目的:探究LncRNA HCG18调控CD8+T细胞抗鼻咽癌细胞的功能及机制.方法:qRT-PCR检测鼻咽癌组织及癌旁组织 HCG18表达以及人鼻黏膜上皮细胞 HNEpC和人鼻咽癌细胞系CNE1、CNE2、HONE-1、HNE-2 中 HCG18 表达.CNE1 细胞分为 si-HCG18 组、si-NC 组、si-HCG18+PD-L1组,HNE-2细胞分为 HCG18组、Vector组和 HCG18+sh-PD-L1组,上述各组CNE1细胞和 HNE-2细胞分别与 CD8+T 细胞共孵育 24h(si-HCG18+CD8+T 组、si-NC+CD8+T 组、si-HCG18+PD-L1+CD8+T组、HCG18+CD8+T 组、Vector+CD8+T 组和 HCG18+sh-PD-L1+CD8+T 组),酶联免疫吸附试验(Enzyme Linked Immunosorbent Assay,ELISA)检测共孵育体系中INF-γ、TNF-α、IL-2浓度,细胞毒性试剂 盒检测肿瘤细胞裂解率.Western blot检测PD-L1蛋白表达.双荧光素酶报告基因实验验证HCG18与miR-20b-5p的靶向关系,miR-20b-5p与PD-L1的靶向关系.结果:鼻咽癌组织中HCG18表达显著高于癌旁组织,CNE1、CNE2、HONE-1、HNE-2细胞中HCG18表达均显著高于 HNEpC细胞(P＜0.05).si-HCG18组CNE1细胞中PD-L1表达显著低于si-NC 组(P＜0.05),HCG18组 HNE-2细胞PD-L1表达显著高于 Vector 组(P＜0.05),相比于 si-NC+CD8+T 组,si-HCG18+CD8+T 组共孵育体系中 INF-y、TNF-α、IL-2浓度显著增加(P＜0.05),CNE1细胞裂解率显著增加(P＜0.05),相比于si-HCG18+CD8+T组,si-HCG18+PD-L1+CD8+T 组共孵育体系中 INF-γ、TNF-α、IL-2 浓度显著降低(P＜0.05),CNE1 细胞裂解率显著降低(P＜0.05).相比于Vector+CD8+T组,HCG18+CD8+T组共孵育体系中INF-γ、TNF-α、IL-2浓度显著降低(P＜0.05),HNE-2细胞裂解率显著降低(P＜0.05),相比于HCG18+CD8+T组,HCG18+sh-PD-L1+CD8+T组共孵育体系中INF-γ、TNF-α、IL-2浓度显著增加(P＜0.05),HNE-2细胞裂解率显著增加(P＜0.05).miR-20b-5p 为 HCG18 靶基因,PD-L1 为 miR-20b-5p 靶基因.结论:HCG18 上调鼻咽癌细胞PD-L1表达并且抑制CD8+T细胞的抗肿瘤活性.

白细胞介素-24(IL-24)是一种具有显著抗肿瘤活性的细胞因子,可诱导肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤细胞增殖和减少肿瘤血管生成,其通过p38 MAPK、PI3K和JAK/STAT等多种信号通路调节细胞周期、细胞代谢等关键过程,并有效抑制肿瘤发生、发展.IL-24独特的抗肿瘤机制和临床应用潜力使其受到广泛关注.然而,IL-24的肿瘤靶向性、毒副作用、递送效率和剂量控制等问题限制了其在临床中的广泛应用.为提高IL-24的治疗效率和靶向性,研究人员通过基因工程改造和溶瘤病毒载体递送等方式优化和增强其治疗效果.此外,IL-24与放化疗等抗肿瘤手段联合可显著提高治疗效果并减少不良反应,提供了更为安全有效的癌症治疗方案.

