目的:探讨忍冬藤提取物对骨质疏松性骨折大鼠模型的影响及其机制.方法:将大鼠随机分为对照组,模型组,忍冬藤提取物低剂量组、中剂量组、高剂量组.除对照组外均建模,建模成功后,低、中、高剂量组分别给予50、100、200 mg·kg-1·d-1忍冬藤提取物,灌胃12周,对照组和模型组给予等体积生理盐水.对比各组双能X线摄片结果、骨痂组织H-E染色结果、骨密度、血清碱性磷酸酶(ALP)水平、血清炎症因子即肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)水平,应用免疫印迹和RT-PCR检测骨痂组织Wnt3、β-catenin蛋白和mRNA表达水平.结果:双能X线摄片结果显示,模型组骨折线清晰、骨痂生长明显;与模型组相比,低、中、高剂量组骨折端缝隙以及骨痂体积减小,高剂量组骨折愈合最佳.H-E染色结果显示,模型组可见软骨性骨痂,成熟的骨小梁细胞较少,骨小梁排列紊乱;低、中、高剂量组,组织病理变化有程度不同改善,骨小梁数目逐渐增多,排列趋于有序.与对照组比较,模型组大鼠骨密度、ALP及Wnt3、β-catenin蛋白和mRNA表达水平显著降低,血清TNF-α、IL-1β水平显著升高;与模型组比较,低、中、高剂量组骨密度、ALP及Wnt3、β-catenin蛋白和mRNA表达水平显著升高,血清TNF-α、IL-1β水平显著降低.结论:忍冬藤提取物可促进骨质疏松性骨折大鼠模型骨折愈合,其机制可能与其能激活Wnt/β-catenin通路有关.

目的:忍冬藤中5-O-[4'-O-(β-D-吡喃葡萄糖基)咖啡酰基]奎宁酸的分离鉴定及HPLC含量测定方法的建立.方法:采用色谱分离方法从忍冬藤50％甲醇提取物中分离得到5-O-[4'-O-(β-D-吡喃葡萄糖基)咖啡酰基]奎宁酸,并通过核磁共振波谱和质谱数据确定其结构.含量测定色谱条件:Dikma Technologies PLATISILTM ODS C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相乙腈(A)-0.4％冰乙酸溶液(B)梯度洗脱(0～20 min,8％ ～ 15％ A);流速1.0 mL·min-1;检测波长327 nm;柱温35℃.结果:5-O-[4'-O-(β-D-吡喃葡萄糖基)咖啡酰基]奎宁酸在0.15 ～3.07 μg与峰面积呈良好的线性关系,其线性回归方程为Y=1.521 3X-3.777 7(r=1.000 0).供试品溶液在24 h内稳定性良好,平均加样回收率(n=6)为95.95％,RSD1.5％.对收集的8批忍冬藤药材进行测定,5-O-[4'-O-(β-D-吡喃葡萄糖基)咖啡酰基]奎宁酸质量分数1.737 ～7.390 mg·g-1.结论:首次从忍冬藤中分离鉴定了5-O-[4'-O-(β-D-吡喃葡萄糖基)咖啡酰基]奎宁酸,报道了其完整核磁数据,建立了忍冬藤中该成分的含量测定方法,并设立了合理的含量限度值.建立的含量测定方法准确、可靠,可用于忍冬藤药材的质量控制.

目的 研究灰毡毛忍冬Lonicera macranthoides花蕾中的化学成分.方法 采用正相硅胶、ODS、Sephadex LH-20、半制备高效液相色谱等方法对灰毡毛忍冬花蕾的水提取物进行分离纯化,采用NMR、MS等波谱方法进行鉴定结构,采用MTT法研究化合物的细胞毒活性.结果 从灰毡毛忍冬花蕾中分离得到了7个三萜类化合物,分别鉴定为3-O--D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-α-L-吡喃阿拉伯糖基常春藤皂苷元28-O-β-D-吡喃葡萄糖酯苷(1)、3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖基齐墩果酸28-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖基酯苷(2)、3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-L-吡喃阿拉伯糖基常春藤皂苷元28-O-β-D-吡喃葡萄糖酯苷(3)、3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖基常春藤皂苷元28-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖基酯苷(4)、3-O-α-L-吡喃阿拉伯糖基常春藤皂苷元28-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖基酯苷(5)、3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-α-L-吡喃阿拉伯糖基常春藤皂苷元28-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖基酯苷(6)、3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖基常春藤皂苷元28-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→6)-p-D-吡喃葡萄糖基酯苷(7).结论 化合物1为新化合物,命名为灰毡毛忍冬皂苷丙;化合物2～7为首次从该植物中分离得到.细胞毒活性结果显示,化合物1、4和5对人宫颈癌HeLa细胞均有一定的抑制作用,其IC50值分别为54.3、43.9、61.2 μmol/L.

