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补中益气汤对盆腔脏器脱垂模型大鼠子宫骶韧带组织转化生长因子β-3和微小核糖核酸-30d表达的影响
编辑人员丨1周前
目的:观察中药补中益气汤对盆腔脏器脱垂模型大鼠子宫骶韧带组织中转化生长因子β-3(TGFβ-3)、微小核糖核酸-30d(miR-30d)表达的影响。方法:数字抽签分组,16只空白对照组大鼠分为两组(每组8只):(1)A1组:饲养4周;(2)A2组:卵巢切除,生理盐水灌胃8周。64只盆腔脏器脱垂模型大鼠分为8组(每组8只):(1)B1组:饲养4周;(2)B2组:生理盐水灌胃8周;(3)C1组、C2组:低浓度补中益气汤(3.5 ml·kg -1·d -1)灌胃4周、8周;(4)D1组、D2组:中浓度补中益气汤(7.0 ml·kg -1·d -1)灌胃4周、8周;(5)E1组、E2组:高浓度补中益气汤(14.0 ml·kg -1·d -1)灌胃4周、8周。反转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定各组大鼠子宫骶韧带组织胶原蛋白COL1A1、COL3A1和TGFβ-3、miR-30d的表达。 结果:B1组较A1组COL1A1、COL3A1表达下降(均 P<0.01),TGFβ-3、miR-30d表达升高(均 P<0.01);治疗4周组组间比较,COL1A1表达E1组较C1组升高( P<0.01),COL3A1相对表达量随补中益气汤剂量升高,D1组较C1、E1组较D1组均升高(均 P<0.01)。TGFβ-3表达D1、E1组较C1组升高( P<0.01);miR-30d表达D1、E1组较C1组下降(均 P<0.01)。治疗8周组组间比较,COL1A1表达D2组较C2组升高( P<0.01),而E2组较D2组下降( P<0.01);COL3A1 、TGFβ-3表达D2组较C2组升高(均 P<0.01),TGFβ-3表达E2组较D2组下降( P<0.01);miR-30d表达D2组较C2组下降( P<0.01),E2组较D2组升高( P<0.01);补中益气汤治疗4周组与B1组比较,D1、E1组COL1A1、COL3A1、TGFβ-3表达升高( P<0.01),C1、D1、E1组miR-30d表达下降( P<0.01);补中益气汤治疗8周组与B2组比较,D2、E2组COL1A1、COL3A1表达升高( P<0.01),C2、D2、E2组TGFβ-3表达升高、miR-30d表达均下降(均 P<0.01)。 结论:补中益气汤可增加盆腔脏器脱垂模型大鼠子宫骶韧带组织中胶原蛋白COL1A1、COL3A1的合成,其作用机制可能与上调大鼠子宫骶韧带组织中TGFβ-3的表达和降低组织中miR-30d的表达水平有关。
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编辑人员丨1周前
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数字RT-PCR与荧光定量RT-PCR法检测草莓中甲型肝炎病毒
编辑人员丨1周前
目的:建立甲型肝炎病毒(hepatitis A virus,HAV)数字芯片式RT-PCR(dRT-PCR)方法并与real time RT-PCR(RT-qPCR)方法进行比较,选出适用于检测草莓中HAV的最佳方法。方法:提取HAV疫苗RNA,优化dRT-PCR的反应条件,评价其特异性;碱性洗脱-PEG浓缩法对草莓标本进行前处理后提取核酸,同时采用dRT-PCR与RT-qPCR方法,检测纯水或草莓基质中HAV疫苗RNA的敏感性、抑制率;比较人工污染草莓中HAV的回收率,并应用于市售标本中的检测。结果:确立了dRT-PCR反应的最适退火温度为60 ℃,最佳引物、探针浓度为0.4 μmol/L、0.4 μmol/L、0.2 μmol/L,特异度良好;两种检测方法检测HAV疫苗RNA在纯水或草莓基质中的敏感性没有明显差异,dRT-PCR的抑制率较低。dRT-PCR与RT-qRCR在检测较高浓度HAV污染草莓标本时的回收率分别为12.90±0.006%、30.12±0.02%;在检测较低浓度HAV污染草莓标本时的回收率分别为18.27±0.07%、10.85±0.03%,差异均具有统计学意义( P<0.05)。对市售标本进行检测,两种方法检测结果均为阴性。 结论:本研究建立的dRT-PCR法,与RT-qPCR检测不同基质中的HAV RNA敏感性没有明显差异,但dRT-PCR对PCR反应抑制物有较好的耐受能力,在检测低浓度HAV时回收率较高。两种检测方法均可用于草莓中甲型肝炎病毒的定量检测,可根据具体实际情况进行选择。
