分析耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌（carbapenem-resistant Klebsiella pneumoniae，CRKP）分子流行病学及探讨 blaKPC和 blaNDM水平传播机制，为预防和治疗CRKP提供参考依据。回顾性分析2022年1—12月湖南中医药大学第一附属医院临床非重复分离的CRKP，共计 49株。采用改良碳青霉烯灭活实验（mCIM）、EDTA-碳青霉烯灭活实验（eCIM）进行表型筛选；聚合酶链式反应（PCR）检测CRKP碳青霉烯耐药基因、β内酰胺酶耐药基因和毒力基因；多位点序列分析检测CRKP菌株的同源性。通过接合试验，推断 blaKPC和 blaNDM两种碳青霉烯耐药基因的水平传播机制。结果显示，本研究共收集到CRKP 49株，有44株携带 blaKPC，8株携带 blaNDM，其中同时携带 blaKPC和 blaNDM两种耐药基因的CRKP（ blaKPC+ blaNDM-CRKP）有3株。28株CRKP携带毒力基因（28/49，57.2%），1株CRKP拉丝试验阳性，且同时携带 Aerobactin和 rmpA两种毒力基因。共检出5种ST型，以ST11为主（41/49，83.7%）。3株 blaKPC-CRKP均接合成功，3株 blaNDM-CRKP仅1株接合成功，接合子菌株对亚胺培南以及头孢菌素类抗菌药物的敏感性均显著降低。综上，本研究CRKP耐药机制主要以产KPC酶为主，且同时携带多种β-内酰酶耐药基因，并有高毒力耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌（high virulence carbapenem-resistant Klebsiella pneumoniae，hv-CRKP）和 blaKPC+ blaNDM-CRKP的局部流行。 blaKPC和 blaNDM可通过质粒水平传播，不同菌株的水平传播效率存在差异。

高毒力肺炎克雷伯菌(hypervirulent Klebsiella pneumoniae, hvKP)可以感染健康人群和糖尿病患者，主要表现为肝脓肿合并多部位侵袭性感染，即侵袭性肺炎克雷伯菌肝脓肿综合征。近年来，耐碳青霉烯hvKP的检出率逐渐升高，给临床诊治带来了极大的挑战。目前，关于hvKP肝脓肿的发病机制、肺炎克雷伯菌的高毒力及高耐药机制并未完全阐明，对hvKP菌株的鉴定及毒力检测技术仍需改进，现就其流行病学、发病机制、高毒力与耐药机制和诊治进展进行综述。

高毒力肺炎克雷伯菌（hvKP）是较经典肺炎克雷伯菌（cKP）更易引发严重侵袭性和播散性感染的菌株。近年来世界范围内hvKP感染的报道不断增长，甚至还表现出广泛的耐药性。由高毒力和多重耐药性整合形成的碳青霉烯类耐药hvKP（CR-hvKP），已成为世界性的公共卫生挑战，但目前有关hvKP的检测流程和鉴定方法尚无统一标准。为了促进这一重要病原体的实验室筛查与鉴定、流行病学和临床特征的科学研究，在查阅大量相关文献的基础上，国内该领域的专家共同讨论达成共识，以规范hvKP的鉴定和鉴别方法，明确诊断hvKP感染。

目的:筛查住院患者肠道定植耐碳青霉烯类肠杆菌目细菌(carbapenem-resistant Enterobacterales，CRE)的检出率，并分析CRE菌株分子的流行病学特征。方法:本研究为前瞻性研究。采集2019年3月至12月安徽医科大学第二附属医院外科重症监护病房、内科重症监护病房和血液内科(移植病房)213例住院患者的粪便、直肠拭子或肛周拭子标本，应用含碳青霉烯类药物的麦康凯平板法筛查CRE菌株，并进行细菌鉴定、药物敏感试验，选取重点菌株进行全基因组测序，并分析其多位点序列分型、荚膜血清型、耐药基因、毒力基因和质粒携带特征。以菌株KPN FJ723042序列作为参考，对所有菌株序列进行单核苷酸多态性分析。结果:共检出CRE菌株23株，检出率为10.8%(23/213)；其中耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(carbapenem-resistant Klebsiella pneumoniae，CRKP)15株(65.2%)，大肠埃希菌和阴沟肠杆菌各3株(13.0%)，弗氏柠檬酸杆菌2株(8.7%)。单核苷酸多态性聚类分析表明，15株CRKP有2组主要克隆型，均在外科重症监护病房内流行。15株CRKP均属于ST11-K64型，均携带β-内酰胺类耐药基因肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶2型(β-lactamase Klebsiella pneumoniae carbapenemase 2， blaKPC-2 )基因；12株CRKP携带毒力基因黏液表型调控基因2型(regulator of mucoid phenotype gene A2, rmpA2)、 iucABCD。 结论:住院患者中肠道定植CRE的检出率较高，以ST11-K64型CRKP为主，CRKP菌株兼具多重耐药性和毒力特征，有医院传播风险。

