目的:评价瑞芬太尼对肠缺血再灌注大鼠肠上皮细胞凋亡时丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的影响。方法:清洁级健康成年雄性SD大鼠36只，体重200～250 g，2月龄，采用随机数字表法分为3组( n＝12)：假手术组(Sham组)、肠缺血再灌注组(I/R组)和瑞芬太尼组(R组)。采用夹闭大鼠肠系膜上动脉1 h恢复灌注的方法制备大鼠肠缺血再灌注损伤模型。R组缺血前30 min静脉输注瑞芬太尼0.2 μg·kg -1·min -1 5 min，静脉输注生理盐水5 min，重复循环3次。于再灌注2 h时采集大鼠右心室血样测定血清二胺氧化酶(DAO)浓度，随后处死大鼠取小肠组织，观察病理学结果并进行Chiu评分；TUNEL法计数凋亡肠上皮细胞，采用Western blot法检测肠组织磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK)、磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)、p-p38 MAPK的表达，活化型半胱氨酸蛋白酶(cleaved caspase-3)和核蛋白NF-κB p65的表达，计算p-ERK/ERK比值、p-JNK/JNK比值和p-p38 MAPK/p38 MAPK比值。 结果:与Sham组比较，I/R组大鼠肠黏膜Chiu评分、血清DAO浓度、肠上皮细胞凋亡率、p-ERK/ERK、p-JNK/JNK和p-p38 MAPK/p38 MAPK比值、cleaved caspase-3、NF-κB p65表达水平升高、R组大鼠肠黏膜Chiu评分升高( P<0.05)，血清DAO、肠上皮细胞凋亡率、p-ERK/ERK、p-JNK/JNK、p-p38 MAPK/p38 MAPK比值、cleaved caspase-3和NF-κB p65表达水平差异无统计学意义( P>0.05)；与I/R组比较，R组大鼠肠黏膜Chiu评分、肠上皮细胞凋亡率、血清DAO浓度下降，p-ERK/ERK比值、cleaved caspase-3、NF-κB p65表达水平降低( P<0.05)。 结论:瑞芬太尼抑制肠缺血再灌注大鼠肠上皮细胞凋亡的机制与促进ERK活化有关。

目的:评价IL-1β/c-Jun氨基末端激酶(JNK)通路在七氟烷诱发大鼠离体海马神经元程序性坏死中的作用。方法:原代培养SD大鼠胎鼠的海马神经元，分别接种于96孔板(1×10 4个/ml，200 μl/孔)和6孔板(1×10 6个/ml，2 ml/孔)中，培养7 d时，采用随机数字表法分为3组( n＝20)：对照组(C组)、七氟烷组(S组)和IL-1受体拮抗剂组(I组)。C组常规培养，I组加入IL-1受体拮抗剂IL-1ra 1 μg/μl孵育30 min后，将S组和I组置于含2%七氟烷的培养箱中，37 ℃培养5 h。收集神经元，倒置显微镜下观察神经元形态，采用流式细胞术检测神经元程序性坏死率，MTT法检测神经元活力，采用Western blot法检测IL-1β、IL-1受体Ⅰ型(IL-1RI)、IL-1受体辅助蛋白(IL-1RAcP)、磷酸化JNK(p-JNK)、受体相互作用蛋白1(RIP1)、RIP3和磷酸化人混合系列蛋白激酶样结构域(p-MLKL)的表达水平。 结果:与C组比较，S组神经元活力降低，程序性坏死率升高，IL-1β、IL-1RI、IL-1RAcP、p-JNK、RIP1、RIP3和p-MLKL表达上调( P<0.05)；与S组比较，I组神经元活力升高，程序性坏死率降低，IL-1β、IL-1RI、IL-1RAcP、p-JNK、RIP1、RIP3和p-MLKL表达下调( P<0.05)。C组神经元形态未见明显异常，S组神经元胞体皱缩，突起断裂及突起间网络稀疏；I组神经元胞体圆润，形态接近正常。 结论:七氟烷诱发大鼠离体海马神经元程序性坏死的机制与激活IL-1β/JNK通路有关。

