目的:初步研究恩度联合X线照射对心肌纤维母细胞(CF)影响及miR-21的作用。方法:使用大鼠CF进行实验，设空白对照组、10 Gy X线照射组、恩度组、10 Gy X线+恩度组、10 Gy X线+恩度+NC mimics组(阴性对照组1)、10 Gy X线+恩度+miR-21 mimics组、10 Gy X线+恩度+NC抑制剂组(阴性对照组2)、10 Gy X线+恩度+miR-21抑制剂组。MTT法检测CF增殖，蛋白印迹法检测胶原蛋白I (Collagen Ⅰ)的表达、q-PCR检测Collagen Ⅰ和miR-21 mRNA的表达。结果:与空白对照组、10 Gy X线+恩度组及阴性对照组1比较，10 Gy X线+恩度+miR-21 mimics组CF增殖及Collagen Ⅰ mRNA、miR-21 mRNA表达增加(均 P<0.05)。与空白对照组、10 Gy X线+恩度组及阴性对照组2比较，10 Gy X线+恩度+miR-21抑制剂组的CF增殖及Collagen Ⅰ mRNA表达降低(均 P<0.05)。 结论:模拟miR-21基因表达CF增殖和Collagen Ⅰ表达增加，抑制该基因表达CF增殖和Collagen Ⅰ表达降低。

目的:探讨新生儿血色病-妊娠同族免疫性肝病（NH-GALD）的临床病理特征。方法:收集广州市妇女儿童医疗中心2018年9月至2021年3月3例NH-GALD的临床资料，尸体解剖检查内脏及脑组织，各脏器常规取材并行HE染色观察各脏器形态学改变，行普鲁士蓝染色观察铁沉积情况，应用免疫组化染色检测肝脏组织肝细胞膜复合攻击物C5b-9的表达。病例1由于病情危重死亡未做基因检测，病例2及病例3两例均行全外显子高通量测序。同时进行相关文献回顾。结果:3例NH-GALD均为男性，死亡年龄分别为9、58、50 d。病例1及病例2母孕期无异常，均为G1P1，胎龄分别为36 +4 W、33 +6 W。病例1出生时羊水少，出生体质量2300 g。病例2为胎龄双胎之大，出生体质量1450 g。病例3母妊娠期糖尿病，G2P2，胎龄37 +3 W，出生体质量2900 g。3例均无窒息抢救病史。3例临床均表现为急性肝衰竭及多脏器损害，包括凝血功能障碍、黄疸、水肿、新生儿肺炎等。实验室检查3例均提示贫血、血糖降低、严重的凝血障碍、直接及间接胆红素均增高、转氨酶正常或增高后降至正常、铁蛋白增高；2例AFP增高。3例尸体解剖主要病症均为NH-GALD，急性重型肝坏死并肝纤维化（或肝硬化），其他诊断包括肺出血、肺水肿、间质性肺炎、淤血性脾肿大、脑水肿及急性胸腺退化等。尸体解剖时大体观察3例肝脏重41.1~73.1 g（均低于同龄儿平均值），病例1及2肝脏表面细颗粒状，切面灰黄或暗红，病例3表面及切面可见大小不等暗红或墨绿色结节。镜下，3例肝脏均可见肝小叶结构破坏，肝细胞大片坏死，病例1及2见残留肝细胞呈梁索状或假腺样散在分布于疏松纤维间质中，胞质内含色素颗粒，可见少量多核肝巨细胞，微胆栓形成，小胆管相对增生。病例3肝组织见大小不等呈结节状分布的假小叶，结节内肝细胞大片坏死，周边残留多少不等的肝细胞。普鲁士蓝染色3例肝脏、胰腺及甲状腺均可见弥漫铁沉积；其他铁沉积组织包括肾上腺皮质（病例1和2），心肌和颌下腺（病例2和3），口腔黏膜涎腺、喉和支气管黏膜涎腺和小肠黏膜上皮（病例3）。免疫组化染色3例肝细胞膜复合攻击物C5b-9均弥漫阳性。2例全外显子高通量测序，均未检测到与肝脏遗传代谢性及胆汁淤积性疾病相关基因改变。 结论:新生儿急性肝衰竭时需要考虑到罕见的NH-GALD的可能，肝外器官铁沉积是其特征性改变，明确病理诊断对于患儿治疗及孕母再次妊娠预防性干预的意义重大。

