多囊卵巢综合征以高雄激素血症、胰岛素抵抗、代谢综合征为主要临床表现,通常合并月经不调、排卵障碍、不孕症,其远期心血管疾病、骨质疏松症和癌症的发病风险增高.既往研究表明,磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B、丝裂原活化蛋白激酶/细胞外信号调节激酶、Toll样受体4/核转录因子-κB、转化生长因子-β1/Smads蛋白、抑癌基因p53/腺苷酸活化蛋白激酶等信号通路可通过抑制雄激素分泌、改善胰岛素抵抗,调节卵巢颗粒细胞增殖、凋亡与自噬,促使卵母细胞成熟,抑制卵巢纤维化形成,改善炎症反应等途径治疗多囊卵巢综合征.故本文通过对参与多囊卵巢综合征形成过程的相关信号通路进行综述,并探讨中药的治疗机制.

背景 骨骼肌衰老后质量和功能逐渐下降,其分泌的外泌体对骨代谢具有明显的影响,但衰老骨骼肌外泌体对骨代谢的调控机制尚未明确.目的 探索衰老骨骼肌组织外泌体调控成骨、破骨细胞功能的作用.方法 将2月龄(Young)和24月龄(Old)小鼠骨骼肌组织消化形成单细胞悬液,从中提取的骨骼肌组织外泌体分别为年轻骨骼肌组织外泌体(Young-Exo)和衰老骨骼肌组织外泌体(Old-Exo).通过生物透射电子显微镜(transmission electron microscope,TEM)、纳米颗粒跟踪分析(nanoparticle tracking analysis,NTA)和Western blot对外泌体进行验证.利用提取的外泌体干预诱导原代成骨细胞成骨分化和诱导骨髓单核巨噬细胞向破骨细胞分化.组织外泌体干预实验分为对照组(PBS组)、年轻组织外泌体组(Young-Exo 组)、衰老组织外泌体组(Old-Exo组).茜素红(alizarin red S,ARS)染色和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色检测成骨分化水平;抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphase,TRAP)染色检测破骨细胞面积;实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)检测 Alp、Opn、Ocn、Col1a1、Runx2、Ctsk、Dc-stamp、Atp6v0d2、Mmp-9、Acp5 基因相对表达量.结果Young-Exo组与Old-Exo组的细胞外囊泡均为双层膜结构的圆形囊泡,直径110nm左右,且均表达CD9、CD63、CD81和TSG101等外泌体相关标志蛋白.组织外泌体干预诱导原代成骨细胞成骨分化实验结果显示,与PBS组、Young-Exo组比较,Old-Exo组原代成骨细胞ARS染色的钙盐沉积量和ALP染色强度均下降(P＜0.01),成骨分化基因 Alp、Opn、Ocn、Collal、Runx2的mRNA相对表达量降低(P＜0.01);组织外泌体干预诱导骨髓单核巨噬细胞向破骨细胞分化结果显示,与PBS组、Young-Exo组比较,Old-Exo组TRAP染色的破骨细胞所占面积百分比升高(P＜0.01),破骨细胞相关基因Ctsk、Dc-stamp、Atp6v0d2、Mmp-9、Acp5的mRNA相对表达量升高(P＜0.01).结论 与年轻骨骼肌组织外泌体相比,衰老骨骼肌组织外泌体可能通过抑制原代成骨细胞的成骨分化、促进破骨细胞形成,打破骨代谢的动态平衡,导致骨质疏松症.

目的 用星点设计-效应面法(CCD-RSM)联用正交实验设计优选抗骨质疏松颗粒的制剂工艺.方法 以溶媒用量、煎煮时间为考察因素,以有效成分补骨脂素、异补骨脂素总量和干膏收率的总评"归一值"(optical density,OD)为评价指标,用CCD-RSM确定最佳提取工艺;以颗粒溶化性、吸湿率、水分、成型率、休止角为评价指标,用正交实验优选最佳成型工艺.结果 最佳提取工艺为加水量12倍,提取2次,每次130 min;成型工艺为浸膏与辅料的比例为1∶2,可溶性淀粉与糊精的比例为1∶3,用体积分数为90％的乙醇制粒,75 ℃干燥,过16目筛整粒,即得.结论 优选的制剂工艺条件稳定、可行,可为抗骨质疏松颗粒的实际生产提供依据.

