目的:利用温敏性水凝胶泊洛沙姆 407(P407)负载Erastin缓释系统诱导人子宫内膜癌细胞(Ishikawa)铁死亡.方法:构建并评估负载Erastin水凝胶复合物(P407Era)的物理表征、相变时间和缓释性能.实验分为对照(control,Ctrl)组、水凝胶(P407)组、Erastin处理(Erastin)组和水凝胶负载 Erastin(P407Era)组.CCK-8 检测细胞增殖情况,ROS试剂盒检测细胞内活性氧含量,TUNEL原位细胞凋亡试剂盒检测细胞凋亡,Mito-Tracker Red CMXRos检测细胞线粒体膜电位,Mito-FerroGreen检测线粒体内Fe2+含量,免疫荧光和RT-qPCR检测铁死亡相关分子的表达水平.结果:P407 水凝胶的相变时间与浓度呈负相关,18%浓度的P407 水凝胶复合物药物缓释性能较优.与对照组相比,P407 组、Erastin组和P407Era组的Ishikawa细胞增殖、迁移和侵袭均受明显抑制,且P407Era组比Erastin组抑制增殖、迁移和侵袭作用更加明显;Erastin组及P407Era组细胞活性氧水平、细胞凋亡相对数量显著升高;细胞线粒体膜电位和线粒体Fe2+结果显示,Erastin组和P407Era组细胞线粒体膜电位显著下降,且线粒体Fe2+含量显著升高;免疫荧光结果显示Erastin组及P407Era组GPX4 含量显著降低,NRF2 含量无明显变化;Erastin组及P407Era组TFR1、NCOA4 和P53 的mRNA表达水平显著升高.结论:温敏性水凝胶泊洛沙姆 407 负载Erastin缓释系统诱导人子宫内膜癌细胞发生铁死亡.

目的:探讨过氧化氢(H2O2)诱导人肝实质细胞(L-O2 细胞)铁死亡的作用及潜在机制.方法:采用不同浓度梯度H2O2 刺激L-O2 细胞,分别于处理 12、24 h后使用 CCK-8 法检测细胞存活率,从而确定最有效的H2O2 诱导条件.在实验中设立了以下处理组:空白对照组、H2O2 组、Erastin组、H2O2+Fer-1 组;确定H2O2 可诱导L-O2 细胞发生铁死亡,为了进一步明确具体的机制,细胞分为空白对照组、H2O2 组、H2O2+不同浓度的ERK激动剂以及ERK抑制剂,使用试剂盒检测各处理组的细胞死亡情况、ROS水平和MMP水平,利用RT-qPCR检测铁死亡标记物PTGS2 和ACSL4 mRNA表达水平.结果:800 μmol/L H2O2 刺激 24h可诱导L-O2 细胞死亡;与空白对照组相比,H2O2 组和Erastin组细胞受损明显,细胞内ROS水平升高、MMP 水平显著降低,同时PTGS2 和ACSL4 mRNA的表达水平升高;与H2O2 组相比,H2O2+Fer-1 组细胞受损减弱,细胞内ROS水平降低、MMP 水平恢复,PTGS2 和ACSL4 mRNA的表达水平降低.与H2O2 组相比,H2O2+ERK激动剂组细胞受损减弱,细胞内ROS水平降低、MMP水平恢复、PTGS2 和ACSL4 mRNA的表达水平降低;然而,加入ERK抑制剂组则出现了相反的结果.结论:800 μmol/L的H2O2 处理 24h能显著诱导L-O2 细胞发生铁死亡,且此过程可能主要通过ERK通路的抑制作用来实现.

