目的:探讨3-磷酸肌醇依赖性蛋白激酶1-蛋白激酶B（PDK1-Akt）信号通路干预对心肌细胞超极化激活环核苷酸门控离子通道4（HCN4）转录、表达及功能的影响。方法:使用酶解法从健康雄性野生型C57小鼠和心脏特异性敲除PDK1小鼠获得心房肌细胞，分别为空白对照组和PDK1-KO组；另外，对急性分离自C57小鼠的心房肌细胞进行培养，将其分为药物对照组［予二甲基亚砜（DMSO）干预）］、PDK1敲低组［予1 μg/ml PDK1的短发夹状RNA（shRNA）干扰质粒干预］、SC79组［予Akt激动剂SC79（8 μmol/ml）干预］、GSK2334470组［予PDK1抑制剂GSK2334479（10 nmol/ml）干预］和PDK1敲低+SC79组（予8 μmol/ml SC79和1 μg/ml PDK1的shRNA干扰质粒干预）。为进一步减少药物脱靶的可能，故运用PDK1的shRNA质粒转染培养的心肌细胞，并在此基础上加用SC79干预。采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测相应组心房肌细胞PDK1及HCN4的mRNA表达水平，Western blot检测PDK1、Akt及HCN4蛋白表达水平，全细胞膜片钳检测HCN的电流密度，免疫荧光技术检测HCN4蛋白表达情况。结果:（1）PDK1-KO组的HCN4的mRNA（1.46±0.03比0.99±0.01， P<0.001）及蛋白（1.14±0.02比1.00±0.06， P=0.017）表达水平高于空白对照组。全细胞膜片钳结果显示，PDK1-KO组的HCN电流密度大于空白对照组［（-17.47±2.00）pA/pF比（-12.15±2.25）pA/pF， P=0.038］。（2）通过比较PDK1敲低组、SC79组和药物对照组细胞，对PDK1 shRNA及Akt特异性激动剂SC79进行功能验证，结果显示PDK1敲低组细胞的PDK1 mRNA及蛋白表达水平低于药物对照组，SC79组细胞的磷酸化-Akt（Thr 308）蛋白表达水平高于药物对照组。（3）GSK2334470组细胞的HCN4 mRNA（3.61±0.46比1.00±0.08， P<0.001）及蛋白（2.33±0.11比1.00±0.05， P<0.001）表达水平高于药物对照组。（4）PDK1敲低组细胞的HCN4 mRNA表达水平高于药物对照组（1.76±0.11比1.00±0.06， P<0.001）及PDK1敲低+SC79组（1.76±0.11比1.33±0.07， P=0.003），PDK1敲低+SC79组的HCN4 mRNA表达水平亦高于药物对照组（1.33±0.07比1.00±0.06， P<0.001）。PDK1敲低组细胞的HCN4蛋白表达水平高于药物对照组（1.15±0.04比1.00±0.05， P=0.003），PDK1敲低+SC79组的HCN4蛋白表达水平与药物对照组比较差异无统计学意义（ P>0.05），但低于PDK1敲低组（0.95±0.01比1.15±0.04， P<0.001）。全细胞膜片钳实验结果示，药物对照组细胞的HCN电流密度为（-13.27±1.28）pA/pF，PDK1敲低组细胞为（-18.76±2.03）pA/pF，PDK1敲低+SC79组细胞为（-13.50±2.58）pA/pF；PDK1敲低组细胞的HCN电流密度大于药物对照组（ P<0.001），而PDK1敲低+SC79组与药物对照组比较差异无统计学差异（ P>0.05）。（5）免疫荧光检测结果显示PDK1敲低组的绿色荧光较药物对照组增强，提示定位于细胞膜的HCN4表达量增加。而PDK1敲低+SC79组的绿色荧光较PDK1敲低组减弱，提示当敲低PDK1后再进一步激动Akt，定位于细胞膜HCN4表达量下降。 结论:PDK1-Akt信号通路参与心肌细胞HCN4离子通道转录、表达水平及功能的调控。

