目的:评价大鼠神经病理性痛时外周神经免疫球蛋白重链结合蛋白(BIP)与电压门控性钠离子通道亚型1.8(Na v1.8)的关系。 方法:SPF级健康雄性SD大鼠44只，体重210～260 g。采用坐骨神经慢性缩窄损伤(CCI)法制备神经病理性痛模型。实验Ⅰ　采用随机数字表法将20只大鼠分为2组( n＝10)：假手术组(Sham组)和CCI组。实验Ⅱ　采用随机数字表法将24只大鼠分为3组( n＝8)：假手术组(Sham组)、CCI＋生理盐水组(CCI＋NS组)和CCI＋BIP抑制剂HA15组(CCI＋H组)。于术后第4天开始，CCI＋NS组腹腔注射0.9%生理盐水1 ml，CCI＋H组腹腔注射HA15 0.7 mg/kg，连续3 d(1次/d)。实验Ⅰ和Ⅱ均于术前1 d、术后1、3、d及7 d(T 0-T 4)时测定机械缩足反应阈(MWT)和热缩足潜伏期(TWL)，术后第7天行为学测试完成后采用Western blot法检测背根神经节和坐骨神经BIP与Na v1.8的表达。实验Ⅰ于术后第7天行为学测试结束后采用免疫荧光检测背根神经节和坐骨神经BIP和Na v1.8的表达及共定位情况，采用免疫共沉淀实验评价BIP和Na v1.8相互作用情况。 结果:实验Ⅰ　与Sham组比较，CCI组T 1-T 4时MWT降低，TWL缩短，背根神经节Na v1.8表达下调，BIP表达上调，坐骨神经Na v1.8和BIP表达上调( P<0.05)，CCI组背根神经节和坐骨神经BIP与Na v1.8存在明显共定位，背根神经节BIP可以免疫共沉淀出Na v1.8，Na v1.8也能免疫共沉淀出BIP。实验Ⅱ　与Sham组比较，CCI＋NS组T 1-T 4时MWT降低，TWL缩短，背根神经节Na v1.8表达下调，BIP表达上调，坐骨神经Na v1.8和BIP表达上调( P<0.05)；与CCI＋NS组比较，CCI＋H组T 3，4时MWT升高，TWL延长，背根神经节和坐骨神经Na v1.8和BIP表达下调( P<0.05)。 结论:BIP可介导外周神经Na v1.8的再分布，参与大鼠神经病理性痛的病理生理机制。

目的:评价背根神经节核苷酸寡聚化域样受体2(NLRP2)在大鼠神经病理性痛中的作用。方法:取鞘内置管成功的雄性SD大鼠32只，体重200～250 g，2～3月龄，采用随机数字表法分为4组( n＝8)：假手术组(S组)、神经病理性痛组(NP组)、神经病理性痛＋NLRP2-siRNA组(NP＋siRNA组)和神经病理性痛＋NLRP2-scrRNA组(NP＋scrRNA组)。S组仅暴露右侧坐骨神经不结扎；NP组、NP＋siRNA组和NP＋scrRNA组采用慢性坐骨神经缩窄性损伤术制备大鼠神经病理性痛模型；NP＋siRNA组和NP＋scrRNA组于术前3 d时分别鞘内注射NLRP2-siRNA和NLRP2-scrRNA。于术前1 d(T 0)、术后1、3、7和10 d(T 1-4)时测定机械缩足反应阈(MWT)，最后1次测定痛阈后处死大鼠，取术侧L 4，5节段背根神经节，采用Western blot法检测NLRP2和caspase-1表达，采用RT-PCR法检测NLRP2 mRNA表达，采用ELISA法测定IL-1β含量。 结果:与T 0时比较，NP组、NP＋siRNA组和NP＋scrRNA组T 2-4时MWT降低( P<0.05)；与S组比较，NP组T 2-4时MWT降低，背根神经节NLRP2及其mRNA表达和caspase-1表达上调，IL-1β含量升高( P<0.05)；与NP组比较，NP＋siRNA组T 2-4时MWT升高，背根神经节NLRP2及其mRNA表达和caspase-1表达下调，IL-1β含量减少( P<0.05)，NP＋scrRNA组各时点上述指标差异无统计学意义( P>0.05)。 结论:背根神经节NLRP2参与了大鼠神经病理性痛发生的过程，机制与形成NLRP2炎症小体诱发外周神经炎症有关。