目的 探讨生长激素释放相关肽GHRL-12在免疫检查点抑制剂相关心肌炎中的作用与机制,为其临床应用提供理论依据.方法 6～8周龄BALB/c小鼠,采用随机数生成器,随机分为对照组、心肌炎组、GHRL-12组和GHRL-12+心肌炎组.GHRL-12组和GHRL-12+心肌炎组小鼠尾静脉注射10 mg/kg GHRL-12连续1周,同时对照组和心肌炎组小鼠尾静脉注射同等体积的无功能scramble肽.在第7天和第14天分别给予心肌炎组和GHRL-12+心肌炎组小鼠250 μg心肌肌钙蛋白I(cTnI),从第14天开始,每间隔1天给予小鼠腹腔注射5mg/kganti-PD-1,共5次.每7天称量小鼠体重,测量小鼠心体比和心胫比.超声心动图检测心功能指标.HE染色检测心肌组织炎症细胞浸润程度,Masson染色检测心肌组织纤维化程度,并用ImageJ对炎症细胞浸润和纤维化程度进行量化.取小鼠眼球血,检测血清中肌酸激酶(CK)、CK同工酶(CK-MB)和乳酸脱氢酶1(LDH-1)变化.酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠血清中炎症因子cTnI、cTnT、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子a(TNF-a)释放情况.蛋白质印迹技术测定小鼠心肌组织中自噬相关蛋白高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、酵母Atg6同源物(Beclin-1)、自噬基因-相关蛋白5(ATG5)和微管相关蛋白轻链3B(LC3B)的表达,同时测定小鼠心肌组织中凋亡相关蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)和多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)的表达.对心肌细胞核用DAPI染成蓝色,凋亡细胞被TUNEL染成绿色,检测小鼠心肌组织发生凋亡的情况.结果 (1)与对照组相比,GHRL-12组小鼠体重无显著差异,心肌炎组小鼠体重增长不明显;与心肌炎组比较,给药第19天起GHRL-12+心肌炎组小鼠体重增长较为明显.与对照组和GHRL-12组相比,心肌炎组小鼠心体比、心胫比显著增加,而与心肌炎组小鼠相比,GHRL-12+心肌炎组小鼠心体比、心胫比下降.(2)超声心动图显示,单纯给予GHRL-12干预对小鼠心功能无显著影响,与对照组相比,心肌炎组小鼠左心室射血分数(LVEF)、缩短分数(FS)显著下降,左心室收缩末期内径(LVEDs)、左心室舒张末期内径(LVEDd)显著增加;而与心肌炎组小鼠相比,GHRL-12+心肌炎组小鼠LVEF、FS升高,LVEDs、LVEDd减少.(3)HE染色结果显示,与对照组小鼠相比,心肌炎组小鼠炎症细胞浸润显著增加,而与心肌炎组小鼠相比,GHRL-12+心肌炎组小鼠炎症细胞浸润减少.(4)Masson染色结果表明,与对照组小鼠相比,心肌炎组小鼠心肌组织纤维化程度增加,而与心肌炎组小鼠相比,GHRL-12+心肌炎组小鼠心肌组织纤维化程度降低.(5)与对照组小鼠相比,心肌炎组小鼠血清中CK、CK-MB、LDH-1、cTnI和cTnT均显著上升,而与心肌炎组小鼠相比,GHRL-12+心肌炎组均显著下降.(6)蛋白质印迹结果显示,与对照组小鼠相比,心肌炎组小鼠心肌组织HMGB1、Beclin-1、ATG5和LC3B蛋白表达均显著增加,而与心肌炎组小鼠相比,GHRL-12+心肌炎组均显著下降;同时,心肌炎组Caspase-3和PARP蛋白表达均显著增加,GHRL-12+心肌炎组均显著减少.(7)TUNEL结果显示,与对照组小鼠相比,心肌炎组小鼠心肌组织凋亡显著增加,与心肌炎组小鼠相比,GHRL-12+心肌炎组小鼠心肌组织凋亡显著下降.结论 多肽GHRL-12能够改善免疫检查点抑制剂诱导的心功能损伤,减少心肌组织中炎症细胞浸润和纤维化,抑制心肌组织凋亡和自噬,为未来免疫检查点抑制剂相关心肌炎的治疗提供潜在可能.

