目的 探讨胃癌组织微小核糖核酸(miR)-23a-3p、miR-361-5p表达与磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路和预后的关系.方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应检测120例胃癌患者胃癌组织与癌旁组织中miR-23a-3p、miR-361-5p、PI3K mRNA、AKT mRNA、mTOR mRNA 表达.Pearson 相关分析胃癌组织中 miR-23a-3p、miR-361-5p 表达与 PI3K mRNA、AKT mR-NA、mTOR mRNA表达的相关性,以及分析miR-23a-3p、miR-361-5p表达与胃癌患者临床病理特征的关系.Kaplan-Meier生存分析胃癌组织中不同miR-23a-3p、miR-361-5p表达与胃癌患者生存预后的关系.单因素及多因素COX回归分析影响胃癌患者生存预后因素.结果 相比于癌旁组织,胃癌组织中miR-23a-3p、miR-361-5p表达明显较低,而PI3K mRNA、AKT mRNA、mTOR mRNA表达明显较高,差异有统计学意义(均P＜0.05).Pearson 相关分析结果显示,胃癌组织中 miR-23a-3p、miR-361-5p 表达与 PI3K mRNA、AKT mR-NA、mTOR mRNA表达呈负相关(均P＜0.05).不同肿瘤TNM分期、肿瘤分化程度、术后辅助化疗及淋巴结转移的胃癌患者胃癌组织中miR-23a-3p、miR-361-5p表达比较,差异有统计学意义(均P＜0.05).miR-23a-3p低表达胃癌患者3年总体生存率为46.77％(29/62),低于miR-23a-3p高表达胃癌患者3年总体生存率[81.03％(47/58)],差异有统计学意义(Log-Rank x2=30.243,P＜0.001).miR-361-5p 低表达胃癌患者 3 年总体生存率为50.79％(32/63),低于miR-361-5p高表达胃癌患者3年总体生存率[77.19％(44/57)],差异有统计学意义(Log-Rank x2=24.932,P＜0.001).单因素及多因素Cox回归分析结果显示,TNM分期Ⅲ期、有淋巴结转移、无术后辅助化疗、miR-23a-3p低表达、miR-361-5p低表达是影响胃癌患者不良预后的独立危险因素(P＜0.05).结论 胃癌患者胃癌组织中miR-23a-3p、miR-361-5p表达降低,二者表达与PI3K/AKT/mTOR信号通路有关,是潜在的胃癌预后相关的肿瘤标志物.

目的:检测膀胱癌组织中微小RNA-361-5p(miR-361-5p)、通用转录因子3(BTF3)的表达水平，并探讨其临床意义。方法:选取2015年3月至2017年6月本院收治的74例膀胱癌患者为研究对象，所有患者均行根治性膀胱全切术，收集癌组织及癌旁正常组织，采用荧光定量PCR技术检测miR-361-5p、BTF3 mRNA的相对表达量，采用免疫组化法检测BTF3蛋白的表达情况，根据细胞染色强度和阳性细胞比例进行定量分析，将患者分为miR-361-5p高表达组和低表达组、BTF3高表达组和低表达组，分析miR-361-5p、BTF3表达水平与膀胱癌患者临床病理参数的关系，分析患者的3年生存情况。结果:膀胱癌组织中miR-361-5p水平明显低于癌旁组织( P<0.05)，BTF3 mRNA水平明显高于癌旁组织( P<0.05)；膀胱癌组织中BTF3蛋白的阳性表达率为62.16%(46/74)，癌旁组织中BTF3蛋白的阳性表达率为17.57%(13/74)，差异有统计学意义( χ2＝30.694， P<0.001)；miR-361-5p、BTF3表达水平与肿瘤分化程度、病理分期、淋巴结转移均有显著相关性(均 P<0.05)；miR-361-5p高表达组和低表达组患者的中位生存时间分别为24、16个月，高表达组患者的3年累积生存率明显高于低表达组( χ2＝7.516， P＝0.006)；BTF3高表达组和低表达组患者的中位生存时间分别为15.0、23.5个月，BTF3高表达组患者的3年累积生存率明显低于低表达组( χ2＝5.217， P＝0.022)。 结论:膀胱癌组织中miR-361-5p表达降低，BTF3表达升高，其水平变化与肿瘤分期、分化程度、淋巴结转移有关，可能参与肿瘤增殖分化、转移侵袭过程，并可作为反映膀胱癌患者预后的生物指标。

