目的:探讨ZNA （ZIP Nucleic Acid）探针的PCR性能及其在沙眼衣原体（CT）核酸定量检测中的研究。方法:使用CT阳性质粒，比较偶联不同ZIP数量的ZNA探针的PCR扩增曲线差异；比较ZNA探针与29mer普通Taqman探针（DNA长探针）、20mer普通Taqman探针（DNA短探针）、MGB探针在PCR扩增曲线、反复冻融稳定性及低浓度质粒检出率的差异；使用CT阳性临床样本，比较ZNA探针与DNA长探针、DNA短探针、MGB探针扩增曲线差异及低浓度样本检出率的差异。结果:（1）偶联5个ZIP单位的ZNA探针Ct值和荧光值最优，与偶联1个ZIP的探针相比：Ct值提升1.34 （灵敏度提升2.37倍），荧光值提升30%。（2）偶联5个ZIP的ZNA探针的扩增效率是优选的普通Taqman探针和MGB探针的2.14~2.64倍，荧光值高17%~90%。（3）四组探针冻融稳定性结果显示，ZNA探针的稳定性最佳，低浓度（1×10 4拷贝/mL）的Ct值偏离最小（CV%= 1.4），优于DNA长探针、DNA短探针、MGB探针（CV%= 1.7~3.7）。（4）用35例CT临床样本比较四组探针（DNA长探针、DNA短探针、MGB探针、ZNA探针）的PCR扩增性能，相对于其他三组探针，ZNA探针的扩增灵敏度分别提升1.60倍、0.99倍和1.06倍，且Ct值一致性分析结果显示，ZNA探针对临床样本的检出性能提升更优。（5）使用低浓度质粒模板（分别为200、100、50和10拷贝/mL）比较四组探针的扩增灵敏度，ZNA探针的检出率均优于DNA长探针、DNA短探针、MGB探针；在最低浓度10拷贝/mL时，其他三组探针的检出率只有15%~20%，ZNA探针仍有30%。（6）在20例不同低浓度（分别为200、150、100和50拷贝/mL）临床样本中ZNA探针检出率最高，分别为100%、95%、90%和70%。 结论:偶联5个ZIP的ZNA探针的扩增效率、荧光值、冻融稳定性、临床样本的扩增性能及低浓度样本检出灵敏度都优于普通Taqman探针和MGB探针，ZNA探针可作为一种设计灵活和合成易得的新探针技术，在基因表达领域可进一步提升检测的灵敏度及低浓度样本的检出率。

目的:基于生物信息学筛选肺腺癌预后基因，探讨预后基因与免疫治疗反应性的关系，同时筛选其潜在药物。方法:在基因表达谱(GEO)数据库用GEO2R对GSE30219、GSE31210、GSE32863、GSE33532、GSE40791和GSE75037数据集进行差异表达分析，取 P<0.05且Log2(fold change)≥1的基因，用在线网站取交集得共同上调基因。在GSE31210、GSE42127、GSE68465、GSE72094数据集和癌症基因图谱计划(TCGA)数据库中获取生存资料，用R软件对上调基因行单因素COX回归分析，得到7个预后关键基因。通过基因表达谱交互分析(GEPIA2)网站验证基因表达与预后的关系。使用人类蛋白图集(HPA)在线工具验证关键基因的蛋白表达水平。京东基因组百科全书(KEGG)和基因本体论(GO)进行基因功能富集分析。使用仙桃学术分析关键基因与免疫治疗反应的相关性。最后通过CellMiner数据库筛选关键基因的敏感性药物。两组间的比较通过Student’s t检验评估。 结果:共获得142个共同上调基因，经单因素COX回归分析和GEPIA2网站验证得到7个预后关键基因，即细胞周期蛋白B2(CCNB2)、细胞分裂周期蛋白20(CDC20)、瓣状核酸内切酶1(FEN1)、鸟嘌呤核苷酸交换因子(GEF)上皮细胞转化序列2(ECT2)、微小染色体维持蛋白4(MCM4)、母胚亮氨酸拉链激酶(MELK)和溶质载体家族2成员1(SLC2A1)。通过GO和KEGG功能富集分析，关键基因生物学功能主要富集在作用于DNA的催化活性方面，以及在细胞周期、人类T细胞白血病病毒1感染等信号通路上。此外，免疫相关性分析显示7个关键基因与肿瘤突变负荷(TMB)、表面抗原分化簇274(CD274)表达以及肿瘤免疫功能障碍和排斥评分(TIDE)明显相关。最后，7个关键基因得到37个对应的敏感性药物。结论:CCNB2、CDC20、FEN1、ECT2、MCM4、MELK和SLC2A1可以作为肺腺癌预后不良标志物，且可能与免疫治疗低反应性相关，同时得到37个对应的敏感性药物。