目的:评价治疗性低温减轻大鼠脑缺血再灌注损伤(CIRI)时谷胱甘肽S转移酶μ1(GSTM1)与细胞凋亡信号调节激酶1(ASK1)-c-Jun氨基末端激酶(JNK)/p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路的关系。方法:清洁级健康雄性SD大鼠100只，8周龄，体质量260～280 g，采用随机数字表法分为5组( n＝20)：假手术组(S组)、脑缺血再灌注组(I/R组)、治疗性低温组(H组)、GSTM1抑制剂＋治疗性低温组(IH组)和GSTM1抑制剂＋ASK1抑制剂＋治疗性低温组(IAH组)。采用线栓法建立CIRI模型，阻断大鼠左侧大脑中动脉2 h后拔出线栓恢复血流灌注，手术期间维持大鼠脑温36～37 ℃。H组于再灌注即刻用75%酒精擦拭大鼠头部及颈部，维持脑温32～33 ℃ 3 h，其余同I/R组；IH组分别于造模前24和1 h时腹腔注射GSTM1抑制剂依他尼酸8.6 mg/kg，其余同H组；IAH组于造模前4 d开始口服ASK1抑制剂Selonsertib 10 mg/kg，1次/d，连续4 d，其余同IH组。于再灌注24 h行改良神经功能缺损评分(mNSS)，随后处死大鼠后取脑，采用TTC染色法观察脑梗死情况并计算梗死体积百分比，Western blot法检测GSTM1、ASK1、磷酸化ASK1(p-ASK1)、JNK、磷酸化JNK(p-JNK)、p-38 MAPK、磷酸化p-38 MAPK(p-p38 MAPK)的表达水平；HE染色观察神经细胞形态改变，TUNEL法检测神经细胞凋亡率。 结果:与S组比较，I/R组mNSS、神经细胞凋亡率、脑梗死体积百分比、p-ASK1/ASK1比值、p-JNK/JNK比值及p-p38 MAPK/p38MAPK比值升高，GSTM1表达下调( P<0.05)；与I/R组和IH组比较，H组mNSS、神经细胞凋亡率、脑梗死体积百分比、p-ASK1/ASK1比值、p-JNK/JNK比值及p-p38 MAPK/p38 MAPK比值降低，GSTM1表达上调( P<0.05)，神经细胞损伤减轻；与IH组比较，IAH组mNSS、神经细胞凋亡率、脑梗死体积百分比、p-ASK1/ASK1比值、p-JNK/JNK比值及p-p38 MAPK/p38 MAPK比值降低( P<0.05)，GSTM1表达差异无统计学意义( P>0.05)，神经细胞损伤减轻。 结论:治疗性低温减轻大鼠CIRI的机制与上调GSTM1表达，抑制ASK1-JNK-p38 MAPK信号通路激活有关。

目的:评价卵巢肿瘤结构域蛋白酶1(OTUD1)在脓毒症小鼠急性肺损伤中的作用及其与转化生长因子β活化激酶1 (TAK1)-丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的关系。方法:雄性野生型和OTUD1基因敲除的C57BL/6N小鼠各20只，6~8周龄，体质量20~25 g。采用随机数字表法分别分为野生型假手术组(WT-Sham组)、野生型脓毒症组(WT-SEP组)、OTUD1基因敲除型假手术组(KO-Sham组)和OTUD1基因敲除SEP组(KO-SEP组)，每组10只。采用盲肠结扎穿孔法制备脓毒症小鼠急性肺损伤模型。于术后24 h时处死小鼠，采集腹主动脉血样，取肺组织。采用血气分析仪行血气分析，计算氧合指数(OI)，光镜下观察肺组织形态学并计算肺损伤评分，确定肺组织湿重/干重(W/D)比值，测定髓过氧化物酶(MPO)活性；采用ELISA法测定血浆TNF-α和IL-6浓度，Western blot法检测肺组织OTUD1、磷酸化(p-)TAK1、p38、c-Jun氨基末端激酶(JNK)和细胞外调节蛋白激酶(ERK)的表达。结果:与WT-Sham组比较，WT-SEP组小鼠PaO 2和OI降低，肺损伤评分、W/D比值、MPO活性、血浆TNF-α和IL-6浓度升高，肺组织OTUD1、p-TAK1、p-p38、p-JNK和p-ERK表达上调( P<0.05)；与WT-SEP组比较，KO-SEP组小鼠PaO 2和OI降低，肺损伤评分、W/D比值、MPO活性、血浆TNF-α和IL-6浓度升高，肺组织p-TAK1、p-p38、p-JNK和p-ERK表达上调( P<0.05)。 结论:OTUD1参与了脓毒症小鼠急性肺损伤的内源性保护机制，可能与抑制TAK1-MAPK信号通路激活，降低炎症反应有关。