背景:随着疾病治疗模式的改变及近年来对老年性骨质疏松症研究的深入,越来越多的研究证实中医药在防治老年性骨质疏松症方面的效果显著.目的:探讨益肾固疏方对肾虚血瘀型老年性骨质疏松症患者骨代谢标志物的影响.方法:选择2020年7月至2022年3月广西中医药大学附属瑞康医院收治的肾虚血瘀型老年性骨质疏松症患者102例,其中男32例,女70例,年龄71-93岁.采用随机数字表法将102例患者分为试验组及对照组,每组51例,对照组给予碳酸钙D3颗粒+阿仑磷酸钠片治疗,治疗组给予碳酸钙D3颗粒+阿仑磷酸钠片+益肾固疏方治疗,连续治疗3个月.治疗前及治疗3个月后,检测两组患者L1-4椎体与左侧股骨颈骨密度,评估目测类比评分,检测血清骨钙素、骨桥素、Ⅰ型胶原交联C-末端肽及抗酒石酸酸性磷酸酶水平,评估中医证候积分与治疗有效率.结果与结论:①两组治疗3个月后的L1-4椎体与左侧股骨颈骨密度均高于治疗前(P<0.05),试验组治疗3个月后的L1-4椎体与左侧股骨颈骨密度均高于对照组(P<0.05);②两组治疗3个月后的目测类比评分均低于治疗前(P<0.05),试验组治疗3个月后的目测类比评分低于对照组(P<0.05);③两组治疗3个月后的血清骨钙素、骨桥素、Ⅰ型胶原交联C-末端肽及抗酒石酸酸性磷酸酶水平均较治疗前明显改善(P<0.05),试验组治疗3个月后的血清骨钙素、骨桥素水平高于对照组(P<0.05),Ⅰ型胶原交联C-末端肽及抗酒石酸酸性磷酸酶水平低于对照组(P<0.05);④两组治疗3个月后的中医证候总评分均低于治疗前,试验组治疗3个月后的中医证候总评分低于对照组;治疗3个月后,两组均未发生明显不良反应,试验组于对照组治疗总有效率分别为88.2％,70.6％,组间比较差异有显著性意义(P<0.05);⑤结果显示,益肾固疏方联合抗骨质疏松药物可通过调节骨代谢、提高骨密度、减轻患者病痛来显著改善肾虚血瘀型老年性骨质疏松症患者的临床症状,阻止疾病的进一步发展.

目的:观察固本活血壮骨颗粒对糖皮质激素性骨质疏松症(GIOP)大鼠骨微结构的影响及作用机制.方法:3 月龄的 Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、中药组及西药组.采用苏木精-伊红染色观察大鼠股骨组织病理形态变化;采用 Micro-CT检测大鼠股骨的骨密度(BMD)、结构模式指数(SIM)、各向异性程度(DA)、骨小梁数量(Tb.N)、皮质骨总面积(Tt.Ar)、皮质骨厚度(Ct.Th)、骨髓腔面积(Ma.Ar);采用 RT-PCR检测股骨组织中低密度脂蛋白受体相关蛋白 5(LRP5)和 Runt相关转录因子 2(Runx2)的 mRNA 表达.结果:固本活血壮骨颗粒可改善GIOP大鼠骨微结构,提高BMD、Tb.N、Ct.Th 值,降低 SIM、Tt.Ar 值(均P<0.05).固本活血壮骨颗粒可提高GIOP大鼠骨组织中 LRP5、Runx2 mRNA 表达(均 P<0.05).结论:固本活血壮骨颗粒通过调节 Wnt/LRP5/β-catenin信号通路拮抗 GIOP,减少骨质丢失.

骨免疫学认为巨噬细胞和破骨细胞之间的相互作用可以调控骨骼疾病,巨噬细胞-破骨细胞轴在骨免疫中发挥重要作用.人工关节产生的磨损颗粒刺激破骨细胞发生骨溶解,巨噬细胞吞噬磨损颗粒产生慢性炎症导致无菌性松动的发生.而巨噬细胞通过抗炎作用和促进破骨细胞分化促使骨折愈合.破骨细胞活跃是骨质疏松发生的主要原因,巨噬细胞在其中扮演重要的角色.同时巨噬细胞被认为是类风湿性关节炎患者破骨细胞过度活跃的重要原因.本文就骨免疫中巨噬细胞和破骨细胞的相互作用在相关骨骼疾病中的作用进行综述.

