目的 血管新生在肿瘤、糖尿病等血管异常增生性疾病和冠心病、心肌梗死、脑梗死等缺血性心脑血管病的发生、发展及治疗中具有重要作用.微小RNA(miRNAs)与血管新生之间联系紧密,miRNAs对血管新生的作用包括促进血管新生和抑制血管新生两个方面,促进血管新生的miRNAs包括miR-126、miR-378、miR-132、miR-146a、miRNA-31、miR-425-5p、let-7f等,抑制血管新生的miRNAs包括miR-195、miR-140-5p、miR-150、miR-497、miR-214、miR-221/miR-222、miR-29b、miR-29c等.miRNAs在血管新生信号通路上具有同时调控多个基因的潜力,并且体积小、物种间序列保守性强、相对稳定,可作为一种很有前景的调控血管新生的治疗靶点.

目的 探究微小RNA-210(miR-210)在乳腺癌组织中的表达及临床意义,并探究其在体外对人三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖及转移能力的影响.方法 收集湖南省肿瘤医院病理科2013年12月至2015年9月乳腺癌组织及相应癌旁组织标本各82例,荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测组织及细胞中miR-210的表达水平,分析miR-210与患者临床资料及预后的关系.三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231转染含miR-210全长的载体作为实验组,转染空白载体作为对照组,CCK-8实验检测两组细胞增殖能力,Transwell侵袭及迁移实验检测两组细胞转移及侵袭能力.结果 qRT-PCR结果显示乳腺癌组织中miR-210的表达水平为0.198±0.014,显著高于癌旁组织的0.084±0.009,差异具有统计学意义(t=8.141,P<0.001);三阴性乳腺癌组织miR-210表达水平为0.254±0.026,显著高于非三阴性乳腺癌组织0.167±0.015,差异具有统计学意义(t=3.175,P=0.003).miR-210高表达、低表达两组患者TNM分期、分子分型差异有统计学意义(χ2=7.859,P=0.005;χ2=7.053,P=0.008);而miR-210高表达的患者4年生存率显著低于低表达患者(49.37％:76.80％),差异具有统计学意义(χ2=4.743,P=0.024).qRT-PCR结果显示,实验组细胞miR-210的表达水平为0.517±0.038,显著高于对照组细胞的0.284±0.022,差异具有统计学意义(t=9.280,P<0.001).CCK-8实验结果显示实验组细胞48、72及96 h时增殖能力显著高于对照组细胞(3.771±0.452:3.206±0.314;7.662±0.619:6.736±0.552;15.477±1.425:11.592±1.243),差异具有统计学意义(t=2.296,P=0.025;t=2.496,P=0.019;t=4.594,P=0.001).Transwell侵袭实验结果显示实验组细胞下室面细胞数为(107.8±13.0)个,显著高于对照组细胞的(74.4±10.9)个,差异具有统计学意义(t=3.732,P=0.001);迁移实验结果显示实验组细胞下室面细胞数为(136.5±18.5)个,显著高于对照组细胞的(87.4±15.7)个,差异具有统计学意义(t=4.256,P<0.001).结论 miR-210在乳腺癌组织中高表达,且与患者病情进展、肿瘤恶性程度及预后密切相关,体外miR-210可促进三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞的恶性行为,是潜在的分子标志物及靶向治疗位点.

目的:检测微小RNA-425-5p(miR-425-5p)在子宫内膜癌患者血清和组织中的表达及与预后关系.方法:收集本院2014年4月-2015年5月收治的子宫内膜癌患者84例为研究对象,另取健康体检妇女50例为健康对照组.qRT-PCR检测受试者血清及患者癌组织和癌旁组织中miR-425-5p表达水平.结果:子宫内膜癌患者血清miR-425-5p表达水平高于对照组,癌组织中表达水平高于癌旁正常组织(均P＜0.05);血清和组织中miR-425-5p表达水平与子宫内膜癌肿瘤分期、淋巴结转移和分化程度有关,低表达患者总生存率高于高表达患者(均P＜0.05).COX分析表明,血清和组织中miR-425-5p表达水平、组织分化程度是影响子宫内膜癌患者预后的独立危险因素(P＜0.05).结论:miR-425-5p在子宫内膜癌患者血清和组织中表达均上调,且与患者预后有关,可作为子宫内膜癌患者预后评判的参考指标.

