目的:基于微小核糖核酸(miRNA)-信使核糖核酸(mRNA)调控网络探讨重复经颅磁刺激(rTMS)促进缺血性脑卒中(IS)神经修复的潜在分子机制。方法:从基因表达综合数据库(GEO)下载rTMS干预7 d后的IS大鼠皮质miRNA表达谱。使用R软件分析差异miRNAs，通过在线数据库预测其对应的下游mRNAs，构建miRNA-mRNA调控网络，筛选关键miRNAs。对靶基因进行功能富集分析，构建靶基因所编码的蛋白质相互作用网络，识别网络中的核心mRNAs。选取无特定病原体动物(SPF)级雄性Sprague-Dawley大鼠24只，按随机数字表法随机分为假手术组、模型组和磁刺激组，每组8只大鼠。模型组和磁刺激组制备IS大鼠模型，仅磁刺激组接受连续7 d的rTMS干预，其余2组不进行干预。采用改良神经功能评分(mNSS)于造模前和造模成功1 d、3 d、7 d后评价3组大鼠的神经功能缺损程度；于造模成功8 d后深度麻醉大鼠，取脑组织行苏木精-伊红和尼氏染色观察组织缺失情况和神经元形态，利用实时荧光定量聚合酶链反应验证差异基因在3组大鼠缺血侧皮质中的表达趋势。结果:共筛选出167个差异miRNAs和预测到25个mRNAs。富集分析表明，这些基因与细胞迁移的正向调节、神经营养因子受体信号通路的正向调节等生物学过程有关，涉及腺苷酸激活蛋白激酶、神经营养因子通路、大鼠肉瘤等信号通路。通过构建miRNA-mRNA调控网络，识别出miR-206-3p、miR-378a-3p、miR-107-3p、miR-92a-3p和miR-29b-3p共5个关键miRNAs；通过蛋白互作网络分析筛选出4个核心mRNAs，分别为整合素亚基β1、水通道蛋白4、脑源性神经生长因子(BDNF)、溶质载体家族2成员4。造模成功7 d后，磁刺激组的mNSS评分显著低于模型组同时间点( P<0.05)。与模型组相比，磁刺激大鼠右侧皮质的miR-206-3p表达明显降低( P<0.05)，BDNF表达则显著增高( P<0.05)。 结论:miR-206-3p-BDNF调控网络和相关作用途径在rTMS促进IS大鼠神经修复过程中发挥重要的作用。

目的 建立血塞通片溶出度检验方法,测定血塞通片中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1和人参皂苷Rd的整合溶出度.方法 以小杯法进行溶出度实验,采用高效液相色谱法(HPLC)测定5种指标成分的溶出量,采用质量分数权重系数法进行溶出度整合.绘制溶出曲线,采用f2相似因子法比较各成分溶出曲线与整合溶出曲线的相似性,对整合溶出数据进行模型拟合,计算溶出参数T50、Td和T85.结果 以水为溶出介质,转速50 r/min,60 min取样.5种指标成分溶出曲线与整合溶出度溶出曲线的f2相似因子分别为64.5,61.6,79.8,60.0和68.2.溶出数据拟合模型以Weibull模型最优,溶出参数T50、Td和T85分别为12.29 min、18.09 min和56.09 min.结论 建立的溶出度检查方法准确、可行,采用质量分数权重系数法整合溶出度能较好地表征血塞通片的体外溶出行为,可为血塞通片的质量一致性评价研究及质量控制提供技术借鉴.

