长链非编码RNA(Long non-coding RNA，lncRNA)及微小RNA(micro-RNA，miRNA)均为蛋白质非编码RNA(non-coding RNA，NcRNAs)，作为重要的调控分子参与生命活动的不同过程。其中lncRNA H19及其衍生物miRNA-675能够参与多种疾病的发生发展，现将近几年有关lncRNA H19和miRNA-675在一些疾病中的研究进行综述。

目的:观察长链非编码RNA(lncRNA)H19靶向微小RNA(miRNA，miR)-675/EHZ2对结肠癌细胞增殖的影响。方法:收集2013年7月到2018年7月郑州大学附属肿瘤医院结肠癌组织及其对应的癌旁组织各150例，采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析LINC00052和miR-330-3p表达水平。待细胞完全贴壁后，采用lncRNAH19 shRNA、lncRNA control shRNA、miRNA Control和miR-675慢病毒感染SW480细胞，感染12 h更换含嘌呤霉素(1 mg/L)的杜尔伯科改良伊格尔(DMEM)培养基处理24 h，存活的细胞即为稳定细胞株，分别命名为Lnc Control组、lncRNAH19 KD组、miR-Control组和miR-675组。采用生物信息学和双荧光素酶报告基因分析lncRNAH19和miR-675关系以及miR-675的靶基因。在结肠癌细胞株SW480建立lncRNAH19沉默细胞株和miR-765过表达细胞株，采用5-乙炔基-2’-脱氧尿嘧啶核苷(EdU)法和细胞计数试剂盒(CCK-8)法测定不同处理结肠癌细胞的增殖能力。体内异体移植瘤实验分析不同处理对成瘤的影响。采用 t检验分析两组数据的统计学意义。 结果:与癌旁组织lncRNAH19和miR-675[(1.12±0.18)、(1.09±0.17)]比较，结肠癌组织中lncRNAH19表达水平(3.49±0.27)显著增加，miR-675表达水平(0.32±0.11)显著下调，差异均有统计学意义( t＝3.109、2.981， P<0.05)。与Lnc-Contrtol组和miR-Control组结肠癌细胞EdU阳性率[(89.44±10.25)%、(85.41±12.33)%]比较，lncRNAH19 KD组和miR-675组结肠癌细胞EdU阳性率[(30.14±6.89)%、(41.72±8.32)%]显著下调，差异有统计学意义( t＝2.981、2.981， P<0.05)。CCK-8实验显示，与Lnc-Contrtol组和miR-Control组结肠癌细胞增殖能力比较，lncRNAH19 KD组和miR-675组结肠癌细胞能力显著下调，差异有统计学意义( F＝2.441、2.592， P<0.05)。与Lnc-Contrtol组和miR-Control组结肠癌细胞体内增殖能力比较，lncRNAH19 KD组和miR-675组结肠癌细胞能力显著下调，差异有统计学意义( F＝1.980、2.019， P<0.05)。生物信息学和双荧光素酶分析显示lncRNAH19能与miR-675互补结合，EHZ2是miR-675的靶蛋白。与Lnc-Contrtol组和miR-Control组结肠癌细胞EHZ2蛋白表达水平[(1.19±0.13)、(1.04±0.14)]比较，lncRNAH19 KD组和miR-675组结肠癌细胞EHZ2蛋白表达水平[(0.32±0.13)、(0.47±0.13)]显著下调，差异有统计学意义( t＝3.109、3.011， P<0.05)。 结论:lncRNAH19通过靶向miR-675/EHZ2调控结肠癌细胞的增殖。

