目的:探讨miR-425-5p对脂多糖诱导的肠道L细胞胰升糖素样肽1(GLP-1)分泌的影响及其机制。方法:采用脂多糖孵育肠道L细胞系GLUTag细胞，检测miR-425-5p和GLP-1的表达和分泌；采用MTT法测定细胞活力，流式细胞术检测细胞凋亡。采用实时定量PCR和Western印迹法检测miR-425-5p、磷酸酶和张力蛋白同源基因(PTEN)、胰升糖素原mRNA和蛋白的表达。通过检测TOP/FOP比率测定Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路的活性。采用双荧光素酶报告基因实验和染色质免疫共沉淀(ChIP)明确miR-425-5p与PTEN、β-catenin之间的相互作用。结果:在GLUTag细胞中，随着脂多糖浓度的升高，miR-425-5p表达增加，活性GLP-1水平降低，细胞凋亡增加，细胞活力下降；而且miR-425-5p参与脂多糖对GLP-1表达和肠道L细胞活力的调节作用。抑制miR-425-5p可降低胰升糖素原mRNA表达和TOP/FOP比率，提高PTEN蛋白水平，抑制细胞活力。在脂多糖诱导下，miR-425-5p通过靶向PTEN上调β-catenin的表达水平，而β-catenin作为顺式作用元件诱导胰升糖素原的转录，进而促进GLP-1的表达。结论:在脂多糖诱导的肠道L细胞中，miR-425-5p通过靶向PTEN调控β-catenin水平进而促进GLP-1的分泌。

目的:探讨脂多糖（LPS）促进肠道L细胞 miR-425-5p表达的机制。 方法:将肠道L细胞系GLUTag细胞分为对照（NC）组、LPS组（LPS 200 ng/ml培养24 h）、小干扰RNA（siRNA）NC组（LPS 200 ng/ml培养24 h后转染siRNA NC）和NF-κB siRNA组［LPS 200 ng/ml培养24 h后转染核因子-κB（NF-κB）siRNA］，每组3个复孔。采用Western blotting检测细胞核及细胞质中NF-κB p65蛋白表达水平，实时荧光定量聚合酶链反应检测 miR-425-5p表达水平，酶联免疫吸附测定法检测胰高糖素样肽-1（GLP-1）的分泌水平。采用Promo软件分析预测 miR-425-5p启动子上NF-κB的潜在结合位点，双荧光素酶报告实验检测 miR-425-5p启动子区域结合位点的相对活性，染色质免疫沉淀反应验证NF-κB与 miR-425-5p之间的相互作用。两组之间比较采用独立样本 t检验，多组之间比较采用单因素方差分析。 结果:与对照组相比，LPS组的GLP-1分泌水平显著下降（ P<0.01）， miR-425-5p表达水平显著升高（ P<0.01）、细胞质和细胞核中NF-κB p65蛋白表达水平显著升高（ P<0.05）。与siRNA NC组相比，NF-κB siRNA组细胞核及细胞质中NF-κB p65的蛋白表达水平、 miR-425-5p表达水平均明显下降（ P<0.01）。LPS诱导下，含有两个结合位点（2-Luc/3-Luc）的 miR-425-5p启动子活性明显高于含有单独的结合位点（3-Luc），差异具有统计学意义（ P<0.01）；NF-κB与 miR-425-5p基因启动子序列结合位点2的结合能力最强（ P<0.01）。 结论:LPS通过活化NF-κB，促进其与 miR-425-5p基因启动子序列的结合位点2结合，进而促进肠道L细胞 miR-425-5p转录，最终调节肠道L细胞GLP-1分泌。

