分析耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌（carbapenem-resistant Klebsiella pneumoniae，CRKP）分子流行病学及探讨 blaKPC和 blaNDM水平传播机制，为预防和治疗CRKP提供参考依据。回顾性分析2022年1—12月湖南中医药大学第一附属医院临床非重复分离的CRKP，共计 49株。采用改良碳青霉烯灭活实验（mCIM）、EDTA-碳青霉烯灭活实验（eCIM）进行表型筛选；聚合酶链式反应（PCR）检测CRKP碳青霉烯耐药基因、β内酰胺酶耐药基因和毒力基因；多位点序列分析检测CRKP菌株的同源性。通过接合试验，推断 blaKPC和 blaNDM两种碳青霉烯耐药基因的水平传播机制。结果显示，本研究共收集到CRKP 49株，有44株携带 blaKPC，8株携带 blaNDM，其中同时携带 blaKPC和 blaNDM两种耐药基因的CRKP（ blaKPC+ blaNDM-CRKP）有3株。28株CRKP携带毒力基因（28/49，57.2%），1株CRKP拉丝试验阳性，且同时携带 Aerobactin和 rmpA两种毒力基因。共检出5种ST型，以ST11为主（41/49，83.7%）。3株 blaKPC-CRKP均接合成功，3株 blaNDM-CRKP仅1株接合成功，接合子菌株对亚胺培南以及头孢菌素类抗菌药物的敏感性均显著降低。综上，本研究CRKP耐药机制主要以产KPC酶为主，且同时携带多种β-内酰酶耐药基因，并有高毒力耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌（high virulence carbapenem-resistant Klebsiella pneumoniae，hv-CRKP）和 blaKPC+ blaNDM-CRKP的局部流行。 blaKPC和 blaNDM可通过质粒水平传播，不同菌株的水平传播效率存在差异。

目的:从敏感和多重耐药的肺炎克雷伯菌中筛选出hvKP表型株，对比探讨其临床感染特征的分布和同源性。方法:回顾性收集2014至2018年中山大学附属第三医院临床感染标本所分离的敏感和多重耐药的肺炎克雷伯菌共158株，通过黏液拉丝试验（string test，ST）初筛hvKP感染情况，共筛选到65例患者，男性51例，女性14例，平均年龄56岁。构成比分析其临床感染相关信息，基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术（MALDI-TOF MS）对筛选出的hvKP进行种属鉴定及建立新数据库，利用分析软件对所有符合实验条件的菌株进行生物树聚类分析和主成分分析，获得蛋白水平的同源性。结果:根据ST试验，158株肺炎克雷伯菌株中，65例患者共筛选到hvKP 65株，其中62株为全敏感菌株，3株为多重耐药菌株，感染者入院主要疾病诊断集中在肝胆疾病、脑病及肝脓肿；人群基础病主要为糖尿病与高血压。聚类分析将hvKP在距离水平线550处分为3群；主成分分析发现部分菌株具有较近亲缘关系，其中占比最大的Kc群主要与肝胆管疾病有关。Ka群主要与手术后感染有关。结论:hvKP具有高侵袭力，临床感染表现多样，感染病患多为免疫力低下老年患者。MALDI-TOF MS质谱快速同源性分析对hvKP感染快速筛查具有重要临床意义。