目的:评价鞘内注射特异性真核翻译起始因子2α (eIF2α)去磷酸化抑制剂(Salubrinal)对大鼠神经病理性痛的影响。方法:SPF级健康雄性SD大鼠45只，8～10周龄，体重220～280 g。采用随机数字表法分为5组( n＝9)：假手术组(Sham组)、神经病理性痛组(NP组)和不同剂量Salubrinal组(S 1组、S 2组、S 3组)。采用坐骨神经慢性缩窄损伤(CCI)法制备神经病理性痛模型。于CCI术后第4天行为学测试结束后鞘内注射37.5 μmol Salubrinal 10 μl(S 1组)、15 μl(S 2组)、20 μl(S 3组)，Sham组和NP注射5% DMSO＋生理盐水20 μl，连续给药10 d，1次/d。于CCI术前1 d、术后1、3、5、7、10和14 d(鞘内给药后1 h)时测定术侧足机械缩足反应阈(MWT)和热缩足潜伏期(TWL)。于CCI术后第14天行为学测试结束后，处死大鼠，取背根神经节组织，采用Western blot法检测BIP、eIF2α、p-eIF2α表达水平，免疫荧光法检测BIP、p-eIF2α表达水平，HE染色观察神经元形态变化。 结果:与Sham组比较，NP组CCI术后各时点MWT降低，TWL缩短，BIP和p-eIF2α表达上调，p-eIF2α/eIF2α比值升高( P<0.05)。与NP组比较，S 1组p-eIF2α表达下调，p-eIF2α/eIF2α比值降低( P<0.05)，各时点MWT和TWL差异无统计学意义( P>0.05)，S 2组和S 3组CCI术后5～14 d MWT升高，TWL延长，BIP和p-eIF2α表达下调，p-eIF2α/eIF2α比值降低( P<0.05)，DRG神经元形态结构损伤均有不同程度的改善。 结论:鞘内注射Salubrinal可能通过抑制背根神经节神经元内质网应激，减轻大鼠神经病理性痛。

目的 设计并合成一系列新型镇痛小分子,初步考察目标化合物对大鼠慢性坐骨神经缩窄(CCI)的镇痛效果.方法 基于σ1和μ受体双靶点镇痛活性化合物Ⅶ的结构改造,以不同基团取代的苯胺为原料,通过Wittig-Homer、氢化还原、羰基还原、亲核取代等反应得到目标产物Ⅰ.建立CCI疼痛模型,分别于给药前、后各时间点测量并比较各组大鼠的机械性痛阈,初步分析不同结构对镇痛效果的影响.结果与结论 合成了 3个目标化合物Ⅰ,并用NMR、ESI-MS确证了结构.与给药前比较,空白组大鼠的机械性痛阈无显著影响,而实验组及对照组大鼠的机械性痛阈均有提升;与对照组比较,各实验组大鼠的镇痛效果无明显差异;与空白组比较,差异有统计学意义.

目的 评价褪黑素对神经病理性疼痛夜间加重的影响,并通过特异性沉默信息调节因子 1(SIRT1)-脑和肌肉ARNT样蛋白 1(BMAL1)通路探讨其机制.方法 96 只SPF级雄性C57/B6 小鼠,随机分为3 组:假手术(S)组、神经病理性疼痛模型(NP)组和NP模型+褪黑素治疗(NP+M)组;术前试验小鼠置于指定光照模式环境中;采用12h光照与12h黑暗交替环境,持续至少两周,将自然时间转换为授时时间(ZT),光照起点定为ZT0;S组小鼠仅分离坐骨神经,NP组和NP+M组采用坐骨神经慢性缩窄性损伤制备小鼠NP模型,NP+M组术后注射10 mg/kg褪黑素;Western blot法检测术后14d各时点脊髓的SIRT1、BMAL1 和谷胱甘肽过氧化酶1(Gpx1)表达量的变化;术后通过免疫荧光技术对脊髓背角SIRT1 和脊髓神经元标志物神经元特异性核蛋白(NeuN)、小胶质细胞激活标记物离子钙结合适配器分子 1(iba-1)、星形胶质细胞标记物胶质纤维酸性蛋白(GFAP)进行共染色,并检测各时点iba-1 以确定小胶质细胞激活状态.结果 与NP组ZT10 时点相比,NP组小鼠术后 14 d ZT22时点SIRT1、BMAL1 和Gpx1 降低(P<0.05);与NP组ZT14时点相比,NP+M组ZT14 时点SIRT1 与 BMAL1 升高(P<0.05),而Gpx1 于ZT18 时点升高(P<0.05).SIRT1 在脊髓背角与小胶质细胞共表达;与ZT10 时点相比,NP组小鼠术后14 d ZT22 时点小胶质细胞表达降低(P<0.05);与ZT10时点相比,NP+M组小鼠术后14 d ZT22 时点小胶质细胞表达差异无统计学意义.结论 褪黑素可以减轻神经病理性疼痛夜间加重,其机制可能与激活小胶质细胞 SIRT1-BMAL1 通路蛋白表达有关.