探讨重症监护病房耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌（carbapenem-resistant Klebsiella pneumoniae，CRKP）碳青霉烯酶分布情况，并比较耐碳青霉烯类高毒力肺炎克雷伯菌（carbapenem-resistant hypervirulent Klebsiella pneumoniae，CR-hvKP）和耐碳青霉烯非高毒力肺炎克雷伯菌（carbapenem-resistant non-hypervirulent Klebsiella pneumoniae，CR-non-hvKP）两者之间的临床特征。收集并回顾性分析2020年5月至2021年3月西安交通大学第二附属医院重症监护病房49例患者分离的53株非重复CRKP菌株，使用碳青霉烯酶抑制剂增强试验进行产碳青霉烯酶菌株初筛，拉丝试验进行高黏液表型初筛，使用PCR方法检测5种主要的碳青霉烯酶基因（ blaKPC-2、 blaNDM、 blaIMP、 blaVIM和 blaOXA-48-like），常见血清型（K1和K2）和毒力基因（rmpA和iutA），将同时检测出rmpA和iutA基因的菌株视为高毒力肺炎克雷伯菌（hypervirulent Klebsiella pneumoniae，hvKP），并对CR-hvKP进行全基因组测序。针对49例感染患者的临床资料，采用独立样本 t检验，Mann-Whitney U检验，χ2检验或Fisher精确概率法比较CR-hvKP和CR-non-hvKP两者的临床特征差异。重症监护病房分离的CRKP存在广泛耐药，对多黏菌素B和替加环素仍具有良好的敏感性。CRKP主要的耐药机制为产碳青霉烯酶（52/53，98.1%），53株CRKP除1株未检测到碳青霉烯酶外，其余52株CRKP至少检测到1种碳青霉烯酶耐药基因，其中45株携带单一酶型，包括36株 blaKPC-2（36/53，67.9%）、8株 blaNDM（8/53，15.1%）和1株 blaIMP（1/53，1.9%），7株携带两种酶型 blaKPC-2和 blaNDM（7/53，13.2%）。拉丝试验和毒力基因检测结果显示，53株CRKP检出7株（13.2%）CR-hvKP，其中2株拉丝试验阳性。测序结果表明CR-hvKP主要属于ST11型。CR-hvKP感染患者年龄几乎都在60岁以上（7/7），存在侵入性治疗（7/7）、肺部感染高黏液表型（2/7）以及具有较高的死亡率（5/7）；CR-hvKP感染患者的中性粒细胞百分比（86.44±4.70）%高于CR-non-hvKP感染患者（78.90±19.15）%，差异有统计学意义（ t =-2.225， P=0.032）。综上，重症监护病房CR-hvKP菌株以产KPC-2酶，荚膜血清型K2和ST11序列型为主，需加强对CR-hvKP菌株的监测与控制，防止耐药和高毒力菌株的共同进化。

