目的:应用生物信息学技术筛选结直肠癌(CRC)关键长链非编码RNA(lncRNA)，并对筛选出的LINC00174在CRC中的作用机制进行初步分析。方法:对癌症基因组图谱(TCGA)数据库中638例CRC和51例癌旁组织的RNA数据分析，应用Wilcoxon检验识别筛选差异表达明显的RNA；Pearson相关性检验确定lncRNA-mRNA关系对；在Starbase v3.0数据库中确定与lncRNA-mRNA关系对中RNA分子存在互作关系的微小RNA(miRNA，miR)。对TCGA数据库中CRC临床数据使用R软件包的"survival"和"survminer"方法进行生存分析，探讨lncRNA-mRNA关系对预测预后的价值。用STRING数据库及metascape平台对mRNA编码蛋白(ZNF692)的功能进行分析。收集40例新鲜的CRC及癌旁组织，应用荧光实时定量PCR(qRT-PCR)对筛选出的RNA检测，验证生物信息学结果。符合正态分布的计量资料采用均数±标准差( ± s)表示，各指标间关系采用 t检验及Person相关分析。 结果:与癌旁组织比较，CRC组织中上调的LncRNA为820，下调的为951；上调的mRNA为1 628，下调为3127。分析后确定2775对候选lncRNA-mRNA，其中501对与患者生存有关。进一步通过功能分析发现LINC00174-ZNF692对可能在CRC进展中有重要作用。结果显示，LINC00174、ZNF692在CRC组织中表达水平(14.52±0.97、17.12±0.72)高于癌旁组织(13.50±0.60、15.53±0.44， W＝26 747、31 438， P<0.01)；LINC00174与ZNF692呈正相关( r＝0.58， P<0.01)。生存分析结果显示，LINC00174-ZNF692对高表达是CRC患者预后差的标志( χ2＝5.52， P<0.05)，其风险比( HR)为1.51(1.05～2.20)( P<0.05)。对Starbase v3.0数据库分析显示，ZNF692通过海绵吸附miR-200b-3p与LINC00174形成内源性竞争RNA(ceRNA)机制发挥作用。富集分析显示，ZNF692蛋白在泛素介导的蛋白降解、mRNA监控、核苷酸切除修复等过程。组织验证结果显示，LINC00174、ZNF692在CRC水平(2.65±1.23、1.19±0.33)明显高于癌旁组织(0.83±0.39、0.42±0.17， t＝8.92、13.12， P<0.01)；miR-200b-3p在CRC水平(0.35±0.13)明显低于癌旁组织(0.82±0.22， t＝－11.63， P<0.01)。Pearson分析显示，CRC组织中LINC00174与ZNF692呈正相关( r＝0.81， P<0.01)；LINC00174与miR-200b-3p、ZNF692与miR-200b-3p均呈负相关( r＝－0.75、－0.53， P<0.01)。 结论:LINC00174可能通过海绵吸附机制调控miR-200b-3p/ZNF692轴在CRC进展中发挥重要作用。

目的:研究食管癌组织中微小RNA-501-5p(miR-501-5p)与溶血磷脂酸受体1(LPAR1)mRNA的表达水平，并分析其与临床病理资料之间的关系。方法:选取2015年1月至2017年8月于滇南中心医院住院治疗的130例食管癌患者为研究对象。应用荧光实时定量PCR技术(qRT-PCR)检测食管癌组织和癌旁正常组织中miR-501-5p及LPAR1 mRNA的相对表达量，分析miR-501-5p和LPAR1 mRNA与患者临床病理资料的关系及两指标的相关性。采用Kaplan-Meier检验分析miR-501-5p和LPAR1 mRNA的表达与患者预后的关系。结果:食管癌组织中miR-501-5p的相对表达量高于癌旁组织，LPAR1 mRNA的相对表达量低于癌旁组织，差异有统计学意义( P<0.05)。食管癌组织中miR-501-5p和LPAR1 mRNA的相对表达量与肿瘤TNM分期、分化程度、淋巴结转移有关( P<0.05)，与患者年龄、性别及肿瘤长径无关( P>0.05)。相关性分析结果显示，食管癌组织中miR-501-5p和LPAR1 mRNA的表达呈负相关( r＝-0.632， P<0.05)。Kaplan-Meier检验结果显示，高miR-501-5p表达组患者3年总体生存率(OS)低于低表达组，高LPAR1 mRNA表达组患者3年OS高于低表达组，差异有统计学意义( P<0.05)。 结论:食管癌组织中miR-501-5p表达水平高于癌旁组织、LPAR1 mRNA表达水平低于癌旁组织，并与肿瘤TNM分期、分化程度、淋巴结转移及预后有关，有望成为食管癌诊断、治疗及预后评估的生物标志物。