目的 探讨微小RNA-425-5p(miR-425-5p)靶向FOXJ3对乳腺癌细胞的作用.方法 用Lipofiectamine2000分别将miR-425-5p inhibitor及NC转染至MDA-MB-231乳腺癌细胞作为miR-425-5p inhibitor组和NC组,不做任何处理的为对照组.通过RT-qPCR测乳腺上皮细胞MCF10A及miR-425-5p inhibitor组、NC组、对照组中miR-425-5p及FOXJ3mRNA表达水平.通过MTT法测miR-425-5p inhibitor组、NC组、对照组细胞增殖情况;通过流式细胞仪测3组细胞凋亡情况;Transwell小室实验测细胞侵袭情况;Western-blot测细胞中FOXJ3、CyclinD1、Bcl-2、MMP-2蛋白表达情况;双荧光素酶实验验证miR-425-5p与FOXJ3的靶向关系.结果 与乳腺上皮细胞MCF10A比,乳腺癌细胞MDA-MB-231中miR-425-5p表达水平显著升高(P<0.05),FOXJ3mRNA表达水平显著下降(P<0.05);与对照组和NC组比,miR-425-5p inhibitor组细胞增殖、迁移、侵袭能力受到抑制,细胞凋亡率升高(P<0.05);双荧光素酶实验结果显示抑制miR-425-5p表达显著增加野生型FOXJ33'UTR萤光素酶活性,对突变型FOXJ33'UTR的萤光素酶活性无影响.结论 下调miR-425-5p可能通过靶向FOXJ3抑制乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭,并促进细胞凋亡.

目的 探究微小RNA-425-5p(miR-425-5p)在大鼠心肌梗死(MI)诱发实验性心肌纤维化中的调控作用及其潜在的作用机制.方法 在体水平选用雄性SD大鼠20只,采用随机数字表法分为假手术组、MI模型组.采用冠状动脉左前降支结扎术构建大鼠MI模型,假手术组开胸后只做冠状动脉穿线并不结扎.模型建立4周后,取心肌组织进行Masson染色及胶原含量测定,分析两组大鼠心肌纤维化程度.采用实时荧光定量PCR检测miR-425-5p及转化生长因子β1(TGF-β1)mRNA的表达,借助Western Blot检测TGF-β1蛋白的表达水平.为验证miR-425-5p是否可以调控TGF-β1的表达,采用氯化钴及低糖培养液处理来源于胚胎期BD1X大鼠心脏组织的亚克隆细胞系H9c2,构建体外细胞模型模拟在体MI模型,并将H9c2细胞分为对照组、模型组、miR-425-5p mimic处理组.采用RT-PCR及Western Blot分别检测上述三组细胞中miR-425-5p和TGF-β1 mRNA及蛋白水平的表达.结果 Masson染色及胶原含量测定结果显示,与假手术组比较,MI模型组大鼠心肌组织内胶原纤维粗大,大量胶原堆积,胶原含量显著增加(0.68±0.09比0.34±0.08,t=0.153,P<0.01);miR-425-5p水平显著降低,TGF-β1的mRNA及蛋白表达显著增加(均为P<0.01).体外细胞实验表明,miR-425-5p mimic可以逆转氯化钴诱导H9c2细胞缺氧模型细胞中TGF-β1表达上调(P<0.05).结论 miR-425-5p参与MI诱发的实验性心肌纤维化的调控,其作用可能与调控TGF-β1信号通路密切相关.