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)AC092718.4对人类表皮生长因子受体2(HER2)阳性乳腺癌耐药性的影响及其可能机制.方法 (1)获取曲妥珠单抗非耐药及耐药HER2阳性乳腺癌患者的乳腺癌组织(设为非耐药组、耐药组),检测其lncRNA AC092718.4、miR-135a-5p、S100钙结合蛋白P(S100P)mRNA和蛋白的表达水平.(2)以对曲妥珠单抗不敏感的HER2阳性乳腺癌细胞系MDA-MB-361细胞作为原发耐药细胞模型,以乳腺癌细胞株BT-474细胞为亲本,构建对曲妥珠单抗继发耐药的细胞模型(BT-474/TRA细胞).检测3种细胞中lncRNA AC092718.4、miR-135a-5p、S100P mRNA和蛋白的表达水平.经同一浓度曲妥珠单抗干预48 h后,检测3种细胞的活力.(3)取MDA-MB-361细胞分为sh-AC092718.4组、sh-NC组、对照组进行实验,其中sh-AC092718.4组细胞和sh-NC组分别转染sh-AC092718.4和sh-NC,对照组细胞未经任何处理.经同一浓度曲妥珠单抗干预48 h后,检测3组细胞的活力.(4)采用starBase和TargetScan分别预测lncRNA AC092718.4和miR-135a-5p的潜在靶标.通过双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA AC092718.4与miR-135a-5p之间、miR-135a-5p与S100P之间的靶向结合情况.结果 (1)与非耐药组相比,耐药组lncRNA AC092718.4、S100P mRNA、S100P蛋白表达水平升高,miR-135a-5p表达水平降低(P<0.05).(2)与BT-474细胞相比,BT-474/TRA细胞及MDA-MB-361细胞的lncRNA AC092718.4、S100P mRNA、S100P蛋白表达水平升高,miR-135a-5p表达水平降低,曲妥珠单抗干预48 h后的细胞活力更大(P<0.05).(3)与对照组和sh-NC组比较,sh-AC092718.4组MDA-MB-361细胞活力降低(P<0.05).(4)starBase预测结果显示,lncRNA AC092718.4与miR-135a-5p有靶向结合位点;TargetScan预测结果显示,miR-135a-5p与S100P有靶向结合位点.荧光素酶报告基因实验结果提示,lncRNA AC092718.4可与miR-135a-5p直接结合,S100P是miR-135a-5p的靶基因.结论 LncRNA AC092718.4促进乳腺癌细胞对曲妥珠单抗产生耐药性,下调lncRNA AC092718.4 表达可减轻MDA-MB-361细胞对曲妥珠单抗的耐药性,其机制可能涉及lncRNA AC092718.4作为竞争性内源RNA竞争性结合miR-135a-5p,从而上调S100P的表达.

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)核富集转录本1(NEAT1)/miR-361-5p/瞬时受体电位通道7(TRPM7)轴对宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响.方法 使用RT-qPCR和Western blot检测正常宫颈上皮细胞End1/E6E7和宫颈癌细胞(Caski、HeLa和C33a)内lncRNA NEAT1、miR-361-5p和TRPM7的表达;将 HeLa细胞分为si-NC组、si-lncRNA NEAT1组、miR-NC组、miR-361-5p组、si-lncRNA NEAT1+anti-miR-NC组、si-lncRNA NEAT1+anti-miR-361-5p组、miR-361-5p+vector组、miR-361-5p+TRPM7组,采用RT-qPCR检测细胞中lncRNA NEAT1、miR-361-5p表达;使用 MTT、Transwell检测细胞的增殖、迁移和侵袭;使用 Western blot检测TRPM7、MMP-2、CyclinD1和 MMP-9蛋白的表达;使用双萤光素酶报告实验验证lncRNA NEAT1与miR-361-5p、miR-361-5p和TRPM7的靶向关系.结果 在宫颈癌细胞Caski、HeLa、C33a中lncRNA NEAT1、TRPM7蛋白表达升高,而miR-361-5p表达水平降低;敲低lncRNA NEAT1或过表达miR-361-5p可降低CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白的表达及细胞活性,并减少细胞迁移、侵袭.lncRNA NEAT1靶向调控miR-361-5p,抑制miR-361-5p表达可减弱敲低lncRNA NEAT1对宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭的作用;miR-361-5p靶向调控TRPM7,上调TRPM7可减弱过表达miR-361-5p对宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭.结论 lncRNA NEAT1可能通过调控 miR-361-5p/TRPM7轴促进宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭.