目的:制备并表征包载CPI-444并偶联CD8抗体的纳米微粒(CNP/αCD8),探讨其对CD8+T细胞活化、增殖和抗肿瘤作用的影响.方法:采用复乳溶剂蒸发法和EDC/NHS法制备包载腺苷受体A2A(A2AR)特异性拮抗剂CPI-444(C)或香豆素6(C6)荧光素的纳米微粒并分别在其表面偶联CD8抗体,制得CNP/αCD8和C6NP/αCD8.扫描电镜和NanoPlus粒度测定仪表征纳米微粒形态和粒径,液相色谱与串联质谱联用(LC-MS/MS)法和离心法测定纳米微粒的载药量和药物释放情况,荧光显微镜和流式细胞仪检测CD8+T细胞内化C6NP/αCD8的情况,流式细胞仪、ELISA和LDH法检测CNP/αCD8对CD8+T细胞增殖、活化、细胞毒活性和杀瘤能力的影响.结果:CNP/αCD8纳米微粒为圆形、粒径约150 nm,能有效包载CPI-444和偶联CD8抗体,药物包封率和CD8抗体偶联效率分别约为60%和53.4%;CNP/αCD8纳米微粒具有良好稳定性,能被CD8+T细胞内化,抑制A2AR分子表达.生物学功能实验显示,CNP/αCD8增强CD8+T细胞的增殖能力、促进T细胞活化、分泌细胞因子及产生颗粒酶B和穿孔素,并增强CD8+T细胞杀伤肿瘤细胞的能力.结论:CNP/αCD8纳米微粒能显著增强CD8+T细胞免疫效应功能,其增强CD8+T细胞功能可能是通过抑制A2AR分子的表达起作用.

目的 制备具有化学动力疗法(CDT)疗效的多功能二氧化锰包覆二氧化硅纳米平台(SiO2@MnO2 NPs),并观察其体外MRI/超声的成像效果.材料与方法 通过溶胶-凝胶法制备SiO2纳米粒(SiO2 NPs),并基于氨水、聚乙二醇与高锰酸钾的还原反应制备SiO2@MnO2 NPs.观察两种纳米粒的形貌、粒径大小和表面电位,验证SiO2@MnO2 NPs产生毒性羟基自由基的能力,评估纳米粒体外MRI/超声成像的效果,观察细胞对纳米粒的摄取以及纳米粒在细胞内产生活性氧的能力,并评估纳米粒对人胰腺癌细胞PANC-1的CDT疗效.结果 成功制备SiO2@MnO2 NPs,透射电子显微镜下观察碎片状MnO2的壳层包覆在球形SiO2 NPs表面,平均粒径(115.9±2.0)nm,平均电位(-32.51±0.30)mV.紫外分光光度计检测到亚甲基蓝随SiO2@MnO2 NPs浓度的升高逐渐降解,提示毒性羟基自由基的生成.体外模拟肿瘤微环境见SiO2@MnO2 NPs可增强MRI/超声成像效果;于PANC-1细胞内检出大量活性氧生成并发挥CDT效应杀伤肿瘤细胞.结论 本研究成功制备了多功能性SiO2@MnO2 NPs,体外显示了良好的CDT效应和双模态成像效果,对PANC-1细胞具有一定的杀伤作用,为增效CDT和构建多功能纳米平台奠定基础.

