阿尔茨海默病(AD)是一种以脑组织内tau蛋白过度磷酸化和β-淀粉样蛋白(Aβ)沉积为典型病理特征的神经退行性疾病,主要表现为记忆力减退,行为异常和认知障碍.幽门螺杆菌与多种胃肠疾病相关,且可能参与中枢神经系统疾病的发生,尤其是AD.幽门螺杆菌可能直接或间接释放毒力因子和炎症介质,通过激活GSK-3β通路或EPK/MAPK通路诱导tau蛋白过度磷酸化参与AD进程.幽门螺杆菌可以通过靶向早老素-2增强γ分泌酶的活性,增加海马和皮质中Aβ42形成,或者激活 C3-C3aR通路增加星形胶质细胞和小胶质细胞交互作用,导致小胶质细胞激活状态改变,触发神经元功能障碍,Aβ清除率下降,最终导致认知障碍.幽门螺杆菌影响微生物群的组成,使得细菌多样性降低,引发大脑免疫调节功能障碍;其自身释放神经毒性物质,如空泡毒素A使轴突损伤或刺激等使得肠脑轴失调,激活神经炎症;通过直接或间接释放多种炎症介质可能诱导血脑屏障破裂,从而参与AD的发病机制.另外,幽门螺杆菌还可通过口腔—鼻腔—嗅觉途径损伤大脑,从而参与AD的发生发展.

目的:探讨咪达唑仑对被剥夺氧和葡萄糖(oxygen-glucose deprivation，OGD)后的N2a/APP695细胞淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein，APP)代谢变化的影响及机制。方法:将处于对数生长期的N2a/APP695细胞用平衡盐缓冲液冲洗后随机分为空白组、对照组及实验组。空白组未经OGD处理，在正常培养箱内培养；对照组行OGD处理后继续培养复氧；实验组在OGD处理后加入不同浓度(分别为70、100、125、150 ng/ml)的咪达唑仑继续培养复氧。24 h后用AnnexinV-FITC/双染法流式细胞术检测各组细胞凋亡比例；用Western blot方法检测各组细胞的Caspase-3、Aβ 1-42、解整合素金属蛋白酶10(adisintegrin and metalloproteinase 10，ADAM10)、β-淀粉样前体蛋白水解酶1(β-site APP cleavage enzyme-1，BACE1)、早老素1(presenilin 1，PS1)蛋白水平。 结果:与空白组相比，对照组的细胞凋亡比例、Caspase-3、Aβ 1-42、BACE1及PS1水平显著升高( P<0.05)；APP及ADAM10水平无明显变化( P>0.05)。与对照组相比，实验组细胞凋亡比例、Caspase-3、Aβ 1-42显著下降( P<0.05)；咪达唑仑70 ng/ml组BACE1显著下降( P<0.05)，而APP、ADAM10及PS1无明显变化( P>0.05)。 结论:OGD可通过上调BACE1及PS-1导致Aβ 1-42表达增加促使细胞凋亡；而咪达唑仑可通过下调BACE1减少Aβ 1-42表达进而减少神经细胞凋亡，发挥对OGD损伤后N2a/APP695细胞的保护作用。

目的:探究酪氨酸激酶结合蛋白(TYROBP)通过磷酯酰肌醇-3-激酶/丝氨酸苏氨酸激酶(PI3K/AKT)信号通路神经炎症及自噬过程的影响。方法:15月龄的C57BL/6J、 TYROBP－/－、淀粉样前体蛋白/早老素1( APP/ PS1)转基因雄性小鼠各10只，分为3组。八臂迷宫实验和新物体识别实验检测动物的学习记忆能力；免疫荧光检测小胶质细胞、NOD样受体家族3(NLRP3)炎症小体的活化情况；实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、白介素-1β(IL-1β)mRNA表达情况；蛋白免疫印迹法(Western blot)检测NLRP3、裂解的半胱氨酸蛋白酶1(cleaved Caspase-1)、选择性自噬接头蛋白1(SQSTM1)、微管相关蛋白轻链3B Ⅱ(LC3B Ⅱ)、TYROBP、p-PI3K、PI3K、p-AKT、AKT蛋白的表达水平。 