目的:检测膀胱癌组织中微小RNA-361-5p(miR-361-5p)、通用转录因子3(BTF3)的表达水平，并探讨其临床意义。方法:选取2015年3月至2017年6月本院收治的74例膀胱癌患者为研究对象，所有患者均行根治性膀胱全切术，收集癌组织及癌旁正常组织，采用荧光定量PCR技术检测miR-361-5p、BTF3 mRNA的相对表达量，采用免疫组化法检测BTF3蛋白的表达情况，根据细胞染色强度和阳性细胞比例进行定量分析，将患者分为miR-361-5p高表达组和低表达组、BTF3高表达组和低表达组，分析miR-361-5p、BTF3表达水平与膀胱癌患者临床病理参数的关系，分析患者的3年生存情况。结果:膀胱癌组织中miR-361-5p水平明显低于癌旁组织( P<0.05)，BTF3 mRNA水平明显高于癌旁组织( P<0.05)；膀胱癌组织中BTF3蛋白的阳性表达率为62.16%(46/74)，癌旁组织中BTF3蛋白的阳性表达率为17.57%(13/74)，差异有统计学意义( χ2＝30.694， P<0.001)；miR-361-5p、BTF3表达水平与肿瘤分化程度、病理分期、淋巴结转移均有显著相关性(均 P<0.05)；miR-361-5p高表达组和低表达组患者的中位生存时间分别为24、16个月，高表达组患者的3年累积生存率明显高于低表达组( χ2＝7.516， P＝0.006)；BTF3高表达组和低表达组患者的中位生存时间分别为15.0、23.5个月，BTF3高表达组患者的3年累积生存率明显低于低表达组( χ2＝5.217， P＝0.022)。 结论:膀胱癌组织中miR-361-5p表达降低，BTF3表达升高，其水平变化与肿瘤分期、分化程度、淋巴结转移有关，可能参与肿瘤增殖分化、转移侵袭过程，并可作为反映膀胱癌患者预后的生物指标。

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)AC092718.4对人类表皮生长因子受体2(HER2)阳性乳腺癌耐药性的影响及其可能机制.方法 (1)获取曲妥珠单抗非耐药及耐药HER2阳性乳腺癌患者的乳腺癌组织(设为非耐药组、耐药组),检测其lncRNA AC092718.4、miR-135a-5p、S100钙结合蛋白P(S100P)mRNA和蛋白的表达水平.(2)以对曲妥珠单抗不敏感的HER2阳性乳腺癌细胞系MDA-MB-361细胞作为原发耐药细胞模型,以乳腺癌细胞株BT-474细胞为亲本,构建对曲妥珠单抗继发耐药的细胞模型(BT-474/TRA细胞).检测3种细胞中lncRNA AC092718.4、miR-135a-5p、S100P mRNA和蛋白的表达水平.经同一浓度曲妥珠单抗干预48 h后,检测3种细胞的活力.(3)取MDA-MB-361细胞分为sh-AC092718.4组、sh-NC组、对照组进行实验,其中sh-AC092718.4组细胞和sh-NC组分别转染sh-AC092718.4和sh-NC,对照组细胞未经任何处理.经同一浓度曲妥珠单抗干预48 h后,检测3组细胞的活力.(4)采用starBase和TargetScan分别预测lncRNA AC092718.4和miR-135a-5p的潜在靶标.通过双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA AC092718.4与miR-135a-5p之间、miR-135a-5p与S100P之间的靶向结合情况.结果 (1)与非耐药组相比,耐药组lncRNA AC092718.4、S100P mRNA、S100P蛋白表达水平升高,miR-135a-5p表达水平降低(P<0.05).(2)与BT-474细胞相比,BT-474/TRA细胞及MDA-MB-361细胞的lncRNA AC092718.4、S100P mRNA、S100P蛋白表达水平升高,miR-135a-5p表达水平降低,曲妥珠单抗干预48 h后的细胞活力更大(P<0.05).(3)与对照组和sh-NC组比较,sh-AC092718.4组MDA-MB-361细胞活力降低(P<0.05).(4)starBase预测结果显示,lncRNA AC092718.4与miR-135a-5p有靶向结合位点;TargetScan预测结果显示,miR-135a-5p与S100P有靶向结合位点.荧光素酶报告基因实验结果提示,lncRNA AC092718.4可与miR-135a-5p直接结合,S100P是miR-135a-5p的靶基因.结论 LncRNA AC092718.4促进乳腺癌细胞对曲妥珠单抗产生耐药性,下调lncRNA AC092718.4 表达可减轻MDA-MB-361细胞对曲妥珠单抗的耐药性,其机制可能涉及lncRNA AC092718.4作为竞争性内源RNA竞争性结合miR-135a-5p,从而上调S100P的表达.