目的:构建表达报告基因荧光素酶和肿瘤相关抗原间皮素(mesothelin，MSLN)基因的胰腺癌细胞系，评估其作为靶细胞在评价免疫细胞的肿瘤杀伤效力中的应用。方法:构建表达荧光素酶、MSLN基因的慢病毒载体，包装慢病毒，感染胰腺癌细胞系，抗生素筛选后，有限稀释法获得单细胞克隆，并验证目的基因的稳定表达。实时无标记细胞分析(real-time cell analysis，RTCA)和荧光素酶活性检测方法体外检测免疫细胞对肿瘤细胞的杀伤效力。将构建的细胞系接种B-NDG小鼠建立表达荧光素酶的胰腺癌肿瘤模型，利用活体成像技术检测荧光素酶表达水平，监测小鼠体内胰腺癌肿瘤生长情况。在胰腺癌小鼠模型中验证嵌合抗原受体T(chimeric antigen receptor T，CAR-T)细胞的肿瘤杀伤能力。结果:本研究建立了稳定表达荧光素酶和MSLN基因的胰腺癌细胞系panc-1-luc、panc-1-luc-MSLN和capan-2-luc细胞。3种细胞的报告基因表达水平较高，与细胞数量呈正相关，panc-1-luc-MSLN细胞的MSLN阳性率达95.6%。体外肿瘤细胞杀伤试验结果表明MSLN-CAR-T细胞能特异性杀伤MSLN抗原阳性的panc-1-luc-MSLN细胞和capan-2-luc细胞，最小杀伤率分别为(70.00±18.19)%和(57.00±5.29)%，而对MSLN阴性的panc-1-luc细胞无杀伤作用。RTCA结果显示MSLN-CAR-T细胞对构建的3种胰腺癌细胞均有杀伤能力，最小杀伤率分别为(56.33±7.64)%、(93.00±2.65)%和(26.33±28.15)%；NK-92MI细胞对靶细胞的杀伤不受MSLN限制。免疫缺陷小鼠胰腺癌模型结果显示，体内杀伤效力与体外荧光素酶活性检测结果一致。体内外试验证明，检测靶细胞荧光素酶表达活性，可以反映免疫细胞对靶细胞的杀伤效力。结论:本研究建立了稳定表达荧光素酶的多株胰腺癌单克隆细胞系，可用于体内外免疫治疗产品肿瘤杀伤效力的研究评价。

目的:探索开发一种靶向CLL-1的嵌合抗原受体T细胞（CAR-T细胞）并验证其功能。方法:通过流式细胞术检测急性髓系白血病（AML）细胞系和AML原代细胞CLL-1靶点的表达水平。构建CLL-1 CAR载体并制备出相应慢病毒，感染激活后T细胞生产出CAR-T细胞，并通过体外和体内实验验证CLL-1 CAR-T细胞的功能。结果:AML细胞系和原代AML细胞中均表达CLL-1。制备的CLL-1 CAR-T细胞转导率为77.82%，在AML细胞系以及AML原代细胞中，CLL-1 CAR-T细胞能明显特异性杀伤表达CLL-1的靶细胞系和原代肿瘤细胞。相对于未转导的T细胞，CLL-1 CAR-T细胞在杀伤靶细胞和原代肿瘤细胞时分泌IL-6、IFN-γ等细胞因子水平更高（ P值均<0.001）。在AML人源性异种移植小鼠模型中，相对于未转导的T细胞，CLL-1 CAR-T细胞表现出有效的抗白血病活性并延长小鼠存活时间[未达到对22（95% CI 19~24）d， P=0.002]。 结论:靶向CLL-1的CAR-T细胞成功开发并具有较好的肿瘤杀伤作用。

目的:制备转染治疗基因早期生长反应蛋白1(Egr1)-钠碘同向转运体(NIS)并携带金纳米颗粒(AuNPs)的骨髓间充质干细胞(BMSCs)，探讨Egr1对NIS表达的促进和AuNPs的辐射增敏作用。方法:采用慢病毒(Lv)-Egr1-NIS-巨细胞病毒(CMV)-绿色荧光蛋白(GFP)及Lv-Egr1-GFP颗粒对BMSCs进行基因转染，制备BMSCs-Egr1-NIS及BMSCs-Egr1-GFP(对照)。通过摄碘实验验证在不同放射性浓度碘诱导下NIS基因的表达；用激光共聚焦显微镜观察BMSCs吞噬AuNPs的最佳温育时间、质量浓度；进行细胞毒性实验，分析AuNPs对BMSCs-Egr1-NIS细胞活性的影响；通过摄碘实验研究BMSCs-Egr1-NIS吞噬和未吞噬AuNPs对基因表达的影响；用细胞迁移实验验证BMSCs-Egr1-NIS在吞噬和未吞噬AuNPs的情况下对乳腺癌细胞MDA-MB-231的体外靶向性；探索不同质量浓度AuNPs对 131I杀伤乳腺癌细胞MDA-MB-231的辐射增敏作用。