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编辑人员丨1周前
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甲型肝炎病毒四种核酸检测方法的比较
编辑人员丨1周前
目的:比较甲型肝炎病毒(hepatitis A virus,HAV)四种核酸检测方法。方法:采用A、B、C实时荧光定量RT-PCR(RT-qPCR)及D微滴芯片数字RT-PCR(RT-dPCR)分别对HAV质粒标准品、梯度稀释的HAV疫苗进行灵敏度检测;对相关病毒核酸进行特异性检测;用A、B、C方法对40份人工污染HAV牡蛎、市售牡蛎及血清标本、HAV疫苗标本进行检测,比较检出率;比较A、D方法对低浓度HAV人工污染牡蛎的回收率。结果:A、B方法对质粒标准品均可检测至10拷贝/μL;检测梯度稀释的HAV疫苗,A、B、C方法的斜率、R 2值、扩增效率(-3.446~-3.297、0.991~0.998、95.07%~101.051%)均在可接受范围;40份不同来源的标本,A、B、C方法的阳性检出率分别是50%(20/40)、47.5%(19/40)、55%(22/40),差异无统计学意义( χ2=0.467, P=0.792);A、D方法对梯度稀释疫苗检测灵敏度无明显差别,对低浓度HAV人工污染牡蛎检测,D方法回收率高于A方法,但差异无统计学意义(F=0.294,P=0.642)。 结论:A、B、C方法无明显差异,较方便快捷;在检测低浓度HAV污染的食品时,D方法略有优势,但检测成本稍高,选取检测方法可根据实际情况选择。
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编辑人员丨1周前
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PSD-95在七氟烷麻醉致新生大鼠远期学习记忆功能损害机制中的作用
编辑人员丨1周前
目的:探讨突触后致密物-95(postsynaptic density-95,PSD-95)在七氟烷麻醉致新生大鼠远期学习记忆功能损害机制中的作用。方法:选择SPF级鼠龄7 d的SD大鼠54只,按照随机数字法分为3组:对照组(暴露于空气)、模型组(暴露于2.1%的七氟烷,4 h/d,连续3 d)、PSD-95抑制剂组(吸入七氟烷+腹腔注射NA-1,连续5 d),每组18只。Morris水迷宫实验和新异物体识别实验检测各组大鼠的视空间学习记忆和识别记忆能力;RT-qPCR检测大鼠海马组织kalirin、Rac1和PSD-95的mRNA水平;Western blot检测大鼠海马组织kalirin、Rac1、PSD-95及凋亡相关蛋白Caspase-3、Bcl-2和Bax的表达;免疫组化检测海马组织kalirin和Rac1的表达水平。采用SPSS 23 .0软件对数据进行统计分析,采用重复测量方差分析、单因素方差分析进行组间比较。结果:重复测量方差分析显示,在水迷宫实验中三组大鼠寻找平台潜伏期、游泳距离的组间和时间交互作用显著,均差异有统计学意义( F时间×组别=36.539,41.548;均 P<0.01)。简单效应分析显示,模型组中第2~6天的平台潜伏期及游泳距离均长于对照组(第2~6天平台潜伏期: t=14.039,17.147,13.155,13.831,27.247,均 P<0.01;第2~6天游泳距离: t=10.122,20.987,7.267,10.011,8.121,均 P<0.01)。与模型组比较,PSD-95抑制剂组大鼠在2~6 d的平台潜伏期延长( t=7.948,14.768,11.582,12.832,24.346;均 P<0.01),游泳距离增加( t=8.235,24.325,11.234,12.031,7.036;均 P<0.01)。新物体识别实验发现,模型组中的新物体探索时间显著长于对照组[(21.30±2.27)s,(19.21±1.42)s, t=1.843, P<0.01],PSD-95抑制剂组中的新物体探索时间[(26.83±2.13)s]明显长于模型组( t=4.844, P<0.01)。模型组中的新异物体差异指数显著低于对照组[(0.41±0.12),(0.59±0.10), t=3.416, P<0.01],PSD-95抑制剂组中的新异物体差异指数[(0.37±0.08)]明显低于模型组( t=0.696, P<0.05)。