目的 观察木姜子和忍冬藤的乙醇提取物对冷哮模型小鼠气道炎症及血清白介素4(Interleukin-4,IL-4)、白介素5(Interleukin-5,IL-5)、白介素22(Interleukin-22,IL-22)水平的影响,探讨其抑制冷哮气道炎症的作用机制.方法 将70只雌雄各半昆明种小鼠随机分为7组,每组10只,分别为空白组、模型组、木姜子和忍冬藤的乙醇提取物低、中、高剂量组、地塞米松组和小青龙汤组.除空白组外,其余各组用卵白蛋白腹腔注射致敏+雾化吸入激发法+寒冷刺激建立冷哮小鼠模型.药物干预组给予木姜子和忍冬藤的乙醇提取物,连续7d.各组小鼠末次激发24h后,各组小鼠留取标本并处死.镜下观察各组哮喘小鼠肺组织病理形态变化;用ELISA法测定小鼠血清中IL-4、IL-5、IL-22含量.结果 与模型组相比,木姜子和忍冬藤的乙醇提取物治疗组小鼠血清中IL-4、IL-5、IL-22含量明显降低(P＜0.05).病理切片染色结果显示木姜子和忍冬藤的乙醇提取物高、中剂量能够明显减轻肺组织细胞炎性浸润等病理症状.结论 木姜子和忍冬藤的乙醇提取物可通过降低IL-4、IL-5、IL-22水平,调节Trh2/Th17免疫平衡而改善冷哮模型小鼠气道炎症.

目的 观察木姜子和忍冬藤配伍乙醇提取物对气管平滑肌细胞(ASMC)增殖、凋亡的影响,并探讨其可能机制.方法 配制5.65μg/mL、11.3μg/mL、22.6μg/mL浓度的木姜子和忍冬藤配伍乙醇提取物.体外培养ASMC,将其分为空白组、模型组、低浓度组、中浓度组、高浓度组.各组均加入1％胎牛血清+杜氏改良伊格尔培养基/汉氏F-12营养培养基,除空白组外,其余各组均加入20μg/mL血小板源性生长因子,此外各浓度组加入相应浓度的木姜子和忍冬藤乙醇提取物.培养6 h、12 h、18 h、24 h、36 h后检测各组细胞增殖情况,并计算增殖抑制率.培养24 h后,观察各组细胞凋亡情况,检测各组转化生长因子β1(TGF-β1)、血管内皮生长因子(VEGF)、白细胞介素(IL)-4、IL-13、IL-17水平,以及B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)的表达水平.结果 各浓度组的抑制率均高于模型组,低浓度组、中浓度组、高浓度组的抑制率依次升高,且抑制率均随时间延长而升高(均P<0.05).低浓度组可以观察到有部分细胞凋亡和核固缩现象,中浓度组和高浓度组该现象增多.与空白组比较,模型组TGF-β1、VEGF、IL-4、IL-13、IL-17水平及Bcl-2蛋白表达水平升高,Caspase-3蛋白表达水平降低(均P<0.05);与模型组比较,各浓度组TGF-β1、VEGF、IL-4、IL-13、IL-17水平及Bcl-2蛋白表达水平均降低,Caspase-3蛋白表达水平升高(均P<0.05).结论 木姜子和忍冬藤配伍乙醇提取物可抑制ASMC增殖,并可诱导ASMC凋亡,其机制可能与促进凋亡蛋白表达、抑制抗凋亡蛋白表达以及降低相关细胞因子水平有关.