采用单因素方差分析及Dunnett t检验比较多组间数据差异。 结果:成功制备转染治疗基因Egr1-NIS的BMSCs(非稳转)，即BMSCs-Egr1-NIS。在辐射诱导下Egr1可以增加NIS的表达，BMSCs-Egr1-NIS较BMSCs-Egr1-GFP摄碘能力提高2.5～5倍或更高；BMSCs吞噬AuNPs的最佳温育条件是AuNPs 0.20 g/L温育24 h或者0.10 g/L温育48 h；AuNPs的细胞毒性非常低，对细胞的摄碘能力和体外靶向性没有影响；BMSCs-Egr1-NIS对乳腺癌细胞MDA-MB-231具有体外靶向性；AuNPs对 131I的辐射增敏实验示，各 131I杀伤组与无 131I的空白对照组活细胞染色吸光度( A) 570差异有统计学意义( F＝60.670， P<0.01)，AuNPs质量浓度为0.20和0.40 g/L的实验组 131I对MDA-MB-231细胞的杀伤作用高于0 g/L组， A570 nm值分别为0.87±0.05、0.41±0.07和1.39±0.11(均 P<0.01)。 结论:BMSCs可转染治疗基因Egr1-NIS并携带AuNPs，作为靶向乳腺癌的载体，在放射性碘的作用下增强NIS基因表达，同时AuNPs可作为 131I治疗的辐射增敏剂。

黄连素又名小檗碱，是一种苯基四异喹啉生物碱，可从黄连等多种植物中提取，也是黄连解毒汤、左金丸等多种中药方剂的主要成分。黄连素已被证实对微生物感染、炎症、心血管疾病、胃肠疾病、神经退行性疾病、抑郁症、代谢功能障碍等疾病具有多种有益的生物活性。黄连素可通过不同机制抑制食管癌、结肠腺癌、肝癌、骨肉瘤、乳腺癌等多种肿瘤细胞的增殖，促进凋亡；并被发现可以作用于多种儿童胚胎源性肿瘤细胞，如神经母细胞瘤、肝母细胞瘤、横纹肌肉瘤等。本文通过文献复习，阐述黄连素在儿童胚胎源性肿瘤中的药物作用，以期对后续黄连素用于胚胎源性肿瘤的研究有所帮助。

目的:探讨聚集诱导发光材料LD-Orange对骨肿瘤细胞的生物相容性，肿瘤细胞内吞能力，细胞器定位和对骨肿瘤细胞的光动力杀伤效果。方法:采用骨肿瘤细胞系143B作为模型细胞，应用激光共聚焦成像探究LD-Orange与143B细胞孵育后的荧光成像以评估其内吞性能，用商业脂滴染料尼罗红（Nile Red）和LD-Orange共染，应用激光共聚焦成像确定其亚细胞定位并评估其细胞器靶向性能，用DCFH-DA作为活性氧指示剂，探究LD-Orange的细胞内、外活性氧产生能力，用Calcein-AM/碘化丙锭（PI）细胞活性检测试剂盒和噻唑蓝（MTT）实验评估研究细胞杀伤和生物相容性，采用 t检验确定实验组和对照组之间的显著性。 结果:LD-Orange能够被骨肉瘤细胞系143B内吞，定位于细胞脂滴中，且其与商业脂滴染料具有95%的共染率，是一种靶向脂滴的染料。在30 mW/cm 2的低功率普通LED白光的照射下，LD-Orange表现出优异的活性氧产生能力。MTT细胞毒性实验表明，与对照组143B细胞存活率比较LD-Orange为15 μmol/L时，143B细胞存活率不受影响（ t＝0.474， P>0.05），差异无统计学意义。而实验组经过白光（30 mW/cm 2）照射后，143B细胞的杀伤率为98.27%（ t＝39.610， P<0.01）。 结论:LD-Orange具有良好的生物相容性，其能够被骨肉瘤细胞143B内吞，具有高的脂滴靶向性，具备较为优异的活性氧产生能力。LD-Orange对骨肿瘤细胞的脂滴良好的靶向成像能力和荧光成像引导下对骨肉瘤细胞的光动力治疗效果确认其为一种有效的脂滴细胞器靶向性光敏剂，为协助下的骨肉瘤外科手术等治疗手段的效果提升提供了较为有效的尝试。