qRT-PCR结果发现,模型组中的Rac1、kalirin和PSD-95 mRNA表达均低于对照组( t=9.969,3.954,6.561;均 P<0.05); PSD-95抑制剂组的Rac1、kalirin和PSD-95 mRNA表达均低于模型组( t=2.132,2.251,3.502,均 P<0.05)。免疫组化结果显示,模型组大鼠海马CA1区的kalirin和Rac1均低于对照组[kalirin:(8.18±1.94),(15.47±3.35), t=11.47, P<0.01;Rac1:(3.72±1.53),( 8.17±2.91), t=6.76, P<0.01],PSD-95抑制剂组中的kalirin(4.98±1.53)和Rac1(2.73±0.37)均低于模型组[kalirin: t=10.28, P<0.01;Rac1: t=4.72, P<0.05]。Western blot检测发现,模型组中的Caspase-3和Bax蛋白水平均明显高于对照组[Caspase-3:(1.37±0.16),(0.54±0.01), t=5.71, P<0.01;Bax:(1.87±0.31),(1.23±0.25), t=12.01, P<0.01]; PSD-95抑制剂组中的Caspase-3[(1.79±0.17)]和Bax[(2.19±0.21)]蛋白水平明显高于模型组( t=9.87,16.19,均 P<0.01);模型组中的Bcl-2蛋白水平明显低于对照组[(1.22±0.21),(1.96±0.38), t=11.92, P<0.01],PSD-95抑制剂组中的Bcl-2蛋白水平明显低于模型组[(1.01±0.19), t=10.73, P<0.01)]。 结论:七氟烷麻醉可致新生大鼠远期学习记忆功能损害和PSD95蛋白表达降低,抑制PSD95的表达可加重这种损害,这可能与PSD95参与的神经元突触可塑性和神经凋亡相关。
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编辑人员丨1周前
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CBX7在肾脏缺血再灌注损伤中对内质网应激的作用
编辑人员丨1周前
目的:探讨CBX7抑制剂(UNC3866)对肾脏缺血再灌注(IR)损伤的保护作用及其机制。方法:使用随机数字列表法将成年雄性小鼠分为六组:假手术组、缺血组(IR组)、缺血+二甲基亚砜(DMSO)组、缺血+2.5 mg/kg UNC3866组、缺血+5 mg/kg UNC386组、缺血+10 mg/kg UNC3866组。体外培养人肾小管上皮细胞(HK-2细胞),构建细胞缺氧复氧模型后将细胞分为:对照组、缺氧组、缺氧+DMSO组、缺氧+UNC3866组。比较六组小鼠肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)水平的变化,采用HE染色及TUNEL染色比较六组小鼠的肾脏病理学改变以及损伤的组织病理学评分,采用Western blot检测小鼠和体外培育细胞内质网应激相关蛋白的表达水平,采用RT-PCR法检测相关mRNA的表达情况。结果:与假手术组相比,IR组的Scr和BUN显著升高( P<0.05)。用不同浓度的UNC3866处理后,IR组的Scr和BUN水平以及Jablonski等级评分均有不同程度下降( P<0.05)。在UNC3866处理后,IR造成的细胞形态学的改变出现了改善,以10 mg/kg浓度时改变最小,同时,IR造成的凋亡细胞数量减少,以10 mg/kg浓度效果最佳。IR损伤后小鼠肾脏组织中内质网应激相关蛋白及其mRNA的水平较假手术组显著提高( P<0.05),使用10 mg/kg的UNC3866处理后,IR组的内质网应激相关蛋白及其相关mRNA水平降低( P<0.05)。用HK-2细胞建立缺氧复氧模型模拟肾脏细胞IR损伤后,内质网应激相关蛋白及相关mRNA水平显著提高,在培养基中加入UNC3866细胞后,内质网应激相关蛋白及mRNA的水平降低。 结论:CBX7抑制剂可通过抑制内质网应激来减轻肾脏IR损伤。
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编辑人员丨1周前
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Erastin对大鼠焦虑抑郁样行为及海马铁死亡相关蛋白表达的影响