探讨重症监护病房耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌（carbapenem-resistant Klebsiella pneumoniae，CRKP）碳青霉烯酶分布情况，并比较耐碳青霉烯类高毒力肺炎克雷伯菌（carbapenem-resistant hypervirulent Klebsiella pneumoniae，CR-hvKP）和耐碳青霉烯非高毒力肺炎克雷伯菌（carbapenem-resistant non-hypervirulent Klebsiella pneumoniae，CR-non-hvKP）两者之间的临床特征。收集并回顾性分析2020年5月至2021年3月西安交通大学第二附属医院重症监护病房49例患者分离的53株非重复CRKP菌株，使用碳青霉烯酶抑制剂增强试验进行产碳青霉烯酶菌株初筛，拉丝试验进行高黏液表型初筛，使用PCR方法检测5种主要的碳青霉烯酶基因（ blaKPC-2、 blaNDM、 blaIMP、 blaVIM和 blaOXA-48-like），常见血清型（K1和K2）和毒力基因（rmpA和iutA），将同时检测出rmpA和iutA基因的菌株视为高毒力肺炎克雷伯菌（hypervirulent Klebsiella pneumoniae，hvKP），并对CR-hvKP进行全基因组测序。针对49例感染患者的临床资料，采用独立样本 t检验，Mann-Whitney U检验，χ2检验或Fisher精确概率法比较CR-hvKP和CR-non-hvKP两者的临床特征差异。重症监护病房分离的CRKP存在广泛耐药，对多黏菌素B和替加环素仍具有良好的敏感性。CRKP主要的耐药机制为产碳青霉烯酶（52/53，98.1%），53株CRKP除1株未检测到碳青霉烯酶外，其余52株CRKP至少检测到1种碳青霉烯酶耐药基因，其中45株携带单一酶型，包括36株 blaKPC-2（36/53，67.9%）、8株 blaNDM（8/53，15.1%）和1株 blaIMP（1/53，1.9%），7株携带两种酶型 blaKPC-2和 blaNDM（7/53，13.2%）。拉丝试验和毒力基因检测结果显示，53株CRKP检出7株（13.2%）CR-hvKP，其中2株拉丝试验阳性。测序结果表明CR-hvKP主要属于ST11型。CR-hvKP感染患者年龄几乎都在60岁以上（7/7），存在侵入性治疗（7/7）、肺部感染高黏液表型（2/7）以及具有较高的死亡率（5/7）；CR-hvKP感染患者的中性粒细胞百分比（86.44±4.70）%高于CR-non-hvKP感染患者（78.90±19.15）%，差异有统计学意义（ t =-2.225， P=0.032）。综上，重症监护病房CR-hvKP菌株以产KPC-2酶，荚膜血清型K2和ST11序列型为主，需加强对CR-hvKP菌株的监测与控制，防止耐药和高毒力菌株的共同进化。

探讨高毒力肺炎克雷伯菌（Hypervirulent Klebsiella pneumoniae，HvKP）生物被膜形成能力及耐药性，为HvKP感染治疗提供科学依据。回顾性收集2021年1至12月长沙市中心医院临床感染标本所分离的非重复肺炎克雷伯菌96株，同时收集患者临床资料。黏液拉丝试验初步区分HvKP和普通肺炎克雷伯菌（Classic Klebsiella pneumoniae，CKP），微孔板法测定肺炎克雷伯菌（Klebsiella pneumoniae，KP）临床菌株的生物被膜形成能力，Vitek 2 Compact全自动微生物鉴定/药敏分析系统进行细菌鉴定及药敏试验，比较分析HvKP组患者和CKP组患者临床资料、菌株生物被膜形成能力以及耐药性。结果显示，96株非重复KP中共分离出20株HvKP，检出率为20.8%，HvKP中呼吸道标本占比最高，达75.0%。HvKP感染患者肝胆疾病患病率以及多部位感染率高于CKP感染患者，差异具有统计学意义（ χ2=5.184、7.488， P=0.023、0.006）。两组患者从性别、年龄、是否入住ICU、高血压、糖尿病、冠心病、肺部疾病、泌尿系统疾病、中枢神经系统疾病、实验室检测指标比较，差异无统计学意义（ P均>0.05）。HvKP中有17株（85.0%）能形成生物被膜，其中弱成膜2株（10.0%）、中等成膜10株（50.0%）、强成膜5株（25.0%）；而76株CKP有71株（93.4%）能形成生物被膜，其中弱成膜13株（17.1%）、中等成膜30株（39.5%）、强成膜28株（36.8%），HvKP生物被膜形成率与CKP比较，差异无统计学意义（ χ2=1.470， P=0.225）。HvKP整体耐药率不高，但发现1株耐碳青霉烯类抗生素的多重耐药HvKP，多重耐药HvKP检出率（5.0%）低于多重耐药CKP（28.9%），差异具有统计学意义（ χ2=4.984， P=0.026）。HvKP对哌拉西林/他唑巴坦、氨曲南、环丙沙星、左氧氟沙星、头孢他啶、头孢比肟、妥布霉素、米诺环素、多西环素、复方磺胺甲噁唑的耐药率低于CKP，差异具有统计学意义（ P均<0.05）。综上，本研究高毒力肺炎克雷伯菌大多能够形成生物被膜，但与普通肺炎克雷伯菌比较成膜能力差异不明显，HvKP对常用抗菌药物保持较高的敏感性，但不能忽视该菌的耐药性监测。