目的:研究Warburg效应通路的分子丙酮酸脱氢酶激酶1(pyruvate dehydrogenase kinase 1, PDK1)、磷酸化的丙酮酸脱氢酶(phosphorylated Pyruvate dehydrogenase, p-PDH)和丙酮酸激酶M2型(Pyruvate kinase isozyme type M2, PKM2)在宫颈癌组织中的表达情况，并探讨上述分子对宫颈癌预后和术后放疗疗效的影响。方法:免疫组织化学法检测102例接受根治性手术的宫颈癌患者原发灶组织中PDK1、p-PDH和PKM2的表达水平，其中63例接受术后放疗，分别单独和联合分析三分子的表达对宫颈癌预后和术后放疗疗效的影响。利用GEO数据集300例数据进行mRNA水平验证。生存分析用Kaplan-Meier法，COX回归模型用于单因素和多因素预后分析。结果:PDK1和PDK1 high/p-PDH high/PKM2 high指标同时高表达与盆腔淋巴结转移正相关( χ2＝10.890、7.407， P<0.05)。PDK1 high/p-PDH high/PKM2 high、国际妇产科联盟(FIGO)分期、盆腔淋巴结转移和术后放疗是影响总生存(OS)和无病生存(DFS)的因素( P<0.05)；多因素分析显示，PDK1 high/PDH high/PKM2 high、FIGO分期和术后放疗是影响OS和DFS的独立预后因素( P<0.05)。GEO数据集验证结果显示，PDK1 high/PDH high/PKM2 high是DFS的危险因素( P<0.05)。病理分型、盆腔淋巴结转移和PDK1 high/p-PDH high/PKM2 high是术后放疗DFS的影响因素( P<0.05)；多因素分析显示，病理分型和PDK1 high/p-PDH high/PKM2 high( P<0.05)是影响术后放疗DFS的独立预后因素。 结论:PDK1 high/p-PDH high/PKM2 high亚型宫颈癌患者预后和术后放疗无复发生存差，此亚型患者可能为Ⅰ～Ⅱ B期宫颈癌预后不良和术后放疗易复发的高危人群，为宫颈癌的分层治疗提供新思路。

目的:探讨8个多囊肾病家系的致病变异位点，为常染色体显性多囊肾病(autosomal dominant polycystic kidney disease, ADPKD)的遗传咨询和产前诊断提供理论依据。方法:应用全外显子组测序和高通量测序技术检测8个独立家系中先证者的 PKD1、PKD2基因，通过Sanger测序进行位点验证和家系分析，结合多囊肾疾病数据库和蛋白变异预测软件进行生物信息学分析。 结果:检测出8个 PDK1变异，包括5个无义变异和3个错义变异。其中4个无义变异 PDK1：c.7555C>T，c.7288C>T，c.4957C>T和c.11423G>A已报道为ADPKD的致病变异，1个错义变异 PDK1：c.2180T>G(p.Leu727Arg)报道为可能致病的变异；3个变异位点未见报道，c.6781G>T(p.Glu2261*)，c.109T>G(p.Cys37Gly)，c.8495A>G(p.Asn2832Ser)，其中无义变异 PDK1 c．6781G>T(p.Glu2261*)为致病变异，错义变异 PDK1 c．109T>G(p.Cys37Gly)和c.8495A>G(p.Asn2832Ser)为可能致病的变异。2个家系的产前诊断结果显示家系1胎儿携带与先证者相同的变异，家系2胎儿未携带与先证者相同的变异。 结论:鉴定出8个ADPKD家系的 PDK1基因变异，其中包括3个未见报道的新变异，丰富了 PDK1基因变异谱。以鉴定出的变异为理论依据，成功对2个家系进行产前诊断，为临床ADPKD出生缺陷提供咨询。