编辑人员丨1周前
目的:探讨海马注射铁死亡诱导剂Erastin对大鼠焦虑抑郁样行为及其海马铁死亡相关蛋白表达的影响。方法:40只6周龄健康雄性SD大鼠按照随机数字法分为对照组、Erastin低剂量(200 ng/μL)组、Erastin中剂量组(400 ng/μL)、Erastin高剂量组(600 ng/μL)、脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)组(LPS组,10 μg/L),每组8只大鼠。向各组大鼠双侧海马注射相应药物(每侧2.5 μL)后于第4天开始进行体质量及行为学检测,行为学测试包括糖水偏爱实验(sucrose preference test,SPT)、旷场实验(open field test,OFT)、强迫游泳实验(forced swimming test,FST)和高架十字迷宫实验(elevated plus maze,EPM),观察大鼠的抑郁及焦虑样行为。采用Western blot技术和RT-PCR技术分别检测海马铁死亡相关蛋白及其mRNA表达水平,包括谷胱甘肽过氧化物酶4 (glutathione peroxidase 4,GPX4)、环氧化酶2 (cyclo-oxygenase 2,COX2)、铁蛋白重链1(ferritin heavy polypeptide 1,FTH1)、长链酯酰辅酶A合成酶4 (long-chain fatty acyl-CoA synthetase 4,ACSL4)、溶质载体家族7成员11 (solute carrier family 7 member 11,SLC7A11)。采用SPSS 22.0软件进行统计分析,多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较使用LSD检验。结果:(1)体质量及行为学检测结果:注射药物前,5组大鼠体质量和行为学检测结果均差异无统计学意义( F=0.02~1.15,均 P>0.05)。海马给药后,与对照组相比,Erastin中剂量组大鼠表现出更明显的焦虑及抑郁样行为,包括体质量减轻[(245.20±5.24)g,(267.45±13.16)],糖水偏爱率降低[(32.14±8.51)%,(68.17±13.67)%],强迫游泳不动时间[(37.00±7.58)s,(12.50±5.51)s]及高架闭合臂时间百分比[(89.43±4.77)%,(59.96±9.91)%]增加,旷场中心区停留时间[(6.01±2.57)s,(16.49±7.21)s]及高架开放臂时间百分比[(5.00±3.83)%,(19.63±5.91)%]减少,均差异有统计学意义(均 P<0.05)。(2)铁死亡相关蛋白的表达:给药后,5组大鼠海马组织FTH1、GPX4、SLC7A11、COX2和ACSL4的mRNA水平( F=2.23,8.37,2.91,7.60,3.16,均 P<0.05)和蛋白表达水平( F=3.31,40.13,8.52,3.70,70.79,均 P<0.05)均差异有统计学意义。Erastin中剂量组大鼠海马组织FTH1、GPX4和SLC7A11的mRNA水平和蛋白表达均低于对照组(均 P<0.05),COX2和ACSL4的mRNA水平和蛋白表达水平均高于对照组(均 P<0.05)。 结论:海马微量注射Erastin(400 ng/μL)可诱发大鼠海马组织铁死亡,并可诱导大鼠出现焦虑抑郁样行为。
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编辑人员丨1周前
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微小RNA-130a-3p在心肌梗死大鼠心肌组织的表达及其对炎症的影响
编辑人员丨1周前
