目的 探讨利妥昔单抗对视神经脊髓炎谱系疾病(NMOSD)患者治疗前后外周血白细胞介素-23(IL-23)/IL-17A轴及微小RNA-365-5p(miR-363-5p)表达的影响.方法 将NMOSD患者根据水通道蛋白4免疫球蛋白G型抗体(AQP-4IgG)结果分为AQP-4IgG阳性组和AQP-4IgG阴性组.2组患者均接受利妥昔单抗(PTX)连续治疗1年以上.比较2组患者临床疗效,比较患者治疗前和治疗12个月后年复发次数、日常生活活动量表(ADL)评分和外周血IL-23、IL-17A、miR-363-5p表达水平,并记录药物不良反应的发生情况.结果 AQP-4IgG阳性组和阴性组分别纳入73例和27例.AQP-4IgG阳性组与AQP-4IgG阴性组临床疗效分别为84.93％和70.37％,在统计学上差异无统计学意义(P＞0.05).治疗前,AQP-4IgG阳性组和AQP-4IgG阴性组的年复发次数分别为(1.36±0.32)和(1.33±0.41)次,ADL评分分别为(62.36±5.76)和(63.27±5.38)分,IL-23 分别为(325.23±116.35)和(328.79±120.38)pg·mL-1,IL-17A 分别为(68.46±12.38)和(69.61±13.41)pg·mL-1,miR-363-5p 分别为1.76±0.10和1.77±0.19.治疗12个月后,AQP-4IgG阳性组与AQP-4IgG阴性组患者年复发次数分别为(0.28±0.16)和(0.31±0.12)次,ADL评分分别为(85.10±10.36)和(81.26±11.34)分,IL-23 分别为(119.49±10.26)和(122.46±11.54)pg·mL-1,IL-17A 分别 为(43.16±6.29)和(40.27±8.75)pg·mL-1,miR-363-5p 分别为 1.38±0.15 和 1.36±0.15.2组上述指标治疗后与治疗前比较,在统计学上差异均有统计学意义(均P＜0.05);治疗后2组间上述指标比较,在统计学上差异均无统计学意义(均P＞0.05).AQP-4IgG阳性组和AQP-4IgG阴性组的药物不良反应发生率分别为13.69％和18.51％,在统计学上差异无统计学意义(P＞0.05).结论 利妥昔单抗治疗NMOSD疗效确切,可降低年复发次数,促进患者活动能力恢复,其机制可能与调控IL-23/IL-17A轴及抑制miR-363-5p的表达有关.

目的:探讨长链非编码RNA（lncRNA）OIP5-AS1、微小RNA（miR）-363-3p与急性心肌梗死（AMI）患者心血管事件发生的相关性。方法:回顾性选取2020年1月至2021年12月恩施土家族苗族自治州中心医院收治的130例AMI患者，治疗后通过门诊或电话形式对AMI患者进行为期1年的随访，记录是否出现心血管事件，将发生心血管事件的患者纳入发生心血管事件组（55例），反之纳入未发生心血管事件组（75例）；另选择同期60例健康体检者作为健康对照组。采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测三组血清lncRNA OIP5-AS1、miR-363-3p表达水平；采用Pearson检验分析lncRNA OIP5-AS1、miR-363-3p表达水平的相关性；采用受试者工作特征（ROC）曲线分析血清lncRNA OIP5-AS1、miR-363-3p表达水平对AMI患者心血管事件发生的预测价值；采用Logistic回归分析影响AMI患者心血管事件发生的危险因素。结果:发生心血管事件组和未发生心血管事件组血清lncRNA OIP5-AS1表达水平低于健康对照组（0.41 ± 0.09、0.62 ± 0.15比1.00 ± 0.23），而发生心血管事件组血清lncRNA OIP5-AS1表达水平低于未发生心血管事件组，差异均有统计学意义（ P<0.05）。发生心血管事件组和未发生心血管事件组血清miR-363-3p表达水平高于健康对照组（2.33 ± 0.58、1.78 ± 0.45比1.02 ± 0.28），而发生心血管事件组血清miR-363-3p表达水平高于未发生心血管事件组，差异均有统计学意义（ P<0.05）。Pearson检验结果显示，AMI患者血清miR-363-3p表达水平与lncRNA OIP5-AS1表达水平呈负相关（ r = - 0.476， P<0.05）。ROC曲线分析结果显示，血清lncRNA OIP5-AS1、miR-363-3p表达水平联合预测AMI患者发生心血管事件的曲线下面积（AUC）为0.921（95% CI 0.861 ~ 0.961），灵敏度为92.73%，特异度为81.33%，均高于单一指标检测。Logistic回归分析结果显示，lncRNA OIP5-AS1、miR-363-3p、左室射血分数均是影响AMI患者发生心血管事件的独立危险因素（ P<0.05）。 结论:AMI患者血清lncRNA OIP5-AS1表达降低，miR-363-3p表达升高，两者表达水平与心血管事件发生密切相关，可作为预测AMI患者发生心血管事件的血清学指标。