目的:分析1株碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌（CRKP）的耐药及毒力特征。方法:将浙江大学医学院附属第二医院粪便中分离到的1株CRKP命名为肺炎克雷伯菌C35，采用微量肉汤稀释法测定抗菌药物的最低抑菌浓度；全基因组测序和基因组分析确定菌株所携带耐药基因和毒力基因；核心基因组单核苷酸多态性（SNP）分型分析CRKP菌株之间的同源性关系；采用接合试验评估耐药基因的转移能力和效率；采用大蜡螟毒力实验测定菌株的毒力表型。结果:肺炎克雷伯菌C35对大多数受试药物耐药，尤其碳青霉烯类、舒巴坦和多黏菌素。SNP分型显示肺炎克雷伯菌C35与多株分离自本院不同病房的CRKP菌株具有很高的同源性。该菌属于ST11型，携带包括 blaKPC-2、 blaCTX-M-199、 mcr-1和 tet（A）变异体等在内的13种耐药基因。 blaKPC-2基因位于>69 800 bp的IncFⅡ型质粒上， blaCTX-M-199和 mcr-1基因共同位于>64 800 bp的IncI2型质粒上， tet（A）变异体位于83 628 bp的不可分型质粒上，3种质粒均为可接合性质粒。肺炎克雷伯菌C35还携带 rmpA和 rmpA2毒力基因以及气杆菌素（aerobactin）相关基因 iucABCD，为典型的碳青霉烯耐药高毒力肺炎克雷伯菌（CR-hvKP）。该菌在大蜡螟感染模型中也显示了较强的毒力表型，感染肺炎克雷伯菌C35菌株48 h后大蜡螟幼虫存活率仅为16.7%，明显低于无毒力对照菌株的80.0%。 结论:本研究在1株肠道定植CR-hvKP中检测到多个可接合性耐药质粒，包括同时携带 blaCTX-M-199和 mcr-1基因的IncI2质粒，需引起警惕，并对此类菌株进行主动监测。

探讨高毒力肺炎克雷伯菌（Hypervirulent Klebsiella pneumoniae，HvKP）生物被膜形成能力及耐药性，为HvKP感染治疗提供科学依据。回顾性收集2021年1至12月长沙市中心医院临床感染标本所分离的非重复肺炎克雷伯菌96株，同时收集患者临床资料。黏液拉丝试验初步区分HvKP和普通肺炎克雷伯菌（Classic Klebsiella pneumoniae，CKP），微孔板法测定肺炎克雷伯菌（Klebsiella pneumoniae，KP）临床菌株的生物被膜形成能力，Vitek 2 Compact全自动微生物鉴定/药敏分析系统进行细菌鉴定及药敏试验，比较分析HvKP组患者和CKP组患者临床资料、菌株生物被膜形成能力以及耐药性。结果显示，96株非重复KP中共分离出20株HvKP，检出率为20.8%，HvKP中呼吸道标本占比最高，达75.0%。HvKP感染患者肝胆疾病患病率以及多部位感染率高于CKP感染患者，差异具有统计学意义（ χ2=5.184、7.488， P=0.023、0.006）。两组患者从性别、年龄、是否入住ICU、高血压、糖尿病、冠心病、肺部疾病、泌尿系统疾病、中枢神经系统疾病、实验室检测指标比较，差异无统计学意义（ P均>0.05）。HvKP中有17株（85.0%）能形成生物被膜，其中弱成膜2株（10.0%）、中等成膜10株（50.0%）、强成膜5株（25.0%）；而76株CKP有71株（93.4%）能形成生物被膜，其中弱成膜13株（17.1%）、中等成膜30株（39.5%）、强成膜28株（36.8%），HvKP生物被膜形成率与CKP比较，差异无统计学意义（ χ2=1.470， P=0.225）。HvKP整体耐药率不高，但发现1株耐碳青霉烯类抗生素的多重耐药HvKP，多重耐药HvKP检出率（5.0%）低于多重耐药CKP（28.9%），差异具有统计学意义（ χ2=4.984， P=0.026）。HvKP对哌拉西林/他唑巴坦、氨曲南、环丙沙星、左氧氟沙星、头孢他啶、头孢比肟、妥布霉素、米诺环素、多西环素、复方磺胺甲噁唑的耐药率低于CKP，差异具有统计学意义（ P均<0.05）。综上，本研究高毒力肺炎克雷伯菌大多能够形成生物被膜，但与普通肺炎克雷伯菌比较成膜能力差异不明显，HvKP对常用抗菌药物保持较高的敏感性，但不能忽视该菌的耐药性监测。