背景:激素性股骨头坏死多是由于长期大量使用激素所致,但具体的发病机制尚未明确,有待于进一步研究.目的:筛选出三七总皂苷干预破骨细胞来源外泌体中的差异miRNA,在此基础上构建成骨相关铁死亡调控网络,以探索激素性股骨头坏死发生的潜在机制及研究方向.方法:MTT实验检测不同浓度地塞米松和不同质量浓度三七总皂苷对Raw264.7细胞系的毒性作用;抗酒石酸酸性磷酸酶染色和TUNEL染色检测三七总皂苷对破骨细胞抑制和凋亡的影响;从三七总皂苷干预的破骨细胞中提取外泌体,对外泌体进行测序找出差异表达miRNA,通过CytoScape 3.9.1构建并可视化差异表达的miRNA与mRNA间的调控网络;通过GO分析和KEGG分析筛选候选mRNA;最后筛选出铁死亡相关的差异基因,构建铁死亡相关基因的调控网络.结果与结论:①通过MTT实验确定了适合干预Raw264.7细胞的地塞米松浓度(0.1 μmol/L)和三七总皂苷质量浓度(1 736.85 μg/mL);②三七总皂苷对破骨细胞有抑制作用并能促进其凋亡;③从破骨细胞来源外泌体样本中鉴定出20个差异miRNA,通过靶标mRNA预测出11种成骨相关的差异miRNA,并构建了4个上调的差异表达miRNA对应于155个下调的候选mRNA以及7个下调的差异表达miRNA对应于238个上调的候选mRNA的调控网络;④在差异基因中筛选出与铁死亡相关的基因24个,最终构建了12个网络(miR-98-5p/PTGS2,miR-23b-3p/PTGS2,miR-425-5p/TFRC,miR-133a-3p/TFRC,miR-185-5p/TFRC,miR-23b-3p/NFE2L2,miR-23b-3p/LAMP2,miR-98-5p/LAMP2,miR-182-5p/LAMP2,miR-182-5p/TLR4,miR-23b-3p/ZFP36,miR-182-5p/ZFP36).这些结果表明三七总皂苷可能通过调控破骨细胞外泌体来源miRNA的表达来调节成骨细胞铁死亡,为激素性股骨头坏死的机制研究提供新的思路.

目的 筛选类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)活动期患者和健康体检者血浆外泌体(exosomes)中差异表达的微小核糖核酸(microRNAs,miRNAs),并进行生物信息学分析,以探讨血浆外泌体miRNAs在RA致病中的作用及其潜在临床应用价值.方法 选取 2023 年 01～04 月就诊于苏州大学附属第二医院风湿免疫科的 39 例RA患者作为研究对象,同时选取 39 例健康体检者作为正常对照.利用Illumina高通量测序技术检测血浆外泌体中miRNAs的表达水平,以log2(Fold Change)绝对值>1 和P值<0.05 为条件获得差异表达的miRNAs.按照P值从小到大的顺序挑选6条miRNAs进行生物信息学分析,并利用实时荧光定量PCR(quantitative real-time fluorescence PCR,qRT-PCR)验证.结果 与对照组相比,RA患者血浆外泌体中存在22条异常表达的miRNAs,4条上调,18条下调.其中,miR-30b-5p,miR-144-3p,miR-20a-5p,miR-223-5p,miR-425-3p和miR-589-5p的水平变化显著.GO和KEGG富集分析结果显示,差异表达的miRNAs可能通过调节转化生长因子-β(TGF-β)和PI3K/AKT信号通路参与疾病进展,涉及Th17 细胞分化、细胞间相互作用和蛋白磷酸化等生物学过程.qRT-PCR验证结果显示,与对照组相比,RA患者血浆外泌体miR-144-3p和miR-425-3p的表达水平明显降低,差异具有统计学意义(t=3.617,3.595,均P<0.001),而miR-30b-5p,miR-223-5p,miR-589-5p和miR-20a-5p的表达差异均无统计学意义(t=1.956,1.331,1.662,1.861,均P>0.05).结论 RA患者血浆外泌体的miRNAs表达谱发生改变,可能通过TGF-β等信号通路参与疾病进展,外泌体miR-144-3p和miR-425-3p是RA疾病诊断的潜在血清学标志物.