目的 观察加味二至丸颗粒治疗绝经后骨质疏松症的疗效及对E2和OPG水平的影响方法 选择符合标准的绝经后骨质疏松症患者60例,根据数字随机表法分为观察组和对照组,每组各30例.对照组采用口服碳酸钙咀嚼片、阿法骨化醇软胶囊抗骨质疏松治疗,观察组在对照组基础上加用加味二至丸颗粒冲服,共治疗12周.分别于治疗前及随访24周时测定患者骨密度及骨代谢指标,并进行症候量化评分,于治疗前、治疗12周及随访24周时测定患者E2及OPG水平.结果 60例患者均随访至24周.两组患者骨密度及25(OH)D均高于治疗前,BGP及β-CTX均低于治疗前,差异有统计学意义(P＜0.05);同时随访至24周时,观察组骨密度高于对照组,观察组BGP及β-CTX均低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).随访24周,观察组症候量化评分低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).观察组与对照组E2水平比较,差异有统计学意义(F=4.696,P=0.034);不同时间点之间的E2水平存在统计学差异(F=23.103,P＜0.001);组间因素与时间因素存在交互效应(F=12.045,P＜0.001);治疗12周及随访24周,观察组E2水平高于对照组(P＜0.05).观察组与对照组OPG水平比较,两组间差异有统计学意义(F=19.748,P＜0.001);不同时间点之间OPG水平存差异有统计学意义(F=83.587,P＜0.001);组间因素与时间因素存在交互效应(F=11.780,P＜0.001);治疗12周及随访24周,观察组OPG水平高于对照组(P＜0.05).结论 加味二至丸颗粒在西医药物治疗基础上可有效调节绝经后骨质疏松患者骨代谢速率及提高骨密度,升高E2及OPG水平.其治疗机制可能是加味二至丸颗粒通过增加机体E2的分泌,调节RANKL-RANK-OPG轴的表达,降低骨高转换率,从而提高骨密度.

目的 通过制备破骨前体细胞膜纳米颗粒(nanoparticles,NPs)负载丹酚酸B(salvianolic ac-id,SalB),构建载药纳米颗粒SalB-NPs,观察其对破骨细胞及成骨细胞分化的影响.方法 采用超声裂解、挤膜的方法制备NPs,并将NPs与SalB共孵育后,使用200 nm聚碳酸酯膜挤出,获得SalB-NPs.在诱导小鼠原代破骨细胞分化和成骨前体细胞(MC3T3-E1)成骨分化的过程中,按照处理方式不同,分为对照组、SalB组、SalB-NPs组.采用透射电镜、纳米粒度及ZETA电位仪和Western Blot对材料进行表征,采用噻唑蓝检测试剂盒检测材料对RAW 264.7和MC3T3-E1细胞活力的影响,采用高效液相色谱法检测SalB的释放率和装载率.采用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色评价破骨细胞分化能力,通过碱性磷酸酶(ALP)染色和茜素红染色评估成骨分化能力,采用Real time-PCR检测破骨细胞分化及成骨分化相关基因表达水平.结果 制备的纳米颗粒直径在200 nm左右,同时表达RANK蛋白.TRAP染色显示SalB-NPs显著抑制破骨细胞的形成,下调破骨分化相关基因水平,与对照组和SalB组相比,差异有统计学意义(P＜0.05).使用成骨诱导培养基诱导MC3T3-E1细胞成骨分化,14 d ALP染色和21d茜素红染色均显示SalB-NPs组ALP活性和钙盐沉积量较SalB组明显增加,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 SalB-NPs体外发挥促进成骨分化、抑制破骨细胞形成双重功效,作为骨质疏松的治疗药物开发,有很好的应用前景,未来仍需在骨质疏松模型动物进一步验证其治疗效果.