目的:观察心肌梗死(MI)大鼠心肌微小RNA(miR)-130a-3p的表达及其对心肌炎症的影响。方法:使用随机数字法将雄性SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、MI组、miR-130a-3p组(心肌注射miR-130a-3p mimics)和阴性对照组(心肌注射miR-130a-3p mimics阴性对照),每组15只。心脏彩超测定左心室收缩末期内径(LVDs)、左心室舒张末期内径(LVDd)、左心室长轴缩短分数(FS)、左心室射血分数(LVEF);原位缺口末端标记法(TUNEL)法测定心肌凋亡指数;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清肌钙蛋白T(TnT)、肌钙蛋白I(TnI)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、N末端B型利钠肽前体(NT-proBNP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素(IL)-1β水平;反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法测定心肌组织miR-130a-3p、NOD样受体家族3炎症小体(NLRP3)的表达;蛋白质印迹法(Western blot)测定心肌组织B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)和NLRP3的表达水平。各组间比较采用方差分析。结果:MI组miR-130a-3p水平明显低于Sham组( t=4.365, P<0.05)。miR-130a-3p组大鼠LVDs和LVDd低于MI组( t=4.475、5.172、 P<0.05),FS和LVEF高于MI组( t=3.679、5.442, P<0.05)。miR-130a-3p组血清TnT、TnI、CK-MB、NT-proBNP、TNF-α、IL-1β水平明显低于MI组( t=4.265、5.382、3.976、4.436、7.246、4.854, P<0.05)。Sham、MI、阴性对照组和miR-130a-3p组凋亡指数依次为(5.14±0.62)%、(34.54±4.37)%、(35.27±4.55)%和(18.76±2.48)%,miR-130a-3p组凋亡指数低于MI组( t=4.356, P<0.05)。miR-130a-3p组NLRP3 mRNA和bax蛋白、NLRP3蛋白相对表达量均低于MI组( t=6.296、11.356、8.235, P<0.05),bcl-2蛋白水平相对表达量高于MI组( t=8.876, P<0.05)。 结论:miR-130a-3p在MI大鼠心肌组织中呈低表达,上调miR-130a-3p表达可以减轻MI大鼠心肌炎症和细胞凋亡。
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编辑人员丨1周前
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褪黑素通过NF-κB通路抑制脑室周边白质内星形胶质细胞活化的机制研究
编辑人员丨1周前
目的:探讨褪黑素(melatonin, MEL)对脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导的SD幼鼠大脑星形胶质细胞活化及远期焦虑样行为的影响。方法:将新生鼠随机(随机数字法)分为对照组(CON)组、LPS组、LPS+MEL组。LPS组:腹腔注射P1d幼鼠LPS(1 mg/kg)制作脓毒症模型,CON组仅注射等体积生理盐水,LPS+MEL组于建模0.5 h后注射MEL溶液10 mg/kg。在各组注射后不同时间点分为3 d、7 d、28 d三个亚组。免疫荧光染色和Western Blot法检测三组3 d、7 d后胼胝体内GFAP、TNF-α的表达变化;采用旷场实验检测28 d动物焦虑样行为。细胞实验以LPS(1 μg/mL)诱导原代星形胶质细胞为细胞模型, 随机分为对照组、LPS组、LPS+MEL组和LPS+MEL+褪黑素受体抑制剂(Luzindole,LUZ)组, 采用免疫荧光观察各组GFAP、TNF-α表达情况,Western Blot法检测GFAP、TNF-α、p-NF-κBp65、NF-κBp65蛋白表达,荧光定量PCR检测对照组、LPS组、LPS+MEL组神经营养因子GDNF、BDNF mRNA的表达。计量资料多组间比较采用单因素及双因素方差分析,以 P<0.05为差异有统计学意义。 结果:与CON组相比,LPS组中央区活动时间、中央路程/总路程比例下降,MEL干预可明显改善LPS组大鼠焦虑样行为;与LPS组相比,MEL组可降低LPS注射后3 d、7 d胼胝体内GFAP、TNF-α的表达( P<0.05)。与LPS刺激组相比,MEL可降低星形胶质细胞GFAP、TNF-α、p-NF-κBp65的表达上调( P<0.05),该效应可被LUZ所阻断( P<0.05)。此外,与LPS组相比,MEL预处理原代星形胶质细胞可逆转LPS诱发的GDNF、BDNF表达下调( P<0.05)。 结论:褪黑素可改善LPS诱导的脓毒症新生鼠远期焦虑样行为,其作用机制可能是通过NF-κB途径抑制星形胶质细胞活化及炎症反应有关。