目的 筛选低硒大鼠心肌组织中差异表达的微小RNA(miRNA),为克山病的发病机制研究提供参考.方法 采用随机数字表法将30只清洁级SD大鼠分为对照组、低硒组、补硒组,每组10只.对照组大鼠给予AIN-93标准饲料喂养,低硒组及补硒组大鼠均给予AIN-93 M(低硒)饲料喂养;3组大鼠均喂养14周.之后补硒组大鼠给予亚硒酸钠溶液灌胃,对照组和低硒组大鼠则给予相同剂量蒸馏水灌胃;3组大鼠均连续灌胃3周.入组17周后留取3组大鼠外周血检测血清硒及血浆脑钠肽(BNP)水平;采用基因芯片测序筛选差异表达的miRNA,并行聚类分析及靶基因功能显著性分析;采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测差异表达显著的miRNA表达情况.结果 (1)低硒组和补硒组大鼠血清硒水平低于对照组,血浆BNP水平高于对照组(P<0.05);低硒组大鼠血清硒水平低于补硒组,血浆BNP水平高于补硒组(P<0.05).(2)基因芯片测序结果显示,有40个miRNA为硒敏感性miRNA.(3)基因本体(GO)功能富集分析结果显示,上述40个差异表达miRNA靶基因功能主要富集于脂代谢、心脏发育、细胞黏附、血管发育、轴突导向、细胞迁移调控、输尿管芽发育、跨膜受体蛋白酪氨酸激酶信号通路、细胞分化、有机氮化物反应、棕色脂肪分化、髓系祖细胞分化、细胞-基质黏附、细胞增殖调控、生物钟节律.靶基因投射的13条信号转导通路为肾细胞癌、转录调节、多巴胺能突触、焦点黏附、Rap信号通路、脂代谢、PPAR信号通路、Ras信号通路、Oxytocin信号通路、长期抑制、PI3K-Akt信号通路、MAPK信号通路、HTLV-1感染.(4)以表达最显著的8种miRNA作为验证基因,以对照组心肌组织miRNA为参照,补硒组大鼠心肌组织miRNA-374、miRNA-16、miRNA-199a-5p、miRNA-195、miRNA-30e*相对表达量低于低硒组,心肌组织miRNA-3571、miRNA-675、miRNA-450a*相对表达量高于低硒组(P<0.05).结论 低硒会导致大鼠心功能损伤,低硒大鼠心肌组织中存在多个差异表达的miRNA,主要涉及15种生物学功能和13条信号转导通路,这些差异表达的miRNA可能参与克山病的发生发展.

目的 基于生物信息学分析胃腺癌组织中微小RNA(miRNA)差异表达情况,寻找可作为胃腺癌生物标记物的miRNA.方法 利用癌症基因组图谱(TCGA)数据库下载胃腺癌相关数据集,分析肿瘤组织与正常组织之间miRNA的表达差异.利用Kaplan-Meier曲线进行患者生存分析,筛选具有潜在生物标记物性质(高表达、预后差)的miRNA.利用生物信息学预测miRNA的靶基因,通过基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)进行基因富集分析,以判定差异基因主要影响的生物学功能或者通路.结果 TCGA数据库分析结果发现,相对于45份正常组织,446份胃腺癌组织中存在319个差异表达miRNA,其中下调95个、上调224个.进一步通过生存分析筛选出6个高表达、与预后有关的miRNA(miR-217、miR-216a、miR-200b、miR-1911、miR-675、miR-96),其中miR-217高表达者预后差.胃腺癌组织中miR-217表达量为303.2±55.16,高于正常组织中的84.82±13.42(P ＜0.001).通过Targetscan和miRDB生物信息预测软件对miR-217潜在靶基因取交集,获得151个有效靶基因;GO和KEGG分析结果显示,miR-217的这些靶基因与调节细胞凋亡、细胞周期、大分子代谢、蛋白酶的活性密切相关.结论 利用生物信息学分析发现,与正常组织比较,胃腺癌组织中存在miRNA的差异表达;其中miR-217在胃腺癌组织中表达上调,通过调控靶基因参与相关的信号通路而导致患者预后不良,可成为胃腺癌的生物标记物.

目的 观察胃癌正常组织与癌组织中微小RNA(miRNA,miR)-675的表达及其对患者预后的影响,检测miR-675对胃腺癌细胞株(SGC-7901)生物学行为的影响,探讨miR-675在胃癌发生发展中的作用.方法 下载肿瘤基因图谱(TCGA)胃癌数据库中miRNA数据并分析miR-675在胃癌的癌及癌旁组织中的表达水平及对患者预后的影响.采用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测30对胃癌组织与癌旁组织miR-675的表达水平.采用细胞计数试剂盒(CCK-8)试剂盒检测miR-675抑制剂(inhibitor)对SGC-7901细胞增殖能力的影响.采用流式细胞术检测miR-675抑制剂对SGC-7901细胞凋亡的影响.应用SPSS 17.0统计软件分析,计量资料以均值±标准差(Mean±SD)表示.生存分析采用Kaplan-Meier方法.采用单因素方差分析呈正态分布且方差齐的多组间差异比较样本,两组独立样本均值比较采用t检验.结果 TCGA数据库中及收集的胃癌患者miR-675在癌组织中的表达水平显著高于癌旁正常组织(3.78±0.10比2.66±0.23,t=3.236,P＜0.01),差异有统计学意义.miR-675高表达患者其中位生存期显著低于miR-675低表达患者(675 d比1 294 d,x2 =7.711,P＜0.01),差异有统计学意义.CCK-8实验显示与空白对照及转染miRNA无关序列(miR-scramble)组比较,miR-675抑制剂组SGC-7901细胞增殖能力受到抑制(￡=3.875,P＜0.01),差异有统计学意义.流式细胞术结果显示miR-675抑制剂组显著增加SGC-7901细胞的凋亡(18.13±3.39)％.结论 miR-675在胃癌的发生、发展中发挥重要作用.

