目的:探讨miRNAs介导的胶质瘤肿瘤微环境(TME)中巨噬细胞(Mφ)的恶性转化及其机制。方法:应用集落刺激因子诱导表达绿色荧光蛋白(GFP)的小鼠骨髓来源细胞(BMDCs)分化，获得Mφ-GFP。将胶质瘤干细胞(GSCs)与Mφ-GFP体外共培养，筛选具备无限增殖潜能的Mφ-GFP，即恶变巨噬细胞(t-Mφ)。通过miRNAs芯片分析获取t-Mφ与正常Mφ的miRNAs差异表达谱。分别比较目标miRNA在中国脑胶质瘤基因组图谱计划(CGGA)不同世界卫生组织(WHO)分级胶质瘤组织、来源于手术切除的10例胶质瘤组织与瘤旁组织、t-Mφ与正常Mφ中的表达水平，并分析目标miRNA表达水平与患者生存期的相关性。采用流式细胞术、实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、蛋白质免疫印迹法(WB)及荧光素酶活性实验探讨目标miRNA调控TME中Mφ恶变的分子机制。结果:通过建立双色荧光示踪共培养体系，成功获得具备无限增殖潜能的单克隆GFP +细胞，并表达Mφ标志物F4/80和CD11b。miRNAs芯片差异表达谱和qRT-PCR结果证实，与正常Mφ相比，miR-223-3p在t-Mφ中的表达显著升高。临床分析中，胶质瘤组织样本中miR-223-3p的表达水平显著高于配对的瘤旁组织( P<0.01)。对CGGA的分析结果发现，胶质母细胞瘤中的miR-223-3p表达水平显著高于低级别胶质瘤(WHO 2/3级)( P<0.001)。生存分析结果提示，低表达miR-223-3p胶质瘤患者的总体生存期显著优于高表达组( P<0.01)。下调miR-223-3p可促进t-Mφ的凋亡( P<0.01)。生物信息学分析显示，受体相互作用蛋白激酶(RIPK3)基因3′-UTR区存在miR-223-3p潜在的结合位点。荧光素酶活性实验结果显示，与共转染miR-223-3p模拟物对照和RIPK3-WT的细胞相比，共转染miR-223-3p模拟物和RIPK3-WT的t-Mφ细胞荧光强度显著降低( P<0.01)。qRT-PCR和WB实验结果证实，miR-223-3p下调的t-Mφ中RIPK3的表达水平显著高于对照组( P<0.01)，而miR-223-3p过表达的t-Mφ中RIPK3的表达水平显著低于对照组( P<0.05)。此外，miR-223-3p抑制剂/RIPK3抑制剂组t-Mφ的凋亡细胞比例显著低于miR-223-3p抑制剂组( P<0.01)。 结论:GSCs可诱导TME中Mφ的恶性转化，而miR-223-3p可靶向抑制t-Mφ中RIPK3的表达，进而抑制t-Mφ的细胞凋亡。