目的:观察微小RNA-135b(miR-135b)、亮氨酸拉链肿瘤抑制基因1(LZTS1)信使核糖核酸(mRNA)、人附睾蛋白4(HE4)mRNA在卵巢癌中的表达水平及临床意义.方法:选取2018年1月至2020年11月本院接收的56例卵巢癌患者,收集手术切除的卵巢癌组织及其对应的癌旁组织.实时荧光定量PCR法检测两组卵巢组织中miR-135b、LZTS1 mRNA、HE4 mRNA的表达水平;分析卵巢癌组织中miR-135b、LZTS1 mRNA、HE4 mRNA表达水平与卵巢癌临床病理特征的关系及miR-135b、LZTS1 mRNA及HE4 mRNA表达水平对卵巢癌的诊断价值.结果:卵巢癌组miR-135b、HE4 mRNA表达水平均明显高于癌旁组(P均<0.05),LZTS1 mRNA表达水平明显低于癌旁组(P<0.05);卵巢癌组织中miR-135b、LZTS1 mRNA、HE4 mRNA表达水平与卵巢癌患者肿瘤分化程度、TNM分期及淋巴结转移相关(P均<0.05);miR-135b、LZTS1 mRNA、HE4 mRNA对卵巢癌诊断的曲线下面积(AUC)分别为0.781、0.755、0.773,对应截断值分别为1.25、0.87、1.20,此时对应灵敏度分别为74.5％、76.4％、72.7％,特异度分别为77.2％、72.9％、77.2％;三者联合诊断卵巢癌的AUC为0.943,其灵敏度、特异度分别为90.9％、84.2％.结论:卵巢癌患者卵巢癌组织中miR-135b、HE4 mRNA呈高表达,LZTS1 mRNA呈低表达,miR-135b、LZTS1 mRNA、HE4 mRNA对卵巢癌有一定诊断价值,三者联合可有效提高对卵巢癌的诊断效能.

为探究miR-760靶基因碱性亮氨酸拉链转录因子ATF样蛋白3(basic leucine zipper ATF-like transcription factor 3,BATF3)在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织中的表达及其对肿瘤细胞增殖与转移的影响,收集2016年6月至2018年6月于兰州大学第一医院手术治疗的36例NSCLC患者肿瘤组织与癌旁正常组织,qRT-PCR检测组织中miR-760和BATF3的mRNA表达情况.培养NSCLC细胞系A549、H1299和H23及正常人肺上皮细胞BEAS-2B,qRT-PCR和Western blotting检测细胞中miR-760和BATF3的表达情况;MTT法检测miR-760和BATF3对肿瘤细胞增殖能力的影响;Transwell法检测miR-760和BATF3对肿瘤细胞迁移能力的影响;双荧光素酶报告基因实验验证BATF3与miR-760在NSCLC中的靶向作用关系.结果 表明,miR-760在NSCLC组织中的表达与癌旁正常组织相比显著下调(P＜0.01),同时miR-760在NSCLC细胞系中的表达量显著下调,其中在A549细胞中表达最低(均P＜0.01);BATF3 mRNA在NSCLC组织中的表达量与邻近正常组织相比显著上调(P＜0.01),同时BATF3在NSCLC细胞系中的表达也显著上调,其中在A549细胞中表达最高(均P＜0.01).此外,miR-760过表达抑制NSCLC细胞的增殖和迁移;BATF3是NSCLC肿瘤细胞中miR-760的直接靶点;miR-760表达升高显著抑制NSCLC细胞中BATF3的表达(均P＜0.01).由此,miR-760的表达抑制NSCLC组织中BATF3的表达,miR-760通过调控BATF3的表达抑制NSCLC细胞的增殖和迁移.综上,miR-760可能通过调控BATF3的表达在NSCLC中部分发挥抑癌基因的作用.

目的 观察胃癌组织长链非编码RNA(lncRNA)碱性亮氨酸拉链家族转录因子V-Maf鸟类肌筋膜纤维肉瘤癌基因同源物G-反义核糖核酸1(MAFG-AS1)、微小RNA-143-3p(miR-143-3p)表达变化,并探讨二者表达与患者临床病理特征和预后的关系.方法 选择胃癌患者105例,取手术切除的胃癌组织及其配对的癌旁正常组织,采用RT-qPCR技术检测lncRNA MAFG-AS1、miR-143-3p表达.收集胃癌患者临床病理资料和术后随访资料,分析胃癌组织lncRNA MAFG-AS1、miR-143-3p表达与患者临床病理特征和预后的关系.结果 胃癌组织lncRNA MAFG-AS1相对表达量高于癌旁正常组织,miR-143-3p相对表达量低于癌旁正常组织(P均<0.05).胃癌组织lncRNA MAFG-AS1、miR-143-3p表达与肿瘤组织分化程度、浸润深度、pTNM分期、淋巴结转移有关(P均<0.05),而与性别、年龄、肿瘤直径无关(P均>0.05).胃癌组织lncRNA MAFG-AS1表达与miR-143-3p表达呈负相关关系(r=-0.699,P<0.05).以lncRNA MAFG-AS1、miR-143-3p相对表达量的均数为临界值,将患者分为lncRNA MAFG-AS1高表达者55例与lncRNA MAFG-AS1低表达者50例、miR-143-3p高表达者48例与miR-143-3p低表达者57例.lncRNA MAFG-AS1高表达者3年总生存率低于lncRNA MAFG-AS1低表达者,miR-143-3p高表达者3年总生存率高于miR-143-3p低表达者(χ2分别为4.783、5.383,P均<0.05).结论 胃癌组织lncRNA MAFG-AS1表达上调、miR-143-3p表达下调,二者表达变化与胃癌恶性生物学行为和患者预后不良有关.