目的:探讨长链非编码RNA PRMT5-AS1对电离辐射诱导的肝癌细胞铁死亡的影响。方法:在MHCC-97H细胞中构建PRMT5-AS1过表达模型，在HepG2细胞中构建PRMT5-AS1敲低模型。使用X射线照射，吸收剂量为10 Gy，剂量率为3 Gy/min。采用Western blot和qRT-PCR实验检测基因表达水平。采用台盼蓝染色流式细胞术检测PRMT5-AS1表达对受照肝癌细胞脂质过氧化以及铁死亡的影响。采用CCK-8实验检测PRMT5-AS1表达水平对电离辐射照射后肝癌细胞死亡的影响。双荧光素酶报告实验检测let-7c-5p与PRMT5-AS1和SLC7A11之间结合作用。结果:MHCC-97H细胞中过表达PRMT5-AS1能够显著降低电离辐射引起的细胞死亡(对照组 vs. PRMT5-AS1过表达组：27.57% vs.18.30%， t＝14.94， P<0.05)。HepG2细胞中敲低PRMT5-AS1可显著增加电离辐射引起的细胞死亡(对照组 vs. PRMT5-AS1敲低组：17.26% vs.28.26%， t＝13.63， P<0.05)。过表达PRMT5-AS1能够明显抑制由电离辐射诱导的细胞内脂质活性氧(ROS)水平增加(对照组 vs. PRMT5-AS1过表达组：17.01% vs.12.52%， t＝12.80， P<0.05)，敲低PRMT5-AS1可显著增加电离辐射诱导的脂质ROS水平增加(对照组 vs. PRMT5-AS1敲低组：14.54% vs.17.72%， t＝5.93， P<0.05)。CCK-8实验结果表明，过表达PRMT5-AS1能够显著抑制Erastin诱导的细胞活性降低(对照组 vs. PRMT5-AS1过表达组：87.92% vs.109.06%， t＝2.87， P<0.05)，敲低PRMT5-AS1则促进Erastin抑制细胞活性(对照组 vs. PRMT5-AS1敲低组：82.56% vs.60.58%， t＝38.35， P<0.05)。Western blot和荧光定量PCR结果表明，过表达PRMT5-AS1能够明显提高SLC7A11的蛋白和mRNA水平( t＝26.24， P<0.05)，敲低PRMT5-AS1后SLC7A11的蛋白和mRNA水平均显著降低( t＝5.60， P<0.05)。荧光素酶报告基因实验表明PRMT5-AS1与let-7c-5p之间存在相互作用( t＝9.74， P<0.05)。PRMT5-AS1可以与let-7c-5p形成ceRNA网络，靶向调节SLC7A11。let-7c-5p能够逆转由过表达PRMT5-AS1引起的SLC7A11表达水平增加、脂质ROS水平和细胞死亡减少( t＝3.01、4.11， P<0.05)，而敲低SLC7A11能够逆转PRMT5-AS1引起的脂质ROS抑制和细胞死亡减少( t＝21.35、7.15， P<0.05)。 结论:长链非编码RNA PRMT5-AS1通过PRMT5-AS1/let-7c-5p/SLC7A11轴抑制电离辐射诱导肝癌细胞铁死亡的发生。

目的:探讨血红蛋白氧载体(HBOC)对蛛网膜下腔出血(SAH)后早期脑损伤的保护作用及机制。方法:采用血管内穿孔法制备大鼠SAH模型。将150只成年雄性SD大鼠采用随机数字表法分为假手术组(sham组)、SAH组、HBOC组、铁死亡促进剂组(HBOC＋erastin组)和蛋白激酶B抑制剂组(HBOC＋MK2206组)，每组30只。HBOC组术后立即经股静脉泵入HBOC，SAH组大鼠输注等体积乳酸林格钠液。术后24 h行SAH评分、神经功能评分及脑含水量的测定；采用尼氏染色检测神经元损伤；检测右侧颞叶皮质谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)和组织铁含量；利用蛋白免疫印迹检测蛋白激酶B(Akt)通路蛋白及谷胱甘肽过氧化酶4(GPX4)的表达。组间比较采用 t检验。 结果:SAH组神经功能评分低于HBOC组[(12.50±2.48)分比(16.70±0.45)分， t＝3.734， P<0.05)。