目的:利用癌症基因组图谱(TCGA)分析丙酮酸脱氢酶激酶1(PDK1)在脑胶质瘤中的表达和临床意义。方法:回顾性分析TCGA数据库中641例脑胶质瘤患者的临床资料。采用GEPIA(http：//gepia.cancer-pku.cn/)在线分析网站分析PDK1在脑胶质瘤患者中的表达情况。之后采用Pearson相关分析法创建与 PDK1相关的基因列表，再利用STRING在线分析工具对差异基因进行互作网络分析，根据可信度大小筛选出关键蛋白。进一步通过基因本体分析(GO)获得PDK1相关差异基因的功能及与京都基因和基因组百科全书(KEGG)通路的关系。根据PDK1蛋白表达量将所有患者分为PDK1蛋白低表达组(380例)和PDK1蛋白高表达组(261例)，采用Kaplan-Meier生存曲线比较两组患者的生存期差异。进一步采用单因素和多因素Cox回归分析法判断PDK1蛋白表达对脑胶质瘤患者预后的作用。 结果:PDK1蛋白在世界卫生组织(WHO)Ⅳ级胶质瘤中的表达明显高于Ⅱ、Ⅲ级(均 P<0.05)，且Ⅱ、Ⅲ级间的差异无统计学意义(Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级的蛋白相对表达量分别为7.24±0.60、7.34±0.80、8.86±0.90， P>0.05)。PDK1蛋白高表达组的脑胶质瘤患者累积生存率明显低于低表达组( P<0.05)。Pearson相关分析结果发现，96个基因与 PDK1表达密切相关，其中69个为正相关，27个为负相关。GO分析和KEGG通路分析结果显示，PDK1与缺氧微环境、有机环状化合物的反应、有机氮化合物的反应、cAMP反应及HIF-1信号通路密切相关。多因素Cox回归分析结果显示，年龄( HR＝1.579，95% CI：1.085～2.299， P＝0.017)、WHO分级( HR＝12.106，95% CI：6.521～22.474， P<0.001)及放疗( HR＝0.502，95% CI：0.325～0.775， P＝0.002)为胶质瘤患者生存期的独立影响因素(均 P<0.05)，可独立用于患者的预后判断。然而，PDK1蛋白表达对并不影响脑胶质瘤患者预后。 结论:不同WHO分级的脑胶质瘤患者PDK1的表达不同，且主要与缺氧和HIF-1信号通路密切相关。

目的:探讨Ⅺ型胶原α1蛋白（COL11A1）在肺腺癌迁移和侵袭中的作用和机制。方法:采用2020年9至11月贵州医科大学附属医院收治的4例肺腺癌患者手术病理组织，经免疫组织化学方法鉴定肺腺癌组织及癌旁组织并行转录组测序，使用TCGA和GTEx数据库行单基因预后分析。用Western blot法检测肺腺癌组织和癌旁组织中COL11A1基因表达水平。提取及培养人肺腺癌原代细胞。COL11A1 siRNA转染人肺腺癌原代细胞后转录组测序，差异基因做KEGG富集分析，分析差异基因富集的通路，Western blot法检测该通路各关键位点蛋白表达及磷酸化水平变化，划痕愈合实验检测细胞迁移、CCK8法检测细胞增殖、Transwell检测侵袭能力。结果:肺腺癌组织转录测序筛选差异表达较高的10个基因，单基因预后分析发现COL11A1基因表达水平与生存率相关（ P<0.001）；Western blot法检发现COL11A1在肺腺癌组织中表达较癌旁组织高（ P<0.001）；COL11A1 siRNA转染人肺腺癌原代细胞后转录组测序发现差异基因集中在PI3K-akt通路上，Western blot检测发现抑癌基因PTEN在siRNA转染组中表达显著高于对照组和阴性转染组，而Akt、p-Akt 473、p-Akt 308、p-PTEN、p-PDK1、p-c-Raf、p-GSK-3β基因表达均显著下调（均 P<0.05），siRNA转染组相较于阴性对照组人肺腺癌原代细胞迁移、增殖、侵袭能力均降低（均 P<0.05）。 结论:COL11A1调节PI3K/Akt/GSK-3β通路促进人肺腺癌原代细胞迁移和侵袭。