结果:与同月龄C57BL/6J小鼠相比， APP/ PS1小鼠学习记忆能力显著降低(均 P<0.05)；脑组织NLRP3炎症小体活化增加( P<0.05)，小胶质细胞呈激活状态，炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β的mRNA和蛋白表达水平均增加(均 P<0.05)；自噬相关蛋白LC3B-Ⅱ、SQSTM1表达增加(均 P<0.05)；TYROBP、p-PI3K、p-AKT表达增加(均 P<0.05)。与同月龄C57BL/6J小鼠相比， TYROBP－/－小鼠炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β的蛋白表达下降(均 P<0.05)，LC3B Ⅱ、SQSTM1、p-PI3K、p-AKT表达减少(均 P<0.05)。 结论:TYROBP可能通过激活PI3K/AKT信号通路促进炎症反应、抑制自噬过程，参与AD的发生发展。

早老素(presenilin，PS)基因是家族性阿尔茨海默病(Alzheimer's disease，AD)的主要致病基因。PS基因突变可以促使淀粉样前体蛋白( amyloid precursor protein，APP)加工成有毒形式的β淀粉样蛋白(amyloid beta protein，Aβ)，在AD发病机制中发挥重要作用。然而，目前针对Aβ的靶向治疗对AD尚未能产生良好的效果，这表明可能存在其他的致病机制。近年来，钙稳态异常及其在AD中的病理作用引起了人们的关注。钙信号通路受PS的调节，PS基因突变的神经元中钙调节受损，导致其处理氧化应激的能力降低，从而导致细胞死亡促进AD的发生。PS基因突变引起内质网钙含量的部分耗尽也会导致自噬功能受损。此外，最近的研究表明PS基因突变导致的Ca 2+稳态失衡会引起线粒体代谢受损及大脑网络活动缺陷。本文以钙信号通路为中心，从自噬受损、内质网应激、线粒体功能障碍、细胞凋亡及大脑网络活动缺陷等方面综述PS通过调节钙信号参与AD的致病机制，为AD的病因学研究及药物靶点的发现提供思路。

目的:探讨Notch1信号对儿童急性B前体淋巴细胞白血病(BCP-ALL)Foxp3基因组蛋白乙酰化的影响及其在调节性T细胞(Treg)异常机制中的作用。方法:初诊治疗前的急性BCP-ALL患儿38例，同年龄健康对照儿童15例，分别取血备检。采用流式细胞术检测外周血CD4 +CD25 hiFoxp3 + Treg细胞比例及Foxp3、细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(cytotoxic T lymphocyte associated antigen 4，CTLA4)、糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体(glucocorticoid-induced tumor necrosis factorreceptor，GITR)、CD39、Notch1蛋白表达水平；染色质免疫共沉淀技术检测CD4 +T细胞Foxp3基因启动子组蛋白H4乙酰化(H4Ac)及与Notch1受体胞内结合域(Notch1 intracellular domain，NICD1)、p300的结合水平；real-time PCR分析CD4 +T细胞Foxp3、早老素1(presenilin 1，PSEN1)、主导控制样蛋白1(mastermind-like transcriptional coactivator 1，MAML1)、SKI交互蛋白(SKI-interacting protein，SKIP)、F-Box和WD40蛋白7(F-box and WD40 domain protein 7，FBXW7)、糖原合成酶3β(glycogen synthase kinase-3 beta，GSK3β)、含锌指结构的转录因子(IKAROS)等mRNA表达水平；ELISA检测血浆中IL-10和TGF-β浓度。 结果:(1)与对照组比较，BCP-ALL患儿外周血CD4 +CD25 hiFoxp3 +Treg细胞比例、分化及功能相关分子(Foxp3、CTLA4、GITR、CD39)表达水平和血浆IL-10、TGF-β浓度显著增高( P<0.05)。