目的:检测膀胱癌组织中微小RNA-361-5p(miR-361-5p)、通用转录因子3(BTF3)的表达水平，并探讨其临床意义。方法:选取2015年3月至2017年6月本院收治的74例膀胱癌患者为研究对象，所有患者均行根治性膀胱全切术，收集癌组织及癌旁正常组织，采用荧光定量PCR技术检测miR-361-5p、BTF3 mRNA的相对表达量，采用免疫组化法检测BTF3蛋白的表达情况，根据细胞染色强度和阳性细胞比例进行定量分析，将患者分为miR-361-5p高表达组和低表达组、BTF3高表达组和低表达组，分析miR-361-5p、BTF3表达水平与膀胱癌患者临床病理参数的关系，分析患者的3年生存情况。结果:膀胱癌组织中miR-361-5p水平明显低于癌旁组织( P<0.05)，BTF3 mRNA水平明显高于癌旁组织( P<0.05)；膀胱癌组织中BTF3蛋白的阳性表达率为62.16%(46/74)，癌旁组织中BTF3蛋白的阳性表达率为17.57%(13/74)，差异有统计学意义( χ2＝30.694， P<0.001)；miR-361-5p、BTF3表达水平与肿瘤分化程度、病理分期、淋巴结转移均有显著相关性(均 P<0.05)；miR-361-5p高表达组和低表达组患者的中位生存时间分别为24、16个月，高表达组患者的3年累积生存率明显高于低表达组( χ2＝7.516， P＝0.006)；BTF3高表达组和低表达组患者的中位生存时间分别为15.0、23.5个月，BTF3高表达组患者的3年累积生存率明显低于低表达组( χ2＝5.217， P＝0.022)。 结论:膀胱癌组织中miR-361-5p表达降低，BTF3表达升高，其水平变化与肿瘤分期、分化程度、淋巴结转移有关，可能参与肿瘤增殖分化、转移侵袭过程，并可作为反映膀胱癌患者预后的生物指标。

目的:通过两步脱溶剂-交联法制备携带流感病毒血凝素茎部α螺旋区(HAα)、6个串联重复的M2蛋白胞外域(6M2e)和鞭毛蛋白(Flg)的双层蛋白质纳米颗粒，探究其在小鼠体内的免疫效果。方法:采用脱溶剂-交联法将融合蛋白FljB-6M2e-△D2D3-HAα和HAα-6M2e制备成双层蛋白质纳米颗粒。通过透射电镜和纳米颗粒跟踪分析仪进行物理表征后评估其细胞毒性。免疫小鼠后采用ELISA方法进行特异性抗体效价测定，ELISPOT检测细胞免疫水平，CCK-8法检测脾细胞的增殖情况。结果:本研究成功制备了粒径为（130.03±2.96） nm的双层蛋白质纳米颗粒FljB-6M2e-△D2D3-HAα/ HAα-6M2e。免疫小鼠后产生的抗M2e-IgG抗体效价为1∶25 600，抗HAα-IgG抗体效价为1∶12 800，高于对照组小鼠，差异均具有统计学意义（ t=3.051和3.780， P=0.038和0.019）。与对照组相比，多肽刺激可以使小鼠脾细胞显著增殖[M2e刺激增殖率：（154.18±2.34）%，HAα刺激增殖率：（151.51±1.56）%]（ t=12.942和24.591， P均<0.001），并且诱导产生分泌更多IL-4和IFN-γ的淋巴细胞（M2e刺激： t=5.477和6.571， P=0.005和0.013；HAα刺激： t=9.239和7.671， P=0.001和0.013）。多种细胞因子的mRNA水平显著升高，IFN-γ和IL-4的转录水平均高于对照组（IFN-γ： t=13.253和20.847， P均<0.001；IL-4 ： t=6.032和4.824， P=0.004和0.009)。 结论:本研究所制备的双层蛋白质纳米颗粒可以刺激小鼠产生较高水平的体液和细胞免疫应答，为开发多表位流感通用疫苗提供了有效依据。