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)胸腺生成素反义RNA 1(TMPO-AS1)对食管癌细胞恶性生物学行为的影响及其机制。方法:2016年6月至2019年12月，实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测20例食管癌组织和癌旁组织中lncRNA TMPO-AS1和微小RNA(miR)-501-3p的水平，食管癌Eca109细胞分为lncRNA TMPO-AS1干扰组(转染si-NC和si-TMPO-AS1)；miR-501-3p过表达组(转染miR-NC和miR-501-3p)；lncRNA TMPO-AS1过表达组(转染pcDNA和pcDNA-TMPO-AS1)；lncRNA TMPO-AS1和miR-501-3p共抑制组(转染si-TMPO-AS1＋anti-miR-NC和si-TMPO-AS1＋anti-miR-501-3p)。噻唑蓝(MTT)法、流式细胞术和Transwell实验分别检测食管癌Eca109细胞增殖、凋亡率、细胞迁移和侵袭能力，蛋白质印迹法(Western blot)检测相关蛋白水平，双荧光素酶报告系统验证lncRNA TMPO-AS1与miR-501-3p的调控关系。两组间比较采用独立样本 t检验，多组间比较采用单因素方差进行分析。 结果:食管癌组织组中的lncRNA TMPO-AS1水平(2.64±0.26)高于癌旁组织(1.00±0.09， t＝26.657， P<0.05)，miR-501-3p水平(0.44±0.04)低于癌旁组织(1.00±0.07， t＝31.063， P<0.05)；干扰lncRNA TMPO-AS1的Eca109细胞24 h增殖(0.36±0.03)低于si-NC组(0.39±0.03， t＝2.121， P<0.05)，48 h增殖(0.45±0.04)低于si-NC组(0.75±0.07， t＝11.163， P<0.05)，72 h增殖(0.57±0.05)低于si-NC组(1.16±0.09， t＝17.191， P<0.05)，迁移细胞数[(54.14±5.65)个]低于si-NC组[(113.02±9.87)个， t＝15.531， P<0.05]，侵袭细胞数[(47.69±5.01)个]低于si-NC组[(96.32±9.88)个， t＝13.169， P<0.05]，细胞凋亡率[(22.15±2.22)%高于si-NC组[(6.98±0.69)%， t＝19.576， P<0.05]；过表达miR-501-3p的Eca109细胞48 h增殖(0.51±0.05)低于miR-NC组(0.77±0.07， t＝9.067， P<0.05)，72 h增殖(0.65±0.06)低于miR-NC组(1.15±0.09， t＝13.867， P<0.05)，迁移细胞数[(61.23±6.33)个]低于miR-NC组[(115.25±9.25)个， t＝14.458， P<0.05]，侵袭细胞数[(53.14±5.33)]低于miR-NC组[(98.32±8.47)个， t＝13.543， P<0.05]，细胞凋亡[(19.58±1.74)%]高于miR-NC组[(7.23±0.77)%， t＝19.471， P<0.05]，差异均有统计学意义。 结论:lncRNA TMPO-AS1通过靶向miR-501-3p促进食管癌细胞的恶性生物学行为，可被视为食管癌患者的潜在治疗靶标。