目的:分析葡萄糖调节蛋白78（glucose regulatory protein 78，GRP78）对肝癌预后及肿瘤细胞增殖的影响。方法:采用实验研究方法和回顾性队列研究方法。采用肝癌组织芯片，体外培养Huh7、Hep3B肝癌细胞和LO2正常肝细胞，结合免疫组织化学染色、细胞转染、实时荧光定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）、Western blot检测、细胞增殖实验、细胞克隆形成实验及高通量转录组学检测分析肝癌细胞GRP78表达情况。Hep3B、Huh7细胞转染GRP78基因特异性shRNA慢病毒设为GRP78-shRNA组，转染阴性对照shRNA慢病毒设为对照-shRNA组。观察指标：（1）肝癌组织和癌旁组织GRP78表达及其与临床病理特征的关系。（2）肝癌病人预后及影响因素分析。（3）抑制GRP78表达对肝癌细胞增殖的影响。（4）抑制GRP78表达对肝癌细胞p53、p21、CDK2、CDK4、CDK6基因和蛋白表达的影响。（5）HA15对肝癌细胞增殖和p53、p21、CDK2、CDK4、CDK6基因和蛋白表达的影响。正态分布的计量资料以 x±s表示，组间比较采用 t检验或方差分析。重复测量数据采用重复测量方差分析。计数资料以绝对数表示，组间比较采用 χ2检验。单因素和多因素分析采用COX比例风险回归模型。采用Kaplan-Meier法计算生存时间并绘制生存曲线，采用Log-rank检验进行生存分析。 结果:（1）肝癌组织和癌旁组织GRP78表达及其与临床病理特征的关系：肝癌组织芯片免疫组织化学染色结果显示，GRP78在90例肝癌组织中低表达53例，高表达37例，GRP78在90例癌旁组织中低表达84例，高表达6例，肝癌组织与癌旁组织比较，差异有统计学意义（ P<0.05）。（2）肝癌病人预后及影响因素分析：90例病人均获得随访，随访时间为5～56个月，中位随访时间为49个月。53例GRP78低表达肝癌病人中位总体生存时间和中位疾病无进展生存时间分别为56个月和53个月，37例GRP78高表达肝癌病人上述指标分别为32个月和19个月，两者比较，差异均有统计学意义（ χ2=17.482，12.097， P<0.05）。单因素分析结果显示：丙氨酸氨基转移酶（ALT）、肿瘤病理学分级、GRP78表达是影响肝癌病人3年总体生存率和疾病无进展生存率的相关因素（风险比=2.168，2.161，3.784和2.254，0.893，3.493，95%可信区间为1.061~4.432，1.069~4.368，1.793~7.989和1.096~4.636，0.438~1.818，1.631~7.252， P<0.05）。多因素分析结果显示：ALT>40 U/L、肿瘤病理学分级为Ⅲ~Ⅳ级、GRP78高表达是影响肝癌病人3年总体生存率和疾病无进展生存率的独立危险因素（风险比=2.317，2.039，3.740和2.194，2.177，2.927，95%可信区间为1.150~4.671，1.201~3.462，2.116~6.612和1.408~4.593，1.093~4.336，1.492~5.742， P<0.05）。（3）抑制GRP78表达对肝癌细胞增殖的影响：①qRT-PCR检测结果显示，GRP78 mRNA在Huh7、Hep3B、LO2细胞中的相对表达量分别为3.06±0.33、4.42±0.60、1.00±0.02，Huh7、Hep3B细胞分别与LO2细胞比较，差异均有统计学意义（ t=6.19，5.42， P<0.05）。②Western blot检测结果显示：GRP78蛋白在Huh7、Hep3B、LO2细胞中的相对表达量分别为1.65±0.01、1.77±0.01、0.99±0.02，Huh7、Hep3B细胞分别与LO2细胞比较，差异均有统计学意义（ t=75.09，108.10， P<0.05）。