目的:使用生物信息学方法构建铁死亡相关微小RNA(miRNAs)-信使RNA(mRNAs)的调控网络并探讨其在骨关节炎(OA)中的分子作用机制。方法:从基因表达综合数据库(GEO)下载软骨相关数据集GSE175961和GSE1140007，利用生物信息学方法筛选铁死亡相关miRNAs和mRNAs，并进行富集分析、miRNA-mRNA网络构建以及诊断价值分析。最后采用荧光实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)验证关键基因表达，并采用独立样本 t检验比较其差异。 结果:GSE175961数据集中共筛选获得了15个差异表达miRNAs。使用TargetScan和miRDB数据库分别预测差异表达miRNAs的下游靶基因，共获得了5 115个共存的靶基因。与GSE1140007数据集中19个差异表达铁死亡基因取交集后共获得了4个下游铁死亡基因(PARP15、KLF2、CDKN1A、PDK4)。基于上述研究结果构建了由15个差异表达的miRNAs和4个下游铁死亡基因组成的miRNA-mRNA调控网络。进一步富集分析表明，4个下游铁死亡基因与多种生物学功能和信号途径有关，如脂肪酸代谢、细胞周期调控、FOXO信号途径以及P53信号途径等。受试者工作曲线分析表明，4个下游铁死亡基因具有良好的诊断价值。此外，使用外部数据集证实，CDKN1A和PDK4在OA软骨组织中表达降低。而列线图表明，OA发生率随CDKN1A和PDK4表达降低而升高。qRT-PCR证实，正常组和OA组中，CDKN1A相对表达量分别为1.322±0.890、0.035±0.031；PDK4相对表达量分别为1.085±0.567、0.393±0.180。结论:本研究构建的铁死亡相关miRNA-mRNA调控网络与软骨退变密切相关。

目的:探讨糖代谢关键酶葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD）介导的还原应激在砷致细胞恶性转化中的作用以及具体机制。方法:以0.0（对照组）、1.0 μmol/L（染砷组）亚砷酸钠（NaAsO 2）处理永生化人皮肤角质形成细胞（HaCaT细胞），利用细胞生长动力学、细胞划痕和软琼脂集落形成实验检测细胞恶性转化指标。在砷处理不同时期（0、1、7、14、21、28、35代细胞），通过相应试剂盒和免疫印迹（Western blot）检测NaAsO 2对HaCaT细胞糖代谢[葡萄糖-6-磷酸（G6P）、乳酸、乙酰辅酶A、G6PD水平及己糖激酶2（HK-2）、6-磷酸果糖-2-激酶/果糖-2，6-二磷酸酶3（PFKFB3）、丙酮酸脱氢酶激酶1（PDK1）、6-磷酸葡萄糖脱氢酶（PGD）、G6PD蛋白表达水平]的影响；提取线粒体，通过相应试剂盒检测NaAsO 2对HaCaT细胞及线粒体氧化还原[还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）/烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADP +）比值、还原型谷胱甘肽（GSH）/氧化型谷胱甘肽（GSSG）比值]的影响；使用小干扰RNA（siRNA）干预方法，检测G6PD对还原应激及NaAsO 2诱导的HaCaT细胞恶性转化的影响。 结果:1.0 μmol/L NaAsO 2培养HaCaT细胞至35代（T-HaCaT细胞），与传代匹配的0.0 μmol/L NaAsO 2培养HaCaT细胞相比[（33.797 ± 0.280）h、0.177 ± 0.015、（13.667 ± 2.625）个]，倍增时间[（24.042 ± 0.479）h]较短（ t = 30.45， P < 0.001），细胞迁移率（0.396 ± 0.039）较高（ t = 9.08， P < 0.001），软琼脂集落数量[（73.667 ± 4.450）个]较多（ t = 20.11， P < 0.001）。