目的:研究乳腺癌患者血浆中微小RNA-501-5p(miR-501-5p)、钙激活氯通道调节蛋白A4(CLCA4)mRNA的表达水平及其诊断价值。方法:选取2019年2月至2020年12月武汉大学中南医院诊治的88例乳腺癌患者(乳腺癌组)及同时期的60例乳腺良性病变患者(对照组)，采用实时定量PCR(qRT-PCR)检测血浆中miR-501-5p及CLCA4 mRNA的相对表达量，并分析两者表达水平及在乳腺癌中的意义。结果:乳腺癌组患者血浆中miR-501-5p相对表达量明显高于对照组[(2.304±0.727) vs (1.813±0.324)， t＝4.906， P<0.001]，CLCA4 mRNA相对表达量明显低于对照组[(2.162±0.416) vs (4.037±0.542)， t＝23.905， P<0.001]，差异均有统计学意义。血浆miR-501-5p、CLCA4 mRNA表达水平在不同TNM分期、分化程度、是否淋巴结转移的乳腺癌患者中差异有统计学意义(均 P<0.05)。乳腺癌患者血浆中miR-501-5p及CLCA4 mRNA的表达呈负相关( r＝-0.731， P＝0.031)。受试者工作特征(ROC)曲线分析结果显示：血浆中miR-501-5p及CLCA4 mRNA的表达水平对乳腺癌均有较高的诊断价值，曲线下面积(AUC)均>0.700，二者联合应用价值更高，AUC为0.928，灵敏度和特异度分别为94.32%、93.33%。 结论:乳腺癌患者血浆中miR-501-5p表达升高，CLCA4 mRNA表达降低，与肿瘤TNM分期、细胞分化程度、淋巴结转移有关，可能有助于乳腺癌的辅助诊断。

目的 探究血清长链非编码RNA(lncRNA)CCDC18-AS1、微小RNA-501(miR-501)在人乳头瘤病毒(HPV)感染宫颈癌中的表达及其与预后的关系.方法 选取2019年5月至2020年5月该院诊治的78例HPV感染宫颈癌患者作为研究组,同期80例单纯的HPV感染患者及81例单纯非HPV感染的宫颈癌患者作为对照1、2组,采用实时荧光定量PCR检测血清lncRNA CCDC18-AS1、miR-501相对表达量,分析研究组临床特征、术后总生存期及无进展生存期.结果 研究组血清lncRNA CCDC18-AS1、miR-501相对表达量均高于对照1、2组(P<0.05),对照2组血清lncRNA CCDC18-AS1、miR-501相对表达量均高于对照1组(P<0.05).经Pearson相关性分析显示,研究组血清lncRNA CCDC18-AS1和miR-501呈正相关(r=0.421,P<0.001).研究组血清lncRNA CCDC18-AS1、miR-501与年龄无关,但与临床分期、分化程度、淋巴结转移情况、鳞状上皮细胞抗原有关(P<0.05).Kaplan Meier生存曲线法分析结果显示,lncRNA CCDC18-AS1与miR-501高表达组术后总生存期及无进展生存期均短于低表达组(P<0.05).结论 lncRNA CCDC18-AS1、miR-501相对表达量在HPV感染宫颈癌患者血清中明显升高,这一变化与患者临床特征及术后生存期具有关联性,可作为病情及其预后评估的辅助指标.