(2)BCP-ALL患者Foxp3基因启动子H4Ac及与NICD1、p300的结合水平明显高于对照组( P<0.05)，且与NICD1、p300的结合水平和Foxp3转录呈正相关( r＝0.58和0.46， P<0.05)。经竞争性抑制后，BCP-ALL患儿前3项指标均低于未处理组( P<0.05)；对照组Foxp3基因启动子与NICD1结合水平显著降低( P<0.05)，而另2项指标与未处理对照组比较差异无统计学意义( P>0.05)。(3)与对照组比较，BCP-ALL患儿CD4 + T细胞Notch1、PSEN1、MAML1、SKIP表达水平显著升高( P<0.05)，负性调节因子FBXW7表达明显降低( P<0.05)，GSK3β、IKAROS表达差异无统计学意义( P>0.05)。 结论:FBXW7表达低下所致Notch1信号过度活化可能是导致BCP-ALL患儿Foxp3基因启动子H4Ac及Treg异常的重要因素。

目的:探讨Notch1信号对川崎病患儿调节性T细胞（Treg）的影响及在血管损伤机制中的作用。方法:以2019年3月至2021年6月收治的42例川崎病患儿为研究对象，分别于急性期及输注丙种球蛋白（IVIG）治疗后取样送检，对照组为32名同年龄健康儿童。采用流式细胞术检测外周静脉血CD4 +CD25 hiFoxp3 + Treg数量及叉头螺旋翼状转录因子（Foxp3）、细胞毒性T细胞相关抗原4（CTLA4）、糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体（GITR）、Notch1蛋白表达水平；免疫共沉淀-定量PCR技术鉴定CD4 + T细胞Foxp3基因启动子组蛋白H4乙酰化（H4Ac）及Notch1受体胞内结合域1（NICD1）、重组信号结合蛋白J（RBP-J）、p300结合水平；荧光定量PCR分析早老素1（PSEN1）、主导控制样蛋白1（MAML1）、RBP-J和Foxp3 mRNA表达；ELISA检测血浆中IL-10、TGF-β蛋白浓度。采用 t检验、Pearson相关分析法进行统计分析。 结果:①与健康对照组相比，急性期川崎病患儿CD4 +CD25 hiFoxp3 + Treg比例显著降低[（4.3±1.5）%和（7.9±2.9）%； t=6.41， P<0.001]，分化及功能相关分子（Foxp3、CTLA4、GITR）表达水平和血浆IL-10、TGF-β蛋白浓度明显下降（ t=6.87， P<0.001； t=4.26， P<0.001； t=7.88， P<0.001； t=8.42， P<0.001； t=13.01， P<0.001），其中合并冠状动脉损伤组（CAL）前述6项指标低于无冠状动脉损伤组（NCAL）[ t=5.83， P<0.001； t=3.83， P<0.001； t=3.28， P=0.002； t=5.05， P<0.001； t=5.96， P<0.001； t=5.17， P<0.001]，治疗后显著上调[ t=7.13， P<0.001； t=6.10， P<0.001； t=4.31， P<0.001； t=6.55， P<0.001； t=7.40， P<0.001； t=7.84， P<0.001]。②急性期川崎病患儿Foxp3基因启动子H4Ac修饰及NICD1、p300结合水平明显低于同年龄对照组（ t=10.25， P<0.001； t=6.93， P<0.001； t=6.75， P<0.001），其中CAL组Foxp3基因启动子H4Ac及NICD1、p300结合水平低于NCAL组（ t=6.08， P<0.001； t=2.66， P=0.011； t=6.02， P<0.001），治疗后明显上调（ t=7.72， P<0.001； t=4.16， P<0.001； t=5.76， P<0.001）。Pearson相关分析显示Foxp3基因启动子H4Ac与其mRNA水平呈正相关（ r=0.47， P<0.001）。各组间Foxp3/RBP-J结合水平略有改变，但差异无统计学意义（ t=0.57， P>0.005； t=0.61， P>0.05； t=1.20， P>0.05）。