与同组0代和同代对照组细胞相比，染砷组细胞糖代谢指标G6P水平在1、7、14、21、28、35代均较高（均 P < 0.05），乳酸和G6PD水平在14、21、28、35代均较高（均 P < 0.05），乙酰辅酶A水平在21、28、35代均较低（均 P < 0.05），HK-2、PFKFB3、PDK1、PGD、G6PD蛋白表达水平在7、14、21、28、35代均较高（均 P < 0.05）；细胞NADPH/NADP +比值在1、14、21、28、35代均较高（均 P < 0.05），GSH/GSSG比值在21、28、35代均较高（均 P < 0.05）；线粒体NADPH/NADP +比值在1、7、21、28、35代均较高（均 P < 0.05），GSH/GSSG比值在1、7、14、21、28、35代均较高（均 P < 0.05）。siRNA沉默T-HaCaT细胞G6PD表达后，与T-HaCaT con siRNA处理组相比，T-HaCaT G6PD siRNA处理组细胞和线粒体NADPH/NADP +和GSH/GSSG比值均较低（均 P < 0.05），细胞倍增时间较长、细胞迁移率较低、软琼脂集落数量较少（均 P < 0.05）。 结论:NaAsO 2致HaCaT细胞恶性转化过程中，G6PD等糖代谢相关酶被激活导致糖代谢重编程，引起细胞氧化还原稳态失衡，细胞和线粒体的还原应激增强，进而促进NaAsO 2所致HaCaT细胞恶性转化。

目的:探讨免疫抑制剂雷帕霉素对流感病毒复制的影响及在流感病毒感染后调节糖酵解和炎性因子的作用。方法:本研究为实验研究，采用甲型H1N1流感病毒株A/PR/8分别感染人肺泡上皮细胞系A549和永生化小鼠骨髓源巨噬细胞(iBMDM)，构建流感病毒感染细胞模型。使用人非小细胞肺癌细胞系A459设置空白对照组、感染对照组、感染雷帕霉素组、感染二甲亚砜组，在流感病毒感染及雷帕霉素处理48 h后，使用空斑法和血凝法测定上清液病毒滴度，定量聚合酶链反应法检测细胞内病毒基因、糖酵解相关基因(PDK3、PKM、GAPDH、LDHA、HK2、PGAM1、PGK1)和炎性因子干扰素α(IFN-α)、Caspase-1、白细胞介素(IL)-1β、IL-18、IL-6、IL-8、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)]基因相对量的表达。设置巨噬细胞空白对照组，巨噬细胞感染对照组和巨噬细胞感染雷帕霉素组，使用小鼠永生化骨髓巨噬细胞(iBMDM)在流感病毒感染及雷帕霉素处理24 h后，酶联免疫吸附测定法检测上清肿瘤坏死因子(TNF)-α浓度。进行3次平行重复实验。结果:感染雷帕霉素组A549细胞上清中的病毒滴度与感染对照组、感染二甲亚砜组比较差异均无统计学意义(均 P>0.05)。感染雷帕霉素组NP基因CT值较感染对照组和感染二甲亚砜组升高，分别为[(17.50±0.35)比(16.43±0.12)和(16.52±0.27)，差异有统计学意义，均 P<0.05]；感染对照组A549细胞上清中炎性因子基因GAPDH、LDHA、HK2、PGAM1表达量均较空白对照组上调，分别为[(2.34±0.32)比(1.01±0.16)、(2.43±0.18)比(1.01±0.18)、(2.63±0.48)比(1.00±0.06)，(17.97±1.13)比(1.00±0.09)差异有统计学意义，均 P<0.05]；与感染对照组相比，感染雷帕霉素组下调了GAPDH、LDHA、HK2、PGAM1的相对表达量，分别为[(1.48±0.19)比(2.34±0.32)、(1.79±0.09)比(2.43±0.18)、(1.65±0.28)比(2.63±0.48)、(10.48±0.81)比(17.97±1.13)，差异有统计学意义，均 P<0.05]；感染雷帕霉素组基因PDK3、PKM、PGK1与感染对照组比较差异无统计学意义(均 P>0.05)]。感染对照组A549细胞上清中Caspase-1、IL-6、IL-8基因的相对表达量较空白对照组上调，分别为[(47.02±2.07)比(1.00±0.09)、(17.59±2.14)比(1.00±0.04)、(3.86±0.44)比(1.01±0.19)，差异有统计学意义，均 P<0.05]。