目的:基于"柔肝养筋"理论探讨小鼠肝脏来源外泌体对膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)模型小鼠膝关节软骨的影响.方法:以超速离心法从3月龄(年轻)和22月龄(老年)C57BL/6雄性小鼠肝脏提取外泌体.将48只7周龄SPF级C57BL/6J雄性小鼠随机分为4组,每组12只.KOA组、Young-EVs组及Aged-EVs组小鼠采用前交叉韧带横断术进行KOA造模,Sham组小鼠接受手术但不离断前交叉韧带.术后14 d开始,向Young-EVs组和Aged-EVs组小鼠膝关节腔分别注射10 μL年轻和老年小鼠肝脏来源外泌体,每周2次,连续注射4周;Sham组和KOA组用同样方法向膝关节腔注射10 μI.PBS溶液.外泌体干预结束后,对各组小鼠造模侧膝关节进行X线检查;苏木精-伊红染色和番红0-固绿染色后进行组织病理学观察,并采用国际骨关节炎研究协会(Osteoarthritis Research Society International,OARSI)骨关节炎软骨组织病理学评价系统及Mankin病理评分系统评价小鼠软骨退变程度;免疫组化法检测软骨组织中Ⅱ型胶原蛋白(collagen Ⅱ,COL Ⅱ)、聚集蛋白聚糖(aggrecan,ACAN)、基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)13和一种具有血小板反应蛋白基序的去整合素和金属蛋白酶(a disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs,ADAMTS)5表达量.结果:①小鼠膝关节X线检查结果.Sham组小鼠膝关节关节间隙正常,关节面平整光滑,软骨完整,关节边缘无骨赘形成,Kellgren-Lawrence分级为0级;KOA组小鼠膝关节间隙未见明显狭窄,关节面粗糙,软骨出现部分缺损,关节边缘可见明显骨赘形成,Kellgren-Lawrence分级为Ⅱ级;Young-EVs组小鼠膝关节间隙轻微变窄,关节表面稍有粗糙表现,软骨缺损较KOA组减少,关节边缘可见轻微骨赘形成,Kellgren-Lawrence分级为Ⅰ级;Aged-EVs组小鼠膝关节间隙、关节表面粗糙程度、软骨缺损情况、关节内游离体数量较KOA组更为严重,Kellgren-Lawrence分级为Ⅲ级.②小鼠膝关节软骨组织病理学观察结果.4组小鼠膝关节软骨OARSI评分和Mankin评分组间总体比较,差异均有统计学意义[OARSI评分:(0.417± 0.376)分,(4.500±0.632)分,(2.417±0.492)分,(5.417±0.492)分,F=116.800,P=0.000;Mankin 评分:(1.083±0.665)分,(7.250±0.880)分,(3.583±0.917)分,(8.833±0.683)分,F=117.100,P=0.000].KOA 组、Young-EVs 组及 Aged-EVs 组的OARSI 评分和 Mankin 评分均高于 Sham 组(P=0.000,P=0.000,P=0.000;P=0.000,P=0.000,P=0.000);Young-EVs 组的OARSI评分和Mankin评分均低于KOA组(P=0.000,P=0.000);Aged-EVs组的OARSI评分和Mankin评分均高于KOA组、Young-EVs 组(P=0.025,P=0.000;P=0.015,P=0.000).③小鼠膝关节软骨组织免疫组织化学检测结果.4组小鼠膝关节软骨中COLⅡ和ACAN阳性表达面积比组间总体比较,差异均有统计学意义[COLⅡ:(40.050±2.324)％,(26.083±1.119)％,(23.317±2.599)％,(16.717±2.479)％,F=118.500,P=0.000;ACAN:(51.500±3.191)％,(17.700±3.415)％,(19.383± 3.924)％,(12.300±1.908)％,F=185.500,P=0.000].KOA 组、Young-EVs 组及 Aged-EVs 组的 COL Ⅱ 和 ACAN 阳性表达面积比均低于 Sham 组(P=0.000,P=0.000,P=0.000;P=0.000,P=0.000,P=0.000);Young-EVs 组与 KOA 组 COLⅡ、ACAN 阳性表达面积比的组间差异均无统计学意义(P=0.167,P=0.799);Aged-EVs组的COL Ⅱ和ACAN阳性表达面积比均低于KOA组、Young-EVs组(P=0.000,P=0.000;P=0.039,P=0.005).4组MMP13和ADAMTS5阳性表达面积比组间总体比较,差异均有统计学意义[MMP13:(11.733±2.191)％,(46.150±6.237)％,(34.417±5.027)％,(57.233±4.049)％,F=106.600,P=0.000;ADAMTS5:(7.950±1.344)％,(30.533±6.184)％,(22.083±3.418)％,(39.317±5.606)％,F=51.450,P=0.000].KOA 组、Young-EVs 组及 Aged-EVs 组的 MMP13 和 ADAMTS5 阳性表达面积比均高于 Sham 组(P=0.000,P=0.000,P=0.000;P=0.000,P=0.000,P=0.000);Young-EVs 组的 MMP13 和 ADAMTS5 阳性表达面积比均低于 KOA 组(P=0.002,P=0.021);Aged-EVs 组的 MMP13 和 ADAMTS5 阳性表达面积比均高于 KOA 组、Young-EVs 组(P=0.003,P=0.000;P=0.016,P=0.000).结论:小鼠肝脏来源外泌体可能参与软骨细胞合成及分解代谢反应;其中老年小鼠肝脏来源外泌体可加速细胞外基质降解、减少聚集蛋白聚糖合成,加剧KOA小鼠软骨退变;而年轻小鼠肝脏来源外泌体可抑制软骨细胞外基质降解,保护KOA小鼠软骨.

