目的:探讨下调长链非编码RNA（lncRNA）HOX转录反义RNA（HOTAIR）靶向微小RNA761（miR-761）对肝癌细胞HCCLM3放射敏感性的影响。方法:实时荧光定量PCR测定HOTAIR在肝癌细胞HuH-7、SNU-449、HCCLM3和正常肝细胞L-02中的表达差异。HCCLM3细胞分成空白对照、Sh-NC（转染shRNA阴性对照）、Sh-HOTAIR（转染HOTAIR shRNA）、RAD+Sh-NC（转染shRNA阴性对照并经8Gy剂量照射）、RAD+Sh-HOTAIR（转染HOTAIR shRNA并经8Gy剂量照射），流式细胞术检测细胞凋亡，Western印迹检测Bcl-2相关X蛋白（Bax）、C-Caspase-3蛋白表达。Sh-NC、Sh-HOTAIR细胞经过0、2、4、6、8 Gy照射处理，平板克隆实验测定放射敏感性。生物信息学软件预测miR-761可能为HOTAIR的靶基因，荧光素酶报告系统鉴定靶向关系。将miR-761抑制物、HOTAIR shRNA以及抑制物阴性对照、HOTAIR shRNA分别共转染到HCCLM3细胞中，同样使用上述方法测定细胞凋亡和Bax、C-含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3蛋白表达和细胞存活分数。结果:肝癌细胞HuH-7、SNU-449、HCCLM3中HOTAIR表达水平均高于正常肝细胞L-02（1.85±0.12、2.27±0.23、2.68±0.15比1.00±0.09，均 P<0.05）。与Sh-NC比较，Sh-HOTAIR、RAD+Sh-NC细胞凋亡率和Bax、C-Caspase-3蛋白水平较高[凋亡率：（13.47±1.32）%、（12.84±1.19）%比（2.98±0.27）%；Bax蛋白：0.74±0.08、0.72±0.06比0.42±0.06；C-Caspase-3蛋白：0.56±0.06、0.54±0.08比0.25±0.04；均 P<0.05]。与Sh-HOTAIR、RAD+Sh-NC比较，RAD+Sh-HOTAIR细胞凋亡率和Bax、C-Caspase-3蛋白水平较高[凋亡率：（22.57±2.36）%比（13.47±1.32）%、（12.84±1.19）%；Bax蛋白：0.99±0.11比0.74±0.08、0.72±0.06；C-Caspase-3蛋白：1.03±0.12比0.56±0.06、0.54±0.08；均 P<0.05]。与Sh-NC比较，Sh-HOTAIR细胞存活分数较低，细胞放射敏感性较高（ P<0.05）。HOTAIR靶向负调控miR-761表达。与共转染抑制物阴性对照、HOTAIR shRNA的细胞比较，共转染miR-761抑制物、HOTAIR shRNA的细胞经过放射处理后，细胞凋亡率较低[（10.24±1.32）%比（21.84±2.01）%]，细胞中Bax（0.50±0.06比1.01±0.10）、C-Caspase-3蛋白（0.56±0.07比1.05±0.14）表达较低，细胞存活分数较高（均 P<0.05）。 结论:下调lncRNA HOTAIR靶向miR-761增加肝癌细胞HCCLM3放射敏感性。