③细胞增殖实验检测结果显示：Huh7细胞GRP78-shRNA组和对照-shRNA组24、48、72、96 h细胞增殖率分别为111.51%±0.35%、144.85%±0.68%、188.71%±3.62%、282.51%±5.25%和190.08%±0.58%、285.76%±2.69%、459.51%±4.29%、597.88%±12.25%，两组比较，差异有统计学意义（ F组间=1 360.000， F时间=668.500， F交互=197.600， P<0.05）。Hep3B细胞GRP78-shRNA组和对照-shRNA组上述指标分别为124.47%±0.25%、153.25%±1.25%、195.45%±3.19%、282.51%±10.76%和179.69%±0.33%、322.67%±2.46%、486.27%±5.82%、622.35%±12.58%，两组比较，差异有统计学意义（ F组间=1 222.000， F时间=706.200， F交互=179.600， P<0.05）。④细胞克隆形成实验结果显示：Huh7细胞GRP78-shRNA组和对照-shRNA组细胞数分别为（125±3）个和（435±17）个，两组比较，差异有统计学意义（ t=17.86， P<0.05）；Hep3B细胞GRP78-shRNA组和对照-shRNA组上述指标分别为（138±3）个和（388±7）个，两组比较，差异有统计学意义（ t=32.29， P<0.05）。（4）抑制GRP78表达对肝癌细胞p53、p21、CDK2、CDK4、CDK6基因和蛋白表达的影响：高通量转录组学检测结果显示，Huh7细胞GRP78-shRNA组相对于对照-shRNA组的p53、p21、CDK2、CDK4、CDK6表达率分别为19%、334%、398%、41%、49%。①qRT-PCR检测结果显示：Huh7细胞GRP78-shRNA组和对照-shRNA组中，GRP78、p53、p21、CDK2、CDK4、CDK6 mRNA的相对表达量分别为0.17±0.03，4.05±0.71，3.73±0.47，0.49±0.09，0.48±0.06，0.36±0.07和1.00±0.05，1.03±0.17，1.00±0.07，1.01±0.09，1.02±0.14，1.00±0.03，两组比较，差异均有统计学意义（ t=14.62，4.17，5.72，4.26，3.49，8.82， P<0.05）。Hep3B细胞GRP78-shRNA组和对照-shRNA组上述指标分别为0.11±0.01，4.28±0.43，4.19±0.22，0.44±0.01，0.25±0.03，0.68±0.04和1.01±0.09，1.02±0.15，1.00±0.06，1.01±0.09，1.01±0.08，1.15±0.02，两组比较，差异均有统计学意义（ t=10.19，7.14，13.79，6.37，9.42，9.61， P<0.05）。②Western Blot检测结果显示：Huh7细胞GRP78-shRNA组和对照-shRNA组中，GRP78、p53、p21、CDK2、CDK4、CDK6蛋白的相对表达量分别为0.45±0.01，1.98±0.05，2.31±0.12，0.75±0.03，0.69±0.04，0.82±0.03和1.01±0.05，1.03±0.01，1.00±0.02，1.00±0.01，1.01±0.02，1.00±0.03，两组比较，差异均有统计学意义（ t=11.07，14.56，11.30，11.29，10.55，11.37， P<0.05）。Hep3B细胞GRP78-shRNA组和对照-shRNA组上述指标分别为0.61±0.03，1.98±0.16，2.55±0.12，0.85±0.03，0.78±0.01，0.54±0.02和1.00±0.03，1.05±0.02，1.05±0.01，1.05±0.02，1.00±0.02，1.00±0.02，两组比较，差异均有统计学意义（ t=10.97，13.40，12.35，11.06，12.45，13.78， P<0.05）。