目的 探讨微小RNA-361-5p(miR-361-5p)在口腔鳞状细胞癌(OSCC)中的表达及其与临床病理特征和预后的关系.方法 收集本院2012年1月至2015年12月收治的84例OSCC组织标本,采用实时定量PCR(QPCR)检测miR-361-5p在OSCC组织中的表达并分析miR-361-5p表达与OSCC临床病理特征的关系;采用Kaplan-Meier法进行生存分析,选取同期69例正常口腔黏膜作对照.采用受试者工作特征曲线(ROC)评价组织miR-361-5p水平在OSCC早期诊断中的效能.结果 miR-361-5p在OSCC组织中的表达量为0.306±0.024,低于正常口腔黏膜组织的1.054±0.040,差异有统计学意义(P=0.001).miR-361-5p在OSCC组织中的表达与患者年龄、性别、吸烟及T分期均无关,而与分化程度、临床分期及淋巴结转移有关(P＜0.05).在高、中分化,临床分期Ⅰ、Ⅱ期及无淋巴结转移患者的miR-361-5p表达水平分别为为0.356±0.028、0.391±0.033和0.450±0.036,均高于低分化癌,Ⅲ、Ⅳ期和有淋巴结转移者的0.121±0.008、0.168±0.016和0.168±0.013,差异有统计学意义(P＜O.001).ROC曲线分析显示组织miR-361-5p水平诊断OSCC的曲线下面积为0.966(95％CI:0.939～0.993),而在不同临床分期、淋巴结转移及分化程度OSCC诊断中的曲线下面积分别为0.841 (95％ CI:0.757～0.926)、0.925(95％CI:0.869～0.979)和0.907(95％CI:0.844～0.971),提示组织miR-361-5p水平在OSCC诊断中的价值较高.全组的中位OS为24.65个月,且与年龄、性别、吸烟情况、T分期及淋巴结转移无关,而与分化程度、临床分期及miR-361-5p表达有关.miRNA-361-5p高表达水平的中位OS为29.90个月,长于低水平者的18.70个月,差异有统计学意义(P＜0.001).结论 MiR-361-5p低表达与口腔鳞癌的发生、发展密切相关,且miR-361-5p低水平者的预后较差,可作为判断口腔鳞癌恶性程度和不良预后的参考指标.

目的 观察长链非编码RNA-LINC00485(LINC00485)在肺癌细胞株及组织中的表达,探讨其对肺癌细胞增殖和迁移的影响及其作用机制.方法 采用qRT-PCR检测LINC00485在4种肺癌细胞株(H1975、A549、HCC827、H1299)、正常肺泡上皮细胞HPAEPIC和12例肺癌组织及癌旁组织中的差异性表达.通过生物信息学方法预测LINC00485可能结合的微小RNA(miRNA)及靶基因,将靶向沉默LINC00485的小干扰RNA(siRNA)通过脂质体转染至HCC827细胞.应用qRT-PCR检测LINC00485、miR-361-5p、p21活化蛋白激酶2(PAK2)mRNA的表达水平.采用Western blot法检测PAK2蛋白的表达水平.应用MTS法检测细胞增殖能力、细胞划痕实验检测细胞迁移能力.结果 与正常肺泡上皮相比,LINC00485在肺癌细胞株中均呈高表达(P <0.05),其中在HCC827细胞中表达水平最高.LINC00485在肺癌组织中的表达水平高于其癌旁组织(P <0.01).下调HCC827细胞LINC00485的表达后,miR-361-5p的表达上调(P <0.01),PAK2 mRNA和蛋白的表达下调(P <0.01),HCC827细胞增殖能力降低(P <0.05),细胞迁移能力下降(P <0.01).结论 LINC00485在肺癌细胞株和组织中表达升高,下调LINC00485可通过调控miR-361-5p和PAK2基因的表达,抑制肺癌HCC827细胞的增殖和迁移能力.