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编辑人员丨1周前
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小鼠骨髓间充质干细胞通过糖代谢途径减轻肾缺血再灌注损伤
编辑人员丨1周前
目的:探究小鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)对肾缺血再灌注损伤(IRI)的作用。方法:雄性C57BL/6小鼠30只,根据随机数字法分为6组(每组5只):空白组、常氧BMSC外泌体组、低氧BMSC外泌体组、IRI组、常氧BMSC外泌体+IRI组、低氧BMSC外泌体+IRI组。缺血25 min,再灌注24 h后行肾脏功能和组织病理检查。另取小鼠30只,分为三组(IRI组、常氧+IRI组、低氧+IRI组,每组10只),观察各组存活率。同时,检测肾内炎性因子,巨噬细胞的极化,糖酵解和氧化磷酸化水平。结果:常氧+IRI组小鼠的血肌酐及尿素氮低于IRI组( P<0.05),且病理损伤轻。IRI组,常氧+IRI和低氧+IRI组的7 d存活率分别为20%,50%和80%( P<0.05)。RT-PCR结果示IRI造成肾组织内肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β、单核细胞趋化蛋白(MCP-1)和IL-10的表达水平增加,而低氧可降低TNF-α、IL-1β、MCP-1( P<0.05),但升高IL-10( P<0.05)。低氧可促进巨噬细胞向M2型极化,降低巨噬细胞糖酵解,提高氧化磷酸化水平。 结论:低氧BMSC可通过外泌体诱导巨噬细胞M2极化,减轻肾IRI损伤;其机制是增强巨噬细胞氧化磷酸化而抑制糖酵解。
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编辑人员丨1周前
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生长停滞特异性蛋白6调控巨噬细胞极化在小鼠创面修复中的作用
编辑人员丨1周前
目的:探讨生长停滞特异性蛋白6(growth arrest-specific protein 6,Gas6)调控巨噬细胞极化在创面修复中的作用。方法:采用清洁级雄性B6小鼠随机(随机数字法)分为正常组、皮肤缺损组、皮肤缺损组+生理盐水组、皮肤缺损+Gas6(1 μg)组、皮肤缺损+Gas6(5 μg)组和皮肤缺损+Gas6(10 μg)组,每组16只,其中10只用来观察各组小鼠皮肤创面愈合情况,剩余6只于造模后第5天分离创面组织巨噬细胞,酶联免疫吸附法(ELISA)检测IL-6,IL-10水平,RT-PCR检测精氨酸酶-1(Arg-1)、诱导性一氧化氮合酶(iNOS)的mRNA表达水平,流式细胞术检测巨噬细胞M1型标记物CD197和M2型标记物CD163、F4/80的表达,HE染色检测皮肤创面病理改变,Masson染色分析创面肉芽组织及胶原沉积情况。结果:皮肤缺损造模后第3天伤口表面开始结痂。Gas6治疗组伤口面积小于PBS组,伤口愈合情况优于PBS组。与正常组相比,皮肤缺损组小鼠第5天巨噬细胞CD197的比例升高明显( P=0.0049)、CD163和F4/80双阳性的比例明显降低( P=0.0086)、IL-6水平明显升高( P=0.0013)、IL-10水平明显升高( P=0.0014)、iNOS mRNA水平明显升高( P=0.008)、Arg-1 mRNA水平明显降低( P=0.0121)、组织炎症浸润加重。与PBS对照组相比,Gas6治疗组CD197的比例明显下降( P=0.000)、CD163和F4/80双阳性比例明显升高( P=0.000)、IL-6水平明显降低( P=0.000)、IL-10水平明显升高( P=0.0003)、iNOS mRNA水平明显降低( P=0.0018)、Arg-1 mRNA水平明显升高( P=0.001)、组织炎性细胞减少,胶原纤维增多。 结论:Gas6可促使皮肤缺损小鼠巨噬细胞由M1向M2转化,加快缺损皮肤创面愈合。
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编辑人员丨1周前