背景:心肌补片是一种修复损伤心肌的有效方式,但目前使用哪种细胞制作心肌补片和如何使心肌补片在体内发挥最大的治疗效果还存在争议.目的:通过综述心肌补片的细胞来源和完善心肌补片的策略来寻找出制作心肌补片的最佳方法.方法:由第一作者应用计算机以"cell sheet,cell patch,cardiomyocytes,cardia progenitor cells,fibroblasts,embryonic stem cell,mesenchymal stem cells"等为英文检索词检索PubMed和Web of Science数据库;以"心肌补片,生物3D打印,心肌"为中文检索词检索中国知网和万方数据库,经过入组筛选后,最终纳入94篇文献进入结果分析.结果与结论:①心肌补片的细胞来源主要分为3类:分别是体细胞、单能干细胞和多能干细胞.心肌补片的细胞来源丰富,但是并不是所有的细胞都适合制作心肌补片,例如,成纤维细胞和骨骼肌母细胞制成的心肌补片会有致心律失常的风险,间充质干细胞在体内的作用时间短并且存在伦理方面的问题.随着诱导式多功能干细胞的发现,为制作心肌补片提供了一个可靠的细胞来源.②心肌补片的制作方法有两种:一种是使用细胞片技术,另一种是使用生物3D打印技术.细胞片技术可完整保留细胞外基质成分,可以最大程度地模拟细胞在体内的生长循环,但是想要通过细胞片技术获得具有三维结构的心肌补片还存在困难.而生物3D打印技术可以通过计算机个性化设计获得具有三维结构的心肌补片.③完善心肌补片的策略主要包括:多种细胞共同培养后制作成心肌补片、改进生物3D打印技术中的墨水配方和支架成分、提高心肌补片的治疗效果、抑制移植后的免疫排斥反应和完善干细胞的分化培养方案.④目前还没有制作心肌补片的最佳细胞来源和制作方法,单靠某一种细胞或者某一种技术所获得的心肌补片常无法达到预期的治疗效果,因此研究者们在制作心肌补片之前需要根据预期的治疗效果来选择合适的策略制作心肌补片.

目的:观察贝母提取物(FE)对异丙肾上腺素(Iso)致小鼠心肌纤维化的作用.方法:昆明种小鼠40只,雌雄兼用,随机分为4组(n=10):对照组、模型组、FE 900 mg/kg、300 mg/kg剂量组,每只i.h Iso1.5 mg/kg(0.3 ml/d)造模,持续14 d;高、低给药组造模同时分别0.9 ml/d,0.4 ml/d灌胃FE,对照组s.c.等量生理盐水,连续30d.实验结束,测定小鼠心重指数,血清中超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量,HE和Masson染色分析心肌组织病理改变,免疫组化法检测心肌转化生长因子β1(TGF-β1)表达.结果:与对照组相比,模型组SOD活性显著性下降,MDA含量显著升高(P＜0.05);显微镜下,心肌组织间隙变大,炎性细胞浸润,出血坏死细胞增加,TGF-β1表达明显增加(P＜0.05);与模型组比较,FE组小鼠心重指数明显下降,SOD活性显著提高,MDA含量明显下降(P＜0.05),心肌组织病理学改变缓解,TGF-β1表达明显下调(P＜0.05),且呈一定剂量依赖性.结论:FE治疗对抗Iso诱导心肌纤维化,其机制可能与清除氧自由基,减轻脂质过氧化损伤及抑制TGF-β1表达有关.

心肌纤维化是心肌梗死后主要的病理过程,特征是细胞外基质合成和降解失衡,而成纤维细胞和肌纤维母细胞在此过程中起重要作用.心肌梗死后,梗死区域替代性纤维化可以减少梗死区域进一步的扩张,维持心室结构完整性,防止心室壁破裂;而非梗死区域的反应性纤维化,则会改变心室顺应性,增加心室壁的硬度,影响心脏的收缩和舒张功能.因此,心肌梗死后理想的治疗是抑制非梗死区域反应性纤维化、诱导梗死区域心肌再生,从而改善心功能.