目的 筛选高原肺水肿大鼠肺组织差异表达microRNA(miRNA),并分析其生物学功能.方法 将大鼠随机分为对照组和低氧24、48、72 h组,每组6只.低氧组建立大鼠高原肺水肿模型.各组处死后提取大鼠肺组织.利用miRNA 4.0-Rat芯片筛选出低氧组与对照组大鼠肺组织差异表达miRNA,采用miRanda和TargetScan两个数据库对筛选出的差异表达miRNA进行靶基因预测,并对其进行基因本体功能分析和信号通路分析.实时荧光定量PCR检测四组高原肺水肿大鼠肺组织中筛选出来相对表达强度上调、下调最为明显基因.结果 以差异表达倍数(FC值)>2.0为准,高原肺水肿大鼠肺组织差异表达miRNA 14种,上调的5种,下调的9种,其中持续上调的有rno-miR-344g、rno-miR-541-5p,下调的有rno-miR-3556b、rno-miR-101a-5p、rno-miR-361-3p.14种差异miRNA之间存在多个相互关联的靶基因如Med22、Plekhh2、Parg、Rora、Lrch1、Slcla2等.在生物学过程方面,差异表达miRNA主要参与核酸的调控、蛋白泛素化、信号通路、血管生理功能以及生物进程等;在细胞成分方面,差异表达miRNA主要影响细胞内组成如核浆、胞质、细胞器、细胞膜和细胞功能如神经元投射等;在基因分子功能方面,差异表达miRNA主要涉及生物分子有关的结合如蛋白结合等.涉及的信号通路主要有PI3K-Akt信号通路、癌症通路、细胞外基质受体相互作用通路等.与对照组相比,在各低氧组rno-miR-541-5p相对表达量升高,rno-miR-101a-5p相对表达量下降(P均<0.05).结论 在高原肺水肿大鼠的肺组织中差异表达miRNA有14种,它们之间存在许多交互作用靶基因.这些差异表达miRNA参与多种生物学功能和信号通路调控,如血管新生、血管发育、细胞黏附连接、转录因子结合、PI3K-Akt信号通路等,可能参与高原肺水肿的发病机制.

目的 探讨蒙古族高血压病人和汉族高血压病人血管内皮细胞微小RNA(miRNA)表达谱之间的差异关系.方法 将2017年9月—2018年9月赤峰市医院、锡林郭勒盟医院、海拉尔区人民医院就诊的128例蒙古族高血压病人作为观察组,将136例汉族高血压病人作为对照组.比较蒙古族和汉族高血压病人血管内皮细胞miRNA表达谱.结果 ①蒙古族高血压病人血液中hsa-miR-132、hsa-miR-192、hsa-miR-212、hsa-miR-361-5p、hsa-miR-17、hsa-miR-30、hsa-miR-72、hsa-miR-144、hsa-miR-150、hsa-miR-638、hsa-miR-1249和hsa-miR-185表达上调,hsa-miR-155、hsa-miR-27b、hsa-miR-149、hsa-miR-296-5p、hsa-miR-133b、hsa-miR-1825、hsa-miR-1280、hsa-miR-150表达明显下调.②miRNA差异表达量与高血压分级有关,即高血压分级越高,上调或下调越大,3级高血压最明显.③miRNA-132、miRNA-192、miRNA-212、miRNA-361-5p、miRNA-17、miRNA-155、miRNA-27b的特异度和敏感度较高,可作为蒙古族高血压病人与汉族高血压病人差异的标记物.结论 蒙古族与汉族高血压病人血液中miRNA表达存在差异,miRNA-132、miRNA-192、miRNA-212、miRNA-361-5p、miRNA-17、miRNA-155、miRNA-27b的特异度和敏感度较高,可作为蒙古族高血压病人与汉族高血压病人差异的标记物.

目的 研究微小RNA-582-5p(miR-582-5p)对细胞因子信号转导抑制因子1(SOCS1)基因的靶向关系及对皮肤黑色素瘤细胞迁移、侵袭和上皮间充质转化(EMT)的影响.方法 实时荧光定量PCR(qPCR)检测人黑色素瘤细胞株A375、G361、WM35、M14和人类皮肤黑色素细胞NHEM中miR-582-5p、SOCS1 mRNA表达,蛋白质印迹法(Western blot)检测SOCS1蛋白表达.构建miR-582-5p过表达的A375细胞,噻唑蓝(MTT)和流式细胞术分别检测细胞增殖与凋亡,Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭,Western blot检测N-钙黏蛋白(N-cadherin)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)表达,生物信息学结合双荧光素酶报告实验分析miR-582-5p和SOCS1的靶向关系.miR-582-5p和pcDNA-SOCS1共转染入A375细胞,评价过表达SOCS1对miR-582-5p过表达诱导的细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭和EMT的影响.结果 与NHEM细胞相比,A375、G361、WM35、M14细胞中miR-582-5p表达明显降低(P<0.05),SOCS1 mRNA和SOCS1蛋白表达显著提高(P<0.05).miR-582-5p过表达明显降低A375细胞48 h、72 h的细胞活性、迁移细胞数、侵袭细胞数、N-cadherin、Vimentin蛋白表达(P<0.05),显著提高细胞凋亡率、E-cadherin蛋白表达(P<0.05).miR-582-5p靶向调控SOCS1的表达.过表达SOCS1逆转了miR-582-5p过表达对A375细胞增殖、迁移、侵袭、SOCS1、N-cadherin和Vimentin蛋白表达的抑制作用,及对细胞凋亡、E-cadherin蛋白表达的促进作用.结论 miR-582-5p直接靶向SOCS1调控皮肤黑色素瘤细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡和EMT过程.

