-
PDK1-Akt信号通路干预对心肌细胞HCN4离子通道的影响
编辑人员丨1周前
目的:探讨3-磷酸肌醇依赖性蛋白激酶1-蛋白激酶B(PDK1-Akt)信号通路干预对心肌细胞超极化激活环核苷酸门控离子通道4(HCN4)转录、表达及功能的影响。方法:使用酶解法从健康雄性野生型C57小鼠和心脏特异性敲除PDK1小鼠获得心房肌细胞,分别为空白对照组和PDK1-KO组;另外,对急性分离自C57小鼠的心房肌细胞进行培养,将其分为药物对照组[予二甲基亚砜(DMSO)干预)]、PDK1敲低组[予1 μg/ml PDK1的短发夹状RNA(shRNA)干扰质粒干预]、SC79组[予Akt激动剂SC79(8 μmol/ml)干预]、GSK2334470组[予PDK1抑制剂GSK2334479(10 nmol/ml)干预]和PDK1敲低+SC79组(予8 μmol/ml SC79和1 μg/ml PDK1的shRNA干扰质粒干预)。为进一步减少药物脱靶的可能,故运用PDK1的shRNA质粒转染培养的心肌细胞,并在此基础上加用SC79干预。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测相应组心房肌细胞PDK1及HCN4的mRNA表达水平,Western blot检测PDK1、Akt及HCN4蛋白表达水平,全细胞膜片钳检测HCN的电流密度,免疫荧光技术检测HCN4蛋白表达情况。结果:(1)PDK1-KO组的HCN4的mRNA(1.46±0.03比0.99±0.01, P<0.001)及蛋白(1.14±0.02比1.00±0.06, P=0.017)表达水平高于空白对照组。全细胞膜片钳结果显示,PDK1-KO组的HCN电流密度大于空白对照组[(-17.47±2.00)pA/pF比(-12.15±2.25)pA/pF, P=0.038]。(2)通过比较PDK1敲低组、SC79组和药物对照组细胞,对PDK1 shRNA及Akt特异性激动剂SC79进行功能验证,结果显示PDK1敲低组细胞的PDK1 mRNA及蛋白表达水平低于药物对照组,SC79组细胞的磷酸化-Akt(Thr 308)蛋白表达水平高于药物对照组。(3)GSK2334470组细胞的HCN4 mRNA(3.61±0.46比1.00±0.08, P<0.001)及蛋白(2.33±0.11比1.00±0.05, P<0.001)表达水平高于药物对照组。(4)PDK1敲低组细胞的HCN4 mRNA表达水平高于药物对照组(1.76±0.11比1.00±0.06, P<0.001)及PDK1敲低+SC79组(1.76±0.11比1.33±0.07, P=0.003),PDK1敲低+SC79组的HCN4 mRNA表达水平亦高于药物对照组(1.33±0.07比1.00±0.06, P<0.001)。PDK1敲低组细胞的HCN4蛋白表达水平高于药物对照组(1.15±0.04比1.00±0.05, P=0.003),PDK1敲低+SC79组的HCN4蛋白表达水平与药物对照组比较差异无统计学意义( P>0.05),但低于PDK1敲低组(0.95±0.01比1.15±0.04, P<0.001)。全细胞膜片钳实验结果示,药物对照组细胞的HCN电流密度为(-13.27±1.28)pA/pF,PDK1敲低组细胞为(-18.76±2.03)pA/pF,PDK1敲低+SC79组细胞为(-13.50±2.58)pA/pF;PDK1敲低组细胞的HCN电流密度大于药物对照组( P<0.001),而PDK1敲低+SC79组与药物对照组比较差异无统计学差异( P>0.05)。(5)免疫荧光检测结果显示PDK1敲低组的绿色荧光较药物对照组增强,提示定位于细胞膜的HCN4表达量增加。而PDK1敲低+SC79组的绿色荧光较PDK1敲低组减弱,提示当敲低PDK1后再进一步激动Akt,定位于细胞膜HCN4表达量下降。 结论:PDK1-Akt信号通路参与心肌细胞HCN4离子通道转录、表达水平及功能的调控。
...不再出现此类内容
编辑人员丨1周前
-
CRYAB基因变异致早发限制性心肌病一家系
编辑人员丨1周前