目的:筛选糖尿病足溃疡（DFU）的差异表达基因（DEG）并对其进行功能分析与临床验证，以期为慢性难愈性创面的表观遗传学治疗奠定理论基础。方法:采用观察性研究方法。选取基因表达综合数据库（GEO）中的DFU患者基因表达谱数据集GSE80178，采用GEO2R工具分析筛选数据集中3个正常皮肤组织样本与6个DFU组织样本之间的DEG。对筛选出的DEG，采用R语言程序包中ClusterProfiler、org.Hs.eg.db、GOplot和ggplot2分别进行生物学过程、分子功能、细胞组分的基因本体论（GO）富集分析和京都基因与基因组百科全书（KEGG）富集分析；采用STRING数据库进行蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）分析，筛选DEG中的关键基因，用Cytoscape 3.9.1软件中Cytohubba插件进行关键基因的GO富集分析。取厦门大学附属翔安医院2018年9月—2021年3月收治的15例DFU患者（男7例、女8例，年龄55~87岁）的DFU组织和15例急性创面患者（男6例、女9例，年龄8~52岁）术后弃用的正常皮肤组织，分别采用实时荧光定量反转录PCR法与免疫组织化学法检测富含脯氨酸的小重复蛋白1A（SPRR1A）和晚期角质化包膜蛋白3C（LCE3C）的mRNA与蛋白表达。对数据行独立样本 t检验。 结果:与正常皮肤组织比较，从DFU患者DFU组织中筛选出492个差异表达显著的DEG（校正 P<0.05或校正 P<0.01），包括363个上调DEG和129个下调DEG。GO术语分析显示，DEG在皮肤发育、角质形成细胞（KC）分化、角质化、表皮发育、表皮细胞分化等方面显著富集（校正 P值均<0.01）；KEGG通路分析显示，DEG在肿瘤相关微小RNA、Ras相关蛋白1信号通路和多能干细胞调控信号通路等方面显著富集（校正 P值均<0.01）。PPI分析显示，内披蛋白、 SPRR1A、 SPRR1B、 SPRR2B、 SPRR2E、 SPRR2F、 LCE3C、 LCE3E、角蛋白16（均为下调DEG）和丝聚蛋白（为上调DEG）为从DFU患者DFU组织中筛选出的DEG中的关键基因，其显著富集于角质化、KC分化、表皮细胞分化、皮肤发育、表皮发育、多肽交联等GO术语（校正 P值均<0.01）。DFU患者DFU组织中SPRR1A和LCE3C的mRNA表达量分别为0.588±0.082与0.659±0.098、蛋白表达量分别为0.22±0.05与0.24±0.04，分别明显低于急性创面患者正常皮肤组织的1.069±0.025与1.053±0.044（ t值分别为20.91、13.66， P值均<0.01）、0.38±0.04与0.45±0.05（ t值分别为9.69、12.46， P值均<0.01）。 结论:相较于正常皮肤组织，DFU患者DFU组织中存在DEG谱，且DEG显著富集于KC分化及角蛋白功能方面；关键DEG与KC生物学功能相关，在DFU患者DFU组织中的低表达可能阻碍溃疡愈合。

目的 探讨非小细胞肺癌组织中微小RNA-363-3p(miR-363-3p)、性别决定区Y框蛋白4(SOX4)表达及对上皮间质转化(EMT)进程的影响.方法 收集行手术切除的84例非小细胞肺癌患者的癌及其癌旁组织.采用实时荧光定量聚合酶链反应检测癌及癌旁组织miR-363-3p、SOX4 mRNA表达,免疫组化SP法检测癌及癌旁组织中E-cadherin、Vimentin表达.比较不同病理特征患者癌组织中miR-363-3p、SOX4 mRNA表达,采用Spearman秩相关分析癌组织miR-363-3p、SOX4 mRNA表达与E-cadherin、Vimentin相关性.使用相对超危险度比(RERI)、归因比(AP)、交互作用指数(SI)分析miR-363-3p、SOX4参与EMT进程的交互作用.结果 癌组织中miR-363-3p表达低于癌旁组织,SOX4 mRNA表达高于癌旁组织(P均＜0.05);癌组织中miR-363-3p、SOX4 mRNA表达与性别、年龄、吸烟史、肿瘤最大径无关(P均＞0.05),与分化程度、TNM分期有关(P均＜0.05);癌组织E-cadherin阳性表达率低于癌旁组织,Vimentin阳性表达率高于癌旁组织(P均＜0.05);癌组织miR-363-3p与E-cadherin表达呈正相关(r=0.491,P＜0.05),与Vimentin表达呈负相关(r=-0.506,P＜0.05);癌组织SOX4 mRNA与E-cadherin表达呈负相关(r=-0.527,P＜0.05),与Vimentin表达呈正相关(r=0.463,P＜0.05).癌组织miR-363-3p、SOX4对EMT进程存在负向交互作用(RERI=29.639,AP=70.91,SI=3.656).结论 非小细胞肺癌组织中miR-363-3p、SOX4异常表达与EMT有关,且二者对EMT进程存在负向交互作用.