目的:探讨环状RNA(circRNA)circ-TAGLN在卵巢癌细胞中的表达情况和过表达circ-TAGLN对卵巢癌细胞增殖和侵袭的影响及分子机制.方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)技术分析circ-TAGLN在卵巢癌细胞系SK-OV-3、OC3、Caov-3、A2780、HO-8910和正常卵巢上皮细胞IOSE80中的表达差异.分别转染pcDNA3.1对照质粒(NC组)和pcDNA3.1-circ-TAGLN质粒(circ-TAGLN组)至SK-OV-3细胞.利用平板克隆实验和Transwell实验检测卵巢癌SK-OV-3细胞的增殖和侵袭能力.双荧光素酶报告实验验证circ-TAGLN与miR-425-5p的靶向关系.利用RT-qPCR技术分析过表达circ-TAGLN对SK-OV-3细胞中miR-425-5p表达的影响.Western blot检测过表达circ-TAGLN对SK-OV-3细胞中PI3K/AKT信号通路蛋白p-PI3K、p-AKT、p-mTOR、VEGF、eNOS表达的影响.结果:与IOSE80细胞相比,circ-TAGLN在卵巢癌细胞系SK-OV-3、OC3、Caov-3、A2780、HO-8910中低表达(均P<0.05).NC组与circ-TAGLN组中circ-TAGLN相对表达分别为(1.01±0.34)和(7.56±1.07),circ-TAGLN组SK-OV-3细胞中circ-TAGLN表达高于NC组(P<0.01).在SK-OV-3细胞中,过表达circ-TAGLN后细胞增殖能力和侵袭能力均下降(均P<0.01).circ-TAGLN靶向结合miR-425-5p(P<0.01).NC组与circ-TAGLN组SK-OV-3细胞中miR-425-5p表达分别为(5.57±0.91)和(1.01±0.17),与NC组相比,过表达circ-TAGLN后SK-OV-3细胞中miR-425-5p表达被抑制(P<0.01).在SK-OV-3细胞中,过表达circ-TAGLN后细胞中PI3K/AKT信号通路蛋白p-PI3K、p-AKT、p-mTOR、VEGF、eNOS表达下降(均P<0.01).结论:circ-TAGLN在卵巢癌细胞中低表达,并能通过靶向降低miR-425-5p表达抑制卵巢癌细胞的增殖和侵袭,circ-TAGLN可作为卵巢癌潜在的分子治疗靶点.

目的 拟筛选宫颈鳞癌预后相关的miRNAs分子并探索其可能的作用机制,为改善宫颈鳞癌预后提供实验依据.方法 通过生物信息学方法比较分析宫颈鳞癌患者和正常对照的基因表达情况,获得差异表达的miRNA;然后进行生存分析,找到与预后相关的关键 miRNA;最后通过构建 lncRNA-miRNA-mRNA 竞争性内源 RNA(ceRNA)网络及基因本体论(GO)和京都基因和基因组百科全书(KEGG)分析,探索预后相关的ceRNA网络.结果 共获得宫颈鳞癌中差异表达的miR-NA 106 个,其中,9 个 miRNAs(hsa-miR-425-5p、hsa-miR-145-3p、hsa-miR-1307-3p、hsa-miR-200c-3p、hsa-miR-142-5p、hsa-miR-145-5p、hsa-miR-155-5p、hsa-miR-210-5p、hsa-miR-142-3p)与预后显著相关.成功构建了一个宫颈鳞癌预后相关的ceRNA网络,其中包括5 个miRNA节点、132 个mRNA节点、44 个lncRNA节点和181 条边.最后,GO和KEGG分析显示该网络主要涉及蛋白结合、生长因子结合、转录因子的活化、DNA特异序列的结合等功能,主要参与环磷酸鸟苷酸-蛋白激酶(cGMP-PK)G、腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、叉头框蛋白(Fox)O信号通路等的调节.结论 hsa-miR-425-5p等9 个miRNAs与宫颈鳞癌预后显著相关,并可能通过lncRNA-miRNA-mRNA ceRNA网络的方式参与预后调控,为宫颈鳞癌预后相关机制研究提供新思路.

目的:探讨非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)胸部放射治疗剂量与循环血miR-29a和miR-150的相关性.方法:收集56例2014年1月至2015年12月在我院接受放射治疗的诊断为NSCLC的患者,其中5例NSCLC患者在0、20、40、60 Gy辐照后用miRNA芯片检测循环血miRNA表达差异;51例NSCLC患者在0、20、40 Gy辐照后用实时定量PCR验证循环血中候选 miRNA表达;医用直线加速器(2 Gy/天,连续处理3天)辐照A549和MRC5细胞,实时定量PCR检测细胞内和细胞上清外泌体miR-29a和miR-150的表达.结果:miRNA芯片筛选出随着患者放疗剂量的增加而差异表达的10个 miRNA (miR-29a、miR-150、miR-142、miR-342、miR-125b、miR-101、miR-425、miR-338、miR-126、miR-15b).验证发现验证组患者0、20、40 Gy辐照后循环血 miR -29a和 miR -150表达具有统计学差异(P<0.05).验证组循环miR-29a和miR-150分别与V5、V20、MLD、Mean Eso呈负相关.A549及MRC5细胞辐照3天后细胞内miR-29a和miR-150表达显著增加(P<0.05),细胞上清外泌体中表达显著下降(P<0.05).结论:循环血miR-29a和miR-150与NSCLC胸部放射治疗剂量相关.