尼氏染色结果显示正常神经元细胞计数SAH组明显少于sham组和HBOC组[(17.60±2.41)个/视野比(50.40±4.39)、(27.80±3.35)个/视野， t＝14.640、5.532， P<0.05)。SAH组脑含水量高于sham和HBOC组[(79.65±0.13)%比(78.60±0.16)%、(79.05±0.27)%， t＝11.420、4.486， P<0.05]、GSH明显低于sham和HBOC组(0.43±0.12比0.80±0.07、0.65±0.06， t＝6.048、3.793， P<0.01)、MDA高于sham和HBOC组(4.69±0.85比1.34±0.34、2.14±0.88， t＝8.146、4.652， P<0.01)、组织铁含量高于sham和HBOC组[(0.02±0.01) mg/g prot比(0.11±0.03)、(0.05±0.01) mg/g prot， t＝7.194、4.496， P<0.05]、磷酸化Akt(pAkt)/Akt比值(0.75±0.05比2.19±0.04、2.035±0.04， t＝5.855、3.545， P<0.05)和GPX4含量低于sham和HBOC组(0.31±0.01比1.81±0.05、1.28±0.04， t＝73.290、55.810， P<0.05)，使用HBOC后改善了由SAH造成的指标变化。 结论:HBOC可通过激活Akt信号通路抗氧化应激并抑制铁死亡减轻蛛网膜下腔出血后早期脑损伤。

目的:探讨海马注射铁死亡诱导剂Erastin对大鼠焦虑抑郁样行为及其海马铁死亡相关蛋白表达的影响。方法:40只6周龄健康雄性SD大鼠按照随机数字法分为对照组、Erastin低剂量(200 ng/μL)组、Erastin中剂量组(400 ng/μL)、Erastin高剂量组(600 ng/μL)、脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)组(LPS组，10 μg/L)，每组8只大鼠。向各组大鼠双侧海马注射相应药物(每侧2.5 μL)后于第4天开始进行体质量及行为学检测，行为学测试包括糖水偏爱实验(sucrose preference test，SPT)、旷场实验(open field test，OFT)、强迫游泳实验(forced swimming test，FST)和高架十字迷宫实验(elevated plus maze，EPM)，观察大鼠的抑郁及焦虑样行为。采用Western blot技术和RT-PCR技术分别检测海马铁死亡相关蛋白及其mRNA表达水平，包括谷胱甘肽过氧化物酶4 (glutathione peroxidase 4，GPX4)、环氧化酶2 (cyclo-oxygenase 2，COX2)、铁蛋白重链1(ferritin heavy polypeptide 1，FTH1)、长链酯酰辅酶A合成酶4 (long-chain fatty acyl-CoA synthetase 4，ACSL4)、溶质载体家族7成员11 (solute carrier family 7 member 11，SLC7A11)。采用SPSS 22.0软件进行统计分析，多组间比较采用单因素方差分析，进一步两两比较使用LSD检验。结果:(1)体质量及行为学检测结果：注射药物前，5组大鼠体质量和行为学检测结果均差异无统计学意义( F＝0.02~1.15，均 P>0.05)。海马给药后，与对照组相比，Erastin中剂量组大鼠表现出更明显的焦虑及抑郁样行为，包括体质量减轻[(245.20±5.24)g，(267.45±13.16)]，糖水偏爱率降低[(32.14±8.51)%，(68.17±13.67)%]，强迫游泳不动时间[(37.00±7.58)s，(12.50±5.51)s]及高架闭合臂时间百分比[(89.43±4.77)%，(59.96±9.91)%]增加，旷场中心区停留时间[(6.01±2.57)s，(16.49±7.21)s]及高架开放臂时间百分比[(5.00±3.83)%，(19.63±5.91)%]减少，均差异有统计学意义(均 P<0.05)。