目的:研究食管癌组织中微小RNA-501-5p(miR-501-5p)与溶血磷脂酸受体1(LPAR1)mRNA的表达水平，并分析其与临床病理资料之间的关系。方法:选取2015年1月至2017年8月于滇南中心医院住院治疗的130例食管癌患者为研究对象。应用荧光实时定量PCR技术(qRT-PCR)检测食管癌组织和癌旁正常组织中miR-501-5p及LPAR1 mRNA的相对表达量，分析miR-501-5p和LPAR1 mRNA与患者临床病理资料的关系及两指标的相关性。采用Kaplan-Meier检验分析miR-501-5p和LPAR1 mRNA的表达与患者预后的关系。结果:食管癌组织中miR-501-5p的相对表达量高于癌旁组织，LPAR1 mRNA的相对表达量低于癌旁组织，差异有统计学意义( P<0.05)。食管癌组织中miR-501-5p和LPAR1 mRNA的相对表达量与肿瘤TNM分期、分化程度、淋巴结转移有关( P<0.05)，与患者年龄、性别及肿瘤长径无关( P>0.05)。相关性分析结果显示，食管癌组织中miR-501-5p和LPAR1 mRNA的表达呈负相关( r＝-0.632， P<0.05)。Kaplan-Meier检验结果显示，高miR-501-5p表达组患者3年总体生存率(OS)低于低表达组，高LPAR1 mRNA表达组患者3年OS高于低表达组，差异有统计学意义( P<0.05)。 结论:食管癌组织中miR-501-5p表达水平高于癌旁组织、LPAR1 mRNA表达水平低于癌旁组织，并与肿瘤TNM分期、分化程度、淋巴结转移及预后有关，有望成为食管癌诊断、治疗及预后评估的生物标志物。

目的:研究乳腺癌患者血浆中微小RNA-501-5p(miR-501-5p)、钙激活氯通道调节蛋白A4(CLCA4)mRNA的表达水平及其诊断价值。方法:选取2019年2月至2020年12月武汉大学中南医院诊治的88例乳腺癌患者(乳腺癌组)及同时期的60例乳腺良性病变患者(对照组)，采用实时定量PCR(qRT-PCR)检测血浆中miR-501-5p及CLCA4 mRNA的相对表达量，并分析两者表达水平及在乳腺癌中的意义。结果:乳腺癌组患者血浆中miR-501-5p相对表达量明显高于对照组[(2.304±0.727) vs (1.813±0.324)， t＝4.906， P<0.001]，CLCA4 mRNA相对表达量明显低于对照组[(2.162±0.416) vs (4.037±0.542)， t＝23.905， P<0.001]，差异均有统计学意义。血浆miR-501-5p、CLCA4 mRNA表达水平在不同TNM分期、分化程度、是否淋巴结转移的乳腺癌患者中差异有统计学意义(均 P<0.05)。乳腺癌患者血浆中miR-501-5p及CLCA4 mRNA的表达呈负相关( r＝-0.731， P＝0.031)。受试者工作特征(ROC)曲线分析结果显示：血浆中miR-501-5p及CLCA4 mRNA的表达水平对乳腺癌均有较高的诊断价值，曲线下面积(AUC)均>0.700，二者联合应用价值更高，AUC为0.928，灵敏度和特异度分别为94.32%、93.33%。 结论:乳腺癌患者血浆中miR-501-5p表达升高，CLCA4 mRNA表达降低，与肿瘤TNM分期、细胞分化程度、淋巴结转移有关，可能有助于乳腺癌的辅助诊断。