以感染复数＝20流感病毒感染iBMDM细胞24 h后，巨噬细胞感染对照组上清液中TNF-α的浓度较巨噬细胞空白对照组升高(260.60±38.90)ng/L比(44.96±3.12)ng/L，而巨噬细胞感染雷帕霉素组的TNF-α的浓度降低了(132.20±12.29)ng/L比(260.60±38.90)ng/L，差异有统计学意义(均 P<0.05)。 结论:雷帕霉素减少流感病毒NP蛋白基因在肺泡上皮细胞中的表达，同时可有效减轻流感病毒感染引起的糖酵解通路激活，并降低感染后巨噬细胞炎症反应。

目的:明确环状RNA-SEC31A(circSEC31A)在胰腺癌中的表达水平，探讨其对胰腺癌细胞侵袭、迁移能力的影响及潜在的分子机制。方法:采用实时荧光定量PCR检测人正常胰腺细胞株HPDE及胰腺癌细胞株BXPC-3、PANC1、CaPan-2、SW1990 circSEC31A的表达水平，选用表达量较高的胰腺癌细胞株进行后续实验。针对circSEC31A设计两条siRNA(#1、#2)，采用脂质体将siRNA转染胰腺癌细胞沉默circSEC31A表达(siR-circSEC31A组)，以不针对circSEC31A设计的siRNA转染胰腺癌细胞为对照组(siR-NC组)，Transwell实验及划痕实验检测circSEC31A对胰腺癌细胞侵袭、迁移能力的影响。采用circSEC31A探针及oligo阴性对照探针进行RNA Pull-down实验，筛选与circSEC31A结合的miRNA，并验证该miRNA对胰腺癌细胞侵袭、迁移的影响。荧光定量PCR检测沉默miR-200c-3p及circSEC31A对胰腺癌细胞PDK1 mRNA表达的影响。蛋白质印迹法检测circSEC31A沉默对PDK1蛋白及下游相关蛋白Akt、磷酸化Akt(p-Akt)表达量的影响。结果:胰腺正常细胞株HPDE circSEC31A表达量(1.000±0.120)显著低于胰腺癌细胞株BXPC-3(1.920±0.130)、SW1990(2.93±0.528)、PANC1(4.557±0.692)和CaPan-2(5.247±0.194)的circSEC31A表达量，差异有统计学意义( P<0.001)。Transwell实验结果显示，与PANC1 siR-NC组穿膜细胞数(1301.3±94.6)个/100倍视野和CaPan-2 siR-NC组穿膜细胞数(1835.0±70.1)个/100倍视野比较，PANC1 siR-circSEC31A#1组、siR-circSEC31A#2组和CaPan-2 siR-circSEC31A#1组、siR-circSEC31A#2组穿膜细胞数显著下降，分别为(727.3±92.9)、(792.0±18.1)、(718.0±90.6)、(692.7±84.8)个/100倍镜视野；划痕实验结果显示，与PANC1 siR-NC组(55.000±4.359)%和CaPan-2 siR-NC组(69.000±3.606)%比较，PANC1 siR-circSEC31A#1组(20.667±3.215)%、siR-circSEC31A#2组(20.000±4.583)%和CaPan-2 siR-circSEC31A#1组(28.000±8.185)%、siR-circSEC31A#2组(29.667±5.686)%的划痕区细胞覆盖率显著降低；RNA Pull-down实验表明，与PANC1 oligo探针组(1.000±0.091)和CaPan-2 oligo探针组(1.000±0.153)比较，PANC1 circSEC31A探针组(2.237±0.175)和CaPan-2 