目的 探究微小RNA361-5p(miR-361-5p)在肺结核病人血清中水平及意义.方法 选取2017年3月至2019年1月开封市结核病防治所诊治的肺结核病人136例为肺结核组;并选择同时间段内同一医院142例健康体检者为健康对照组.比较两组一般临床资料;以实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测两组血清miR-361-5p水平;检测血管内皮生长因子(VEGF)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、γ-干扰素(IFN-γ)水平;分析肺结核病人血清miR-361-5p水平与VEGF、TNF-α、IFN-γ的关系;回归分析肺结核发生的影响因素;分析血清miR-361-5p对肺结核的诊断价值.结果 肺结核组血清miR-361-5p[(1.58±0.45)比(1.06±0.31)]、VEGF[(389.39±46.85)pg/mL比(327.62±41.76)pg/mL]、TNF-α[(22.48±5.06)ng/L比(11.36±3.17)ng/L]水平均明显高于健康对照组,IFN-γ水平[(15.58±3.36)ng/L比(26.72±4.78)ng/L]明显低于健康对照组(均P<0.05);肺结核病人血清miR-361-5p与VEGF、TNF-α水平呈正相关,与IFN-γ水平呈负相关(均P<0.05);miR-361-5p、VEGF、TNF-α是影响肺结核发生的危险因素,IFN-γ是影响肺结核发生的保护因素(均P<0.05);血清miR-361-5p水平对肺结核发生诊断的AUC为0.898,截断值为1.44,其灵敏度为83.8％,特异度为88.0％.结论 肺结核病人血清miR-361-5p呈高表达,与炎症相关因子密切相关,miR-361-5p可能与炎症相关因子相互作用,进而共同调节肺结核发生、发展.

目的:分析牙周炎患者外周血微小RNA(microRNA,miRNA)表达谱,筛选出具有潜在牙周炎诊断价值的外周血miRNA,为牙周炎特异性诊断方式的探寻提供参考.方法:从基因表达综合数据库(Gene Expression Om-nibus,GEO)获取受试者外周血miRNA表达谱数据集(GSE61741),并进行GEO2R在线工具分析.Logistic回归分析进行差异表达miRNA自变量筛选,依据接受者操作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线下面积(area under the curve,AUC)确定miRNA的诊断价值.结果:与健康对照组相比,牙周炎患者外周血123个miRNA表达水平显著下调,109个miRNA表达水平显著上调;Logistic回归分析筛选出3个与牙周炎发病相关的外周血miRNA,即hsa-miR-361-5p、hsa-miR-663和hsa-miR-744;ROC曲线显示,hsa-miR-361-5p、hsa-miR-663、hsa-miR-744以及三者联合诊断牙周炎的AUC值分别为0.871、0.899、0.925和0.981,均具有统计学意义(P<0.01).结论:牙周炎患者外周血miRNA表达谱与健康对照组存在明显差异,hsa-miR-361-5p、hsa-miR-744和hsa-miR-663与牙周炎发病风险相关,对于牙周炎的诊疗具有一定价值.

目的 筛选骨细胞分泌因子相关力学响应微小RNA(microRNA,miRNA).方法 分别向体外培养骨细胞和成骨细胞施加周期性张应变(ε=2.5,f=0.5 Hz),采用miRNA芯片筛选出仅在骨细胞中差异表达的miRNA.通过生物信息学技术,从这些miRNA中进一步筛选出靶基因为胰岛素样生长因子1(insulin-like growth factor-1)、NO合成酶(nitric oxide synthesase,NOS)、成纤维细胞生长因子23(fibroblast growth factor 23,FGF23)和硬骨素(sclerostin,SOST)等分泌因子的miRNA,与小鼠跑台锻炼后芯片检测出的小鼠股骨组织差异表达miRNA进行比较,然后随机选4个miRNA进行定量PCR验证.结果 仅在体外经力学刺激的骨细胞中差异表达的77个miRNA中,筛选出22个靶基因为4种分泌因子(IGF-1、NOS、FGF23、SOST)的miRNA,并进一步筛选出11个在跑台锻炼后的小鼠骨组织中以同样趋势差异表达的miRNA,其中随机选出的miR-361-3p、miR-3082-5p、miR-6348和miR-706,也在骨细胞和骨组织中以同样趋势同样差异表达.结论 诸如miR-361-3p、miR-3082-5p、miR-6348和miR-706仅在骨细胞中差异表达的力学响应miRNA,很可能通过调节分泌因子影响成骨分化或骨代谢.