目的 观察木姜子和忍冬藤配伍乙醇提取物减轻哮喘小鼠气道炎症的作用,并探讨其起效机制.方法 健康清洁级昆明种小鼠随机分为空白组,模型组,木姜子+忍冬藤配伍乙醇提取物低、中、高剂量组(低、中、高剂量组),针挑疗法组(针挑组)、地塞米松阳性对照组(阳性组)7组,每组10只.采用卵清蛋白腹腔注射致敏+雾化吸入激发法+寒冷刺激建立哮喘小鼠模型.低、中、高剂量组给予木姜子和忍冬藤的乙醇提取物〔剂量分别为5、10、20 mg/(kg·d)〕,针挑组给予针挑疗法,阳性组给予地塞米松〔10 mg/(kg·d)〕,每天1次,7 d为1个疗程,治疗1个疗程.疗程结束后,观察肺功能变化并取材采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清炎症因子免疫球蛋白(Ig)E、白细胞介素(IL)-4、IL-5、IL-10、干扰素(IFN)-γ水平,苏木素-伊红(HE)染色观察肺组织形态学变化,Western印迹检测锌指蛋白(GATA)-3蛋白表达水平.结果 和模型组比较,阳性组、针挑组和各剂量组血清IgE、IL-4、IL-5、IL-10水平明显降低而IFN-γ水平明显升高,差异均有统计学意义(P<0.01或P<0.05);针挑组和各剂量组均能改善肺功能(P<0.01或P<0.05)和GATA-3蛋白表达水平;肺组织形态学变化显示高、中剂量组能够明显改善肺组织细胞炎性浸润病理变化.结论 针挑疗法与木姜子、忍冬藤配伍疗法均可明显降低IgE、IL-4、IL-5、IL-10、IFN-γ水平,明显升高IFN-γ水平,其起效机制与改善哮喘模型小鼠气道炎症相关.

目的 观察木姜子和忍冬藤配伍醇提物影响哮喘小鼠肺肾功能的作用,并探讨其起效机制.方法 将健康清洁级昆明种小鼠随机分为空白对照组(对照组),模型组,木姜子和忍冬藤配伍醇提物低、中、高剂量组,地塞米松阳性对照组(阳性组)6组,每组10只.采用卵清蛋白腹腔注射致敏+雾化吸入激发法+寒冷刺激建立哮喘小鼠模型.木姜子、忍冬藤配伍醇提物低、中、高剂量组给予木姜子和忍冬藤的乙醇提取物(剂量分别为0.325,0.65,1.3g·kg-1 ·d-1),阳性对照组给予地塞米松(10 mg·kg-1·d-1),每天1次,7d为1个疗程,治疗1个疗程.疗程结束后,观察肺功能变化并取材检测尿酸(UA)、血肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)、尿肌酐(UCr)、核因子-κB亚单位P65(NF-κB P65)以及免疫球蛋白IgE、IgA、IgG、IgM水平;HE染色观察肺、肾组织形态学变化.结果 和对照组比较,模型组UA、SCr、BUN、UCr、IgE、NF-κBP65水平升高而IgA、IgG、IgM水平降低,差异均有统计学意义(P＜0.01或P＜0.05);和模型组比较,各剂量组UA、SCr、BUN、UCr、IgE、NF-κB P65水平下降而IgA、IgG、IgM水平升高,差异均有统计学意义(P＜0.01或P＜0.05);各剂量组均能改善肺肾功能(P＜0.01或P＜0.05);肺、肾组织形态学变化显示各剂量组能够明显改善肺、肾组织病理变化.结论 木姜子、忍冬藤配伍醇提物可改善肺肾功能,降低IgE水平而升高IgA、IgG、IgM水平,对免疫系统具有良性的影响,提示可能是其补肺益肾的起效机理.

对刺通草(Trevesia palmate)的化学成分及其肿瘤细胞毒活性进行研究.通过硅胶、Sephadex LH-20,Rp-C18和高效液相色谱反复层析纯化,从刺通草的甲醇提取物中分离得到14个化合物,并运用现代波谱学技术将它们的结构分别鉴定为3-O-α-L-鼠李糖-(1→2)-α-L-阿拉伯糖常春藤苷(1)、齐墩果酸(2)、熊果酸(3)、川续断皂苷B(4)、灰毡毛忍冬皂苷B(5)、常春藤皂苷C(6)、地肤子皂苷Ic(7)、阿魏酸(8)、水杨苷(9)、绿原酸(10)、芦丁(11)、腺苷(12)、β-谷甾醇(13)和棕榈酸(14).化合物2～14为首次从该植物中分离得到.对分离得到的部分单体化合物进行抗肿瘤活性检测,发现化合物1和3对人肿瘤细胞株SMMC-7721、Hela、MCF-7均显示出较为明显的抑制活性,且化合物1对宫颈癌细胞Hela的抑制活性为首次报道.