目的 探讨微小RNA-361-5p(miR-361-5p)在口腔鳞状细胞癌(OSCC)中的表达及其与临床病理特征和预后的关系.方法 收集本院2012年1月至2015年12月收治的84例OSCC组织标本,采用实时定量PCR(QPCR)检测miR-361-5p在OSCC组织中的表达并分析miR-361-5p表达与OSCC临床病理特征的关系;采用Kaplan-Meier法进行生存分析,选取同期69例正常口腔黏膜作对照.采用受试者工作特征曲线(ROC)评价组织miR-361-5p水平在OSCC早期诊断中的效能.结果 miR-361-5p在OSCC组织中的表达量为0.306±0.024,低于正常口腔黏膜组织的1.054±0.040,差异有统计学意义(P=0.001).miR-361-5p在OSCC组织中的表达与患者年龄、性别、吸烟及T分期均无关,而与分化程度、临床分期及淋巴结转移有关(P＜0.05).在高、中分化,临床分期Ⅰ、Ⅱ期及无淋巴结转移患者的miR-361-5p表达水平分别为为0.356±0.028、0.391±0.033和0.450±0.036,均高于低分化癌,Ⅲ、Ⅳ期和有淋巴结转移者的0.121±0.008、0.168±0.016和0.168±0.013,差异有统计学意义(P＜O.001).ROC曲线分析显示组织miR-361-5p水平诊断OSCC的曲线下面积为0.966(95％CI:0.939～0.993),而在不同临床分期、淋巴结转移及分化程度OSCC诊断中的曲线下面积分别为0.841 (95％ CI:0.757～0.926)、0.925(95％CI:0.869～0.979)和0.907(95％CI:0.844～0.971),提示组织miR-361-5p水平在OSCC诊断中的价值较高.全组的中位OS为24.65个月,且与年龄、性别、吸烟情况、T分期及淋巴结转移无关,而与分化程度、临床分期及miR-361-5p表达有关.miRNA-361-5p高表达水平的中位OS为29.90个月,长于低水平者的18.70个月,差异有统计学意义(P＜0.001).结论 MiR-361-5p低表达与口腔鳞癌的发生、发展密切相关,且miR-361-5p低水平者的预后较差,可作为判断口腔鳞癌恶性程度和不良预后的参考指标.

目的 探讨大鼠肠微血管内皮细胞miRNAs对脂多糖(LPS)诱导的水通道蛋白1(AQP1)表达的影响.方法 用机械吹打法及胰蛋白酶消化法从大鼠空肠分离微血管内皮细胞,用免疫荧光染色鉴定细胞;用荧光实时定量PCR(RT-qPCR)检测AQP1和miRNAs的表达;miRNAs芯片分析结合在线软件筛选调控AQP1表达的miRNAs,瞬时转染miRNAs模拟体及对照序列进行进一步验证.结果 肠微血管内皮细胞vWF免疫荧光染色为阳性.用LPS(0、0.1、1和10 mg/L)处理细胞后,AQP1 mRNA表达水平随LPS浓度增加呈下降趋势,其中1和10 mg/L LPS处理细胞后AQP1 mRNA表达水平与对照组相比有明显差异(P<0.05和P<0.001);与对照组相比,LPS处理组有22个表达上调2倍以上的miRNAs及9个下调2倍以上的miRNAs;软件预测显示芯片结果中的miR-423-5p、miR-874-5p、miR-361-3p、miR-219a-5p、miR-27b-3p、miR-133b和miR-666可与AQP1启动子区互补配对;miR-874-5p、miR-361-3p、miR-133b和miR-666在LPS处理后的肠微血管内皮细胞中表达上调;转染miR-133b和miR-666模拟体后可使AQP1 mRNA表达水平下调.结论 LPS可通过上调miR-133b和miR-666表达水平,间接抑制AQP1的表达,继而影响肠黏膜通透性.

目的 观察长链非编码RNA-LINC00485(LINC00485)在肺癌细胞株及组织中的表达,探讨其对肺癌细胞增殖和迁移的影响及其作用机制.方法 采用qRT-PCR检测LINC00485在4种肺癌细胞株(H1975、A549、HCC827、H1299)、正常肺泡上皮细胞HPAEPIC和12例肺癌组织及癌旁组织中的差异性表达.通过生物信息学方法预测LINC00485可能结合的微小RNA(miRNA)及靶基因,将靶向沉默LINC00485的小干扰RNA(siRNA)通过脂质体转染至HCC827细胞.应用qRT-PCR检测LINC00485、miR-361-5p、p21活化蛋白激酶2(PAK2)mRNA的表达水平.采用Western blot法检测PAK2蛋白的表达水平.应用MTS法检测细胞增殖能力、细胞划痕实验检测细胞迁移能力.结果 与正常肺泡上皮相比,LINC00485在肺癌细胞株中均呈高表达(P <0.05),其中在HCC827细胞中表达水平最高.LINC00485在肺癌组织中的表达水平高于其癌旁组织(P <0.01).下调HCC827细胞LINC00485的表达后,miR-361-5p的表达上调(P <0.01),PAK2 mRNA和蛋白的表达下调(P <0.01),HCC827细胞增殖能力降低(P <0.05),细胞迁移能力下降(P <0.01).结论 LINC00485在肺癌细胞株和组织中表达升高,下调LINC00485可通过调控miR-361-5p和PAK2基因的表达,抑制肺癌HCC827细胞的增殖和迁移能力.