目的 研究微小RNA-21(miR-21)对小鼠慢性病毒性心肌炎(CVMC)心肌纤维化的影响及其可能机制.方法 雄性4周龄Balb/c小鼠40只按照随机数字表法分为磷酸盐缓冲液(PBS)组、CVMC组、CVMC+miR-21抑制剂组和CVMC+同型对照组,每组各10只.首次注射柯萨奇B3病毒(CVB3)液或PBS定为第0天,研究总时间为42 d.CVMC组、CVMC+miR-21抑制剂组和CVMC+同型对照组的小鼠均于第0、14和28天经腹腔注射100TCID50的CVB3液0.1、0.15和0.2 ml/只,同时点PBS组小鼠注射相同剂量的PBS.CVMC+miR-21抑制剂组和CVMC+同型对照组小鼠在第14和28天注射病毒液后分别经尾静脉注射miR-21抑制剂0.1 ml/只或同型对照0.1 ml/只.42 d后行超声心动图检查评估小鼠心功能,然后无菌留取小鼠心脏,观察心肌绿色荧光蛋白(GFP)的表达,同时行苏木素伊红及Masson染色观察心肌病理学特征,并计算心肌病理积分(PS)及胶原容积积分(CVF),实时荧光定量逆转录聚合酶链反应测定小鼠心肌中miR-21、Ⅰ型胶原(COL1-A1)及Ⅲ型胶原(COL3-A1)mRNA的表达,Western blot法测定心肌中转化生长因子-β1(TGF-β1)和母亲DPP同源物7(Smad7)蛋白的表达.结果 (1)超声心动图检查结果:CVMC组和CVMC+同型对照组小鼠左心室收缩末期内径(LVESD)、左心室舒张末期内径(LVEDD)均明显高于PBS组(P均<0.05),左心室射血分数(LVEF)明显低于PBS组(P<0.05).CVMC+miR-21抑制剂组小鼠LVESD、LVEDD均低于CVMC组和CVMC+同型对照组(P均<0.05),LVEF明显高于CVMC组和CVMC+同型对照组(P均<0.05).(2)心肌病理学检测结果:CVMC+miR-21抑制剂组和CVMC+同型对照组小鼠心肌切片在荧光显微镜下可见GFP表达.CVMC组和CVMC+同型对照组小鼠心脏肿大僵硬,镜下可见心肌散在坏死灶,周围少量炎性细胞浸润,间质成纤维细胞增生明显,胶原纤维堆积.CVMC组和CVMC+同型对照组小鼠心肌PS分别为(1.14±0.69)和(1.00±0.63)分,CVF分别为(17.86±2.61)%和(16.78±2.58)%,均明显高于PBS组[PS为0分,CVF为(5.70±1.42)%,P均<0.05].CVMC+miR-21抑制剂组小鼠心肌周围少量炎性细胞浸润,间质纤维化的程度较轻,CVF为(11.01±2.55)%,明显低于CVMC组和CVMC+同型对照组(P均<0.05),PS为(0.89±0.60)分,虽低于CVMC组和CVMC+同型对照组,但差异无统计学意义(P均>0.05).(3)心肌组织miR-21、COL1-A1和COL3-A1 mRNA的表达量:CVMC组和CVMC+同型对照组小鼠心肌组织中miR-21、COL1-A1和COL3-A1 mRNA的表达量均明显高于PBS组(P均<0.05),而CVMC+miR-21抑制剂组小鼠心肌中上述因子的mRNA表达量则均明显低于CVMC组和CVMC+同型对照组(P均<0.05).(4)心肌组织TGF-β1和Smad7蛋白的表达量:CVMC组和CVMC+同型对照组小鼠心肌中TGF-β1蛋白表达量均明显高于PBS组,而Smad7蛋白表达量则均明显低于PBS组(P均<0.05).CVMC+miR-21抑制剂组小鼠心肌中TGF-β1蛋白表达量明显低于CVMC组和CVMC+同型对照组,而Smad7蛋白表达量则明显高于CVMC组和CVMC+同型对照组(P均<0.05).结论 miR-21可促进CVMC小鼠心肌纤维化,这一作用可能是通过TGF-β1/Smad7信号通路介导的.