(2)铁死亡相关蛋白的表达：给药后，5组大鼠海马组织FTH1、GPX4、SLC7A11、COX2和ACSL4的mRNA水平( F＝2.23，8.37，2.91，7.60，3.16，均 P<0.05)和蛋白表达水平( F＝3.31，40.13，8.52，3.70，70.79，均 P<0.05)均差异有统计学意义。Erastin中剂量组大鼠海马组织FTH1、GPX4和SLC7A11的mRNA水平和蛋白表达均低于对照组(均 P<0.05)，COX2和ACSL4的mRNA水平和蛋白表达水平均高于对照组(均 P<0.05)。 结论:海马微量注射Erastin(400 ng/μL)可诱发大鼠海马组织铁死亡，并可诱导大鼠出现焦虑抑郁样行为。

目的:研究脂肪肝缺血再灌注损伤(ischemia reperfusion injury，IRI)中发生铁死亡的现象与机制，阐明靶向抑制铁死亡可减轻脂肪肝IRI的机制。方法:先按照随机数字法取小鼠20只按照喂养方式不同分为2组：正常饮食(Normal chow diet，NCD)组(n＝10)和高脂饮食(high fat diet，HFD)组(n＝10)，经实验室检测相关指标和油红染色验证，脂肪肝建模成功。然后另取两组小鼠分别构建假手术组(sham组，每组n＝10)和缺血再灌注组(IRI组，每组n＝10)，免疫印迹法检测NCD-sham组(n＝10)、NCD-IRI组(n＝10)、HFD-sham组(n＝10)和HFD-IRI组(n＝10)肝组织谷胱甘肽过氧化物酶4(Gpx4)的表达水平，电子显微镜观察各组小鼠肝细胞线粒体形态等，综合判断小鼠肝脏IRI中是否存在铁死亡的发生。另取NCD小鼠和HFD小鼠按照不同手术模型分为6组：NCD-sham组(n＝10)、NCD-IRI组(n＝10)、NCD缺血再灌注铁死亡组(NCD-IRI-fer-1，n＝10)，HFD-sham组(n＝10)、HFD-IRI组(n＝10)、HFD缺血再灌注铁死亡组(HFD-IRI-fer-1，n＝10)，检测各组血清ALT、AST含量以及HE染色检测肝损伤程度；免疫组织化学染色及酶联免疫吸附试验(ELISA)检测炎症因子水平及炎性细胞浸润水平。同样，分别提取NCD、HFD小鼠原代肝细胞，根据对提取细胞的处理不同将其分为8组：NCD-sham组、NCD-Erastin组、NCD-Erastin-fer-1组、NCD-二甲基亚砜(DMSO)组，HFD-sham组、HFD-Erastin组、HFD-Erastin-fer-1组和HFD-DMSO组。通过C11-BODIPY(581/591)荧光染色检测铁死亡的发生并分析比较各组指标的数据。结果:相较于NCD-IRI组，HFD-IRI组Gpx4蛋白表达水平低，血清ALT、AST较NCD-IRI组高(均 P<0.01)，HFD-IRI组4-羟基壬烯酸(4-HNE)的免疫组织化学染色(IHC)为阳性，线粒体特异性损伤更加明显，炎症浸润强；相较于IRI组，IRI-fer-1组血清ALT、AST水平低，炎症细胞浸润少，炎症因子分泌少(均 P<0.01)。 结论:小鼠脂肪肝缺血再灌注(ischemia reperfusion，IR)过程中发生的高水平铁死亡及剧烈炎症反应是脂肪肝IRI区别于普通肝IRI的显著特征，靶向抑制铁死亡可降低脂肪肝IR过程中的炎症与损伤。

目的:探讨草酸钙(CaOx)晶体诱导人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)发生铁死亡的机制。方法:2021年3—9月使用CaOx晶体悬浊液干预HK-2细胞，构建HK-2-CaOx反应模型。设置CaOx晶体浓度分别为0、0.25、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0 mmol/L，干预HK-2细胞24 h，干预完成后提取HK-2细胞蛋白。采用最佳干预浓度的CaOx晶体干预HK-2细胞，分别于干预后0、3、6、9、12、24、48 h提取细胞蛋白。蛋白质印迹法检测细胞内铁死亡标志蛋白谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)的表达情况。