目的:探讨转录起始前复合物中通用转录因子IIH（TFIIH）在前列腺癌（PCa）中的遗传、表达特征及其与PCa预后的关系。方法:通过分析癌症基因图谱-PCa数据库（TCGA-PRAD）中495例PCa组织及52例癌旁组织TFIIH亚基的表达特征及临床意义。再通过PCa微阵列芯片验证TFIIH中的关键因子通用转录因子IIH亚基4（GTF2H4）与临床特征［病理分期、生化复发（BCR）以及格里森评分］的相关性。结果:495例PCa患者年龄为（61.01±6.82）岁。ERCC3、GTF2H4、MNAT1在格里森评分≥8的PCa组织中mRNA表达量较高（ P<0.05）。GTF2H4、MNAT1的表达量与病理分期相关（ P<0.05）。高表达GTF2H4 的PCa患者的BCR率较高（ HR=2.47，95 %CI：1.62~3.77， P<0.001），同时其对PCa患者BCR预测效果在各亚基中最好［3、5、7年受试者工作特征曲线下面积（AUC）均>0.7］，并在额外4个数据库中得到验证。480例PCa样本中，9例发生了TFIIH亚基的突变，占比1.87%。其中3例为ERCC2亚基突变，2例为GTF2H3亚基突变，GTF2H1、GTF2H4、CCNH、CDK7亚基突变各1例。单因素Cox回归分析显示GTF2H4为BCR的危险因素（ HR=2.470，95% CI：1.620~3.767， P<0.001），GTF2H5为保护因素（ HR=0.506，95% CI：0.336~0.762， P=0.001）。免疫组织化学染色评分结果显示GTF2H4的蛋白表达量与患者临床特征相关，差异均有统计学意义。 结论:TFIIH中的关键因子GTF2H4在PCa中高表达并提示预后欠佳。

目的 观察通用转录因子3(BTF3)在食管鳞癌细胞中表达情况,探讨BTF3对食管鳞癌细胞增殖、凋亡的影响及可能机制.方法 取对数生长期正常食管鳞状上皮细胞株Het-1A、食管鳞癌细胞株KYSE150,采用Western blot法检测BTF3蛋白相对表达量.对数生长期KYSE150细胞分为BTF3敲低组(转染BTF3敲低慢病毒)、TWIST1过表达组(转染BTF3敲低+TWIST1过表达慢病毒)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)过表达组(转染BTF3敲低+MMP-2过表达慢病毒)、对照组(转染阴性对照慢病毒).BTF3敲低组、对照组细胞采用实时荧光定量PCR法检测BTF3 mRNA相对表达量,采用Western blot法检测BTF3、MMP-2、TWIST1、β-catenin、p-β-catenin蛋白相对表达量,采用流式细胞术检测细胞凋亡率.转染48、72、96、120 h时,应用Celigo细胞成像分析仪检测4组细胞增殖倍数.结果 KYSE150细胞BTF3 蛋白相对表达量(1.42±0.14)高于 Het-1A 细胞(1.09±0.10)(t=3.289,P=0.030).BTF3 敲低组细胞 BTF3 mRNA 和蛋白相对表达量(0.04±0.01、0.75±0.12)均低于对照组(1.25±0.44、1.03±0.05)(t=4.756,P=0.009;t=3.645,P=0.022),细胞凋亡率[(13.01±0.10)％]高于对照组[(3.34±0.14)％](t=97.670,P＜0.001);BTF3 敲低组细胞 MMP-2、TWIST1、p-β-catenin 蛋白相对表达量(0.65±0.02、0.92±0.04、0.56±0.08)均低于对照组(1.05±0.05、1.09±0.08、0.99±0.02)(t=13.350,P＜0.001;t=3.162,P=0.034;t=9.360,P＜0.001),β-catenin 蛋白相对表达量(0.91±0.10)与对照组(0.97±0.07)比较差异无统计学意义(t=1.152,P=0.314).转染48、72、96、120 h时,BTF3敲低组、TWIST1过表达组、MMP-2过表达组细胞增殖倍数均低于对照组(P＜0.05),TWIST过表达组均高于BTF3敲低组(P＜0.05),BTF3敲低组与MMP-2过表达组比较差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 敲低食管鳞癌细胞中BTF3表达可抑制β-catenin磷酸化及TWIST1表达,从而抑制上皮-间质转化和细胞增殖,促进细胞凋亡.