目的:明确铁载体毒力基因 entB对碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌（CRKP）毒力的影响。 方法:从昆明医科大学第一附属医院收集到的30株CRKP菌株中筛选出CRKP-27作为实验菌株，规律间隔成簇短回文重复序列（CRISPR）-Cas9基因敲除技术构建 entB基因缺失株Δ entB、回补株C-Δ entB，并通过PCR验证敲除及回补是否成功。观察CRKP-27、Δ entB、C-Δ entB菌株的菌落形态并进行拉丝试验，初步了解 entB对CRKP菌落形态和毒力表型的影响。绘制菌株生长曲线，测定 entB对CRKP菌株生长的影响。铬天青S（CAS）检测液对菌株产铁载体能力进行定量检测。建立小鼠腹腔感染模型，观察小鼠生存率直观了解 entB基因对CRKP毒力的影响。计量资料均采用平均数±标准差表示，服从正态分布的数据采用方差分析进行组间比较，不服从正态分布的数据采用Kruskal-Wallis秩和检验。小鼠生存分析用Log-Rank检验进行比较。 P<0.05表示差异具有统计学意义。 结果:PCR结果显示缺失株和回补株构建成功。 entB基因对CRKP的菌落形态、荚膜和毒力表型无明显影响。Δ entB组的生长速度明显快于CRKP-27组（ P=0.008）和C-Δ entB组（ P=0.001），说明 entB基因削弱了CRKP菌株的生长能力。 entB组与CRKP-27组（ P=0.001）和C-Δ entB组（ P=0.001）相比铁载体产量明显下降，分别下降11.739 3%和11.964 2%，说明 entB基因显著增加了CRKP产铁载体能力。动物实验中，与CRKP-27组（ P=0.023）和C-Δ entB组（ P=0.024）相比，Δ entB组小鼠生存率明显增高，说明 entB基因增加了CRKP菌株的毒力。 结论:铁载体毒力基因 entB明显减弱了菌株的生长能力，但使CRKP产铁载体能力、毒力明显增强。

目的:探讨中江县肺炎克雷伯菌毒力相关表型/基因、荚膜血清型、耐药表型、序列分型（ST）的分布特征，提高临床认识，为细菌耐药防控和临床合理用药提供依据。方法:回顾分析中江县人民医院2019年7-12月分离的肺炎克雷伯菌135株的资料。采用WalkAway-40Plus全自动分析系统进行菌种鉴定及药敏检测；采用拉丝实验鉴定菌株高黏液表型；采用聚合酶链式反应筛查高毒力荚膜血清型和毒力基因；采用多位点序列分析（MLST）鉴定菌株ST。结果:135株菌中高黏液型菌株所占比例为50.4%。毒力基因 iucA、 iroN、 rmpA阳性率分别为54.1%、54.8%、54.1%。荚膜血清K1、K2型菌株所占比例分别为11.9%、15.6%。共鉴定出65种ST型别，以ST23和ST37型最为常见，占比分别为11.1%和6.7%。菌株对16种抗菌药物的耐药率为0.0%~25.2%，对碳青霉烯类抗菌药物、阿米卡星、替加环素的耐药率均不足1%。高黏液型菌株的毒力基因阳性率显著高于非高黏液型菌株（ P < 0.001），其对头孢菌素类药物的耐药率显著低于非高黏液型菌株（ P < 0.001）。 结论:中江县肺炎克雷伯菌呈现“高毒力、低耐药”特征，应持续监测该地区肺炎克雷伯菌毒力及耐药性的变化，警惕高毒力菌株快速传播。