circSEC31A探针组(2.166±0.156)miR-200c-3p富集量显著升高；与siR-NC组穿膜细胞数(939.3±57.0)、(786.7±51.5)个/100倍镜视野比较，PANC1、CaPan-2细胞siR-miR-200c-3p组穿膜细胞数增加到(1206.0±99.1)、(1838.0±105.7)个/100倍视野，而siR-miR-200c-3p+siR-circSEC31A组穿膜细胞数又下降到(932.7±116.4)、(785.3±58.8)个/100倍镜视野；与siR-NC组(1.000±0.103、1.000±0.107)比较，PANC1、CaPan-2细胞siR-miR-200c-3p组PDK1 mRNA表达量(1.898±0.159、2.102±0.337)显著升高，而siR-miR-200c-3p+siR-circSEC31A组PDK1 mRNA表达量又显著下降到(0.980±0.070、1.015±0.079)；蛋白质印迹法结果显示，PANC1 siR-NC组、siR-circSEC31A#1组、siR-circSEC31A#2组PDK1蛋白表达量分别为0.767±0.086、0.281±0.191、0.333±0.062，CaPan-2各组PDK1蛋白表达量分别为0.712±0.038、0.353±0.061、0.308±0.018；PANC1各组p-Akt蛋白表达量分别为0.741±0.050、0.114±0.027、0.139±0.041，CaPan-2各组p-Akt蛋白表达量分别为0.823±0.052、0.141±0.045、0.280±0.089。siR-circSEC31A组PDK1、p-Akt蛋白表达量均显著低于siR-NC组。以上各组间比较差异均有统计学意义( P值均<0.05)。 结论:circSEC31A在胰腺癌细胞中高表达，通过介导miR-200c-3p/PDK1/Akt轴来促进胰腺癌的侵袭转移。circSEC31A可能成为胰腺癌患者早期诊疗潜在的新靶点。

目的:通过蛋白质组学方法筛选慢性鼻窦炎伴鼻息肉（CRSwNP）的潜在治疗靶点，并通过实验验证其有效性。方法:收集自2020年6月至2021年12月于烟台毓璜顶医院耳鼻咽喉头颈外科行手术治疗的患者的鼻黏膜组织样本，其中CRSwNP患者69例，对照组（行上颌窦囊肿切除或视神经减压术）患者39例。通过液相色谱-串联质谱法（liquid chromatography-tandem mass spectrometry，LC-MS/MS）以数据独立采集（data-independent acquisition，DIA）模式分析组织样本，寻找差异表达蛋白，结合生物信息学工具对差异蛋白功能进行分析。并通过实时荧光定量聚合酶链反应（qPCR）及蛋白免疫印迹（WB）技术明确CRSwNP患者鼻组织造血细胞激酶（hematopoietic cell kinase，HCK）表达情况。同时构建CRSwNP小鼠模型并给予HCK抑制剂干预治疗，酶联免疫吸附实验（ELISA）检测不同实验组小鼠血清中炎性因子免疫球蛋白E（IgE）、白细胞介素（IL）-4及IL-5的分泌情况。结果:与对照组相比，CRSwNP组鼻黏膜组织筛选出差异蛋白1 850个，其中上调蛋白760个，下调蛋白1 090个。将细胞计数、CT评分等表型数据与组学结果进行加权基因共表达网络分析（weighted correlation network analysis，WGCNA）关联分析，选取MEBrown模块的575个蛋白，与通过蛋白质组学得到的1 850个差异蛋白中进一步筛选出的35个激酶取交集，获得8个蛋白激酶，分别是HCK、SYK、PDK2、FGR、PRKCB、ROR1、CAMK1及GRK6。对差异表达倍数最高的HCK进行实验验证，qPCR及WB结果表明，CRSwNP鼻组织中HCK的表达明显高于对照组（ P<0.05）。在动物实验中发现，CRSwNP组小鼠血清中IgE、IL-4及IL-5分泌量较对照组显著升高（ P<0.05），而经HCK抑制剂干预后，小鼠血清中IgE、IL-4及IL-5分泌量显著降低（ P<0.05）。 结论:HCK抑制剂能够降低CRSwNP小鼠的炎性指标，HCK有望成为CRSwNP的潜在治疗靶点。