目的:探讨胶质瘤干细胞(GSCs)微环境中恶变巨噬细胞(tMΦ)的脂代谢特征及其相关分子调控机制，为靶向tMΦ的精准治疗提供实验依据。方法:实验采用巨噬细胞(MΦ)、tMΦ细胞株(包括tMΦ 1、tMΦ 2)，通过检测细胞内的三酰甘油(TG)和总胆固醇(TC)的水平分析tMΦ的脂代谢特征，采用蛋白质免疫印迹(Western blot)实验检测调控脂代谢的关键分子钙调蛋白(CaM)、载脂蛋白E(ApoE)、激素敏感性三酰甘油脂肪酶(HSL)、肝X受体(LXR)的表达水平。构建tMΦ的差异表达长链非编码RNA(lncRNA)表达谱，选择HOXC-AS3为研究对象。建立HOXC-AS3过表达和低表达的tMΦ细胞株。采用实时定量PCR(qRT-PCR)检测上调、沉默HOXC-AS3后tMΦ内CaM的表达水平。通过克隆形成实验观察HOXC-AS3沉默后tMΦ的集落形成能力，以Transwell实验检测其侵袭能力，通过建立在体移植瘤小鼠模型观察其致瘤能力。对与HOXC-AS3脂代谢相关的结合蛋白进行蛋白组学分析，应用RNA免疫共沉淀实验验证二者是否可形成复合体，进一步通过qRT-PCR、Western blot实验分析HOXC-AS3对其结合蛋白的调控作用。 结果:tMΦ中的TC、TG含量及CaM、ApoE、HSL、LXR蛋白的表达水平均高于正常MΦ(均 P<0.01)。LncRNA表达谱结果提示，与正常MΦ相比，HOXC-AS3在tMΦ 1、tMΦ 2中均呈高表达。克隆形成实验结果表明，沉默HOXC-AS3后的tMΦ 1、tMΦ 2(sh-HOXC-AS3组)的克隆数目明显少于空转染对照组(sh-NC组)(均 P<0.01)；Transwell实验结果表明，sh-HOXC-AS3组tMΦ 1、tMΦ 2的穿膜细胞数少于sh-NC组(均 P<0.01)；致瘤实验结果表明，sh-HOXC-AS3组小鼠的移植瘤体积均小于sh-NC组(均 P<0.01)。qRT-PCR结果提示，过表达HOXC-AS3可上调tMΦ中CaM的表达，而沉默HOXC-AS3可下调tMΦ中CaM的表达(均 P<0.01)。蛋白组学分析结果提示，与HOXC-AS3相关性最高的脂代谢相关蛋白为hnRNPA1。RNA免疫共沉淀结果证实，hnRNPA1与HOXC-AS3可形成复合体，沉默hnRNPA1后tMΦ内的CaM表达下调(均 P<0.01)，而沉默tMΦ内的HOXC-AS3后，hnRNPA1基因和蛋白水平的变化均无统计学意义(均 P>0.05)。 结论:tMΦ中的脂代谢合成水平高于正常MΦ，其机制可能为HOXC-AS3通过与hnRNPA1的结合，从而影响脂代谢分子CaM的表达，进而调控tMΦ的脂代谢重塑。靶向HOXC-AS3可抑制tMΦ在GSCs微环境的增殖和侵袭，HOXC-AS3可能为提高脑胶质瘤免疫治疗效果的潜在靶点。

肝巨噬细胞是肝脏中重要的免疫细胞,其通过极化为M1型和M2型,分别表达"促炎因子"和"抑炎因子",进而发挥调控炎症损伤反应的作用.肝祖细胞恶变是肝癌癌前病变恶性进展的核心机制,其发生的关键因素是炎症损伤微环境的持续刺激,与M1/M2巨噬细胞极化密切相关.本综述主要围绕"巨噬细胞极化-慢性炎症-肝祖细胞恶变"关系进行探讨,为肝癌癌前病变的预防和治疗提供重要的理论依据.

胚胎来源巨噬细胞(embryonicstem cell-derived macrophages,EDMs)是一种来源于胚胎祖细胞的巨噬细胞亚群,在胚胎时期就进入特定的组织.在正常肝脏中,EDMs通过自我更新维持数量,在稳态期间很少需要骨髓单核细胞分化补充.肝脏发生炎症反应时,肝组织中的EDMs由M1型转为M2型,并募集骨髓单核细胞,平衡Ⅰ型与Ⅱ型炎症反应,进而发挥免疫监视、损伤修复、维持稳态的功能,有效避免肝脏慢性炎症的发生和恶变.其位于肝血窦内,具有吞噬循环肿瘤细胞的功能.而在肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的后期发展阶段,EDMs和骨髓来源单核细胞系相互作用,参与构成肿瘤免疫抑制的微环境.本文就巨噬细胞的起源及EDMs在肝脏中维持稳态、介导炎症等方面的作用作一综述.