目的 本研究拟通过建立坐骨神经慢性缩窄损伤(chronic constriction injury,CCI)小鼠模型,分析和探讨白芷在神经病理性疼痛中的镇痛效果及其对MrgprD-TRPA1信号通路的调控作用.方法 无菌外科手术结扎缠绕30只小鼠坐骨神经制备CCI小鼠模型;VonFrey实验检测白芷对小鼠机械刺激疼痛行为学变化,热辐射实验评估白芷对小鼠热痛觉过敏情况;Western Blot、免疫荧光、RT-PCR检测白芷对小鼠MrgprD和TRPA1蛋白表达水平、DRG阳性神经元数量、MrgprD和TRPA1 mRNA水平的影响;通过对HEK293细胞分别单转染和共转染MrgprD、TRPA1质粒后的钙成像实验,分析荧光信号强度差异性.结果 共成功制备了 25只CCI小鼠模型,造模率达到83.33％(25/30);白芷灌胃的CCI小鼠机械性阈值和缩足潜伏时间均显著大于对照组(P＜0.05);白芷灌胃的CCI小鼠中MrgprD和TRPA1蛋白表达水平均显著低于对照组(P＜0.05);白芷灌胃的CCI小鼠DRG中MrgprD和TRPA1阳性神经元的数量显著低于对照组(P＜0.05);白芷灌胃的CCI小鼠中MrgprD和TRPA1 mRNA相对表达水平均显著低于对照组(P＜0.05);共转染MrgprD和TRPA1质粒的HEK293细胞中荧光强度显著高于单转染和对照组(P＜0.05).结论 本研究通过探究白芷在CCI小鼠模型中镇痛的效果,证明了 MrgprD-TRPA1是神经病理性疼痛的重要作用靶点,揭示了白芷可以通过调控MrgprD-TRPA1信号转导通路来抑制神经病理性疼痛程度,这为后续开发新型临床镇痛药物及镇痛机制的深入研究奠定了基础.

目的 观察阿霉素(DOX)对坐骨神经慢性缩窄性损伤(CCI)模型大鼠的镇痛作用,并从形态学及组织凋亡蛋白的角度对其机制进行分析.方法 将SD大鼠随机分为4组:假手术组(Sham)、CCI模型组(Model)、假手术+阿霉素5 mg·kg-1组(Sham+DOX)、CCI模型+阿霉素5 mg·kg-1组(Model+DOX).造模成功后,各组采用尾静脉注射的方式给药,Sham组和Model组给予等量生理盐水,检测各组大鼠机械痛阈值和热痛阈值.在行为学检测结束后,即手术后d 15取大鼠右侧L4-5 DRG,观察DRG细胞形态、超微结构及DOX的分布情况,采用Western blot法测定DRG组织中Bax、Bcl-2、PKCɑ、PKCδ及PKCε的蛋白表达.结果 静脉注射DOX可在DRG组织检测到其自发荧光表达.与Sham组相比,Sham+DOX组痛阈值在整个观察期未见差别,而Model组在术后d 7痛阈值明显降低.与Model组相比,Model+DOX组的痛阈值在给药后明显回升,并表现出DRG细胞明显损伤,Bax/Bcl-2升高以及PKCδ、PKCε的蛋白表达量降低等现象.结论 DOX静脉注射可以到达并蓄积于DRG组织,明显减轻CCI大鼠的疼痛反应,这一作用与其降低PKCδ和PKCε的蛋白表达,诱导DRG的凋亡有关.