目的:分析外泌体(Exo)微小RNA-761(miR-761)通过调控肿瘤相关巨噬细胞(TAM)极化对骨肉瘤(OS)细胞上皮-间质转化(EMT)进程的影响,阐明其相关的作用机制.方法:miR-761质粒和阴性对照(miR-NC)质粒分别转染至HEK239细胞中,同时设不转染的细胞为对照组,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测转染效果.分离含miR-761的Exo,采用透射电镜观察Exo形态,采用纳米颗粒分析仪检测Exo样品浓度和粒径分布,Western blotting法检测Exo表面标志蛋白表达情况.采用佛波酯(PMA)刺激人单核细胞白血病THP-1细胞成为M0巨噬细胞,采用含miR-761的Exo处理M0巨噬细胞并与O S MG63细胞建立共培养体系,实验分组为M0组、TAM组、miR-761 NC组和miR-761 Exo组,收集各组M0巨噬细胞,流式细胞术检测各组细胞中M1巨噬细胞标志物CD86和M2巨噬细胞标志物CD206阳性率,Western blotting法检测各组细胞中M1巨噬细胞分泌因子白细胞介素1β(IL-1β)及肿瘤坏死因子α(TNF-α)和M2巨噬细胞分泌因子白细胞介素10(IL-10)及转化生长因子β1(TGF-β1)蛋白表达水平;采用含miR-761的Exo处理M0巨噬细胞并与MG63细胞建立共培养体系,实验分为对照组、TAM组、miR-NC Exo+TAM组和miR-761 Exo+TAM组,收集各组MG63细胞,免疫荧光染色法观察各组MG63细胞中E-钙黏附蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)荧光强度,Western blotting法检测各组细胞中E-cadherin、Vim entin及EMT调控相关转录因子Twist1、Snail和Slug蛋白表达水平,Transwell小室实验检测各组MG63细胞中侵袭和迁移细胞数.结果:通过转染实验成功获得含miR-761的HEK239细胞,并分离得到Exo.与M0组比较,TAM组巨噬细胞中CD86阳性率降低(P＜0.05),CD206阳性率升高(P＜0.05),IL-1β和TNF-α蛋白表达水平降低(P＜0.05),IL-10和TGF-β1蛋白表达水平升高(P＜0.05);与TAM组比较,miR-761 Exo组巨噬细胞中CD86阳性率升高(P＜0.05),CD206阳性率降低(P＜0.05),IL-1β和TNF-α蛋白表达水平升高(P＜0.05),IL-10和TGF-β1蛋白表达水平降低(P＜0.05).与对照组比较,TAM组MG63细胞中E-cadherin荧光表达强度减弱而Vimentin荧光表达强度增强,E-cadherin蛋白表达水平降低(P＜0.05),Vimentin、Twist1、Snail和Slug蛋白表达水平升高(P＜0.05),迁移细胞数和侵袭细胞数增加(P＜0.05);与TAM组比较,miR-761 Exo+TAM组MG63细胞中E-cadherin荧光表达强度增强而Vimentin荧光表达强度减弱,E-cadherin蛋白表达水平升高(P＜0.05),Vimentin、Twist1、Snail和Slug蛋白表达水平降低(P＜0.05),迁移细胞数和侵袭细胞数减少(P＜0.05).结论:Exo传递miR-761能够抑制OS细胞EMT进程,进而抑制细胞的迁移和侵袭,其作用机制可能与调控TAM极化作用有关.

微小RNA(miRNA,miR)是高度进化保守的长度为18～ 25个核苷酸的非编码核糖核酸,能够在转录后水平调节基因的表达.近年来,大量研究表明miR-761参与细胞内线粒体的分裂、融合及合成,并在不同肿瘤中发挥着抑癌或促癌的作用.此外,还与心血管疾病、海马神经元的塑形和发育等密切相关.本文就miR-761的研究进展进行综述.

目的 探讨LncRNA FAL1通过靶向miR-761对骨肉瘤MG63细胞生物学行为(增殖、侵袭、迁移、凋亡)的影响.方法 常规培养MG63细胞,将其随机分为Vector组、FAL1组、si-FAL1组、si-Ctrl组并分别转染pcDNA3.1空载体、过表达载体pcDNA3.1-FAL1、干扰序列si-FAL1、阴性对照si-Ctrl,用实时荧光定量PCR法检测MG63细胞中miR-761表达,用双荧光素酶报告基因实验验证LncRNA FAL1与miR-761的靶向关系.取部分MG63细胞随机分为si-Ctrl组(转染si-Ctrl)、si-FAL1组(转染si-FAL1)、si-FAL1+inhibitor-NC组(共转染si-FAL1和inhibitor-NC)、si-FAL1+miR-761 inhibitor组(共转染si-FAL1和miR-761 inhibitor),用CCK-8法检测细胞增殖能力,Transwell小室实验检测细胞侵袭、迁移能力,流式细胞术检测细胞凋亡率.结果 与Vector组比较,FAL1组LncRNA FAL1相对表达量高,而miR-761相对表达量低(P均<0.05);与si-Ctrl组比较,si-FAL1组LncRNA FAL1相对表达量低,而miR-761相对表达量高(P均<0.05).双荧光素酶报告基因实验证实,LncRNA FAL1可直接靶向miR-761.与si-Ctrl组比较,si-FAL1组细胞增殖活力低,侵袭、迁移数量低,凋亡率高(P均<0.05);与si-FAL1组比较,si-FAL1-miR-761 inhibitor组MG63细胞增殖活力高,侵袭、迁移数量多,凋亡率低(P均<0.05),但si-FAL1-inhibitor-NC组MG63细胞增殖活力、侵袭、迁移数量、凋亡率差异无统计学意义(P均>0.05).结论LncRNA FAL1可通过靶向调控miR-761的表达以抑制MG63细胞增殖、侵袭、迁移,并促进其凋亡.