目的 通过构建男性乳腺癌的竞争性内源RNA(ceRNA)调控网络,探讨其发病机制.方法 从TCGA数据库(The Cancer Genome Atlas Database)中下载男性乳腺癌的长链非编码RNA(lncRNA)、微小RNA(miRNA)和mRNA的表达谱数据,通过R软件的limma数据包分析男性乳腺癌差异表达的lncRNA、miRNA和mRNA;分析三者之间的靶向调控关系,构建ceRNA网络,并用Cytoscape软件可视化,并将差异表达基因进行GO富集和KEGG通路分析.结果 男性乳腺癌中差异表达的lncRNA为275种,差异表达的miRNA为33种,差异表达的mRNA为1 675种.本研究成功构建了男性乳腺癌的lncRNA-miRNA-mRNA ceRNA网络后,GO富集分析显示,差异表达mRNA参与细胞增殖的负调控、转录的负调控、细胞蛋白质代谢过程的调控、细胞迁移的调控、转移酶活性的正调控、间充质细胞增殖的正调控等.KEGG通路分析显示,差异表达mRNA参与癌症的途径、白细胞跨内皮迁移、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)和神经营养蛋白信号通路.结论 本研究基于TCGA数据库成功构建了男性乳腺癌的ceRNA网络.

背景 与目的免疫治疗已成为极具前景的癌症治疗策略.全面了解肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)免疫调控将有助于HCC免疫治疗的发展.表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)信号在HCC中常被激活,并在肿瘤发生中发挥重要作用.然而,EGFR信号在HCC免疫中的作用还知之甚少.本研究旨在研究HCC细胞中EGFR信号对程序性死亡配体1(programmed death-ligand 1,PD-L1)以及人类白细胞I类抗原(human leukocyte antigen class-I,HLA-I)表达的影响及其作用机制.方法 采用免疫组化法检测HCC标本中磷酸化EGFR(phosphorylated EGFR,p-EGFR)、PD-L1和HLA-I(HLA-ABC)的表达水平,分析它们之间的相关性.采用实时定量PCR、Western blotting和流式细胞检测EGFR活化的HCC细胞中PD-L1和HLA-ABC的表达水平,采用T细胞介导的裂解检测HCC细胞中PD-L1和HLA-ABC异常表达对免疫抑制的作用.另外,采用动物实验、荧光素酶报告基因分析和基因功能获得及缺失实验研究EGFR活化诱导的PD-L1上调和HLA-ABC下调的作用机制.结果 在HCC中p-EGFR与PD-L1表达呈正相关,与HLA-ABC表达呈负相关.在HCC细胞中,EGF激活EGFR上调PD-L1表达的同时下调HLA-ABC表达,这一作用在体外和体内实验中均可被EGFR抑制剂吉非替尼消除.机制如下,P38丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase,MAPK)活性增强可下调微小RNA-675-5p(microRNA-675-5p,miR-675-5p),并上调糖酵解相关酶己糖激酶2(hexokinase 2,HK2);miR-675-5p下调可增加PD-L1 mRNA稳定性并引起PD-L1积累,这一作用可能是通过与PD-L1的3'非翻译区(3'-untranslated region,3'-UTR)结合实现的,而HK2上调可促进有氧糖酵解并介导HLA-ABC下调.结论 在HCC细胞中,EGFR-P38 MAPK途径可通过miR-675-5p上调PD-L1表达,通过HK2下调HLA-ABC表达.我们的研究揭示了一个新的可引起HCC免疫抑制的信号网络,提示EGFR信号可作为HCC免疫治疗的潜在靶点.

目的:探讨胃癌组织中miR-183、miR-675表达水平及临床意义.方法:选取96例接受手术切除的胃癌患者为研究对象,采集胃癌组织与癌旁正常组织(距癌组织边缘>3cm)标本,采用qRT-PCR法检测miR-183、miR-675的相对表达量;分析miR-183、miR-675相对表达量与胃癌临床病理参数的关系,并应用Kaplan-Meier法进行生存分析,比较miR-183、miR-675高表达组与低表达组总生存期(OS)、无进展生存时间(DFS)差异.结果:胃癌组织miR-183、miR-675相对表达量分别为(2.47±0.32)、(3.69±0.27),相比正常癌旁组织呈高表达,差异有统计学意义(P<0.05).胃癌组织miR-183、miR-675表达与TNM分期、是否有远处转移、是否有淋巴结转移具有相关性(P<0.05),而与年龄、性别、肿瘤最大径、分化分级等无相关性(P>0.05).Kaplan-Meier分析显示,miR-183高表达、miR-675高表达胃癌患者OS、DFS分别短于miR-183低表达、miR-675低表达胃癌患者,差异有统计学意义(P<0.05).结论:miR-183、miR-675高表达与胃癌浸润、转移及生存期相关,有助于病情和预后的判断.