目的:研究X射线辐射诱导非小细胞肺癌（NSCLC) A549细胞凋亡的适应性反应，并筛选适应性反应相关的微RNA (miRNA）。方法:将NSCLC A549细胞分为6组，包括50 mGy+20 Gy、200 mGy+20 Gy、20 Gy、50 mGy、200 mGy照射组及对照组（0 Gy），前2组细胞分别用50、200 mGy初始剂量进行照射，培养6 h后用20 Gy的效应剂量进行照射，20 Gy、50 mGy、200 mGy照射组同时进行照射。培养24 h后使用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。利用小RNA测序技术筛选差异表达miRNA，并对其靶基因进行基因本体（GO）及京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路的功能富集分析。采用实时荧光定量PCR (qRT-PCR）对部分差异表达miRNA进行验证。2组间数据的比较采用Welch t检验。 结果:50 mGy+20 Gy照射组和200 mGy+20 Gy照射组的A549细胞早期凋亡率分别为（1.81±0.11）%和（2.17±0.19）%，低于20 Gy照射组的（4.54±0.23）%，且差异均有统计学意义（ t=10.680、8.006，均 P<0.01）。与20 Gy照射组相比，50 mGy+20 Gy照射组和200 mGy+20 Gy照射组共同差异表达趋势miRNA有1个上调（miR-3662）、15个下调（miR-185-3p、miR-1908-5p、miR-1307-5p、miR-182-3p、miR-92a-3p、miR-582-5p、miR-501-3p、miR-138-5P、miR-1260b、miR-484、miR-378d、miR- 193b-3P、miR-127-3p、miR-1303及miR-654-5p）。GO富集分析结果显示，差异表达miRNA调控靶基因功能显著富集于细胞通讯调节、代谢过程的正向调节、代谢信号的调节、酶结合及催化活性等过程。KEGG富集分析结果显示，靶基因相关信号通路显著富集于溶酶体、丝裂原活化蛋白激酶、Ras和内吞作用等信号通路。qRT-PCR检测结果显示，miRNA表达情况与基因芯片结果趋势一致（10个miRNA表达水平得到验证）。 结论:X射线50、200 mGy照射剂量均能诱导NSCLC A549细胞凋亡的适应性反应，并筛选到一组共同差异表达的miRNA，可能在X射线辐射诱导细胞凋亡的适应性反应中发挥了重要作用，有可能成为调节电离辐射生物效应的潜在靶点。

目的 探究血清长链非编码RNA(lncRNA)CCDC18-AS1、微小RNA-501(miR-501)在人乳头瘤病毒(HPV)感染宫颈癌中的表达及其与预后的关系.方法 选取2019年5月至2020年5月该院诊治的78例HPV感染宫颈癌患者作为研究组,同期80例单纯的HPV感染患者及81例单纯非HPV感染的宫颈癌患者作为对照1、2组,采用实时荧光定量PCR检测血清lncRNA CCDC18-AS1、miR-501相对表达量,分析研究组临床特征、术后总生存期及无进展生存期.结果 研究组血清lncRNA CCDC18-AS1、miR-501相对表达量均高于对照1、2组(P<0.05),对照2组血清lncRNA CCDC18-AS1、miR-501相对表达量均高于对照1组(P<0.05).经Pearson相关性分析显示,研究组血清lncRNA CCDC18-AS1和miR-501呈正相关(r=0.421,P<0.001).研究组血清lncRNA CCDC18-AS1、miR-501与年龄无关,但与临床分期、分化程度、淋巴结转移情况、鳞状上皮细胞抗原有关(P<0.05).Kaplan Meier生存曲线法分析结果显示,lncRNA CCDC18-AS1与miR-501高表达组术后总生存期及无进展生存期均短于低表达组(P<0.05).结论 lncRNA CCDC18-AS1、miR-501相对表达量在HPV感染宫颈癌患者血清中明显升高,这一变化与患者临床特征及术后生存期具有关联性,可作为病情及其预后评估的辅助指标.

目的 探讨miR-145-3p对1-甲基-4苯基吡啶离子(MPP+)诱导的帕金森病(PD)细胞模型线粒体自噬的影响及其机制.方法 将人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)分为对照组、模型组、模拟物(mimics)组、钙调蛋白依赖性蛋白激酶激酶β(CaMkkβ)抑制剂(STO-609)组、mimics+STO-609组、环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)抑制剂(KG-501)组、mimics+KG-501组和STO-609+KG-501组.流式细胞术检测细胞凋亡,透射电镜观察自噬体结构,Western blot检测凋亡、自噬和CaMkkβ/腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/CREB通路相关蛋白的表达.结果 与对照组相比,模型组细胞凋亡率、Bcl-2关联X蛋白(Bax)、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)和微管相关蛋白轻链3-I(LC3-Ⅰ)蛋白表达水平均升高(P<0.01),自噬体结构减少,B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、自噬基因(Beclin-1)、微管相关蛋白轻链3-II(LC3-Ⅱ)、磷酸化钙调蛋白依赖性蛋白激酶激酶β(p-CaMkkβ)、磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(p-AMPK)、磷酸化环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(p-CREB)蛋白水平均降低(P<0.01);与模型组相比,mimics组细胞凋亡率、Bax、Caspase-3和LC3-Ⅰ蛋白表达水平降低(P<0.05),自噬体结构增多,Bcl-2、Beclin-1、LC3-Ⅱ、p-CaMkkβ、p-AMPK、p-CREB蛋白水平升高(P<0.05),STO-609组和KG-501组趋势相同均与mimics组相反;与mimics组相比,mimics+STO-609组和mimics+KG-501组细胞凋亡率、Bax、Caspase-3和LC3-Ⅰ蛋白表达水平升高(P<0.01),自噬体结构减少,Bcl-2、Beclin-1、LC3-Ⅱ、p-CaMkkβ、p-AMPK、p-CREB蛋白水平降低(P<0.01);与STO-609组相比,STO-609+KG-501组细胞凋亡率、Bax、Caspase-3和LC3-Ⅰ蛋白表达水平升高(P<0.01),自噬体结构减少,Bcl-2、Beclin-1、LC3-Ⅱ、p-CaMkkβ、p-AMPK、p-CREB蛋白水平降低(P<0.05).结论 miR-145-3p能够抑制MPP+诱导的PD细胞模型的凋亡,促进线粒体自噬,其机制可能与促进CaMkkβ/AMPK/CREB通路的激活有关.