目的 研究微小RNA 761(miR-761)对人卵巢颗粒细胞增殖和凋亡的影响及其机制.方法 取多囊卵巢综合征(PCOS)患者卵巢颗粒细胞培养,随机分为3组,分别为miR-761 inhibitor组(转染miR-761抑制剂),miR-761 mimic组(转染miR-761模拟物),miR-NC组(转染阴性对照寡核苷酸).用细胞计数法-8(CCK-8)实验检测转染细胞的增殖能力;用TUNEL实验检测转染细胞的凋亡能力;用蛋白质印迹(Western blot)法检测雌激素受体2(estrogen receptor 2,ESR2)的表达.采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-761与ESR2之间的结合关系.结果 miR-NC组、miR-761 mimic组和miR-761 inhibitor组的细胞存活率分别为(98.33±1.53)％,(121.23±3.74)％,(79.86±3.66)％;细胞凋亡率分别为(6.51±0.26)％,(4.41±0.24)％和(10.48±0.33)％;ESR2蛋白表达水平分别为1.05±0.03,0.74±0.08和3.90±0.28.以上指标,miR-NC组和miR-761 mimic组相比,miR-NC组和miR-761 inhibitor组相比,差异均有统计学意义(均P<0.05).双荧光素酶报告基因实验证实miR-761可与ESR2靶向结合.结论 miR-761通过下调ESR2促进PCOS患者卵巢颗粒细胞增殖并抑制细胞凋亡.

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)核富集转录本1(NEAT1)对缺氧/复氧(H/R)胶质细胞损伤的影响,及其机制是否与调控微小RNA-761(miR-761)有关.方法 构建大鼠皮质星形胶质细胞H/R损伤模型.分为对照组、H/R 组、H/R+小干扰 RNA 阴性对照(si-NC)组、H/R+si-NEAT1 组、H/R+miR-NC 组、H/R+miR-761 组、H/R+si-NEAT1+miRNA 抑制物(anti-miR-NC)组、H/R+si-NEAT1+anti-miR-761 组.Real-time PCR 分析 NEAT1 和 miR-761的mRNA表达.流式细胞术分析细胞凋亡.试剂盒检测细胞中丙二醛(MDA)含量以及超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)的活性.双荧光素酶报告基因实验和Real-time PCR分析NEAT1和miR-761靶向关系.实验重复3次.结果 与对照组比较,H/R组细胞凋亡率和MDA含量显著升高,SOD和CAT活性显著降低,NEAT1表达显著升高,miR-761表达显著降低(P＜0.05).与H/R+si-NC组比较,H/R+si-NEAT1组细胞凋亡率和MDA含量显著降低,SOD和CAT活性显著升高(P＜0.05).与H/R+miR-NC组比较,H/R+miR-761组细胞凋亡率和MDA含量显著降低,SOD和CAT活性显著升高(P＜0.05).MiR-761是NEAT1的靶基因,NEAT1负调控miR-761表达.与H/R+si-NEAT1+anti-miR-NC 组比较,H/R+si-NEAT1+anti-miR-761 组细胞凋亡率、MDA 含量显著升高,SOD 和 CAT活性显著降低(P＜0.05).结论 干扰NEAT1表达通过上调miR-761对H/R损伤的星形胶质细胞具有保护作用.