用铁死亡诱导剂爱拉斯汀(Erastin)和铁死亡抑制剂3-氨基-4-环己基氨基苯甲酸乙酯(Fer-1)干预HK-2细胞以调控细胞内铁死亡水平。将HK-2细胞分为4组：正常对照组(NC组)，无干预处理，单纯使用完全培养基培养；CaOx晶体刺激组(CaOx组)，使用含4.0 mmol/L CaOx晶体的完全培养基培养；CaOx晶体+Erastin处理组(CaOx+Erastin组)，使用含10.0 μmol/L Erastin和4.0 mmol/L CaOx晶体的完全培养基培养；CaOx晶体+Fer-1处理组(CaOx+Fer-1组)，使用含1.0 μmol/L Fer-1和4.0 mmol/L CaOx晶体的完全培养基培养。培养24 h后，采用蛋白质印迹法和免疫荧光技术检测GPX4、长链脂酰辅酶A合成酶4 (ACSL4)和溶质载体家族7成员11(SLC7A11)在HK-2细胞内的表达情况；检测HK-2细胞内谷胱甘肽含量；采用DCFH-DA荧光染色法观察HK-2细胞活性氧(ROS)表达情况。通过光学显微镜观察各组HK-2细胞内CaOx黏附情况，DAPI染色检测HK-2细胞核损伤情况。结果:采用0、0.25、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0 mmol/L浓度CaOx晶体干预24 h后，细胞中GPX4的表达量分别为5.67±1.05、5.60±0.02、4.99±0.94、4.82±0.93、4.50±0.70、4.14±0.53、0.97±0.53，4.0 mmol/L组与0 mmol/L组相比差异有统计学意义( P＝0.026)。选用4.0 mmol/L作为最佳浓度干预细胞，干预0、3、6、9、12、24、48 h后细胞中GPX4的表达量分别为11.73±1.29、11.68±1.32、11.72±1.30、10.97±1.28、10.63±1.21、8.79±1.10、8.03±1.06，24 h组与0h组相比差异有统计学意义( P＝0.090)。CaOx+Erastin组与NC组相比，ACSL4表达量(9.71±0.68与3.96±0.17， P<0.01)升高；SLC7A11(5.76±1.31与9.18±1.54， P＝0.001)和GPX4(3.61±0.25与9.26±0.13， P<0.01)表达量降低；CaOx+Fer-1组与CaOx组相比，GPX4(7.52±0.23与3.61±0.25， P<0.01)、SLC7A11(7.85±1.34与5.76±1.31， P＝0.012)表达量升高，ACSL4(5.84±0.62与9.71±0.68， P＝0.002)表达量显著降低。CaOx+Erastin组与CaOx组相比，GPX4(2.71±0.18与3.61±0.25， P＝0.001)、SLC7A11(3.82±1.60与5.75±1.31， P＝0.017)表达量显著降低，ACSL4(11.15±0.44与9.71±0.68， P<0.01)表达量升高。NC组、CaOx组、CaOx+Fer-1组、CaOx+Erastin组的谷胱甘肽含量分别为(81.88±4.02)、(53.38±3.53)、(68.26±4.55)、(38.22±2.95)mmol/L；DCFH-DA荧光染色强度分别为(22.72±3.73)、(63.36±5.17)、(82.38±6.25)、(45.32±4.33)；免疫荧光强度分别为(50.36±4.23)、(31.63±2.86)、(23.36±3.74)、(39.89±3.35)，CaOx组与NC组、CaOx+Fer-1组、CaOx+Erastin组相比差异均有统计意义( P<0.05)。DAPI染色计算NC组、CaOx组、CaOx+Fer-1组、CaOx+Erastin组细胞核损伤比例分别为2.85%、11.96%、8.76%、16.27%。 结论:CaOx晶体可以通过增加HK-2细胞内氧化应激水平进而诱导HK-2细胞发生铁死亡。