目的:运用生物信息学分析方法挖掘参与心肌缺血再灌注损伤(MIRI)的关键基因.方法:首先,从数据库中下载大鼠MIRI相关数据集GSE122020、E-MEXP-2098和E-GEOD-4105.其次,一方面利用微阵列数据线性模型(limma)包筛选各数据集中的差异表达基因(DEGs),再用稳健排序整合(RRA)方法筛选稳健DEGs;另一方面,利用替代变量分析(SVA)包将各数据集合并为1个数据集,再利用limma包筛选合并DEGs;将2种渠道的DEGs取交集获取共同DEGs.接着,构建共同DEGs的蛋白相互作用(PPI)网络,利用最大邻域组件密度(DMNC)算法筛选关键基因,并绘制关键基因的受试者工作特征(ROC)曲线,以评价其诊断效能.然后,构建MIRI大鼠模型,检测关键基因的mRNA和蛋白表达情况;并对关键基因参与MIRI的研究开展文献回顾分析.最后,对关键基因开展基因集富集分析(GSEA),进一步揭示其介导MIRI可能的机制.结果:共鉴定出143个稳健DEGs,48个合并DEGs,两者取交集后,获得48个共同DEGs.在共同DEGs的PPI网络中,共筛选出了5个关键基因,即MYC原癌基因bHLH转录因子(MYC)、前列腺素内过氧化物合酶2(PTGS2)、血红素加氧酶1(HMOX1)、胱天蛋白酶3(CASP3)和尿激酶型纤溶酶原激活物受体(PLAUR).这些关键基因的ROC曲线下面积均大于0.8.在MIRI大鼠心肌组织中MYC、PTGS2、CASP3和PLAUR的mRNA和蛋白高表达,而HMOX1的mRNA和蛋白表达无显著差异.回顾文献,5个关键基因中仅PLAUR未被报道参与MIRI.PLAUR的GSEA结果显示,PLAUR的功能富集主要集中在NOD样受体信号通路、P53信号通路、Toll样受体信号通路、细胞凋亡和脂肪酸代谢等途径.结论:MYC、PTGS2、CASP3、HMOX1和PLAUR参与了MIRI的病理过程.PLAUR为潜在的关键基因,其可能通过调控NOD样受体信号通路、P53信号通路、Toll样受体信号通路、细胞凋亡和脂肪酸代谢等途径介导MIRI,结果可为进一步探讨MIRI的分子机制和治疗靶点提供参考.