目的:研究肺炎克雷伯菌( Klebsiella pneumoniae， Kp)的 pks基因岛与毒力基因、荚膜血清型和生物膜形成的关系，并测定其高黏液(hypermucoviscous，HM)表型和生物膜形成情况。 方法:收集福建医科大学附属第一医院临床标本分离的113株肺炎克雷伯菌株。根据 pks基因岛存在与否分为 pks+组和 pks－组。采用拉丝试验检测高黏液表型。PCR扩增检测5种毒力基因( peg-344、 rmpA、 rmpA2、 iucA、 iroB)和6种常见荚膜血清型(K1、K2、K5、K20、K54、K57)，利用微孔板法检测生物膜的形成情况。采用SPSS21.0软件进行统计分析，以 P<0.05为差异具有统计学意义。 结果:113株临床分离的肺炎克雷伯菌株中，共检出46株 pks+肺炎克雷伯菌株和67株 pks－肺炎克雷伯菌株。 pks+组HM表型检出率为87.0%(40/46)，高于 pks－组的检出率43.3% (29/67)，差异有统计学意义(χ 2 ＝21.879， P<0.001)； pks+组毒力基因( peg-344、 rmpA、 rmpA2、 iucA、 iroB)和血清型基因(K1型)的检出率均高于 pks－组，差异有统计学意义( P<0.05)；且 pks+组菌株生物膜形成能力高于 pks－组( P<0.05)。 结论:携带有 pks基因岛的肺炎克雷伯菌更多具有HM表型，血清型以K1型为主，菌株中 peg-344、 rmpA、 rmpA2、 iucA和 iroB基因携带率较高，且生物膜形成能力较强。

目的:临床上已出现耐多黏菌素的肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae,KPN),本研究分析耐多黏菌素KPN的药敏特征、流行病学特点,以及耐多黏菌素KPN产生的危险因素,以期为耐多黏菌素KPN感染的防治提供依据.方法:收集中南大学湘雅三医院(以下简称"本院")的30株耐多黏菌素KPN临床菌株,分析其药敏特点.采用胶体金免疫层析法检测样本中是否存在KPC、OXA-48、VIM、IMP和NDM型碳青霉烯酶;拉丝试验初筛高毒力KPN;结晶紫染色法检测生物膜形成能力;棋盘法进行联合药敏试验(多黏菌素B和美罗培南、替加环素、头孢哌酮/舒巴坦);PCR检测多黏菌素相关耐药基因;多位点序列分型(multi-locus sequence typing,MLST)进行基因分型和构建进化树.收集耐碳青霉烯类(carbapenem-resistant,CR)-KPN多黏菌素耐药菌株(23株,实验组)、CR-KPN多黏菌素敏感菌株(57株,对照组),对耐多黏菌素KPN产生的可能危险因素行单因素分析,再进一步行多因素Logistic回归分析.检测多黏菌素B和多黏菌素E的连续诱导耐药情况.结果:30株耐多黏菌素KPN中,28株为CR-KPN,CR-KPN均产KPC酶,4株拉丝实验阳性,多数菌株生物膜形成能力强.联合用药可有相加或协同效果.所有菌株均检出pmrA、phoP基因,未检测到mcr-1和mcr-2基因.MLST结果显示以ST11型为主.进化树表明耐多黏菌素的KPN未在本院形成医院暴发流行.使用过2种及以上不同类别的抗生素和使用过多黏菌素是多黏菌素耐药菌株产生的独立危险因素.连续使用多黏菌素可诱导耐药.结论:耐多黏菌素KPN对常用的抗菌药物几乎全部耐药,对其可采用以多黏菌素为基础的联合用药.在本院尚未分离出质粒介导的耐多黏菌素KPN.多黏菌素可诱导KPN形成耐药菌株,提示临床应合理使用抗菌药物,以延缓耐药性产生.