目的:探究N-乙酰转移酶10(NAT10)对Erastin诱导结直肠癌(CRC)细胞铁死亡敏感性的影响及其机制。方法:使用公共数据库明确NAT10在CRC中的表达及其与Erastin利用度的关系；应用荧光实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)探索Erastin对NAT10 mRNA表达的影响；细胞计数试剂盒(CCK-8)检测NAT10抑制剂Remodelin联合Erastin对CRC细胞SW620活力的影响。构建NAT10稳转敲低细胞株，蛋白质印迹法(Western blot)验证敲减效率成功后，进行RNA-Seq和ac4C-RNA-Seq的测序，分析与对照组比较，NAT10敲低组出现ac4C修饰水平降低和mRNA表达水平下降的基因，再和铁死亡抑制因子集取交集，最后筛选出NAT10调控铁死亡的潜在下游靶基因。RT-qPCR或Western blot检测对照组和NAT10敲低组或Remodelin处理细胞中的转录调节因子核蛋白1(NUPR1)表达水平，验证NAT10对NUPR1的调控作用。两组间比较采取 t检验。 结果:NAT10表达越高，Erastin的药物利用度越低( R＝－0.16， P<0.05)，SW620细胞Erastin作用组响应性升高(1.440±0.035比1.000±0.096， t＝－7.423， P<0.05)，Remodelin+Erastin组细胞活力明显低于Erastin组(0.293±0.017比0.906±0.048， t＝60.680， P<0.05)。通过铁死亡抑制剂Fer-1干预实验，Fer-1+Erastin+Remodelin细胞组比Erastin+Remodelin组比较，细胞活力出现下降(0.489±0.011比0.412±0.036， t＝3.599， P<0.05)。成功构建NAT10稳转敲减细胞系(1.105±0.065比0.309±0.104， t＝11.220， P<0.05)，测序结果联合铁死亡数据库抑制基因集筛选出NUPR1是NAT10调控铁死亡的下游潜在靶基因。公共数据库证实NAT10与NUPR1呈明显正相关( R＝0.40， P<0.05)。RT-qPCR证实NUPR1的mRNA表达在NAT10敲低组中低于对照组(0.087±0.007比0.198±0.005， t＝20.758， P<0.05)。Western blot结果表明用Remodelin抑制NAT10表达后，NUPR1在SW480和SW620实验组中蛋白表达水平低于对照组(SW480：0.611±0.175比1.245±0.350， t＝6.267， P<0.05；SW620：0.745±0.230比1.201±0.343， t＝6.826， P<0.05)。 结论:结肠癌SW620细胞系中NAT10在Erastin作用下响应性升高，NUPR1可能作为其潜在靶基因介导铁死亡抵抗。

目的:探讨血红素加氧酶1(HO-1)修饰的骨髓间充质干细胞(BMMSCs)对缺氧/复氧(H/R)诱导的脂肪变肝细胞损伤的作用及其机制。方法:将脂肪变大鼠肝细胞(IAR20)按照实验要求分为对照组(Ctrl)、H/R组、H/R+铁死亡抑制剂组(Fer-1)、铁死亡诱导剂组(Erastin)、H/R+BMMSCs(B)组、H/R+HO-1/BMMSCs(HB)组、H/R+HB+小干扰RNA阴性对照组(si-NC)、H/R+HB+敲降GPX4组(si-GPX4)。通过检测不同组别细胞的脂质活性氧(Lipid ROS)、谷胱甘肽过氧化物酶4 (GPX4)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)的表达评价铁死亡的严重程度。两组和多组间的数据比较分别采用独立样本 t检验和单因素方差分析。 