目的:明确铁载体毒力基因 entB对碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌（CRKP）毒力的影响。 方法:从昆明医科大学第一附属医院收集到的30株CRKP菌株中筛选出CRKP-27作为实验菌株，规律间隔成簇短回文重复序列（CRISPR）-Cas9基因敲除技术构建 entB基因缺失株Δ entB、回补株C-Δ entB，并通过PCR验证敲除及回补是否成功。观察CRKP-27、Δ entB、C-Δ entB菌株的菌落形态并进行拉丝试验，初步了解 entB对CRKP菌落形态和毒力表型的影响。绘制菌株生长曲线，测定 entB对CRKP菌株生长的影响。铬天青S（CAS）检测液对菌株产铁载体能力进行定量检测。建立小鼠腹腔感染模型，观察小鼠生存率直观了解 entB基因对CRKP毒力的影响。计量资料均采用平均数±标准差表示，服从正态分布的数据采用方差分析进行组间比较，不服从正态分布的数据采用Kruskal-Wallis秩和检验。小鼠生存分析用Log-Rank检验进行比较。 P<0.05表示差异具有统计学意义。 结果:PCR结果显示缺失株和回补株构建成功。 entB基因对CRKP的菌落形态、荚膜和毒力表型无明显影响。Δ entB组的生长速度明显快于CRKP-27组（ P=0.008）和C-Δ entB组（ P=0.001），说明 entB基因削弱了CRKP菌株的生长能力。 entB组与CRKP-27组（ P=0.001）和C-Δ entB组（ P=0.001）相比铁载体产量明显下降，分别下降11.739 3%和11.964 2%，说明 entB基因显著增加了CRKP产铁载体能力。动物实验中，与CRKP-27组（ P=0.023）和C-Δ entB组（ P=0.024）相比，Δ entB组小鼠生存率明显增高，说明 entB基因增加了CRKP菌株的毒力。 结论:铁载体毒力基因 entB明显减弱了菌株的生长能力，但使CRKP产铁载体能力、毒力明显增强。

高毒力肺炎克雷伯菌（hvKP）具有较高毒力及高黏液性，易造成健康宿主感染，以肝脓肿最为常见，并引发多部位侵袭性感染及血流感染。目前耐药hvKP相关菌株，尤其是耐碳青霉烯类高毒力肺炎克雷伯菌（CR-hvKP）的出现，给临床诊疗带来更大的挑战。本文从hvKP的流行现状、毒力因子、耐药机制及其感染治疗等方面进行综述。

目的:探讨中江县肺炎克雷伯菌毒力相关表型/基因、荚膜血清型、耐药表型、序列分型（ST）的分布特征，提高临床认识，为细菌耐药防控和临床合理用药提供依据。方法:回顾分析中江县人民医院2019年7-12月分离的肺炎克雷伯菌135株的资料。采用WalkAway-40Plus全自动分析系统进行菌种鉴定及药敏检测；采用拉丝实验鉴定菌株高黏液表型；采用聚合酶链式反应筛查高毒力荚膜血清型和毒力基因；采用多位点序列分析（MLST）鉴定菌株ST。结果:135株菌中高黏液型菌株所占比例为50.4%。毒力基因 iucA、 iroN、 rmpA阳性率分别为54.1%、54.8%、54.1%。荚膜血清K1、K2型菌株所占比例分别为11.9%、15.6%。共鉴定出65种ST型别，以ST23和ST37型最为常见，占比分别为11.1%和6.7%。菌株对16种抗菌药物的耐药率为0.0%~25.2%，对碳青霉烯类抗菌药物、阿米卡星、替加环素的耐药率均不足1%。高黏液型菌株的毒力基因阳性率显著高于非高黏液型菌株（ P < 0.001），其对头孢菌素类药物的耐药率显著低于非高黏液型菌株（ P < 0.001）。 结论:中江县肺炎克雷伯菌呈现“高毒力、低耐药”特征，应持续监测该地区肺炎克雷伯菌毒力及耐药性的变化，警惕高毒力菌株快速传播。