目的 筛选基于肺腺癌(LUAD)预后相关的炎症反应关键基因,并基于该基因构建预后预测模型.方法 在TCGA数据库中下载肺腺癌组织数据作为训练集,在GTEx数据库中下载正常肺组织数据作为训练集的正常对照,筛选差异表达基因(DEG);在分子特征数据库中下载炎症反应相关基因列表,采用单变量COX回归分析其中与预后相关的炎症反应相关基因,与DEG取交集得到与LUAD预后相关的炎症反应相关基因,应用LASSO回归和随机生存森林(RSF)算法筛选与LUAD预后相关的炎症反应关键基因,并建立预后风险评分公式.使用训练集进行内部验证,从GEO数据库中下载LUAD数据作为验证集进行外部验证,绘制该预后风险评分预测患者1年、3年和5年生存率的受试者工作特征(ROC)曲线,根据cut-off值分为高、低风险组,比较其总生存期(OS).单因素及多因素COX回归分析风险评分与训练集和验证集OS的关系,整合所有独立的预后相关因素,构建预测训练集患者1年、3年和5年生存率的列线图.结果 LUAD组织和正常肺组织的DEG共48个,与预后相关的炎症反应相关基因共50个,取交集后获得与LUAD预后相关的炎症反应相关基因共11个,LASSO回归和RSF算法筛选得到9个关键基因,即肾上腺髓质素(ADM)、LCCL结构域蛋白2(DCBLD2)、白细胞介素7受体(IL-7R)、MAX二聚化蛋白1(MXD1)、神经介素U受体1(NMUR1)、原钙粘蛋白(PCDH7)、磷酸肌醇3激酶调节亚基5(PIK3R5)、清道夫受体F类成员1(SCARF1)、人纤溶酶原激活物抑制剂1(SERPINE1).内外部验证结果显示,该预后风险评分预测训练集患者1年、3年和5年生存率的曲线下面积(AUC)分别为0.73、0.64和0.68,预测验证集患者1年、3年和5年生存率的AUC分别为0.578、0.602和0.581,高风险组OS均短于低风险组(P均＜0.01).单因素及多因素COX回归分析结果显示,预后风险评分是训练集和验证集患者OS的独立影响因素(训练集HR=2.99、P＜0.01,验证集HR=2.47、P＜0.01).构建包含所有独立预后相关因素(年龄、性别、肿瘤分期、预后风险评分)的列线图,其总体的一致性指数为0.710,模型预测精度高,校准曲线和标准曲线的重合度较好.结论 筛选出LUAD预后相关的炎症反应关键基因9个,即ADM、DCBLD2、IL-7R、MXD1、NMUR1、PCDH7、PIK3R5、SCARF1、SERPINE1,基于上述炎症反应关键基因的预后风险模型有助于判断LUAD患者的预后.

为探究局地尺度下近岸岛礁海域之多变水体环境、极高空间异质性对生物群落的影响,于2020-2021年4个季度在大陈岛礁海域底拖网采样,利用等级聚类(cluster)、非度量多维标度(NMDS)等多元统计方法分析甲壳类群落结构的时空格局,并整合温度、盐度、深度等环境因子进行冗余分析(RDA)以解析影响因素,同时利用丰度生物量曲线(ABC)及W统计量评估群落稳态.结果显示:全年共采集甲壳类53种,隶属2目13科29属,虾类占总种类数的56.60％,种类数秋季(43种)＞冬季(41种)＞春季(31种)＞夏季(26种).优势种的季节更替明显,夏秋季以哈氏仿对虾(Parapenaeopsis hardwickii)、中华管鞭虾(Solenocera crassicornis)和三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)为代表的中大型经济种为主,冬春季则以双斑蟳(Charybdis bimaculata)和细巧仿对虾(Parapenaeopsis tenella)为代表的小个体饵料种为主,口虾蛄(Oratosquilla oratotria)在各个季节皆为优势种.甲壳类资源密度季节间变化明显,空间分布不均,呈现秋季最高,春季最低,夏秋两季极显著高于冬春季(P＜0.001),且近岩礁区资源密度最大,河口侧浅水区最小的特点.受洄游物种的季节性迁移和选择性分布,以及岛礁系统内水文环境的区域分化等因素影响,甲壳类群落结构具有显著的季节和空间差异,形成夏秋季异质性高,冬春季相似性大,河口侧浅水区与外侧深水区分化程度突出的格局.底层水温、底层盐度、底层溶氧和水深等环境因子与群落异质性存在显著关系.ABC曲线表明甲壳类群落状态稳定,具有较强的抗干扰能力.研究表明,大陈岛礁海域优势甲壳类季节变动强烈,且在局地尺度上一定程度表现出区域化的群落结构,但皆保持着较高的资源水平,对当地渔业资源的维系发挥着积极作用,也为当地海洋牧场的功能设计提供了资源基础.