结果:Fer-1及H/R+B处理组Lipid ROS与MDA的表达量均低于H/R组[(1.65±0.02)、(1.85±0.04)比 (3.50±0.03)， t＝87.600、60.030， P<0.05；(154.50±0.84)%、(228.90±21.49)%比 (676.50±22.36)%， t＝36.380、25.000， P<0.05]；Fer-1及H/R+B处理组GSH水平均高于H/R组[(0.75±0.03)、(0.72±0.04)比 (0.45±0.01)， t＝19.400、17.060， P<0.05]；H/R+HB组的Lipid ROS及MDA水平低于H/R+B组[(1.31±0.03)比 (1.85±0.04)， t＝19.400， P<0.05；(150.10±32.82)%比 (228.90±21.49)%， t＝3.478， P<0.05]，其GSH水平高于H/R+B组[(0.81±0.03)比 (0.72±0.04)， t＝4.981， P<0.05]。si-GPX4组的Lipid ROS与MDA表达量均高于si-NC组[(2.87±0.13)比 (1.36±0.06)， t＝18.100， P<0.05；(323.30±12.58)%比 (184.30±7.09)%， t＝16.670， P<0.05]；si-GPX4组的GPX4与GSH表达量均低于si-NC组[(0.45±0.03)比 (0.92±0.04)， t＝7.692， P<0.05；(0.54±0.07)比 (0.75±0.15)， t＝5.076， P<0.05]。 结论:HO-1/BMMSCs通过促进GPX4的表达抑制铁死亡以修复受损的脂肪变肝细胞。

目的:初步探讨沉默信息调节因子3（silent information regulator 3，SIRT3）在高糖诱导的肾小管上皮细胞铁死亡中的作用，以期为糖尿病肾脏疾病患者肾小管损伤提供新的理论依据和治疗思路。方法:通过“Tabula-muris”单细胞转录组数据库分析肾组织各细胞亚群 SIRT3基因的表达。体外培养人永生化肾小管上皮细胞（HK-2细胞）进行以下分组：（1）对照组、甘露醇组及高糖组。（2）对照组、阴性对照组、过表达 SIRT3组、高糖组及过表达 SIRT3+高糖组。（3）对照组、阴性对照组、敲低 SIRT3组、高糖组及敲低 SIRT3+高糖组。（4）对照组、Erastin干预组及过表达 SIRT3+Erastin干预组。正常葡萄糖5.5 mmol/L，高糖30 mmol/L，甘露醇24.5 mmol/L，Erastin 10 μmol/L，干预时间为48 h。细胞增殖与毒性检测试剂盒实验检测细胞活力。实时荧光定量PCR和Western印迹法分别检测SIRT3、肾损伤分子1及铁死亡相关蛋白酰基辅酶A合成酶长链家族成员4（acyl-CoA synthetase long chain family member 4，ACSL4）、谷胱甘肽过氧化物酶4（glutathione peroxidase 4，GPX4）mRNA和蛋白水平的表达。通过检测丙二醛、谷胱甘肽、铁含量评估细胞铁死亡程度。DCFH-DA法检测细胞内活性氧水平。JC-1染色法检测细胞线粒体膜电位改变。 结果:（1）单细胞转录组数据库分析结果显示， SIRT3基因在肾组织近端肾小管上皮细胞亚群中表达最高。（2）与对照组比较，高糖组HK-2细胞肾损伤分子1、ACSL4表达均较高，SIRT3、GPX4表达及细胞活力均较低（均 P<0.05），甘露醇组与对照组上述指标的差异均无统计学意义（均 P>0.05）。（3）与高糖组比较，过表达 SIRT3+高糖组HK-2细胞活力、GPX4表达及细胞内谷胱甘肽均较高，ACSL4表达、细胞内铁、丙二醛及活性氧均较低，线粒体膜电位部分恢复（均 P<0.05）；与高糖组比较，敲低 SIRT3+高糖组HK-2细胞活力、GPX4表达均较低，ACSL4表达较高（均 P<0.05），细胞内铁、丙二醛、谷胱甘肽的差异均无统计学意义（均 P>0.05）。（4）与对照组比较，Erastin干预组HK-2细胞ACSL4表达较高，GPX4表达较低（均 P<0.05）；与Erastin干预组比较，过表达 SIRT3+Erastin干预组ACSL4表达较低，GPX4表达较高（均 P<0.05）。 结论:高糖可诱导HK-2细胞SIRT3表达下调、线粒体膜电位降低以及氧化应激和铁死亡增加，过表达 SIRT3可能通过减少氧化应激及缓解线粒体功能障碍减轻高糖诱导的HK-2细胞铁死亡。