目的 探讨微小RNA(miR)-425-5p对宫颈癌海拉细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其机制.方法 2018年10月至2019年10月,利用Lipofectamine TM 2000将miR-425-5p模拟物(mimics)、抑制剂(inhibitor)及其阴性对照转染至海拉细胞中,采用实时荧光定量PCR检测细胞中miR-425-5p的表达情况,MTT法检测细胞增殖活力,平板克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,Transwell小室实验检测细胞侵袭和迁移,蛋白质印迹法(Western blotting)检测细胞中磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)蛋白的表达.采用生物信息学软件预测、双荧光素酶报告基因实验验证miR-425-5p和PTEN的靶向关系.将PTEN过表达质粒pcDNA3.1-PTEN和PTEN干扰序列siRNA-PTEN转染至海拉细胞后,观察PTEN对海拉细胞增殖活力、克隆形成能力、侵袭能力和迁移能力的影响.结果 与各自阴性对照比较,miR-425-5p过表达可促进海拉细胞增殖[(142.25±11.32)％比(100.00±6.67)％]、克隆形成、侵袭[(133.28±9.86)个比(77.46±5.32)个]和迁移[(187.56±15.12)个比(115.35±10.26)个]并下调PTEN蛋白表达,而miR-425-5p低表达则抑制海拉细胞增殖[(58.38±3.45)比(100.00±5.74)]、克隆形成、侵袭[(43.32±3.62)个比(75.65±6.15)个]和迁移[(62.28±4.05)个比(109.72±9.84)个]并上调PTEN蛋白表达(P<0.05).双荧光素酶报告基因实验证实,PTEN是miR-425-5p的靶基因;PTEN过表达可促进海拉细胞增殖[(66.52±4.36)％比(100.00±6.18)％]、克隆形成、侵袭[(46.23±3.13)个比(71.65±5.24)个]和迁移[(62.65±4.26)个比(108.42±8.57)个],而PTEN低表达则抑制海拉细胞增殖[(136.52±9.85)个比(100.00±7.05)个]、克隆形成、侵袭[(110.27±9.85)个比(70.52±6.18)个]和迁移[(168.78±16.96)个比(113.26±10.13)个].结论 miR-425-5p可通过靶向调控PTEN表达促进宫颈癌海拉细胞增殖、侵袭和迁移.

目的 研究下调微小RNA(miR)-425-5p靶向第10号染色体同源缺失性磷酸酶-张力蛋白(PTEN)调控宫颈癌Caski细胞侵袭和迁移的分子机制.方法 本研究起止时间为2018年12月至2019年11月.以宫颈癌Caski细胞为探讨对象,转染miR-425-5p抑制剂(inhibitor),PTEN siRNA和miR-425-5p inhibitor共转染到宫颈癌Caski细胞;MTT法测定细胞增殖,Transwell小室测定细胞侵袭和迁移;在线靶基因预测软件发现PTEN与miR-425-5p可能互为靶向关系,荧光素酶报告系统鉴定靶向关系;蛋白质印迹法(Western blotting)测定上皮钙黏素(E-cadherin)、神经钙黏素(N-cadherin)蛋白表达.结果 转染miR-425-5p inhibitor后的宫颈癌Caski细胞miR-425-5p表达量降低[(0.96±0.15)比(0.32±0.04)],增殖[(0.47±0.05)比(0.23±0.04)]、侵袭[(95.32±7.86)比(63.17±5.22)]及迁移[(140.88±13.94)比(89.64±9.57)]能力降低,E-cadherin表达上调[(0.29±0.05)比(0.65±0.07)],N-cadherin表达下调[(0.59±0.04)比(0.30±0.04)].miR-425-5p靶向负调控PTEN表达.PTEN siRNA可以逆转下调miR-425-5p对宫颈癌Caski细胞增殖、侵袭和迁移的抑制作用.结论 下调miR-425-5p靶向PTEN抑制宫颈癌Caski细胞侵袭和迁移.