背景:关节骨软骨缺损是目前骨科医生面临的难题,传统修复方法难以取得满意疗效,以羟基磷灰石-聚乙烯醇为基础的复合水凝胶材料是目前研究的一个方向.目的:制备羟基磷灰石-聚乙烯醇/胶原-壳聚糖-明胶复合水凝胶,表征其物理学特征,验证其植入体内后的组织相容性及细胞黏附增殖能力,探讨其对兔骨软骨缺损的修复效果.方法:利用3D打印技术制备圆柱状多孔聚乳酸支架(孔径分别为1.2,1.4,1.6,1.8 mm),再将聚乙烯醇及羟基磷灰石混合乳液灌入聚乳酸支架中,经过冻融及二氯甲烷溶解后制成羟基磷灰石-聚乙烯醇水凝胶.然后将胶原-壳聚糖-明胶混合液灌入羟基磷灰石-聚乙烯醇水凝胶中,利用京尼平进行交联,最后经乙醇清洗及冷冻干燥制成羟基磷灰石-聚乙烯醇/胶原-壳聚糖-明胶复合水凝胶,表征4组水凝胶的物理学特征,筛选性能最优的水凝胶进行后续实验.将羟基磷灰石-聚乙烯醇水凝胶、胶原-壳聚糖-明胶复合水凝胶分别植入SD大鼠皮下,苏木精-伊红与Masson染色观察材料表面的细胞黏附生长状况.在15只兔双侧膝关节股骨滑车制作骨软骨缺损(直径5 mm、深6 mm)模型,左侧植入复合水凝胶(实验组),右侧未植入任何材料(对照组),Micro-CT及组织学检测来评估其对骨软骨缺损的修复效果.结果与结论:①综合孔隙率、含水率、力学测试及扫描电镜结果,得出孔径1.2 mm的羟基磷灰石-聚乙烯醇/胶原-壳聚糖-明胶复合水凝胶更符合天然软骨的一般特性,用于后续实验;②苏木精-伊红与Masson三色染色显示,随着材料植入大鼠皮下时间的延长,两种材料周边黏附的细胞均明显增多,其中胶原-壳聚糖-明胶植入后的细胞增殖状况更好,可见大量细胞长入其形成的网状结构,且网状结构也逐渐降解;③在兔骨软骨缺损实验中,至术后8周时,Micro-CT检查显示实验组植入的材料和周围骨-软骨整合良好,其表面及内部均有部分骨长入,对照组软骨及软骨下层仍然存在明显的缺损,未形成有效修复;苏木精-伊红与甲苯胺蓝染色显示,实验组植入复合水凝胶4-8周后即与周围骨软骨发生整合,随着时间的延长材料表面逐渐有新生软骨形成,至12周时缺损处大部分被新生软骨覆盖,软骨下层也出现良好的骨长入;对照组至术后12周虽然深层骨缺损大部分修复、浅层的软骨及软骨下骨缺损也有一定程度修复,但主要被纤维组织及部分纤维软骨替代;④结果表明,羟基磷灰石-聚乙烯醇/胶原-壳聚糖-明胶复合水凝胶材料可仿生天然软骨的结构和功能,在动物实验中能有效修复骨软骨缺损.

目的 观察阿托伐他汀(ATV)对牙周炎大鼠的治疗效果.方法 45 只牙周炎模型大鼠随机分为牙周炎组、ATV组、联合组,各 15 只;健康组 15 只不做处理.ATV组大鼠灌胃阿托伐他汀钙生理盐水溶液 5 mL(含阿托伐他汀钙3 mg·kg-1),1 h后腹腔注射二甲基亚砜(DMSO)溶液0.2 mL;联合组大鼠灌胃阿托伐他汀钙生理盐水溶液5 mL(剂量mg·kg-1),1 h后腹腔注射XAV939 DMSO溶液 0.2 mL(剂量 20 mg·kg-1);健康组、牙周炎组大鼠灌胃生理盐水溶液 5 mL,1 h后腹腔注射DMSO溶液 0.2 mL,每日 1 次,持续干预 4 周.检测各组牙龈出血指数(SBI)、菌斑指数(PLI);观察牙槽骨骨小梁厚度(Tb.Th)、骨小梁数目(Tb.N)、骨小梁分离度(Tb.Sp)、从釉牙骨质界至牙槽嵴顶的距离(CEJ-AC);检测糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)、Runt相关转录因子2(Runx2)、β-连环蛋白(β-catenin)、p-β-catenin蛋白表达量.结果 与牙周炎组比较,ATV组SBI、PLI、Tb.Sp、CEJ-AC均降低(P＜0.05),Tb.Th、Tb.N均升高(P＜0.05);与ATV组比较,联合组SBI、PLI、Tb.Sp、CEJ-AC均升高(P＜0.05),Tb.Th、Tb.N均降低(P＜0.05);与牙周炎组比较,ATV组牙周组织Runx2 蛋白表达量、p-β-catenin/β-catenin升高,GSK-3β蛋白表达量降低(P＜0.05);与ATV组比较,联合组牙周组织Runx2蛋白表达量、p-β-catenin/β-catenin降低,GSK-3β蛋白表达量升高(P＜0.05).结论 ATV可抑制牙周炎大鼠牙槽骨吸收及炎症反应,可能通过调控Wnt/β-catenin信号通路来实现.