目的 研究CD4+淋巴细胞系中转录因子cAMP反应元件结合蛋白(CREB)对miR-30a的表达调节作用.方法 利用UCSC和Ensembl网站确定miR-30a基因启动子区;EMBOSS Cpgplot网站分析启动子区DNA序列的甲基化情况;ECR Browser网站分析启动子区转录因子结合区域及其保守性;JASPAR数据库筛选启动子区结合的转录因子;染色质免疫沉淀检测小鼠CD4+淋巴细胞中miR-30a基因启动子区CREB的结合量;依据培养基中是否添加CREB抑制剂KG-501 将小鼠CD4+淋巴细胞分为对照组、溶剂对照组和KG-501 处理组,RT-qPCR检测KG-501 对细胞中miR-30a表达的影响.结果 miR-30a基因启动子区未发现可被甲基化的CpG岛;启动子区含有高保守性的转录因子结合序列,其中包含多个CREB的结合位点;转录因子CREB直接结合于miR-30a基因启动子区的上游区段;添加KG-501 可明显下调细胞中miR-30a的表达(P＜0.05).结论 转录因子CREB直接结合于小鼠CD4+淋巴细胞中miR-30a基因启动子区的特定位点,调节miR-30a的表达.

目的 探讨24例宣威肺腺癌病人癌组织中miR-501-5p的表达与临床病理因素之间的关系及miR-501-5p在宣威地区肺腺癌中的作用.方法 收集24例宣威地区肺腺癌患者的癌组织及相应的正常肺标本,提取组织中的微小RNA (microRNA),采用QPCR技术,microRNAs芯片扫描,检测miR-501-5p在肺癌组织和相应正常肺组织的表达量.使用x2检验对miR-501-5P在宣威地区肺腺癌标本的表达量与临床特征因素(年龄,性别,肺癌分期及术前CEA值)进行统计学分析,运用多重回归分析miR-501-5p表达与临床特征(年龄,肺癌分期及术前CEA值)的关系.结果 通过对24对宣威地区肺腺癌配对样本进行microRNA芯片检测和QPCR验证均提示:miR-501-5p在宣威地区肺腺癌中呈上调(P＜0.01).mciroRNA芯片结果(癌vs肺组织)表达差异倍数:3倍(P＜0.05,FDR:0.07).qPCR验证结果(癌vs正常肺组织)表达倍数(x±s):5.702±4.626.x2检验芯片miR-501-5p表达量与临床特征结果显示与年龄(f=7.168,P=0.014),肺癌TNM分期(f=36.627,P＜0.01)及术前CEA值f=30.045,P＜0.01)关系密切;但与性别(f=3.612,P=0.071)无关.在多重回归分析结果提示:miR-501-5p表达量与患者年龄,肺癌TNM分期、血清CEA(癌胚抗原)均呈正相关(P＜0.05).结论 miR-501-5p在宣威地区肺腺癌标本中呈高表达,其与年龄,临床肺癌TNM分期、血清CEA呈显著相关,可能参与宣威地区肺腺癌的发生发展.

目的 探讨组织中高危型HPV病毒的载量和microRNA-124表达水平与宫颈癌发病的相关性,为宫颈癌的临床监测以及诊断提供依据.方法 选取在2013年9月-2016年9月在我院行宫颈活检的宫颈癌变患者205例,其中正常或炎症56例,宫颈上皮内瘤变Ⅰ级(cervical intraepithelial neoplasia grade Ⅰ,CIN Ⅰ)32例,宫颈上皮内瘤变Ⅱ级(CIN Ⅱ)37例,宫颈上皮内瘤变Ⅲ级(CIN Ⅲ)31例,宫颈癌49例(宫颈鳞癌38例,宫颈腺癌11例).对宫颈组织或细胞采用逆转录—荧光定量PCR检测microRNA-124的相对表达,采用第二代杂交捕获技术(HC Ⅱ)检测HPV18病毒的载量,病毒载量1 pg/ml为阴性组,1～ 50 pg/ml为低级载量组,51～500 pg/ml为中级载量组,501～1 000 pg/ml则为高级载量组,1 001 pg/ml及以上为极高病毒载量组.Spearman相关性分析病毒载量与宫颈组织病变程度的相关性.结果 宫颈癌组HPV18病毒载量及microRNA-124表达水平显著高于其他组(P均＜0.05),而正常或炎症组高危型HPV病毒载量及microRNA-124的表达水平最低(P=0.001),并且随着宫颈癌病变加重,HPV病毒载量及microRNA-124的表达水平也随之升高;Spearman相关分析显示,高危型HPV病毒载量与宫颈病变程度呈正相关(R=0.975,P=0.000);随着宫颈癌病变加重,microRNA-124表达水平呈线性升高(R=0.889,P=0.012).结论 宫颈组织中microRNA-124表达水平及高危型HPV病毒载量与宫颈癌的发生密切相关.