实体瘤会重构宿主微环境.我们观察双色荧光示踪共培养模型中的宿主巨噬细胞癌变,而且清楚的追踪到恶性转化的具体过程,现报道如下.一、材料与方法1.材料:人胶质瘤干/祖细胞株SU3和表达绿色荧光裸鼠的巨噬细胞,流式细胞仪(BECKMAN),活细胞工作站(Olympus公司),大鼠抗小鼠CD68单克隆抗体(Abcam),细胞计数试剂盒(Abbikine).2.观察细胞融合和分裂:表达红色荧光的SU3(SU3-RFP)细胞与绿色荧光裸小鼠腹腔冲洗细胞按1:8左右的比例共培养.在活细胞工作站中捕捉细胞间相互融合和融合细胞分裂过程.

目的 肠癌是消化道常见恶性肿瘤之一,越来越多的流行病学研究及动物实验表明高脂饮食(high fat diet,HFD)是肠癌发生的重要危险因素之一.本研究探讨HFD促进肠腺瘤恶变可能的分子机制.方法 4周龄Apcmin/+小鼠分为HFD组和对照组(常规饮食).12周后处死,观察各组小鼠肠道腺瘤数目、大小及分布.采用HE染色评价腺瘤病理类型及癌变情况,Ki-67免疫组织化学染色评价肿瘤细胞增殖水平,脱氧核苷酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记法评价细胞凋亡.Real-time PCR和免疫组织化学染色评价单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant pro-tein-1,MCP-1)及其受体CC趋化因子受体2(CC chemokine receptor 2,CCR2)的mRNA和蛋白表达.免疫荧光双染法检测肠道肿瘤组织中巨噬细胞表面分子F4/80、M1型及M2型肿瘤相关巨噬细胞(tumor associated macrophages,TAMs)表面分子的表达.结果 HFD组肠道腺瘤总数较对照组明显增加(26.60±1.03 vs 10.20±0.92,t=11.90,P＜0.001),HFD组60％远段小肠和结肠腺瘤发生粘膜内癌,而对照组腺瘤未见癌变.HFD可增加肠道肿瘤Ki-67阳性细胞百分比[(70.80±7.57)％vs (30.80±5.77)％,t=4.20,P＜0.01],降低肿瘤细胞凋亡百分比[(13.00±1.14)％vs(42.60士1.50)％,t=15.69,P＜0.001].HFD组肠道肿瘤组织MCP-1和CCR2 mRNA的表达水平增高,MCP-1及CCR2阳性细胞百分比较对照组明显增加[(73.80±7.02)％vs (36.80±4.68)％,t=4.38,P＜0.01;(63.20±2.15)％vs (26.80±2.22)％,t=11.76,P＜0.001].免疫荧光双染提示HFD组肠道巨噬细胞表面分子F4/80和M2型TAMs表面分子MR阳性表达明显增加,M1型TAMs表面分子iNOS阳性表达明显减少.结论 高脂饮食可活化MCP-1/CCR2信号通路促进TAMs募集及M2型TAMs极化进而促进Apcmin/+小鼠肠道腺瘤发展成为肠癌.