③急性期川崎病患儿CD4 + T细胞表面Notch1受体蛋白及下游信号分子PSEN1、MAML1及RBP-J表达水平显著下调[ t=5.28， P<0.001； t=6.31， P<0.001； t=11.78， P<0.001； t=8.06， P<0.001]，且CAL组前4项指标均低于NCAL组[ t=3.16， P=0.003； t=4.13， P<0.001； t=5.42， P<0.001； t=4.05， P<0.001]，治疗后呈不同程度回调（ t=4.77， P<0.001； t=6.43， P<0.001； t=11.95， P<0.001； t=7.79， P<0.001）。经体外重组人Jagged1蛋白刺激48 h后，川崎病患儿及对照组CD4 + T细胞Foxp3基因H4Ac及NICD1、p300结合水平明显高于未处理组[（川崎病： t=15.36， P<0.001； t=7.25， P<0.001； t=14.29， P<0.001），（对照组： t=7.87， P<0.001； t=5.71， P<0.001； t=8.74， P<0.001）]，RBP-J结合水平差异无统计学意义（川崎病： t=1.11， P>0.05；对照组： t=1.37， P>0.05），但川崎病患儿Foxp3基因H4Ac及NICD1、p300结合水平仍低于对照组（ t=3.86， P<0.001； t=3.42， P=0.001； t=2.85， P=0.006）。④经川崎病血清刺激健康儿童外周血PBMCs建立炎症细胞模型，IVIG干预组Treg比例、Foxp3表达水平及CD4 + T细胞Notch1、RBP-J表达水平明显高于未处理组（ t=7.10， P<0.001； t=10.16， P<0.001； t=8.06， P<0.001； t=9.77， P<0.001），Foxp3基因启动子H4Ac及NICD1结合水平亦高于后者（ t=7.24， P<0.001； t=8.24， P<0.001）。 结论:Notch1信号低下所致Treg数量不足及功能障碍可能是导致川崎病患儿免疫功能异常活化及血管损伤的重要因素之一。

目的:探究六味地黄丸对β-淀粉样蛋白前体/早老素蛋白1(amyloid β-precursor protein/presenilin-1，APP/PS1)双转基因小鼠行为及Toll样受体4/核因子κB(Toll-like receptor 4/nuclear factor kappa-B，TLR4/NF-κB)信号转导途径的影响。方法:3月龄雌性APP/PS1小鼠40只，按照随机数字表法分为模型组、六味地黄丸低剂量组(0.59 g/kg，2次/d，灌胃)、中剂量组(1.18 g/kg，2次/d，灌胃)、高剂量组(2.36 g/kg，2次/d，灌胃)和布洛芬组(0.04 g/kg，2次/d，灌胃)，每组8只；8只体质量相匹配的3月龄野生型C57BL/6小鼠作为对照组；对照组和模型组小鼠给予等体积0.9%氯化钠溶液灌胃(2次/d)；所有小鼠连续干预3个月。采用Morris水迷宫实验检测小鼠的学习记忆能力，采用ELISA法检测小鼠血清肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)、白介素-1β(interleukin-1β，IL-1β)水平，免疫组化法检测海马组织β-淀粉样蛋白(amyloid β-protein，Aβ)、胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein，GFAP)及NF-κB水平，Western blot法检测海马组织TLR4、髓样分化因子88(myeloid differentiation primary response gene 88，MyD88)及磷酸化NF-κB(phosphorylated NF-κB，p-NF-κB)蛋白表达水平。采用SPSS 20.0进行数据处理，多组间的比较采用重复测量方差分析或单因素方差分析。结果:重复测量方差分析结果显示，6组小鼠的逃避潜伏期比较，时间和组别的交互作用显著( F交互＝117.219， P<0.001)。