目的 通过生物信息学方法筛选人肝癌耐药细胞株Bel-7402/5-FU、Bel-7402/ADR与亲本细胞株Bel-7402差异表达的微小RNA(miRNA),分析差异表达miRNA的生物学功能.方法 利用miRNA芯片分析亲本细胞和耐药细胞中miRNA的差异表达情况,筛选差异倍数较高的10个miRNA进行靶基因预测,对获取的靶基因进行GO富集分析、KEGG信号通路富集分析.采用实时定量PCR法验证差异表达显著的miRNA.结果 与Bel-7402细胞比较,Bel-7402/5-FU细胞中存在58个差异表达miRNA,其中上调27个、下调31个;Bel-7402/ADR细胞中存在87个差异表达miRNA,其中上调17个、下调70个.对耐药细胞中差异倍数较高的10个miRNA进行靶基因预测,GO分析发现,这些靶基因主要涉及RNA聚合酶Ⅱ启动子的转录调控、生物合成过程正向调控和氮化合物代谢过程负向调控、酶结合、大分子复合物结合和核酸结合转录因子活性、高尔基体、催化复合物和转移酶复合物等过程;KEGG分析发现,靶基因富集通路涉及轴突引导、泛素介导的蛋白水解、PAR1通路、神经营养因子信号通路、MAPK信号通路、TGF-β信号通路.实时定量PCR检测结果显示,miR-31-5p、miR-4446-3p表达上调,miR-205-5p、miR-675-3p、miR-373-5p、miR-372-3p、miR-371a-3p、miR-675-5p、miR-10a-5p和miR-4532表达下调(P均<0.01),与基因芯片检测结果一致.结论 肝癌耐药细胞中存在多种差异表达miRNA,这些miRNA可能通过靶基因介导PAR1通路、MAPK信号通路和TGF-β信号通路的异常参与肝癌耐药的发生发展.

目的 分析稽留流产患者胎盘绒毛组织中长链非编码RNA(lncRNA)H19与低氧诱导因子1α(HIF-1α)的表达模式.方法 收集2013年1月至2014年12月石家庄第六医院送检的稽留流产患者胎盘绒毛组织纳入患者组(48例),并以1:1的比例匹配收集同期正常人工流产孕妇的胎盘绒毛组织纳入对照组(48例);又依据年龄不同将每组分为4个亚组:＜26岁组、26～＜31岁组、31～＜36岁组、≥36岁组.利用实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)定量分析lncRNA H19与HIF-1α在胎盘绒毛组织中的表达变化,并分析两者是否存在调控关系;利用RNAInter、ENCORI数据库预测与lncRNA H19和HIF-1α存在互作关系的microRNAs(miRNAs),并利用qRT-PCR方法定量分析miRNAs在胎盘绒毛组织中的表达变化,综合分析lncRNA H19与HIF-1α和miRNAs间是否存在调控关系.结果 qRT-PCR检测发现,与对照组相比,稽留流产患者组胎盘绒毛组织中H19 mRNA相对表达量无显著性差异(P＞0.05);但与同年龄段对照组比较,患者组胎盘绒毛组织中H19 mRNA的相对表达量在＜26岁时显著降低(P＜0.05),在≥36岁时显著升高(P＜0.05).与对照组相比,患者组胎盘绒毛组织中HIF-1α mRNA相对表达量显著上调(P＜0.01);与同年龄段对照组比较,除了 31～＜36岁组外,患者组＜26岁组、26～＜31岁组和≥36岁组HIF-1α mRNA的相对表达量均显著上调(P＜0.05).利用RNAInter、ENCORI数据库进行基因互作预测及参考之前文献,miR-675-5p、miR-21-5p、miR-18a-5p、miR-301a-3p、miR-454-3p、miR-93-5p 与 lncRNA H19和HIF-1α均存在互作位点;qRT-PCR检测这些miRNAs的相对表达量,结果显示与对照组相比,除了 miR-18a的相对表达量在两组间无显著性差异(P＞0.05),miR-675、miR-21、miR-301a、miR-454、miR-93在稽留流产患者组胎盘绒毛组织中的表达量均显著上调(P＜0.05).与同年龄段对照组比较,稽留流产患者组中miR-454在＜26岁时显著上调(P＜0.01),miR-301a在＜26岁与≥36岁时显著上调(P＜0.05),而miR-21在＜26岁、26～＜31岁、31～＜36岁、≥36岁时均显著上调(P＜0.05).结论 LncRNA H19和HIF-1α、miR-21、miR-301a、miR-454在稽留流产患者不同年龄组的胎盘绒毛组织中均存在显著的表达差异,提示其可能与稽留流产的发生有关.