目的:评价自噬在吗啡预处理减轻小鼠原代皮层神经元氧糖剥夺/复糖复氧(OGD/R)损伤中的作用及其与c-Jun氨基末端激酶(JNK)的关系。方法:选择出生24 h内的C57BL/6乳鼠，培养原代皮层神经元，采用随机数字表法分为9组( n＝24)：对照组(C组)、OGD/R组、吗啡预处理组(M组)、自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)组(3-MA组)、3-MA＋吗啡预处理组(3-MA＋M组)、自噬抑制剂氯喹组(Ch组)、氯喹＋吗啡预处理组(Ch＋M组)、JNK抑制剂SP600125组(SP组)和SP600125＋吗啡预处理组(SP＋M组)。吗啡预处理：OGD/R前加入吗啡3 μmol/L孵育2 h。3-MA组、Ch组和SP组分别加入3-MA 5 mmol/L、氯喹50 μmol/L、SP6001252 5 μmol/L，孵育150 min。3-MA＋M组、Ch＋M组和SP＋M组于吗啡预处理前30 min时分别加入3-MA 5 mmol/L、氯喹50 μmol/L、SP600125 25 μmol/L。随后氧糖剥夺1 h，复糖复氧24 h。采用CCK-8法测定神经元活力；Western blot法测定JNK、磷酸化JNK(p-JNK)、微管相关蛋白1轻链3(LC3)、p62、Beclin1、caspase-3和cleaved-caspase-3的表达；LC3双荧光腺病毒转染法计数自噬小体和自噬溶酶体；TUNEL染色法检测神经元凋亡率。 结果:与C组比较，OGD/R组神经元活力降低，Beclin1表达上调，p62表达下调，LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值、p-JNK/JNK比值、自噬小体计数、自噬溶酶体计数、cleaved-caspase-3/caspase-3比值和神经元凋亡率升高( P<0.001)。与OGD/R组比较，M组神经元活力、p-JNK/JNK比值、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值、自噬小体计数和自噬溶酶体计数升高，Beclin1表达上调，p62表达下调，3-MA组LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值降低，p62表达下调，Ch组LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高，p62表达上调( P<0.001)，SP600125组上述指标差异无统计学意义( P>0.05)。与M组比较，M＋3-MA组神经元活力和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值降低，p62表达上调，M＋Ch组神经元活力降低，LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高，p62表达上调，M＋SP组神经元活力、p-JNK/JNK比值和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值降低，p62表达上调，自噬小体计数和自噬溶酶体计数降低，Beclin1表达下调，cleaved-caspase-3/caspase-3比值和神经元凋亡率升高( P<0.001)。 结论:吗啡预处理可通过激活JNK，增强自噬，抑制凋亡，减轻小鼠原代皮层神经元OGD/R损伤。

目的 探究盐酸羟考酮通过c-Jun氨基末端激酶(JNK)/p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路对癫痫大鼠炎症和神经元凋亡的影响.方法 构建癫痫大鼠模型,将造模成功的72只癫痫大鼠随机分为模型组、低剂量组(盐酸羟考酮0.125 mg/kg)、中剂量组(盐酸羟考酮0.25 mg/kg)、高剂量组(盐酸羟考酮0.5 mg/kg)、茴香霉素组(茴香霉素5 mg/kg)、联合组(盐酸羟考酮0.5 mg/kg+茴香霉素5 mg/kg),每组12只.另取12只健康大鼠作为对照组.给药结束24 h后,记录各组大鼠癫痫发作频率和持续时间;酶联免疫吸附法检测血清TNF-α、白介素细胞6(IL-6)水平;苏木精-伊红染色观察海马CA1区组织病理学变化;TUNEL染色观察海马CA1区组织神经元凋亡状况;蛋白印迹法检测海马CA1区组织JNK、磷酸化JNK、p38 MAPK、磷酸化p38 MAPK和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)蛋白表达.结果 与对照组比较,模型组大鼠癫痫发作频率、持续时间、血清TNF-α、IL-6水平、海马CA1区组织神经元凋亡率、磷酸化JNK/JNK比值、磷酸化p38 MAPK/p38 MAPK比值、Caspase-3表达明显升高(P＜0.05);与模型组比较,低剂量组、中剂量组、高剂量组大鼠癫痫发作频率、持续时间、血清TNF-α、IL-6水平、海马CA1区组织神经元凋亡率、磷酸化JNK/JNK比值、磷酸化p38 MAPK/p38 MAPK比值、Caspase-3表达依次降低,茴香霉素组大鼠癫痫发作频率、持续时间、血清TNF-α、IL-6水平、海马CA1区组织神经元凋亡率、磷酸化JNK/JNK比值、磷酸化p38 MAPK/p38 MAPK比值、Caspase-3表达明显升高(P＜0.05);联合组大鼠癫痫发作频率、持续时间、血清TNF-α、IL-6水平、海马CA1区组织神经元凋亡率明显高于高剂量组,明显低于茴香霉素组(P＜0.05).联合组大鼠海马CA1区组织磷酸化JNK/JNK比值、磷酸化p38 MAPK/p38 MAPK比值、Caspase-3表达明显高于高剂量组,明显低于茴香霉素组(0.89±0.12 vs 0.25±0.05 vs 1.08±0.16,0.81±0.08 vs 0.21±0.04 vs 0.94±0.12,0.79±0.12 vs 0.26±0.04 vs 0.89±0.14,P＜0.05).结论 盐酸羟考酮可降低癫痫大鼠炎性反应,改善大鼠癫痫症状和病理损伤,保护神经元,其机制与抑制JNK/p38 MAPK信号通路有关.