目的 血管新生在肿瘤、糖尿病等血管异常增生性疾病和冠心病、心肌梗死、脑梗死等缺血性心脑血管病的发生、发展及治疗中具有重要作用.微小RNA(miRNAs)与血管新生之间联系紧密,miRNAs对血管新生的作用包括促进血管新生和抑制血管新生两个方面,促进血管新生的miRNAs包括miR-126、miR-378、miR-132、miR-146a、miRNA-31、miR-425-5p、let-7f等,抑制血管新生的miRNAs包括miR-195、miR-140-5p、miR-150、miR-497、miR-214、miR-221/miR-222、miR-29b、miR-29c等.miRNAs在血管新生信号通路上具有同时调控多个基因的潜力,并且体积小、物种间序列保守性强、相对稳定,可作为一种很有前景的调控血管新生的治疗靶点.

目的 探究微小RNA-210(miR-210)在乳腺癌组织中的表达及临床意义,并探究其在体外对人三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖及转移能力的影响.方法 收集湖南省肿瘤医院病理科2013年12月至2015年9月乳腺癌组织及相应癌旁组织标本各82例,荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测组织及细胞中miR-210的表达水平,分析miR-210与患者临床资料及预后的关系.三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231转染含miR-210全长的载体作为实验组,转染空白载体作为对照组,CCK-8实验检测两组细胞增殖能力,Transwell侵袭及迁移实验检测两组细胞转移及侵袭能力.结果 qRT-PCR结果显示乳腺癌组织中miR-210的表达水平为0.198±0.014,显著高于癌旁组织的0.084±0.009,差异具有统计学意义(t=8.141,P<0.001);三阴性乳腺癌组织miR-210表达水平为0.254±0.026,显著高于非三阴性乳腺癌组织0.167±0.015,差异具有统计学意义(t=3.175,P=0.003).miR-210高表达、低表达两组患者TNM分期、分子分型差异有统计学意义(χ2=7.859,P=0.005;χ2=7.053,P=0.008);而miR-210高表达的患者4年生存率显著低于低表达患者(49.37％:76.80％),差异具有统计学意义(χ2=4.743,P=0.024).qRT-PCR结果显示,实验组细胞miR-210的表达水平为0.517±0.038,显著高于对照组细胞的0.284±0.022,差异具有统计学意义(t=9.280,P<0.001).CCK-8实验结果显示实验组细胞48、72及96 h时增殖能力显著高于对照组细胞(3.771±0.452:3.206±0.314;7.662±0.619:6.736±0.552;15.477±1.425:11.592±1.243),差异具有统计学意义(t=2.296,P=0.025;t=2.496,P=0.019;t=4.594,P=0.001).Transwell侵袭实验结果显示实验组细胞下室面细胞数为(107.8±13.0)个,显著高于对照组细胞的(74.4±10.9)个,差异具有统计学意义(t=3.732,P=0.001);迁移实验结果显示实验组细胞下室面细胞数为(136.5±18.5)个,显著高于对照组细胞的(87.4±15.7)个,差异具有统计学意义(t=4.256,P<0.001).结论 miR-210在乳腺癌组织中高表达,且与患者病情进展、肿瘤恶性程度及预后密切相关,体外miR-210可促进三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞的恶性行为,是潜在的分子标志物及靶向治疗位点.

目的:检测微小RNA-425-5p(miR-425-5p)在子宫内膜癌患者血清和组织中的表达及与预后关系.方法:收集本院2014年4月-2015年5月收治的子宫内膜癌患者84例为研究对象,另取健康体检妇女50例为健康对照组.qRT-PCR检测受试者血清及患者癌组织和癌旁组织中miR-425-5p表达水平.结果:子宫内膜癌患者血清miR-425-5p表达水平高于对照组,癌组织中表达水平高于癌旁正常组织(均P＜0.05);血清和组织中miR-425-5p表达水平与子宫内膜癌肿瘤分期、淋巴结转移和分化程度有关,低表达患者总生存率高于高表达患者(均P＜0.05).COX分析表明,血清和组织中miR-425-5p表达水平、组织分化程度是影响子宫内膜癌患者预后的独立危险因素(P＜0.05).结论:miR-425-5p在子宫内膜癌患者血清和组织中表达均上调,且与患者预后有关,可作为子宫内膜癌患者预后评判的参考指标.