目的 通过高效液相色谱-串联质谱和分子网络整合技术联合应用的快速分析方法分别鉴定川黄柏与关黄柏中的化学成分.方法 采用Agilent C18色谱柱(100 mm×4.5 mm,1.8μm),流动相为0.1％甲酸水溶液(A)-乙腈(B),梯度洗脱.通过三重四极杆-飞行时间串联质谱检测数据,根据MS/MS碎片模式的相似性创建分子网络,在正离子模式下,将拥有相似结构的分子簇运用MSDIAL软件筛选出来.最后结合保留时间信息、高分辨质谱精确相对分子质量和MS/MS碎片信息,并根据相关文献和分子网络进行比对,分别对川黄柏、关黄柏中化学成分进行快速准确鉴定.结果 在川黄柏、关黄柏中共鉴定出22种化学成分,并通过质谱的积分面积确定了两者的相对峰面积比例为2.08:1.通过分子网络分析发现川黄柏中存在很多响应较低的未被鉴定出的生物碱类成分,而木兰花碱同系物多出现于关黄柏中,并且关黄柏中的巴马汀的离子响应较川黄柏更高.结论 该方法可为关黄柏、川黄柏的质量控制、基准物质以及药效物质研究提供参考,同时也可用于两者化学成分的快速定性分析.

目的 探讨小干扰RNA(siRNA)沉默尿激酶型纤溶酶原激活物受体(uPAR)和组织蛋白酶B(CB)基因对肝癌细胞迁移的影响及其机制.方法 培养肝癌SMMC-7721细胞后,用荧光标记的低、中、高浓度的siRNA转染肝癌细胞,在荧光显微镜下计算siRNA转染效率,筛选出最佳siRNA转染浓度.将肝癌细胞分成空白对照组、阴性对照组(LC组)、uPAR-siRNA转染组(si-uPAR组)、CB-siRNA转染组(si-CB组)和uPAR-siRNA/CB-siRNA联合转染组(si-UC组).si-uPAR组、si-CB组、si-UC组细胞分别加入uPAR-siRNA、CB-siRNA、uPAR-siRNA/CB-siRNA转染试剂复合物进行转染,LC组仅加入转染试剂,空白对照组不进行干预.转染72 h后通过细胞划痕实验检测癌细胞迁移能力;转染48 h后,用流式细胞术分析细胞周期,实时荧光定量PCR法检测各组肝癌细胞整合素α6和基质金属蛋白酶9(MMP9)基因表达水平.结果 24 h后,用荧光标记的低浓度的siRNA转染肝癌细胞其转染效率在85％以上,细胞状态良好.与空白对照组及LC组相比,si-uPAR组、si-CB组、si-UC组细胞的迁移能力均下降、G0/G1期细胞比例增加、整合素α6及MMP9 mRNA表达水平均降低(均P<0.05);与si-uPAR组、si-CB组相比,si-UC组细胞的迁移能力均下降、G0/G1期细胞比例增加、整合素α6及MMP9 mRNA表达水平均降低(均P<0.05).结论 siRNA沉默uPAR或CB基因均可抑制肝癌细胞的迁移,且联合沉默抑制效果更明显,其可能通过抑制整合素α6和MMP9 mRNA的表达、诱导细胞G0/G1期阻滞而发挥作用.