目的:解析一个限制性心肌病家系的致病变异。方法:对先证者和两名直系亲属进行全外显子测序,通过GATK3.7软件鉴别潜在的变异,使用snpEff注释变异,参照美国医学遗传学和基因组学学会遗传变异分类标准与指南(ACMG)进行致病性评估,整合Sanger测序和临床表现开展家系内共分离分析。结果:根据ACMG判定 CRYAB c.326A>G (p.Asp109Gly)为致病变异,在家系中基因型与临床表型共分离。先证者罹患合并限制性心肌病、肌病和白内障的多系统性疾病,首发症状为左心房扩大。家系另三名患者确诊限制性心肌病,其中两例男性首发症状是双心房扩大,一例女性首发症状为心室传导阻滞。 结论:CRYAB基因c.326A>G杂合变异是该家系的致病原因,该变异导致合并限制性心肌病、肌病和白内障的多系统性疾病尚未见报道。
...不再出现此类内容
编辑人员丨1周前
-
二尖瓣环分离的再认识:从患病率到临床意义
编辑人员丨1周前
二尖瓣环分离(MAD)是二尖瓣纤维环的一种解剖学变异,表现为二尖瓣铰链点移位,导致左心房壁与二尖瓣环连接处与左心室游离壁的分离。过去普遍认为MAD是二尖瓣脱垂患者的影像学特征,随着影像学技术的发展和研究的深入,目前发现“正常人群”中也有一定比例的MAD,近年来MAD的患病率、组织学与形态学、病理生理学、影像学、临床意义等方面认知不断更新,该文就此进行简要介绍。
...不再出现此类内容
编辑人员丨1周前
-
二尖瓣环分离的研究现状
编辑人员丨1周前
二尖瓣环分离(MAD)是一种二尖瓣环的结构异常,表现为二尖瓣后叶附着点从左心室后侧壁顶部移位至左心房。MAD可导致心脏结构和功能异常,并与室性心律失常和心脏性猝死密切相关。该文就MAD的研究现状做一概述,以期提高临床对该病的认识。
...不再出现此类内容
编辑人员丨1周前
-
起搏成纤维细胞调控心房肌细胞电生理的机制研究
编辑人员丨1周前
目的:探究快速起搏状态下大鼠心房成纤维细胞对心房肌细胞动作电位的影响及其作用机制。方法:本研究为前瞻性对照研究,分离大鼠的乳鼠(雌雄不限,体重8~10 g)心房成纤维细胞和心房肌细胞分别进行培养,采用随机数字表法将心房成纤维细胞分为A组(不做任何处理)、B组(在1.0 V/cm的电压、10 Hz频率条件下起搏48 h)、C组[起搏+10 μmol/L中性鞘磷脂酶2抑制剂(GW4869)培养48 h],48 h后收集成纤维细胞上清液,超速离心提取外泌体以2×10 9颗粒/ml的量与心房肌细胞共培养。将心房肌细胞分为D组(心房肌细胞+A组外泌体共培养组)、E组(心房肌细胞+B组外泌体共培养组)、F组(心房肌细胞+C组外泌体共培养组)。比较不同状态成纤维细胞来源的外泌体对心房肌动作电位时限的影响。透视电镜分析外泌体形态,纳米颗粒跟踪分析外泌体粒径分布、浓度等指标,膜片钳检测不同组间心房肌细胞动作电位时限[复极达50%和90%时的动作电位时限(APD50和APD90)]。 结果:与A组相比,B组外泌体分泌量明显增加{[(1.193±0.090)×10 12]颗粒/ml对[(1.613±0.100)×10 12]颗粒/ml, P=0.006};与B组相比,C组外泌体分泌量相对减少{[(1.613±0.100)×10 12]颗粒/ml对[(1.267±0.070)×10 12]颗粒/ml, P=0.008};与D组相比,E组心房肌细胞APD50和APD90明显缩短( P=0.021);与E组相比,F组心房肌细胞APD50和APD90则相对延长( P=0.033)。 结论:快速起搏心房成纤维细胞可促进其外泌体的分泌,而起搏成纤维细胞来源的外泌体则可以缩短心房肌细胞APD50和APD90,增加心房颤动易感性。
...不再出现此类内容
编辑人员丨1周前
-
下腔静脉膈上段解剖特征及毗邻关系的尸体研究
编辑人员丨1周前