通用转录因子3(BTF3)属于核糖核酸聚合酶Ⅱ转录因子,进化中高度保守,具有重要功能,肿瘤组织中BTF3表达异常[1].我们检测BTF3在结直肠癌(CRC)中的表达,分析其和临床病理特征间的关系.一、材料与方法收集CRC肿瘤标本156例,远端切缘138例,淋巴结转移标本35例.BTF3抗体(Santa Cruz生物科技公司),按照生物素-亲和素-酶结合物(ABC)法检测.Rad50、NBS1、Mre11、p65、星形细胞上调基因1(AEG-1)结果来自本实验室前期研究数据.应用SPSS 19.0统计软件分析.

目的 探讨长链非编码RNA GAS5(lncRNA GAS5)对喉癌Hep2细胞增殖和凋亡的影响及可能机制.方法采用实时荧光定量PCR(QPCR)检测喉癌和癌旁正常组织中GAS5的表达,分析其表达与喉癌临床病理特征的关系. Hep2细胞中分别转染pcDNA3. 1?GAS5或siGAS5,另分别转染pcDNA3. 1?NC或siNC作对照. MTT法检测转染后Hep2细胞增殖活性,流式细胞术检测Hep2细胞周期和凋亡,QPCR法和Western blotting法检测E2F1、BTF3 mRNA和蛋白的表达.结果 喉癌组织和癌旁正常组织中GAS5 表达水平分别为0. 56±0. 10和0. 98±0. 11,差异有统计学意义(P＜0. 05). GAS5表达与分化程度、TNM分期有关. pcDNA3. 1?GAS5组24、48 、72 、96 h Hep2细胞存活率明显低于pcDNA3. 1?NC组,差异有统计学意义(P＜0. 05);siGAS5组细胞存活率明显高于 siNC组,差异有统计学意义(P＜0. 05). pcDNA3. 1?GAS5 组细胞 G1期细胞比例为(68. 14±4. 33)%,高于pcDNA3. 1?NC组,差异有统计学意义(P＜0. 05). pcDNA3. 1?GAS组凋亡率高于pcDNA3. 1?NC组,差异有统计学意义(P＜0. 05). pcDNA3. 1?GAS5组细胞E2F1、BTF3 mRNA和蛋白的水平均低于pcDNA3. 1?NC组,差异具有统计学意义(P＜0. 05);siGAS5组细胞E2F1、BTF3 mRNA和蛋白的水平均高于siNC组,差异具有统计学意义( P＜0. 05).结论GAS5可负性调控E2F1和BTF3表达,从而参与调控喉癌细胞的增殖和凋亡.

嵌合抗原受体T (chimeric antigen receptor T,CAR-T)细胞是通过基因工程技术将T细胞改造成针对肿瘤特异性抗原的新型杀伤细胞,具有特异性强、效率高、非MHC限制等优点,在复发/难治性血液系统肿瘤和部分实体瘤中取得良好的治疗效果.但目前CAR-T细胞治疗仍面临着缺乏“现货供应”的通用型CAR-T细胞、抑制性免疫微环境和T细胞耗竭等问题.近年来,锌指核酸酶(zinc finger nucleases,ZFNs)、转录激活子样效应因子核酸酶(transcription activator like effector nucleases,TALENs)、规律性重复短回文序列簇[clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR-associated(Cas9),CRISPR/Cas9]等新型基因编辑技术被广泛应用于细胞免疫治疗,为解决上述问题带来了希望.本文综述了目前CAR-T细胞治疗的研究进展及存在问题,并探讨了3种主要的基因编辑技术改良CAR-T细胞治疗的策略,为CAR-T细胞的基础研究和临床治疗提供参考.