各组小鼠第5天逃避潜伏期均低于第1天(均 P<0.05)；第1～5天布洛芬组和六味地黄丸中、高剂量组小鼠逃避潜伏期均低于模型组(均 P<0.05)；在第3～5天，六味地黄丸中、高剂量组小鼠的逃避潜伏期均低于六味地黄丸低剂量组(均 P<0.05)。6组小鼠平台象限停留时间百分比和穿越平台次数均差异有统计学意义( F＝5.451，4.824，均 P<0.05)。六味地黄丸高、中剂量组和布洛芬组小鼠在平台象限停留时间百分比[(50.77±5.49) %，(54.39±5.71) %，(51.98±6.12) %]、穿越平台次数[(5.9±1.1)次，(6.0±1.3)次，(5.1±0.8)次]均高于模型组[(27.32±3.22)%，(2.2±1.0)次](均 P<0.05)。免疫组化结果显示，6组小鼠海马组织Aβ、GFAP和NF-κB积分光密度值均差异有统计学意义( F＝57.52，45.37，79.10，均 P<0.05)。六味地黄丸高、中剂量组和布洛芬组海马组织Aβ、GFAP和NF-κB积分光密度值均低于模型组(均 P<0.05)，六味地黄丸高、中剂量组海马组织Aβ、GFAP和NF-κB积分光密度值均低于六味地黄丸低剂量组(均 P<0.05)。ELISA结果显示，6组小鼠血清TNF-α和IL-1β含量均差异有统计学意义( F＝3.996，6.395，均 P<0.05)；Western blot结果显示6组小鼠海马组织TLR4、MyD88及p-NF-κB蛋白表达均差异有统计学意义( F＝15.710，3.522，4.119，均 P<0.05)。六味地黄丸高、中剂量组和布洛芬组血清TNF-α和IL-1β含量均低于模型组(均 P<0.05)，六味地黄丸高、中剂量组血清TNF-α[(18.90±2.33)ng/L，(21.56±2.49) ng/L]和IL-1β[(5.88±0.80)ng/L，(6.75±0.83)ng/L]含量均低于低剂量组[(30.77±2.89)ng/L，(9.11±1.27)ng/L](均 P<0.05)。六味地黄丸高、中剂量组和布洛芬组海马组织TLR4、MyD88及p-NF-κB蛋白表达均低于模型组(均 P<0.05)，六味地黄丸高、中剂量组海马组织TLR4[(0.254±0.091)，(0.318±0.122)]、MyD88[(0.229±0.077)，(0.386±0.119)]及p-NF-κB[(0.412±0.188)，(0.358±0.119)]蛋白表达均低于低剂量组[(0.617±0.172)，(0.672±0.166)，(0.799±0.227)](均 P<0.05)。 结论:六味地黄丸能够明显改善阿尔茨海默病模型小鼠学习记忆障碍，可能是通过抑制TLR4/NF-κB信号转导途径，降低TNF-α和IL-1β的表达，从而减轻中枢免疫炎性反应，发挥抗AD的作用。

阿尔茨海默病(AD)患者或AD动物模型大脑中β-淀粉样蛋白(Aβ)、tau蛋白、早老素(PS)1、PS2和载脂蛋白E4(ApoE4)等会影响神经元细胞膜、内质网膜和线粒体膜上的钙通道，最终导致神经元的钙稳态失衡。Aβ还可以作用于星形胶质细胞(AS)内质网引起AS内钙信号异常。而大脑异常的钙信号反过来会作用于神经元和AS，促进Aβ的产生、tau蛋白磷酸化，从而加重AD病情。本研究围绕AD中神经元和AS内钙信号的变化进行综述，以期阐明神经元和AS内钙稳态失衡与AD病理学特征之间的联系，为AD的预防和治疗提供新思路。

目的:研究β淀粉样蛋白(β-amyloid，Aβ)对大鼠海马细胞钙稳态和内质网钙库表达的影响。方法:将60只成年清洁级雄性SD大鼠按照体质量相匹配的方法分为正常对照组、假手术组、生理盐水组、Aβ 25-35高剂量组(7.5 μg/μL)、Aβ中剂量组(5.0 μg/μL)和Aβ低剂量组(2.5 μg/μL)，每组10只。Aβ 25-35高、中、低剂量组大鼠按分组分别于海马内微量注射对应剂量的Aβ 25-35，每只动物左右侧海马各注射2 μL；并设立生理盐水组(注射2 μL 0.9%氯化钠溶液)、假手术组(动物做开颅处理，海马内不注射任何液体)与正常对照组(正常饲养，不做任何处理)。