目的:探讨本地区从血培养分离的肺炎克雷伯菌临床株的毒力与碳青霉烯类耐药表型的关系,并对碳青霉烯类耐药高毒力肺炎克雷伯菌(CR-HVKP)进行毒力表型验证.方法:收集2016-2019年血流感染患者血培养分离的192株非重复肺炎克雷伯菌,其中96株为碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌(CRKP),96株为碳青霉烯敏感肺炎克雷伯菌(CSKP).采用VITEK-2全自动微生物分析仪检测菌株对药物的敏感性,聚合酶链反应检测碳青霉烯类耐药基因、毒力基因和荚膜分型,拉丝实验检测菌株的高黏表型,全基因组测序方法检测CR-HVKP菌株的基因组特征,并通过血清抗性试验和生物膜形成试验进一步验证CR-HVKP的毒力.结果:CRKP对常见抗菌药物耐药率高,CSKP则对常见抗菌药物较敏感;除米诺环素外,CRKP组和CSKP组菌株对抗菌药物的耐药率差异均有统计学意义(均P<0.05).96株CRKP中,92株携带碳青霉烯酶基因,以blaKPC-2为主.在毒力因子方面,4株CRKP和36株CSKP拉丝试验阳性,呈现为高黏表型,两者差异具有统计学意义(P<0.05).与CRKP组比较,CSKP组Kfu、aerobictin、iutA、ybtS、rmpA、magA、allS等毒力基因检出率均增加,荚膜抗原K1和K2检出率也增加(均P<0.05).CRKP组检出高毒力肺炎克雷伯菌(HVKP)1 株(即CR-HVKP),CSKP组检出HVKP 36株,差异有统计学意义(P<0.05).全基因组测序结果显示,CR-HVKP多位点序列分型为412,荚膜抗原为K57,携带iutA、entB、mrkD、fimH和rmpA毒力基因,生物膜形成能力和血清抵抗力强,同时携带blaSHV-145、blaTEM-1、blaCTX-M-3、fosA6、oqxA5、oqxB26和aac(3)-Ⅱd耐药基因,伴随外膜蛋白K(OmpK)35和OmpK36的异常.结论:CRKP对抗菌药物的耐药率明显高于CSKP,虽然其携带的毒力基因数和种类均少于CSKP,但也出现了碳青霉烯类耐药且高毒力的新型多位点序列分型肺炎克雷伯菌.后者可能对公共卫生造成严重威胁.

目的 通过研究山西白求恩医院2015年1月—2022年1月血流感染患者血培养分离耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌,总结其流行病学和分子生物学特点.方法 收集山西白求恩医院2015年1月—2022年1月血流感染患者血培养分离肺炎克雷伯菌为研究对象,进行细菌鉴定,药敏试验、改良碳青霉烯灭活试验筛选耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌.对所有菌株进行二代测序并分析,其中2株拉丝实验阳性耐碳青霉烯高毒力肺炎克雷伯菌进行全基因组测序.结果 山西白求恩医院2015年1月—2022年1月血流感染患者血培养分离肺炎克雷伯菌共431株,耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌共33株,其中耐碳青霉烯高毒力肺炎克雷伯菌11株,其中拉丝实验阳性2株.所有菌株对厄他培南、亚胺培南均耐药,仅1株对美罗培南中介.33株耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌中26株产KPC-2、4株产NDM-1;有3株双酶型耐碳青霉烯高毒力肺炎克雷伯菌(KPC-2/NDM-9、KPC-2/OXA-1、NDM-1/OXA-1);4株未检测到碳青霉烯耐药基因.二代测序后进化分析结果显示33株耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌主要序列类型(sequence types,ST)型别为ST11、ST147、ST412,主要血清型为KL64、KL47、KL25.质粒接合转移实验有18株转移成功.2株拉丝实验阳性菌株经全基因组测序发现携带毒力质粒和耐药质粒.结论 本院血流感染患者检出耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌从2015年逐年增加,2021年出现暴发流行.携带的碳青霉烯酶基因以KPC-2为主,ST11/KL64型菌株占多数.进一步加强临床耐药菌株筛检及控制对临床抗感染治疗作用关键.