目的 探讨蛋白精氨酸甲基化酶(PRMT)在外周神经损伤背根神经节(DRG)转录表达与疼痛行为关系.方法 构建C57BL6小鼠双侧L4脊神经结扎(SNL)外周神经损伤神经病理性疼痛模型,假手术Sham组作对照,收集SNL或Sham术后第7天DRG组织,行RNA-Seq测序全面分析PRMT家族9个基因在转录表达规律和组织分布情况,筛选出差异表达基因;建立小鼠单侧L4 SNL模型(Sham组作对照),测量各组在SNL术前(0 d)、术后3、7和14 d不同时点机械缩爪反应频率(PWF)和热缩爪反应潜伏期(PWL),收集两组上述不同时点患侧和对侧DRG行RT-qPCR验证差异基因表达情况;建立坐骨神经结扎慢性缩窄损伤(CCI)模型,假手术组Sham作对照,疼痛行为检测方法和时间点同SNL模型,RT-qPCR进一步验证CCI术后上述时点差异基因表达情况.结果(1)RNA-Seq测序结果表明,9个PRMT基因均表达与DRG内,其基础表达量最多的是Prmt2和Prmt3,最少的是Prmt6.与Sham组比较,SNL神经损伤上调DRG Carm1转录表达(增加1.7倍),抑制Prmt5、Prmt8和Prmt9这3个基因转录,其中Prmt8抑制最明显(下降16.3倍).(2)RT-qPCR验证表明,与Sham组较,SNL外周神经损伤增加术后3、7和14 d PWF,降低PWL,上调DRG Carm1转录表达,而仅抑制Prmt8转录表达,Prmt1、Prmt5和Prmt9无明显改变.(3)同样的,CCI坐骨神经损伤亦增加CCI术后3、7和14 d PWF,降低PWL,上调DRG Carm1,抑制Prmt8在上述时点的表达.结论 外周神经损伤致机械痛觉高敏和热痛觉过敏的同时,上调DRG Carm1转录表达,抑制Prmt8基因转录.

目的 评价c-Jun氨基末端激酶(JNK)在神经病理性痛大鼠中脑导水管周围灰质(PAG)星形胶质细胞活化中的作用.方法 清洁级雄性SD大鼠72只,9周龄,体重160～ 200 g,采用随机数字表法分为4组:正常对照组(C组,n=8)、神经病理性痛组(NP组,n=40)、二甲基亚砜溶剂对照组(DS组,n=12)和JNK抑制剂SP600125组(SP组,n=12).采用慢性坐骨神经缩窄性损伤(CC1)法制备大鼠神经病理性痛模型.于CCI后14d时,SP组PAG内注射10 nmol JNK抑制剂SP600125 0.5μl,DS组注射10％二甲基亚砜0.5 μl.C组取8只大鼠,NP组于CCI前、CCI后3、7、14、21 d时取8只大鼠,DS组和SP组取8只大鼠分别于CCI前、CCI后14 d给药前、给药后30、45、60、75和90 min时测定机械痛阈.C组机械痛阈测定结束后处死,取PAG组织,采用Western blot法测定PAG区磷酸化JNK(p-JNK)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达;NP组于各时点痛阈测定结束后处死,测定PAG区p-JNK表达;DS组和SP组取4只大鼠于给药后45 min时机械痛阈测定结束后处死,测定PAG区GFAP的表达.结果 与C组比较,NP组CCI后各时点机械痛阈降低,CCI后7～21d时p-JNK表达上调(P＜0.01);与DS组比较,SP组给药后30 min时机械痛阈升高,给药后45 min时GFAP表达下调(P＜0.01);与给药前比较,SP组给药后30～75 min时机械痛阈升高(P＜0.01).结论 神经病理性痛大鼠PAG星形胶质细胞活化机制与JNK激活有关.

目的:探讨槐果碱缓解坐骨神经慢性缩窄性损伤 (Chronic constriction injury, CCI) 致神经病理性疼痛的抗氧化应激和抗凋亡机制.方法:将BALB/c小鼠随机分为:假手术组 (sham) 、神经病理性疼痛模型组 (CCI) 、普瑞巴林阳性药对照组 (CCI+Pre10 mg/kg) 及槐果碱组 (CCI+SC 40、20、10 mg/kg), 共6组, 每组10只小鼠.采用CCI法建立小鼠神经病理性疼痛动物模型, 于术前d1、术后d7 (给药前d1) 及给药后1、3、5、7 d测定小鼠热刺激缩足反应潜伏期及冷缩足反射次数;采用生化法测定槐果碱对CCI小鼠脊髓组织SOD、GSH-Px、T-AOC及MDA水平的影响;采用RT-PCR和Western blot法检测槐果碱对CCI小鼠脊髓组织Caspase-3、Bax和Bcl-2 mRNA及蛋白表达的影响.结果:与假手术组比较, CCI模型组小鼠术后PWTL显著缩短, CWT明显增多;小鼠脊髓组织SOD、GSH-Px、T-AOC水平降低、MDA含量增多、Caspase-3、Bax mRNA及蛋白表达上调、Bcl-2 mRNA及蛋白表达下调;与CCI模型组比较, 槐果碱40 mg/kg组小鼠PWTL延长, CWT减少;小鼠脊髓组织SOD、GSH-Px、T-AOC水平升高、MDA含量减少、Caspase-3、Bax mRNA及蛋白表达下调、Bcl-2 mRNA及蛋白表达上调.结论:槐果碱对CCI致小鼠神经病理性疼痛具有较好的缓解作用, 其机制可能与其抗过氧化应激和抗神经元凋亡有关.