目的 评价c-Jun氨基末端激酶(JNK)在神经病理性痛大鼠中脑导水管周围灰质(PAG)星形胶质细胞活化中的作用.方法 清洁级雄性SD大鼠72只,9周龄,体重160～ 200 g,采用随机数字表法分为4组:正常对照组(C组,n=8)、神经病理性痛组(NP组,n=40)、二甲基亚砜溶剂对照组(DS组,n=12)和JNK抑制剂SP600125组(SP组,n=12).采用慢性坐骨神经缩窄性损伤(CC1)法制备大鼠神经病理性痛模型.于CCI后14d时,SP组PAG内注射10 nmol JNK抑制剂SP600125 0.5μl,DS组注射10％二甲基亚砜0.5 μl.C组取8只大鼠,NP组于CCI前、CCI后3、7、14、21 d时取8只大鼠,DS组和SP组取8只大鼠分别于CCI前、CCI后14 d给药前、给药后30、45、60、75和90 min时测定机械痛阈.C组机械痛阈测定结束后处死,取PAG组织,采用Western blot法测定PAG区磷酸化JNK(p-JNK)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达;NP组于各时点痛阈测定结束后处死,测定PAG区p-JNK表达;DS组和SP组取4只大鼠于给药后45 min时机械痛阈测定结束后处死,测定PAG区GFAP的表达.结果 与C组比较,NP组CCI后各时点机械痛阈降低,CCI后7～21d时p-JNK表达上调(P＜0.01);与DS组比较,SP组给药后30 min时机械痛阈升高,给药后45 min时GFAP表达下调(P＜0.01);与给药前比较,SP组给药后30～75 min时机械痛阈升高(P＜0.01).结论 神经病理性痛大鼠PAG星形胶质细胞活化机制与JNK激活有关.

目的 非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)与胰岛素抵抗密切相关.绿原酸(CG)能调节糖脂代谢、改善胰岛素抵抗.探讨CG在NAFLD中的作用及其可能的分子基础.方法 选取30只SD大鼠,随机分为正常饮食组(NG组)、高脂饮食组(HG组)和绿原酸干预组(CG组).所有大鼠第1周采用普通饲料适应性喂养,第2周开始NG组喂饲普通饲料,HG组和CG组喂饲高脂饮食.第4周起NG组、HG组给予每周3次生理盐水灌胃,CG组给予每周3次灌胃CG.采用全自动生化仪和放射免疫法检测血清生化指标,采用全波长分光光度计测定超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和游离脂肪酸(FFA).正常血糖高胰岛素钳夹试验技术测定胰岛素抵抗.Western Blot检测自噬及C-Jun氨基末端激酶(JNK)蛋白.计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验.相关分析采用Pearson相关性分析.结果 与NG组相比,HG组体质量、肝指数、肝湿重、ALT、AST、TG、TC、TNFα及肝匀浆MDA、FFA均明显升高,而SOD明显低于NG组(P值均＜0.05).HG组与NG组相比,p-JNK1和JNK1的蛋白及自噬相关LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、Beclin-1、Atg3和Atg5蛋白水平升高(P值均＜0.05).且JNK1蛋白的表达与胰岛素抵抗呈正相关.CG组体质量、肝湿重及肝指数显著低于HG组;ALT、AST、TG、TC、TNFα及肝匀浆MDA、FFA比HG组均明显降低,SOD高于HG组;LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、Beclin-1、Atg3、Atg5表达均显著低于HG组,差异均有统计学意义(P值均＜0.05).结论 CG在NAFLD大鼠模型中通过JNK途径失活抑制自噬来改善肝损伤和胰岛素抵抗,CG可能为治疗NAFLD的潜在手段.