目的 探讨急性髓系白血病(AML)患者miR-363表达与其临床特征及靶基因的关系.方法 下载TCGA数据库中AML患者的miRNA、RNA表达谱及临床数据,按照miR-363表达水平由高到低排序,将前50％设为高表达组(n=81),后50％设为低表达组(n=81),比较两组患者生存曲线及年龄差异;利用Omisc软件,采用Pearson相关性分析筛选与miR-363表达相关的靶基因.将2021年12月至2022年12月在我院诊治的52例AML患者纳入研究,采用RT-qPCR技术检测患者骨髓miR-363表达水平,按照表达水平由高到低排序,将前50％设为高表达组(n=26),后50％设为低表达组(n=26),比较两组患者初诊白细胞计数、血小板计数、血红蛋白及血浆靶基因水平、年龄、性别及预后分层的差异.结果 TCGA数据库分析显示,miR-363低表达组患者中位生存时间高于miR-363高表达组(822d vs 365d,P<0.05);miR-363高表达组高龄患者比例明显高于低表达组(54.32％vs 45.68％,P<0.05);共筛选出5404个miR-363相关基因,KIAA1377相关性最高(r=0.62,P<0.05).miR-363高表达组高龄患者比例、预后不良患者比例、初诊白细胞计数≥50×109/L比例、血浆KIAA1377水平明显高于低表达组(均P<0.05);血小板计数、血红蛋白水平明显低于低表达组(均P<0.05).结论 miR-363高表达与AML患者生存率降低、高龄、预后不良、初诊白细胞计数升高、血小板计数及血红蛋白水平降低有关,且KIAA1377可能是miR-363的靶基因之一.miR-363可能是AML基因治疗和预后评估的新靶点.

目的:分别检测气虚和鼻咽癌都有差异表达的微小RNA(miR),筛选出气虚鼻咽癌特征性miR.方法:在鼻咽癌高发区广东中山市,选择气虚鼻咽癌作为研究对象,分别以正常质及慢性鼻咽炎作为对照,采用芯片技术及实时荧光定量PCR检测鼻咽组织miR表达,并进行统计分析,探索气虚鼻咽癌变的特异性miR.结果:miR在气虚以上调表达为主,上调2倍以上且具有统计学差异的有34个,下调2倍以上且具有统计学差异的有19个.在鼻咽癌及气虚同时上调表达的且存在着统计学差异的miR有12个,主要包括miR-106-363基因族(miR-18b、miR-19a及miR-106)和miR-30基因族,在气虚和鼻咽癌均明显下调的且存在着统计学差异的miR有9个,PCR检测11个miR表达结果与芯片检测结果基本一致.结论:中医气虚存在着特定的miR表达特征且以上调表达为主, miR-106-363及miR-30两基因族可能是鼻咽癌气虚癌变的特征性miR.

目的 探讨微小RNA-363(miR-363)靶向调控E2F转录因子3(E2F3)的表达对HepG2细胞增殖和凋亡的影响.方法 体外培养HepG2细胞,采用Lipofectamine法将miR-363抑制剂或其阴性对照转染到HepG2细胞,继续培养48 h,收获细胞,采用四噻唑蓝(MTT)法测定细胞增殖率,使用流式细胞术法检测细胞凋亡率,采用实时荧光RT-PCR法检测HepG2细胞miR-363 mRNA水平,采用Western Blot法检测HepG2细胞E2F3、BAX和Caspase-3蛋白表达水平.结果 对照组HepG2细胞增殖率为(96.4±9.7)％,显著高于抑制剂处理组[(72.3±6.5)％,P<0.05],凋亡率为(8.2±1.4)％,显著低于抑制剂处理组[(9.7±0.8)％,P<0.05];对照组HepG2细胞miR-363 mRNA相对水平为(1.0±0.1),显著高于抑制剂处理组[(0.6±0.2),P<0.05],E2F3蛋白表达量为(1.0±0.1),显著高于抑制剂处理组[(0.6±0.1),P<0.05],而对照组HepG2细胞Bax和Caspase-3蛋白表达量分别为(0.4±0.0)和(0.5±0.1),均显著低于抑制剂处理组[(0.6±0.1)和(0.7±0.0),P均<0.05].结论 miR-363可靶向调控E2F3的表达,抑制HepG2细胞增殖,诱导其凋亡.本研究结果为肝癌靶向治疗提供了一定的理论依据.