目的:研究养心康片对心衰后小鼠心肌纤维化的影响,探讨其作用机制.方法:采用胸主动脉缩窄法(TAC)建立小鼠慢性心衰模型,建模成功后随机分为假手术组,模型组,3-甲基腺嘌呤(3-MA)组(15 mg·kg-1),养心康片高、中、低剂量组(1 170,585,390 mg·kg-1),假手术组给予等体积蒸馏水灌胃.30 d后行心脏超声检查,收集血流动力学参数;通过心脏石蜡切片,马松(Masson)染色观察心肌细胞形态学变化及心肌纤维化程度;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测微管相关蛋白轻链3(LC3),酵母ATG6同源物(Beclin-1),溶酶体膜蛋白(LAMP)心肌自噬蛋白,Ⅰ型胶原酶(Collagen Ⅰ),Ⅲ型胶原酶(CollagenⅢ),α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)心肌纤维化标志性蛋白表达情况.结果:与假手术组比较,模型组小鼠左心射血分数(LVEF),短轴缩短分数(FS)明显降低(P＜0.05),左心室舒张末期内径(LVDd),左心室收缩末期内径(LVDs)明显增大(P＜0.05),心肌纤维化程度显著加重(P＜0.01),α-SMA,Collagen Ⅰ,CollagenⅢ心肌纤维化标志性蛋白,LAMP,LC3,Beclin-1自噬蛋白表达均明显升高(P＜0.05);与模型组比较,3-MA组,养心康高、中剂量组心脏超声各项指标均显著改善(P＜0.05),心肌纤维化程度明显改善(P＜0.01),α-SMA,Collagen Ⅰ,CollagenⅢ,LAMP,LC3,Beclin-1表达明显降低(P＜0.05),低剂量组心功能、心肌纤维化及各项蛋白表达差异不明显.结论:养心康片可通过下调自噬减缓慢性心力衰竭小鼠心肌纤维化,改善心功能.

心脏纤维化是一种几乎存在于所有心脏疾病中的显著性病理改变,是心肌重构的重要病理生理机制之一.当心脏受到损伤时,心脏中的纤维母细胞大量增殖并向肌成纤维细胞转化,分泌大量胶原纤维,导致心脏纤维化.心脏纤维化可以增加心室壁的僵硬度,严重损害心脏的舒张功能;大量的纤维胶原包绕心肌细胞,破坏心肌细胞间收缩的协同性,引起心脏收缩功能下降;此外,血管周围的胶原纤维阻断心肌细胞的血供,造成心肌细胞缺血、缺氧,甚至发生凋亡,最终导致心力衰竭的发生.GSK-3是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,包括α和β两种亚型,多种研究证明GSK-3家族可以调节细胞的多种功能,包括代谢、转录、翻译,细胞生长及凋亡等,并且在多种疾病的发生中起重要作用,尤其在多种心脏疾病的发生、发展中扮演着重要角色.而在目前的研究中,对于GSK-3α的研究较少,而且目前的研究发现GSK-3α对于心肌纤维化的发生、发展影响很小,因此本文着重讨论GSK-3β在心脏纤维化发生和发展中的重要作用,并对最新的研究迸展迸行总结.

儿童肥厚型心肌病(HCM)是一类常见的心血管遗传基因异常疾病,多数为单基因常染色体显性遗传性心肌病,也不排除其他遗传方式.HCM以心室对称性或非对称性肥厚为主要特征,组织病理学特点为心肌细胞肥大、排列紊乱以及纤维化.一般将儿童HCM分为原发性和继发性两种,原发性以编码肌小节蛋白基因突变为主要病因,非肌小节蛋白基因突变次之;其中肌小节性HCM以MYH7、MYBPC3、TNNT等基因突变为主.继发性病因包括肥胖、糖尿病母亲婴儿、运动员综合征、异常激素增高或药物诱发等.