目的 探讨miR-361-5p对骨肉瘤细胞放射敏感性的影响及其可能的下游调控机制.方法 构建放射抵抗的骨肉瘤细胞系HOS-R,利用RT-qPCR检测miR-361-5p在HOS和HOS-R细胞中的表达情况;上调或下调miR-361-5p表达、敲低FoxM1,以克隆形成实验和流式细胞术检测miR-361-5p对HOS-R细胞存活率和细胞凋亡率,通过双荧光素报告基因实验和蛋白免疫印迹实验检测miR-361-5p与FoxM1的靶向关系.构建FoxM1过表达载体,采用克隆形成实验和流式细胞术检测miR-361-5p通过FoxM1对骨肉瘤细胞放射敏感性的影响.结果 RT-qPCR检测结果显示,miR-361-5p在HOS-R细胞中低表达.克隆形成实验和流式细胞术检测结果显示,过表达miR-361-5p可显著降低HOS-R细胞的生存率,增加其细胞凋亡率,与敲低FoxM1结果相反.双荧光报告基因实验证实miR-361-5p靶向负性调控FoxM1表达,FoxM1可逆转miR-361-5p对细胞HOS-R放射敏感性的促进作用.结论 miR-361-5p可负调控FoxM1,并影响骨肉瘤细胞的放射敏感性.

目的 筛选高原肺水肿大鼠肺组织差异表达microRNA(miRNA),并分析其生物学功能.方法 将大鼠随机分为对照组和低氧24、48、72 h组,每组6只.低氧组建立大鼠高原肺水肿模型.各组处死后提取大鼠肺组织.利用miRNA 4.0-Rat芯片筛选出低氧组与对照组大鼠肺组织差异表达miRNA,采用miRanda和TargetScan两个数据库对筛选出的差异表达miRNA进行靶基因预测,并对其进行基因本体功能分析和信号通路分析.实时荧光定量PCR检测四组高原肺水肿大鼠肺组织中筛选出来相对表达强度上调、下调最为明显基因.结果 以差异表达倍数(FC值)>2.0为准,高原肺水肿大鼠肺组织差异表达miRNA 14种,上调的5种,下调的9种,其中持续上调的有rno-miR-344g、rno-miR-541-5p,下调的有rno-miR-3556b、rno-miR-101a-5p、rno-miR-361-3p.14种差异miRNA之间存在多个相互关联的靶基因如Med22、Plekhh2、Parg、Rora、Lrch1、Slcla2等.在生物学过程方面,差异表达miRNA主要参与核酸的调控、蛋白泛素化、信号通路、血管生理功能以及生物进程等;在细胞成分方面,差异表达miRNA主要影响细胞内组成如核浆、胞质、细胞器、细胞膜和细胞功能如神经元投射等;在基因分子功能方面,差异表达miRNA主要涉及生物分子有关的结合如蛋白结合等.涉及的信号通路主要有PI3K-Akt信号通路、癌症通路、细胞外基质受体相互作用通路等.与对照组相比,在各低氧组rno-miR-541-5p相对表达量升高,rno-miR-101a-5p相对表达量下降(P均<0.05).结论 在高原肺水肿大鼠的肺组织中差异表达miRNA有14种,它们之间存在许多交互作用靶基因.这些差异表达miRNA参与多种生物学功能和信号通路调控,如血管新生、血管发育、细胞黏附连接、转录因子结合、PI3K-Akt信号通路等,可能参与高原肺水肿的发病机制.

目的:探讨miR-361-5p对肾细胞癌ACHN细胞增殖、侵袭、迁移、凋亡及其细胞周期的影响.方法:将miR-361-5p mimics和miR-361-5p inhibitor分别转染至肾癌ACHN细胞中,用qPCR检测转染细胞中miR-361-5p的表达水平,用MTT法、划痕愈合实验、Transwell实验、流式细胞术分别检测细胞的增殖、迁移、侵袭、细胞周期和凋亡水平.结果:与空白对照组和Mimics-NC组比较,miR-361-5p mimics组ACHN细胞中miR-361-5p表达水平显著升高(P＜0.01),细胞的增殖、侵袭和迁移能力均显著减弱(均P＜0.01),而凋亡率升高(P＜0.01).与空白对照组或Inhibitor-NC组比较,miR-361-5p inhibitor组细胞中miR-361-5p表达水平显著下降(P＜0.01),细胞的增殖、侵袭和迁移能力均增强(均P＜0.01),细胞周期运转加速(P＜0.01),凋亡率降低(P.＜0.05).结论:miR-361-5p可抑制肾癌ACHN细胞的增殖、侵袭和迁移,并诱导细胞凋亡,其在肾癌发生发展过程中发挥重要的抑制作用.