目的 探讨Cdc42 GTPase和微小RNA (miRNA)-363-5p在不同级别胶质细胞瘤中的分布规律.方法 常规采集胶质细胞瘤患者术后肿瘤样本,多聚甲醛固定24h后,用蔗糖溶液浸泡至沉底,冰冻切片后应用免疫组织化学方法检测Cdc42 GTPase的表达;其余样品用液氮保存,实时荧光定量-聚合酶链反应检测Cdc42 GTPase和miRNA-363-5p在不同级别胶质细胞瘤中的表达情况.结果 实时荧光定量-聚合酶链反应检测结果显示,随着肿瘤级别(肿瘤临床分期Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期)的增高,miRNA-363-5p表达量逐渐上调[(1.401 ±0.515)×10-6、(1.665 ±0.686)×10-6、(5.792 ±0.000)×10-6、(8.383±2.858)×10-6],而Cdc42 GTPase表达量逐渐下调[(2.218 ±0.694)×10-2、(2.004±0.236)×10-2、(0.285±0.004) ×10-2、(0.071±0.007) ×10-2],两两比较差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 miRNA-363-5p的靶基因可能是Cdc42 GTPase,且随着miRNA-363-5p表达量的上调,Cdc42 GTPase表达量下调,胶质细胞瘤级别增高.

目的 探讨血清miRNA-363联合超声弹性评分(ES)和弹性应变比值(SR)在老年甲状腺乳头状癌中的临床意义.方法 选择2017年1月-2018年12月在复旦大学附属华山医院静安分院诊断为甲状腺乳头状癌患者118例,为甲状腺乳头状癌组;选择同期75例诊断为老年甲状腺腺瘤者为对照组.采用实时定量PCR测定2组血清miRNA-363,采用超声测定ES和SR.结果 甲状腺乳头状癌组的血清miRNA-363较甲状腺腺瘤组降低(P＜0.01),而甲状腺乳头状癌组的ES和SR水平高于甲状腺腺瘤组(P＜0.01).甲状腺乳头状癌患者血清miRNA-363与ES(r=-0.762,P＜0.01)和SR (r=-0.813,P＜0.01)呈负相关,同样甲状腺乳头状癌患者ES与SR呈正相关(r=0.781,P＜0.01).以血清miRNA-363,ES和SR联合检测作为检验变量,以发生甲状腺乳头状癌为状态变量绘制ROC曲线,联合检测的灵敏度为94.1％,特异性为76.0％,其AUC为0.940联合检测的曲线下面积优于miRNA-363 (Z=3.780,P＜0.01),ES(Z=5.256,P＜0.01)和SR (Z=4.976,P＜0.01),而血清miRNA-363,ES和SR的曲线下面积之间的比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 血清miRNA-363联合声弹性成像检测与甲状腺乳头状癌的恶性程度相关,在诊断老年甲状腺乳头状癌具有较高的灵敏度和特异性,在早期诊断甲状腺乳头状癌具有重要的临床意义.

目的:探索长链非编码RNA NORAD(lncRNA NORAD)对多发性骨髓瘤细胞增殖和凋亡的影响及其与微小RNA-363-3p(miR-363-3p)的靶向关系.方法:RT-qPCR检测健康人成骨细胞hFOB1.19和多发性骨髓瘤细胞U266,LP-1,H929中NORAD和miR-363-3p表达.在U266细胞中转染si-NORAD,或共转染si-NORAD和anti-miR-363-3p,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白质印迹法检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved caspase-3)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达.starBase软件预测结合双荧光素酶报告实验分析NORAD与miR-363-3p的靶向结合.结果:多发性骨髓瘤细胞系U266,LP-1和H929中NORAD表达明显上调(P<0.05),miR-363-3p表达显著下调(P<0.05).沉默NORAD表达显著降低48,72 h的U266细胞活性和cyclin D1,CDK4,Bcl-2蛋白水平(P<0.05),明显提高细胞凋亡率和cleaved caspase-3,Bax蛋白表达量(P<0.05).NORAD靶向调控miR-363-3p表达.抑制miR-363-3p表达逆转沉默NORAD表达对U266细胞增殖、cyclin D1,CDK4和Bcl-2表达的抑制作用,以及逆转沉默NORAD表达对细胞凋亡、cleaved caspase-3和Bax蛋白表达的促进作用.结论:LncRNA NORAD通过靶向miR-363-3p表达影响多发性骨髓瘤细胞增殖和凋亡.