目的 对川崎病(Kawasaki disease,KD)患儿外周血 miRNA 异常表达谱进行鉴定并探讨血清NT-proBNP、miR-431 对KD合并冠状动脉损害的预测价值.方法 选择 170 例上呼吸道感染患儿(NC 组)及 168 例 KD 患儿为研究对象(KD组),根据心脏超声结果,将 KD 组进一步分为冠状动脉损害组(CAL组,n=32)和非冠状动脉损害组(NCAL组,n=136),采集外周静脉血,利用下一代测序技术鉴定血清中差异性表达的 miRNAs.分析筛选的差异性 miRNA、NT-proBNP对KD合并冠状动脉损害发生的预测价值.结果 (1)与 NC组比较,KD组外周血共检测到 149 种差异表达的 miRNAs,其中 113 种表达上调,36 种下调.层级聚类显示,NC 组与 KD组患儿的 miRNA图谱明显不同,miR-100a、miR-431、miR-203 分别上调 3.4 倍、3.1 倍、2.9 倍,是变化最为显著的 miRNA.亚组分析发现,与 NCAL 组比较,CAL 组患儿外周血 miRNA-501、miRNA-520d-5p、miRNA-200 表达水平明显升高,miRNA-15b、miRNA-451 表达水平明显下降.(2)相关性分析显示,CAL 组、NCAL 组外周血中 NT-proBNP 与 miR-431 表达均呈正相关(r= 0.765、0.536,P=0.003、0.018).(3)多因素Logistic 回归分析显示,发热时间、NT-proBNP、miR-431 均是影响KD患儿发生冠状动脉损害的独立性危险因素(P＜0.05).受试者工作特征(Receiver operating characteristic,ROC)曲线显示,NT-proBNP、miR-431 对KD合并冠脉损伤诊断的曲线下面积(Area under curve,AUC)分别为 0.645、0.659,当二者联合检测时,可将AUC提高至 0.799.结论 血清 miR-431 作为一种新的潜在生物标志物,与 NT-proBNP 联合检测对预测急性KD患儿是否发生冠状动脉损害具有较高的敏感性和特异性.

目的 探讨24例宣威肺腺癌病人癌组织中miR-501-5p的表达与临床病理因素之间的关系及miR-501-5p在宣威地区肺腺癌中的作用.方法 收集24例宣威地区肺腺癌患者的癌组织及相应的正常肺标本,提取组织中的微小RNA (microRNA),采用QPCR技术,microRNAs芯片扫描,检测miR-501-5p在肺癌组织和相应正常肺组织的表达量.使用x2检验对miR-501-5P在宣威地区肺腺癌标本的表达量与临床特征因素(年龄,性别,肺癌分期及术前CEA值)进行统计学分析,运用多重回归分析miR-501-5p表达与临床特征(年龄,肺癌分期及术前CEA值)的关系.结果 通过对24对宣威地区肺腺癌配对样本进行microRNA芯片检测和QPCR验证均提示:miR-501-5p在宣威地区肺腺癌中呈上调(P＜0.01).mciroRNA芯片结果(癌vs肺组织)表达差异倍数:3倍(P＜0.05,FDR:0.07).qPCR验证结果(癌vs正常肺组织)表达倍数(x±s):5.702±4.626.x2检验芯片miR-501-5p表达量与临床特征结果显示与年龄(f=7.168,P=0.014),肺癌TNM分期(f=36.627,P＜0.01)及术前CEA值f=30.045,P＜0.01)关系密切;但与性别(f=3.612,P=0.071)无关.在多重回归分析结果提示:miR-501-5p表达量与患者年龄,肺癌TNM分期、血清CEA(癌胚抗原)均呈正相关(P＜0.05).结论 miR-501-5p在宣威地区肺腺癌标本中呈高表达,其与年龄,临床肺癌TNM分期、血清CEA呈显著相关,可能参与宣威地区肺腺癌的发生发展.