目的 探讨急性一氧化碳中毒后迟发性脑病(delayed encephalopathy after acute carbon monoxide poisoning,DEACM P)患者脑脊液中S100β、Jun氨基末端激酶(jun amino-terminal kinase,JNK)通路蛋白、白细胞介素-4(interleukin-4,IL-4)、IL-10、转化生长因子β1(transforming growth factor β1,TGF-β1)及干扰素γ(inter-feron-γ,IFN-γ)的变化及其临床意义.方法 选取2010-01—2016-12作者医院收治的DEACM P 患者20例(DEACM P组),另收集同期发生一氧化碳中毒但未发生迟发性脑病的患者37例作为对照组,检测两组患者入院后第2天脑脊液中S100β、JNK 通路蛋白(JNK1、JNK2)及TNF-ɑ、IL-4、IL-10、TGF-β1、IFN-γ水平,并于治疗2周后对两组患者进行简易精神状态量表(mini-mental state examination,MMSE)评分,分析脑脊液S100β蛋白、JNK通路蛋白及相关细胞因子与 MMSE评分的相关性.结果 DEACMP组脑脊液中S100β、JNK1、JNK2、TNF-ɑ、IFN-γ水平均高于对照组(P< 0.05),而 IL-4、IL-10、TGF-β1水平及 MMSE评分均低于对照组(P<0.05).DEACMP组患者MMSE评分与患者脑脊液中S100β、JNK1、JNK2、TNF-ɑ、IFN-γ水平呈负相关(P<0.05),与IL-4、IL-10、TGF-β1水平呈正相关(P<0.05).结论 DEACMP患者脑脊液中S100β、JNK 通路蛋白及相关细胞因子发生明显改变,且其水平与患者恢复期认知功能损害有关.

目的 探讨右美托咪定(DEX)对机械通气相关性肺损伤大鼠肺组织细胞凋亡的影响.方法 清洁级雄性SD大鼠100只,采用随机数字表法将大鼠分为五组(每组n =20):对照组(C组)、机械通气组(V组)和不同剂量右美托咪定组(DEX 1 ～3组).机械通气参数设置:潮气量40 mL/kg,呼吸频率50次/min,吸呼比1: 1,FiO2 21％.DEX 1 ～3组机械通气前20 min分别静脉输注DEX 0.5、2.5、5.0 μg/kg,机械通气期间DEX分别以0.5、2.5、5.0μg/(kg-h)的速率静脉输注4 h.于插管即刻及机械通气1、2和4 h时采集股动脉血样,进行动脉血气分析,并记录 Pa02,计算氧合指数(01).机械通气4 h时处死大鼠,回收肺泡支气管灌洗液(BALF),测定肺通透指数(LPI),取左肺下叶,测定肺湿/干质量(W/D)比值.采用Western blot法检测JNK、p- JNK、Bax、Bcl-2、Caspase-3和唯BH3结构域促凋亡因子(BID、BIM)的表达水平.采用RT- PCR法检测JNK mRNA的表达.光镜下,观察肺组织病理学结果,测定肺泡损伤率(IAR),采用 TUNEL法观察肺组织细胞凋亡情况并计算凋亡指数.结果 与C组比较,V组和DEX 1组01降低,W/D比值、LPI、IAR(％ )、AI(％ )升高,p-JNK和JNK mRNA表达上调,促凋亡因子BID、BIM的表达增加,同时伴有Bax表达增加,Bcl-2表达减少,Caspase-3表达增加(P＜0.05),DEX 2、3组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05);与V组比较,DEX 2、3组01升高,W/D比值、LPI、IAR(％ )、AI(％ )降低,p-JNK和JNK mRNA表达下调,促凋亡因子BID、BIM表达减少,同时伴有 Bax表达减少,Bcl-2表达增加,Caspase-3表达减少(P＜0.05),DEX 1组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05).与V组比较,DEX 2、3组肺组织病理损伤减轻,TUNEL法检测细胞凋亡减少.结论 DEX可减轻大鼠机械通气相关性肺损伤,与其抑制肺组织JNK磷酸化,下调唯BH3结构域促凋亡因子BID、BIM的表达,进而上调Bcl-2表达,下调Bax表达,抑制Caspase-3表达来减少肺组织细胞凋亡,减轻肺损伤有关.