（5）HA15 对肝癌细胞增殖和p53、p21、CDK2、CDK4、CDK6基因和蛋白表达的影响：HA15半抑制浓度（IC50）实验结果显示，Huh7、Hep3B细胞48 h IC50分别为9.98 μmol/L、13.70 μmol/L。①分别以9.98 μmol/L和13.70 μmol/L HA15作用Huh7、Hep3B细胞，细胞增殖实验检测结果显示：HA15-Huh7细胞和正常Huh7细胞24、48、72、96 h细胞增殖率分别为112.81%±0.27%、154.71%±1.45%、237.66%±16.77%、294.40%±14.92%和133.67%±0.49%、352.93%±2.31%、557.17%±4.89%、662.60%±13.31%，两者比较，差异有统计学意义（ F组间=766.800， F时间=518.200， F交互=133.300， P<0.05）；HA15-Hep3B细胞和正常Hep3B细胞上述指标分别为121.27%±2.32%、203.85%±3.18%、240.80%±3.02%、286.50%±7.10%和239.14%±1.02%、362.00%±5.44%、539.37%±10.80%、694.79%±17.13%，两者比较，差异有统计学意义（ F组间=594.300， F时间=317.900， F交互=78.600， P<0.05）。②qRT-PCR检测结果显示：HA15-Huh7细胞和正常Huh7细胞中，GRP78、p53、p21、CDK2、CDK4、CDK6 mRNA的相对表达量分别为0.27±0.05，3.64±0.28，4.13±0.41，0.51±0.07，0.39±0.03，0.17±0.02和1.02±0.14，1.00±0.03，1.00±0.05，1.01±0.08，1.01±0.09，1.03±0.17，两者比较，差异均有统计学意义（ t=5.00，9.25，7.63，4.73，6.82，5.01， P<0.05）；HA15-Hep3B细胞和正常Hep3B细胞上述指标分别为0.28±0.03，3.49±0.78，4.31±0.53，0.38±0.05，0.36±0.04，0.24±0.03和1.01±0.11，1.03±0.18，1.01±0.08，1.00±0.06，1.02±0.15，1.00±0.06，两者比较，差异均有统计学意义（ t=6.26，3.08，6.21，7.97，4.26，11.08， P<0.05）。③Western blot检测结果显示：HA15-Huh7细胞和正常Huh7细胞中，GRP78、p53、p21、CDK2、CDK4、CDK6蛋白的相对表达量分别为0.52±0.05，1.94±0.08，1.58±0.02，0.89±0.00，0.86±0.02，0.74±0.01和1.02±0.03，1.00±0.03，1.02±0.02，1.04±0.03，1.00±0.01，1.01±0.02，两者比较，差异均有统计学意义（ t=11.54，10.28，11.03，12.81，13.67，10.09， P<0.05）。HA15-Hep3B细胞和正常Hep3B细胞上述指标分别为0.57±0.02，1.67±0.04，1.41±0.04，0.82±0.03，0.70±0.02，0.74±0.01和1.03±0.01，0.98±0.03，1.00±0.03，1.03±0.03，1.01±0.01，1.04±0.01，两者比较，差异均有统计学意义（ t=10.81，11.54，12.26，13.62，14.23，10.17， P<0.05）。 结论:GRP78高表达是影响肝癌病人3年总体生存率和疾病无进展生存率的独立危险因素，抑制GRP78表达可抑制肝癌细胞增殖活性及影响p53、p21、CDK2、CDK4、CDK6基因和蛋白表达。