目的 探索与慢性血栓栓塞性肺动脉高压(CTEPH)显著相关的微RNA (miR).方法 通过整合Affymetrix miR芯片数据以及从高通量基因表达数据库(GEO)公共数据库上下载的GSE56914数据.两套芯片数据均来自于CTEPH患者和匹配的健康受试者的外周血标本.筛选两套数据中的差异表达miR,搜索这些miR的靶基因.并对这些miR进行功能富集分析.最后构建了包括miR、靶基因和通路的疾病关联网络.结果 筛选出hsa-miR-885-5p、hsa-miR-501-5p、hsa-miR-615-3p、hsa-miR-610和hsa-miR-346等5个对该疾病起重要作用的miR,而且这5个miR在两个数据集中均为显著下调.hsa-miR-885-5p和hsa-miR-501-5p显著参与细胞周期通路,hsa-miR-615-3p显著参与细胞因子-细胞因子受体相互作用,轴突导向,黏着斑和细胞周期通路,hsa-miR-610显著参与黏着斑通路,hsa-miR-346显著参与细胞因子-细胞因子受体相互作用,轴突导向和黏着斑通路.结论 hsa-miR-885-5p、hsa-miR-501-5p、hsa-miR-615-3p、hsa-miR-610和hsa-miR-346是与CTEPH显著相关的miR.

Chronic obstructive pulmonary disease (COPD) significantly increases the risk of developing cancer.Biomarker studies frequently follow a case-control set-up in which patients diagnosed with a disease are compared to controls.Longitudinal cohort studies such as the COPD-centered German COPD and SYstemic consequences-COmorbidities NETwork (COSYCONET) study provide the patient and biomaterial base for discovering predictive molecular markers.We asked whether microRNA (miRNA) profiles in blood collected from COPD patients prior to a tumor diagnosis could support an early diagnosis of tumor development independent of the tumor type.From 2741 participants of COSYCONET diagnosed with COPD,we selected 534 individuals including 33 patients who developed cancer during the follow-up period of 54 months and 501 patients who did not develop cancer,but had similar age,gender and smoking history.Genome-wide miRNA profiles were generated and evaluated using machine learning techniques.For patients developing cancer we identified nine miRNAs with significantly decreased abundance (two-tailed unpaired t-test adjusted for multiple testing P ＜ 0.05),including members of the miR-320 family.The identified miRNAs regulate different cancer-related pathways including the MAPK pathway (P =2.3 × 10 5).We also observed the impact of confounding factors on the generated miRNA profiles,underlining the value of our matched analysis.For selected miRNAs,qRT-PCR analysis was applied to validate the results.In conclusion,we identified several miRNAs in blood of COPD patients,which could serve as candidates for biomarkers to help identify COPD patients at risk of developing cancer.

目的 研究OBI患者血浆特征性miRNA表达谱,为进一步明确miRNAs在其发生和发展中相关分子机制奠定基础.方法 收集2017年11月-2018年9月在本站初筛HBsAg-/HBV-DNA+并经随访确诊为OBI的无偿献血者血浆,同时收集年龄、性别相匹配的23名健康献血者血浆.从中分别选取3例应用miRNA测序技术进行miR-NA表达谱分析;随后采用qRT-PCR对有显著差异表达的miRNAs进行验证;最后通过TargetScan7.1和miRDB v5对筛选出的miRNAs的靶基因进行预测,并对靶基因进行KEGG通路和GO功能富集分析.结果 与健康献血者相比,OBI患者血浆中有32个miRNAs表达存在统计学差异(FC≥1.5,P＜0.1,CPM≥1),包括16个上调的hsa-miR-7706,-511-5p,-1299,-3913-5p,-99b-3p,-503-5p,-296-3p,-501-3p,-3158-3p,-3615,-15b-5p,-451a,-486-5p,-25-3p,-106b-3p,-92a-3p,和16个下调的hsa-miR-187-3p,-219a-5p,-491-5p,-514a-3p,-221-5p,-132-5p,-203a-3p,-3168,-206,-218-5p,-1224-5p,-1-3p,-9-5p,-30a-5p,-30c-5p,let-7f-2-3p.生物信息学分析表明,这些差异表达的miRNAs主要参与基因表达和转录、细胞发育和代谢、蛋白修饰和激酶活性调控等相关的多种生物学过程,以及包括PI3K/Akt在内的多条信号通路.最后,qRT-PCR验证结果显示,在OBI患者血浆中hsa-miR-486-5p,-25-3p和-92a-3p表达量显著高于健康献血者,hsa-miR-1-3p显著低于健康献血者(P均＜0.05),与测序结果相符合;尽管hsa-miR-206表达量也低于健康献血者,但无统计学意义.结论 在OBI患者血浆中同样存在特征性miRNA表达谱,其在HBV感染的特定过程中可能起到重要作用,将其筛选鉴定出有助于对OBI的病理机制的阐述和将来在临床辅助筛查诊断中的应用.