目的 研究新加苁蓉菟丝子汤对卵巢颗粒细胞线粒体生物合成和线粒体功能的影响.方法 采用雷公藤甲素建立人卵巢颗粒细胞(KGN)损伤模型,将细胞分为对照组、模型组、阳性药调经促孕丸组、新加苁蓉菟丝子汤组、沉默信息调节因子1(Silent mating type information regulator 1,SIRT1)抑制剂组和SIRT1抑制剂+新加苁蓉菟丝子汤组.用雷公藤甲素孵育6 h造成颗粒细胞功能损伤后再予SIRT1抑制剂以及空白或含药血清.干预48 h后采用CCK8法检测细胞活力;流式细胞术检测凋亡率;ELISA试剂盒检测抗苗勒激素(Anti-Müllerian,AMH)、促卵泡生成素(Follicle-stimulating hormone,FSH)和抑制素B(Inhibin B,INHB);生化试剂盒检测三磷酸腺苷(Adenosine triphosphate,ATP)酶;JC-1 法检测线粒体膜电位(Mitochondrial membrane potential,MMP);电子显微镜和荧光显微镜观察细胞线粒体形态结构、数量和活性变化;Western blot 检测 SIRT1、p-SIRT1、过氧化物酶体增殖物激活受体 γ 辅助活化因子 1(Peroxlsomeproliferator-activated receptor-γ coactlvator-1α,PGC-1α)、核呼吸因子1(Nuclear respiratory factor 1,NRF1)和线粒体转录因子(Mitochondrial transcription factor A,TFAM)的蛋白表达;PCR检测SIRT1、PGC-1α、NRF1和TFAM的mRNA表达和线粒体DNA拷贝数(Mitochondrial DNA copy number,mtDNA).结果 中成药调经促孕丸和补肾养血活血复方新加苁蓉菟丝子汤均可提高颗粒细胞活力(P<0.05);降低细胞凋亡率(P<0.05);提高ATP酶活性和MMP(P<0.05);改善线粒体形态结构损伤;增加线粒体数量、活性和mtDNA表达(P<0.01),上调SIRT1、PGC-1α、NRF1和TFAM的蛋白和mRNA表达(P<0.05).结论 新加苁蓉菟丝子汤对雷公藤甲素所致卵巢颗粒细胞损伤具有保护作用,其机制可能是通过调控SIRT1/PGC-1α信号通路促进新生线粒体生物合成以改善线粒体功能障碍.

目的 研究新加苁蓉菟丝子汤通过调控AMPK/SIRT1 信号通路对卵巢储备功能减退(DOR)大鼠线粒体功能的影响.方法 大鼠给予雷公藤甲素(500 μg/kg)灌胃30d建立DOR模型,随机分为模型组、调经促孕丸组(1.05 g/kg)、新加苁蓉菟丝子汤组(5.11 g/kg),每组6 只,另取6 只正常大鼠作为空白组,灌胃给予相应药物.给药2 周后,观察大鼠动情周期,HE染色计数卵巢各级卵泡、黄体数,ELISA法检测血清FSH、AMH、INHB水平,透射电镜下观察卵巢组织线粒体结构,流式细胞术检测卵巢组织ROS、MMP 水平,试剂盒检测卵巢组织ATP 水平,Western blot法检测卵巢组织AMPK、SIRT1、PGC-1α蛋白表达.结果 与模型组比较,新加苁蓉菟丝子汤组部分大鼠恢复动情周期,初级、次级卵泡数、黄体数增加(P<0.05,P<0.01),闭锁卵泡数减少(P<0.01);血清 FSH 水平降低(P<0.05),AMH水平升高(P<0.05);卵巢组织线粒体形态学及功能损伤得到缓解,ROS 水平降低(P<0.01),MMP、ATP水平升高(P<0.01);卵巢组织AMPK、SIRT1、PGC-1α蛋白表达升高(P<0.01).结论 新加苁蓉菟丝子汤可有效改善卵巢储备功能减退大鼠线粒体功能障碍,促进卵泡发育,保护卵巢功能,其作用机制可能与激活AMPK/SIRT1 信号通路有关.

目的 通过对治疗男性不育症中药复方专利的挖掘,研究其配伍用药规律,为临床遣药组方及新药开发提供依据.方法 检索2010至2021年国家专利数据库中治疗男性不育症的中药复方专利,运用中医传承计算平台V3.0,对中药的药性、药味、归经、功效及中药频次进行统计,通过关联规则和复杂系统熵聚类法等方法分析中药复方的配伍规律.结果 共纳入治疗男性不育症中药复方123首,涉及中药220味,使用频次前6位分别是菟丝子、枸杞子、淫羊藿、熟地黄、当归、肉苁蓉.涉及药物药性以温为主,其次为平、寒;药味以甘居多,其次为苦、辛;归经以肾、肝经为主;功效以补虚类为主,其次为活血化瘀类;"菟丝子-枸杞子"药对组合出现频次最高;置信度居首位的关联组合为"菟丝子,山药→枸杞子";聚类分析得到男性不育症中药复方专利5个核心类方.结论 诸医家治疗男性不育症重视标本兼治,以补肾益精治其本,活血化瘀、清热利湿、健脾益气治其标,注重肝肾同治,脾肾并调,常用五子衍宗丸、左归丸、右归丸、四物汤等经典方加减治疗男性不育症.