目的 探讨吡非尼酮通过调控miRNA-425-5p及转化生长因子(TGF)-β/Smad通路改善心肌梗死大鼠心肌纤维化程度的作用.方法 将60只雄性SD大鼠分为3组:假手术组(不结扎冠状动脉)、模型组、吡非尼酮组(吡非尼酮0.3 g/kg灌胃).造模4周后采用心脏多普勒超声评价各组大鼠心脏功能;酶联免疫吸附试验检测血浆中白细胞介素6(IL-6)、Ⅰ型胶原蛋白α2(COL1α2)、Ⅲ型胶原蛋白α1(COL3α1)的水平;采用Masson染色法评价大鼠心肌纤维化程度,使用Image-Pro Plus 6.0分析各组心肌胶原容积分数;Western blot检测心肌组织中TGF-β1、Smad2、Smad3蛋白表达水平;实时荧光定量PCR(qPCR)检测心肌组织中TGF-β1和miRNA-425-5p表达水平.同时在体外分离、培养乳鼠心肌成纤维细胞,分为对照组(不加任何物质)、miRNA-425-5p mimic组(加入转染miRNA-425-5p mimic)、吡非尼酮组(加入1.5 g/L的吡非尼酮).采用qPCR检测各组miRNA-425-5p和TGF-β1 mRNA表达水平.结果 模型组大鼠与假手术组相比心脏左心室舒张末期内径(LVEDd)、左心室收缩末期内径(LVESd)增大,左心室射血分数(LVEF)、左心室短轴缩短率(FS)降低(P<0.05);Masson染色及定量分析结果显示心肌纤维化加重;炎性因子IL-6、COL3α1、COL1α2水平明显升高(P<0.05);心肌组织TGF-β1、Smad2、Smad3蛋白表达升高,miRNA-425-5p表达水平降低(均P<0.05).吡非尼酮组与模型组相比,LVEDd、LVESd缩小,LVEF、FS升高(P<0.05),Masson染色及定量分析结果示心肌纤维化程度减轻,血浆炎性因子IL-6、COL3α1、COL1α2水平明显降低(P<0.05);心肌组织TGF-β1、Smad2、Smad3蛋白表达水平降低,miRNA-425-5p表达水平升高(均P<0.05).体外细胞实验结果表明,miRNA-425-5p mimic组与对照组相比,miRNA-425-5p表达水平升高,TGF-β1 mRNA表达水平降低(P<0.05).吡非尼酮组与对照组相比,miRNA-425-5p表达水平升高,TGF-β1 mRNA表达水平降低(P<0.05).结论 吡非尼酮可通过调节miRNA-425-5p表达水平调控TGF-β/Smad信号通路,减轻心肌纤维化,改善心肌梗死后心力衰竭大鼠心脏功能.

目的 探讨皮肤鳞状细胞癌(CSCC)组织中微小RNA(miR)-421、程序性细胞死亡因子4(PDCD4)mRNA的表达及临床意义.方法 选取CSCC患者78例,取癌组织、癌旁组织(距癌组织边缘5 cm以上),以同期50例正常皮肤组织作为对照.应用荧光定量PCR法检测癌、癌旁及正常组织中miR-421、PDCD4 mRNA表达.相关性分析采用Pearson相关分析.应用miRNA数据库TargetScan对miR-421与PDCD4 mRNA可能的结合位点进行预测.比较miR-421、PDCD4 mRNA表达与CSCC患者临床病理特征的关系.采用受试者工作特征(ROC)曲线分析miR-421、PDCD4 mRNA及两者联合对CSCC发生的诊断价值.结果 CSCC组织中miR-421表达高于癌旁组织和正常组织,PDCD4 mRNA表达低于癌旁组织和正常组织(P均<0.05).CSCC组织中miR-421与PDCD4 mRNA表达呈负相关(r=-0.694,P<0.05).TargetScan分析发现,PDCD4 mRNA的3′UTR区第419～425位点存在与miR-421结合的位点.不同肿瘤TNM分期、淋巴结转移CSCC患者癌组织中miR-421、PDCD4 mRNA表达差异有统计学意义(P均<0.05).miR-421、PDCD4 mRNA及两指标联合诊断CSCC发生的曲线下面积分别为0.826、0.764、0.889,联合检测时曲线下面积优于miR-421、PDCD4 mRNA单项检测的诊断效能(Z分别为2.409、4.363,P均<0.05).结论 CSCC组织中miR-421表达升高,PDCD4 mRNA表达降低,两者与CSCC肿瘤TNM分期、淋巴结转移有关,二者联合检测有助于评估CSCC的发生.