目的 探讨通用转录因子ⅡH亚基2(GTF2H2)在肝癌细胞中的核苷酸切除修复(NER)功能及对肝癌细胞增殖和凋亡的影响.方法 使用siRNA构建GTF2H2敲低的肝癌细胞模型,采用细胞计数试剂盒(CCK8)实验检测肝癌细胞的增殖能力;流式细胞术检测肝癌细胞株的凋亡情况.定量实时聚合酶链式反应(q-RT-PCR)检测增殖细胞核抗原(PCNA)和凋亡蛋白半胱天冬酶(Caspase-3)的表达情况.进一步构建肝癌细胞的紫外线(UV)照射模型,分析GTF2H2敲低后UV照射引起的NER的标志物环丁烷嘧啶二聚体(CPD)和嘧啶(6-4)嘧啶酮光产物(6-4PP)的变化.结果 GTF2H2敲低的肝癌细胞增殖能力相对明显增强,增殖蛋白PCNA的表达相对增多.相反,凋亡能力相对减弱,凋亡蛋白Caspase-3的表达相对降低.而GTF2H2敲低后,UV照射所致的NER标志物CPD和6-4PP含量相对增加.结论 GTF2H2在肝癌细胞中发挥了NER功能,抑制了肝癌细胞的增殖,促进其凋亡,是肝癌发生的一个潜在抑制因子.

目的:探讨通用转录因子Ⅱ H亚基2(GTF2H2)是否影响肝癌细胞Hep3B的增殖和迁移及其潜在的分子机制.方法:通过转染GTF2H2-siRNA构建GTF2H2敲低的Hep3B肝癌细胞模型;实时定量聚合酶链反应(q-RT-PCR)和蛋白质印迹实验检测肝癌细胞Hep3B的GTF2H2敲低效果;细胞计数实验(MTS)检测GTF2H2敲低的肝癌细胞Hep3B的增殖能力;Transwell细胞迁移实验检测GTF2H2敲低的肝癌细胞Hep3B的迁移能力;蛋白质印迹分析实验检测GTF2H2敲低后是否影响肿瘤相关分子信号通路.结果:GTF2H2敲低组的Hep3B细胞的增殖能力较对照组的Hep3B细胞增强,迁移能力亦有增强;蛋白质印迹实验显示GTF2H2敲低后,p-AKT通路蛋白的表达明显升高.结论:GTF2H2可能通过介导AKT分子信号通路,影响肝癌细胞Hep3B的增殖和迁移能力.

14-3-3蛋白通常也称为通用调节因子(general regulatory factors,GRF),是一类丝氨酸和苏氨酸磷酸化结合蛋白,通过与其他转录因子或信号蛋白相互作用参与调节细胞内基础代谢、信号传导、参与植物生长发育以及环境胁迫应答等一系列生理过程.本研究从刚毛柽柳干旱转录组中克隆获得一条干旱胁迫差异表达的ThGRF2基因.ThGRF2基因CDS片段全长为786 bp,编码261个氨基酸.相对分子质量为29.40 kDa,理论等电点(pI)为4.76.将ThGRF2基因构建到pROK2过表达载体上,瞬时转化刚毛柽柳,渗透胁迫前后生理指标结果显示,渗透胁迫后ThGRF2过表达提高了转基因柽柳的叶绿素含量、SOD和POD活性,降低了丙二醛(MDA)含量、电导率(EL)和失水率,表明ThGRF2基因在刚毛柽柳渗透胁迫应答中起重要作用.为进一步探究刚毛柽柳ThGRF2基因的非生物胁迫耐受性功能奠定基础.