目的:明确腹腔镜手术中下腔静脉膈上段的解剖特点及毗邻关系。方法:2018年12月于南方医科大学基础医学院选取成人尸体、新鲜尸体各2例。对冰冻尸体进行解剖。沿双侧锁骨中线打开胸腔,翻开心包前壁,解剖分离上腔静脉、下腔静脉。沿腹正中线打开腹腔,翻左、右肝叶,显露肝后段下腔静脉、第二肝门,剖开腔静脉裂孔进入心包,观察下腔静脉膈上段的解剖特点及毗邻关系,测量下腔静脉膈上段长度。对新鲜尸体行腹腔镜手术试验,于脐旁、右侧腹直肌旁距脐约4 cm、腹正中线脐上约6 cm、右侧腋前线肝下缘下方约2 cm、左侧锁骨中线肝下缘下方约2 cm置入5个12 mm套管。腹腔镜辅助下翻左、右肝叶,显露肝后段下腔静脉、第二肝门,剖开腔静脉裂孔进入心包,观察下腔静脉膈上段的解剖特点及毗邻关系。结果:2例尸体解剖中可见,下腔静脉经肝的腔静脉沟,穿膈的腔静脉孔进入胸腔,再穿纤维心包注入右心房。测量下腔静脉膈肌至右心房入口的长度分别为1.67 cm和2.57 cm。2例腹腔镜手术试验,可很好地显露肝后段下腔静脉、第二肝门、下腔静脉膈肌入口;沿腔静脉裂孔打开膈肌存在一个相对无血管的脂肪组织解剖层次;心包与右心房之间有较大的解剖间隙,可很好地显露下腔静脉、上腔静脉及右心房,可完整连续地显露整个膈下至右心房入口节段的下腔静脉。结论:下腔静脉旁存在一个相对无血管的解剖层次,腹腔镜手术中经腹腔打开膈肌可较安全地进入心包,很好地显露下腔静脉、上腔静脉及右心房,为经该入路行MayoⅣ级下腔静脉癌栓取出术提供了可能。
...不再出现此类内容
编辑人员丨1周前
-
二尖瓣环分离的影像诊断
编辑人员丨1周前
二尖瓣环分离(MAD)是二尖瓣的解剖结构异常,其特征为二尖瓣后叶铰链点向左心房侧移位,同时伴随与左心室基底部心肌不同程度的分离。MAD曾被认为是与二尖瓣脱垂(MVP)和/或二尖瓣黏液样变性并存的附属解剖结构异常。随着影像学技术的发展和研究的深入,近年来学界发现MAD不依赖于MVP而独立存在,且与室性心律失常紧密相关,本文就MAD影像诊断及研究进展进行简要概述。
...不再出现此类内容
编辑人员丨1周前
-
特殊类型阵发性室上性心动过速一例
编辑人员丨1周前
房室结折返性心动过速(AVNRT)是阵发性室上性心动过速最常见的类型,其确切机制尚未完全阐明,心动过速时可能出现房室分离的情况。AVNRT患者心动过速时更常见的是心室侧出现传导阻滞,而心动过速时心房侧传导阻滞罕见。本文旨在报道AVNRT合并室房2∶1逆传1例。
...不再出现此类内容
编辑人员丨1周前
-
凝血因子Ⅺ抑制剂在心房颤动中应用的研究进展
编辑人员丨1周前
生理性止血和病理性血栓间关系紧密,任何减少血栓形成的策略都会对止血产生不可避免的影响。因此,出血成为抗凝治疗难以规避的风险。但越来越多证据表明,凝血因子Ⅺ的功能在血栓形成中更重要,而在止血中发挥的作用相对较小。近期临床研究证实,凝血因子Ⅺ抑制剂可有效预防心房颤动患者血栓形成,同时未增加高出血风险患者的出血事件,进一步支持了该观点。以凝血因子Ⅺ为靶点的抗凝药物有望为安全预防心房颤动血栓事件提供新的治疗理念与方式。该文对凝血因子Ⅺ抑制剂将止血与血栓分离的机制、相关的临床研究证据及现有研究进展作一综述。
...不再出现此类内容
编辑人员丨1周前
-
腹腔镜肝切除术二氧化碳气体栓塞发生与防治的研究进展
编辑人员丨1周前
随着腹腔镜技术不断成熟,腹腔镜肝切除术在肝脏疾病的治疗中已得到认可和推广。与开放手术相比,腹腔镜肝切除术可减少术后并发症发生,缩短住院时间 [1,2,3,4]。腹腔镜手术需要合适气体建立气腹,以获得良好的手术视野。二氧化碳(CO 2)无色、廉价、不易燃,血液溶解度高,是腹腔镜手术中最常用的充气气体。但是随着腹腔镜技术的发展普及,与CO 2气腹相关的气体栓塞引起了关注。CO 2在腹腔镜手术中最大的优势是其在血液中的溶解度高,且吸收入血的CO 2气体可通过机械通气快速经肺排除,所以危及生命的严重CO 2栓塞在腔镜手术中发生率并不高,为0.15% [5],但一旦发生其死亡率却高达28% [6]。肝脏是一个血供丰富的实质性脏器,腔镜下分离切割肝组织时大量离断的肝静脉和肝血窦都暴露在气腹下,CO 2经过破损的静脉吸收入血,随着血液循环进入下腔静脉,流入右心房、右心室再到肺动脉。大量CO 2气体栓塞可能导致低氧血症、肺水肿、脑梗、循环衰竭甚至死亡等不良后果 [7,8,9,10],是腹腔镜肝脏手术的严重并发症之一。如何减少气体栓塞的发生是亟待解决的问题。本文将腹腔镜肝切除术中CO 2气体栓塞的研究进展作一综述。
...不再出现此类内容
编辑人员丨1周前