目的 预测并初步验证乳腺癌中靶向抑制8号染色体开放阅读框33(C8orf33)基因表达的微小RNA(miRNA).方法 使用癌症基因组图谱(TCGA)高通量数据进行泛癌症分析,首次发现包括乳腺癌在内的多种肿瘤组织中C8orf33基因较正常组织高表达,使用该数据库进一步分析发现C8orf33基因在不同肿瘤组织中表达也有差异性.使用Oncomine对上述结果进行验证,Oncomine分析结果与TCGA高通量数据分析结果相一致.进一步通过starBase V2.0中PITA、clipExpNum和miRmap 3种软件预测可靶向抑制C8orf33基因表达的miRNA,分析结果取交集.使用TCGA RNAseq数据库对分析交集结果进行验证,进一步确定miR-NA与C8orf33基因表达的相关性.结果 TCGA数据分析结果发现C8orf33基因在膀胱癌、乳腺癌、卵巢癌和肺鳞癌组织中表达水平均高于正常组织.Oncomine验证结果发现C8orf33基因在包括乳腺癌在内的多种肿瘤组织中表达水平与正常组织不同,且在多种肿瘤组织中表达水平有差异.PITA、clipExpNum和miRmap软件进行预测并取交集获得9个miRNA,分别为:hsa-miR-370、hsa-miR-501、hsa-miR-502、hsa-miR-6131、hsa-miR-1294、hsa-miR-206、hsa-miR-328、hsa-miR-1321和hsa-miR-1-2.使用LinkedOmics网站访问TCGA数据库,分别验证预测所得的9个miRNA在乳腺癌组织中与C8orf33基因表达的相关性.分析结果发现hsa-miR-370与C8orf33基因表达呈负相关(r=-0.124,P=0.026)、hsa-miR-1294与C8orf33基因表达呈负相关(r=-0.116,P=0.001)、hsa-miR-1-2与C8orf33基因表达呈负相关(r=-0.108,P=0.003),其余miRNA与C8orf33基因表达均无相关性.结论 乳腺癌中hsa-miR-370、hsa-miR-1294和hsa-miR-1-2具有潜在靶向抑制C8orf33基因表达的功能,可为乳腺癌诊断治疗提供新思路.

目的:检测瘢痕疙瘩中MicroRNA-501-5p(miR-501-5p)的表达,分析其与真核翻译起始因子3L(eIF3L)的靶向关系.方法:选择瘢痕疙瘩组织41例作为观察组,选择增生性瘢痕41例为对照组,选择正常皮肤组织41例作为正常对照组.应用实时荧光定量PCR法(qPCR)检测3组中miR-501-5p的表达,应用免疫组化法检测瘢痕疙瘩中eIF3L和Ki67的表达.选择永生化成纤维细胞系,应用双荧光素酶报告基因实验观察miR-501-5p与eIF3L的结合情况.结果:三组中miR-501-5p的表达比较差异有统计学意义(P<0.05).观察组中miR-501-5p的表达在有无家族史及不同病程的分组中差异有统计学意义(P<0.05).相关分析显示miR-501-5p与eIF3L呈正相关性.双荧光素酶报告基因实验显示miR-501-5p与eIF3L具有靶向关系.结论:瘢痕疙瘩中miR-501-5p高表达,与家族史及病程相关.miR-501-5p与eIF3L具有靶向关系.