目的 探讨胶质瘤干细胞(GSC)诱导TME中多种间质细胞的恶性转化及其相关分子特征.方法 将红色荧光蛋白(RFP)基因稳定转染人SU3-RFP的GSC与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)转基因裸小鼠间质细胞体外共培养,将SU3-RFP细胞接种于EFGP-Balb/c裸小鼠不同部位,从体外培养基与体内肿瘤组织中分别单克隆具永生化特征的EGFP+细胞,经染色体分析和致瘤试验证实其具有肿瘤细胞特征,再以RT-PCR、流式细胞术和细胞免疫化学染色等分子手段检测相关分子表型.结果 (1)体外培养共得到2株EGFP+细胞系,体内致瘤实验共得到5株EGFP+细胞系,所克隆的7株EGFP+细胞具自我更新、呈异倍体染色体核型和100％致瘤率;(2)根据细胞标志物表达状况鉴定其分别起源于巨噬细胞(tMΦ1和tMφ2)、树突状细胞(tDC1和tDC2)、成纤维细胞(tFB)、少突胶质细胞(tOG)和骨髓间充质干细胞(tBMSC);(3)根据七株细胞共同表达Sca-1(髓源性干细胞标志物)和c-myc,分别表达Sox2、Nanog等诱导性多能干细胞(iPS)标志物,确定这些恶性转化细胞不同程度上兼具髓源干细胞和iPS细胞的分子特征.结论 (1)TME中肿瘤间质细胞自身恶变与GSC对TME组织重构相关,与其寄生地组织类型关系不大;(2)源于GSC的肿瘤细胞和GSC TME中恶变的间质细胞,是GSC重构的肿瘤组织内两大类不同起源的肿瘤细胞,由此构成广义肿瘤异质性概念的细胞学基础,后者有潜力作为靶向诊疗的新靶标.

子宫内膜异位症(endometriosis,EMs)是一种常见的妇科良性疾病,在育龄妇女发病率为10％～15％,近年来有明显升高的趋势.EMs虽为良性疾病,却具有浸润、转移等恶性生长行为,且存在一定的恶变率,导致EMs患者患上皮性卵巢癌的风险显著增高.近年来围绕EMs盆腔微环境的研究发现,铁过载在EMs的发生、发展中起重要作用.经血逆流或异位病灶溶血产生过量的铁引起铁过载,不仅破坏异位囊肿或腹腔的氧化还原平衡导致氧化应激损伤,而且影响巨噬细胞清除功能,还激活核因子 κB(NF-κB)信号通路介导炎症反应.此外,活性铁在与雌激素不断平衡调节过程中也导致了EMs向恶性转变.现就EMs发病时铁过载的形成过程及通过不同方式参与EMs的病程进展进行综述.

肝癌是临床常见消化道恶性肿瘤,其发生呈现多阶段性:肝炎-肝硬化-肝癌癌前病变-肝癌.其中肝癌癌前病变恶变成为肝癌的机制尚不完全明确,可能受Kupper细胞极化方向的影响.Kupffer细胞是肝脏中特殊的单核巨噬细胞,可在不同的微环境中分化出不同的表型即M1型和M2型,表现出不同的功能,在肝癌中发挥抑癌或促癌的作用.研究发现多种miRNA、LncRNA可通过靶向干预Kupffer极化相关蛋白进而调控其极化方向,从而影响肝癌癌前病变的发生、发展及恶变,降低肝癌的发生率.本文主要阐述上述研究的前沿进展,为肝癌的防治提供参考.

宫颈癌是女性最常见的恶性肿瘤,死亡率较高,因此人们越来越多地努力研究新的敏感因子,为宫颈癌的防治提供新的敏感检测指标和治疗靶点.蛋白激酶B/磷脂酰肌醇-3激酶(protein kinase B/phosphatidylinositol 3-kinase,Akt/PI3K)信号通路是许多生长因子受体下游的主要信号途径,也是人类肿瘤中最活跃的信号途径之一.如果该信号通路中的关键调控因子发生突变,会导致其信号异常活化,从而可能诱导恶变的发生发展.研究表明,各种因素引起的Akt/PI3K通路中的巨噬细胞移动抑制因子(macrophage migration inhibition factor,MIF)和核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)的过度表达均与宫颈病变密切相关.故探讨Akt/PI3K通路中MIF和NF-κB与宫颈病变的关系,可能为研究宫颈癌癌前病变的诊断、术后随诊及靶向治疗的潜在靶点提供帮助.本文就Akt/PI3K通路中MIF和NF-κB与宫颈病变关系的研究进展做一综述.