实验动物饲养至注射后14 d，观察并记录大鼠行为和状态，记录体质量和食物摄入总量。应用光学显微镜观察海马组织病理改变，应用透射电镜观察大鼠海马细胞内质网病理学改变；应用流式细胞仪技术检测大鼠海马内游离Ca 2+的浓度；用荧光定量PCR方法和Western blot方法测早老素(PS)、肌质网钙ATP酶(SERCA)和ryanodine受体(RyR)的mRNA和蛋白表达水平。应用SPSS 25.0软件对实验结果进行统计分析，多组间比较采用重复测量方差分析和单因素方差分析，组间多重比较采用Dunnett和Tukey检验。 结果:(1)各实验组大鼠体质量采用重复测量方差分析，发现时间主效应显著( F＝153.15， P<0.001)，组间效应和交互效应不显著( F＝1.547， P＝0.374； F＝1.598， P＝0.113)。与对照组比较，Aβ 25-35高、中、低剂量组大鼠在注射后7 d、14 d体质量差异无统计学意义(均 P>0.05)。Aβ 25-35高、中、低剂量组大鼠食物利用率分别为(22.9±4.0)%、(23.0±4.2)%和(22.6±3.2)%，与对照组[(23.7±5.0)%]相比均差异无统计学意义(均 P>0.05)。注射后14 d内，Aβ 25-35高剂量组大鼠出现萎靡和嗜睡的表现。(2)病理观察结果显示，Aβ 25-35高剂量组和中剂量组大鼠海马细胞内质网裂隙扩张、肥大，线粒体肿胀变形。(3)Aβ 25-35注射后14 d，高、中、低剂量组大鼠海马内游离钙所产生的荧光强度分别为(820.43±6.89)、(720.12±4.30)和(680.50±4.32)，均高于对照组(592.17±3.97)(均 P<0.001)。(4)RT-PCR和Western blot实验结果显示，与对照组相比，Aβ 25-35高剂量组和中剂量组大鼠海马细胞内PS、SERCA mRNA和蛋白的表达上调(均 P<0.05)，同时海马细胞内RyR mRNA和蛋白的表达下调(均 P<0.05)。 结论:Aβ 25-35在海马组织内沉积，可以破坏海马组织内Ca 2+稳态，游离钙及相关蛋白上调，从而发挥神经毒性作用。

目的 观察miR-27 a-3p在七氟烷诱发的神经认知功能障碍中的作用.方法 生物信息学预测及验证:通过生物信息学数据库预测miR-27a-3p的靶基因,用双荧光素酶报告基因法和蛋白质印迹法验证miR-27 a-3p与靶基因的相互作用.细胞实验:将细胞分为2组,miR-27a-3p干涉对照组转染miR-27a-3p干涉对照质粒,miR-27a-3p干涉处理组转染miR-27a-3p干涉质粒,转染质粒之前先用4％的七氟烷处理6 h.以蛋白质印迹法检测各组SY5Y细胞中微管相关蛋白tau(tau)和磷酸化的tau蛋白(p-tau)的表达水平.动物实验:小鼠被随机分为对照组(不做任何处理)、七氟烷处理组(用4％七氟烷处理)、miR-27a-3p干涉对照组(用4％七氟烷处理后注射miR-27a-3p干涉对照质粒)、miR-27a-3p干涉处理组(用4％七氟烷处理后注射miR-27a-3p干涉质粒).通过水迷宫实验测试小鼠的神经认知能力,用免疫荧光法检测小鼠海马组织中的p-tau水平.结果 生物信息学预测及其验证:生物信息学的预测提示早老素1(PSEN1)可能是miR-27a-3p的靶基因.双荧光素酶报告基因法和蛋白质印迹法表明miR-27a-3p与PSEN1存在相互作用.细胞实验:miR-27a-3p干涉对照组和干涉处理组的p-tau水平分别为0.69±0.08和0.21±0.05.动物实验:对照组、七氟烷处理组、miR-27a-3p干涉对照组和miR-27a-3p干涉处理组的逃逸潜伏时间分别为(27.54±3.67)、(52.38±6.12)、(55.16±5.79)和(38.46±4.78)s,新事物探索指数结果分别为0.78±0.11、0.31±0.07、0.33±0.06 和 0.57±0.08,免疫荧光检测结果显示小鼠海马组织中p-tau水平也显著下降(P＜0.05).结论 miR-27 a-3p靶向PSEN1基因调控tau蛋白的磷酸化,干涉miR-27a-3p可缓解七氟烷诱发的小鼠神经认知功能障碍.