目的 研究忍冬藤Lonicera japonica提取物对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的作用及机制.方法 采用超高效液相色谱-飞行时间质谱联用技术(UPLC-Q-TOF/MS)表征忍冬藤提取物的化学成分:采用MTT法检测忍冬藤提取物对人骨肉瘤细胞HOS、143B以及人肾皮质近曲小管上皮细胞HK-2存活率的影响;采用荧光显微镜观察忍冬藤提取物对HOS、143B细胞凋亡的影响;采用Annexin V/PI双染法检测忍冬藤提取物对HOS细胞凋亡的影响;采用JC-1染色法检测忍冬藤提取物对HOS细胞线粒体膜电位的影响;采用Western blotting法检测忍冬藤提取物对HOS细胞B细胞淋巴瘤2相关X蛋白(bcl-2 associated X,Bax)、B 细胞淋巴瘤2(B cell lymphoma-2,Bcl-2)、活化的半胱氨酸蛋白酶-3(cleaved Caspase-3)、活化的多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(cleaved poly ADP-ribose polymerases,cleaved PARP)、cleaved Caspase-9和细胞色素 C(cytochrome-c,Cyt-C)蛋白表达的影响.结果 忍冬藤提取物中鉴定出有机酸类、三萜皂苷类、黄酮类、环烯醚萜类和氨基酸类5种类型的36种化学成分.忍冬藤提取物抑制HOS和143B细胞存活率,显著诱导HOS细胞凋亡(P＜0.01),Caspase-3抑制剂Z-VAD-FMK显著抑制忍冬藤提取物诱导的HOS细胞凋亡(P＜0.05、0.01);忍冬藤提取物显著提高HOS细胞Caspase-3活性(P＜0.01),显著改变HOS细胞线粒体膜电位(P＜0.05、0.01),显著上调HOS细胞Bax、cleaved Caspase-3、cleaved PARP、cleaved Caspase-9、Cyt-C 和 Bax/Bcl-2蛋白表达水平(P＜0.05、0.01),显著下调 Bcl-2蛋白表达水平(P＜0.05、0.01).结论 忍冬藤提取物能够抑制骨肉瘤细胞增殖,并通过线粒体凋亡途径诱导细胞凋亡,其机制可能与下调Bcl-2蛋白表达,上调 Bax、cleaved Caspase-3、cleaved PARP、cleaved Caspase-9和 Cyt-C 蛋白表达,激活 Caspase 级联反应有关.

目的 研究忍冬藤提取物的体外抗结肠癌作用.方法 体外培养结肠癌HCT116和SW480细胞并用忍冬藤提取物干预,采用CCK8法检测忍冬藤提取物对HCT116和SW480细胞增殖的影响;采用Hochest法和Annexin V/PI法检测忍冬藤提取物及p53抑制剂PFT-α对HCT116和SW480细胞凋亡的影响;JC-1法检测忍冬藤提取物对HCT116细胞线粒体膜电位的影响;Western Blot检测忍冬藤提取物对HCT116细胞相关蛋白表达水平的影响.结果 相较于空白组,忍冬藤提取物可明显抑制结肠癌HCT116和SW480细胞增殖,并促进细胞凋亡(P<0.01),促进HCT116细胞线粒体膜电位坍塌,明显上调HCT116细胞Bax/Bcl-2的比值(P<0.01)以及Cleaved PARP、Cyt-C、Cleaved Caspase-3和p53蛋白表达(P<0.05,P<0.01);相较于忍冬藤提取物组,忍冬藤提取物+PFT-α明显抑制HCT116细胞凋亡(P<0.01).结论 忍冬藤提取物可通过诱导p53依赖的线粒体凋亡发挥抗结肠癌作用.