目的 观察固本活血壮骨颗粒对糖皮质激素性骨质疏松症(glucocorticoid-induced osteoporosis,GIOP)大鼠的作用与机制.方法 3月龄的Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、中药组及西药组.采用试剂盒分别检测大鼠血清骨代谢指标钙(calcium,Ca)、磷(phosphorus,P)及碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)含量;采用Micro-CT检测大鼠股骨骨密度(bone mine density,BMD)并分析骨小梁结构系数如骨小梁相对体积(BV/TV)、骨小梁厚度(Tb.Th)、骨表面积组织体积比值(BS/TV)、骨小梁数量(Tb.N)、骨小梁分离度(Tb.Sp);采用苏木精-伊红染色(hematoxylin-eosin staining,HE)观察各组大鼠股骨组织病理形态变化;采用蛋白印迹法(Western blot)检测股骨组织中磷酸化核转录因子 κB-p65(phospho-nuclear transcription factor-κB p65,p-NF-κB p65)、活化T细胞核因子蛋白1(recombinant nuclear factor of activated T-cell,NFATc1)、β-连环蛋白(β-catenin)的表达,采用逆转录PCR(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测股骨组织中NFATc1、肿瘤坏死因子受体相关蛋白6(TNF receptor associated factor 6,TRAF6)、β-catenin的mRNA表达.结果 固本活血壮骨颗粒提高GIOP大鼠血清Ca值、血清P值、BMD值、BV/TV值、Tb.Th值、BS/TV值和Tb.N值(P<0.05),降低血清ALP值与Tb.Sp值(P<0.05);改善骨组织中β-catenin、NFATc1、TRAF6、p-NF-κB p65蛋白与mRNA表达(P<0.05).另外,固本活血壮骨颗粒对GIOP大鼠血清ALP、股骨NFATc1的调节作用比阿法迪三更具优势(P<0.05).结论 固本活血壮骨颗粒可拮抗GIOP,减少骨质丢失,其作用机制与Wnt/β-catenin通路和TRAF6/NF-κB p65/NFATcl信号通路有关.

目的 研究中药复方补肾壮骨颗粒对SAMP6小鼠股骨结构及生物力学性能的影响,并探讨是否有可能替代生长激素对老年男性骨质疏松进行治疗.方法 将30只3月龄SAMP6小鼠随机均分为模型组、生长激素组和中药组,选取10只正常老化小鼠(SAMR1)作为同源对照组.正常饲养1周后,生长激素组和中药组小鼠开始给药,每周称重1次,调整给药剂量,正常组和模型组给予等量的生理盐水.3个月后每组随机选取5只小鼠去眼球取血处死,取其左侧股骨,进行测定股骨的骨量、几何尺寸、骨截面力学几何量和生物力学性能实验,6个月后采取同样的方法处理剩余的小鼠.结果 与模型组比较,3个月后用药组骨量均降低(P＞0.05),6个月后均升高(P＞0.05),且中药组均比同期生长激素组骨量高(P＞0.05);3个月后中药组SAMP6小鼠皮质骨厚度、截面积增大(P＜0.05),骨髓腔直径、横截面积减小(P＜0.05),骨截面力学几何量增加(P＞0.05),骨结构力学各参数均显著性提高(P＜0.01),最大应力、弹性应力显著性提高(P＜0.01),刚性系数增大(P＜0.05),弹性模量增加(P＞Q.05);6个月后中药组SAMP6小鼠皮质骨厚度、横截面积增大(P＜0.01),骨髓腔直径、横截面积减小(P＜0.05),骨的截面力学几何量均显著性提高(P＜0.01),最大载荷、弹性载荷提高(P＜0.05),最大绕度、最大弯矩、能量吸收提高(P＞0.05),弹性应力、刚性系数增加(P＞0.05),弹性模量降低(P＞0.05);与生长激素组比较,3个月后中药组SAMP6小鼠各检测指标结果无明显差异(P＞0.05),6个月后中药组SAMP6小鼠皮质骨厚度、横截面积显著性增大(P＜0.01),骨截面力学几何量增加(P＞0.05),骨生物力学性能参数结果减小,但无统计学意义(P＞0.05).结论 补肾壮骨颗粒可以调节SAMP6小鼠骨宏观几何结构的力学应答机能,改善骨的生物力学性能,增加骨质韧性,增强骨强度,提高抵抗外力变形和骨折的能力;长期用药可提高SAMP6小鼠骨量,以上结果与生长激素治疗SAMP6小鼠骨质疏松的疗效相当,故补肾壮骨颗粒有可能替代价格昂贵且副作用较多的生长激素来治疗老年男性骨质疏松.