目的 研究海绵共附生真菌Fusarium equiseti SCSIO 41019的次级代谢产物及抑菌活性.方法 采用中压硅胶柱色谱、中压反相ODS柱色谱及高效液相色谱等方法对发酵产物进行分离和纯化,运用核磁数据及文献对比的方法鉴定化合物结构.采用滤纸片琼脂扩散法、改良肉汤稀释法评价化合物的抑菌活性.结果 从其大米发酵产物中分离并鉴定了8个化合物,分别为equisetin(1)、5'-epiequisetin(2)、lumichrome(3)、N-乙酰基色胺(4)、亚油酸(5)、methyl (4-hydroxyphenyl) acetate(6)、methyl(2-hydroxyphenyl) acetate(7)和graminin B(8).化合物1、2和5对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)分别具有不同程度的抑制作用,最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)为2.0～125μg/mL,其中化合物1的抑菌活性最强(MIC值分别为2.0和3.9μg/mL).结论 从菌株Fusarium equiseti SCSIO 41019分离得到两个具良好抑菌活性的化合物(1～2),为将其开发为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的先导化合物提供一定参考.

对麦穗携带的真菌、麦穗洗涤液及叶锈菌和白粉菌分别做了豚鼠和人皮肤斑贴试验.发现豚鼠间隔12日重复斑贴反应强度及阳性率比初次试验显着增加,串珠镰刀菌、半裸镰刀菌、木贼镰刀菌、尖端单抱、黄曲霉、黑曲霉、杂色曲霉和麦穗洗涤液阳性率达100%;人皮肤斑贴试验阳性率超过50%者恰与上述菌相同.结果提示:上述7种菌是此病的发病原因,这些菌及其所产生的真菌毒素对人有毒性及致敏作用.故此病的本质是职业性真菌性接触性皮炎.发病与叶锈菌和白粉菌无关.

[背景]科学研究表明,由于南极环境条件特殊,微生物资源丰富,有望筛选出功效显著的抗菌微生物.[目的]以黄瓜枯萎病致病菌木贼镰刀菌(Fusarium equiseti)为指示菌,从南极沉积物中分离筛选具有拮抗作用的细菌菌株并对其抑菌物质进行初步鉴定.[方法]应用平板对峙法和琼脂扩散法分别对样品和发酵液进行初筛和复筛,筛选出对F.equiseti抑菌效果最强的菌株,基于形态学、生理生化、分子生物学分析,对该菌株进行鉴定.之后,对目标菌株发酵上清中的抑菌物质进行抑菌谱研究,并对其抑菌成分进行温度和pH的稳定性检测,通过硫酸铵沉淀的方法初步鉴定发酵液中的抑菌物质.[结果]从南极沉积物样品中共分离纯化出62株细菌,有5株具有较好的抑菌效果,其中抑菌效果最强的菌株鉴定为枯草芽孢杆菌斯氏亚种(Bacillus subtilis subsp, spizizenii),命名为JYM35.抑菌谱检测结果显示,菌株JYM35对丝瓜枯萎病致病菌层生镰刀菌(Fusarium proliferatum)和辣椒枯萎病致病菌F.equiseti具有较强的抑菌效果,对长豆褐腐病致病菌笄霉属(Choanephora)有较明显的拮抗作用,对水产致病菌副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)和溶藻弧菌(V.alginolyticus)也有一定的拮抗作用.菌株JYM35发酵上清中所含的抑菌物质热稳定性强且耐碱不耐酸,硫酸铵沉淀后可初步确定其抑菌物质隶属蛋白类.[结论]菌株JYM35是一株产蛋白类活性物质的广谱型抑菌菌株,对枯萎病致病菌的拮抗作用最强.因此具有较好的开发利用价值.

[背景]由木贼镰刀菌[Fusarium equiseti(Corda)Sacc.]引起的关防风根腐病,是近年来导致关防风产量及质量下降的主要土传病害之一.生物防治因其对环境安全及人畜无害等优势,成为目前植物病害防治的一种有效手段.[目的]挖掘关防风根际土壤中对木贼镰刀菌具有良好拮抗作用的生防菌株.[方法]采用稀释平板法分离根际土壤细菌;用滤纸片法和牛津杯法对拮抗细菌进行筛选和抑菌谱检测;用抗生素标记法标记拮抗细菌并测定其定殖能力;通过盆栽实验研究其对关防风根腐病的防效;通过形态学、生理生化特征及16S rRNA基因序列确定分类学地位.[结果]从健康关防风根际土壤中分离纯化了157株细菌,筛选获得对关防风根腐病菌具有显著抑菌作用的拮抗细菌SC-119,无菌滤液的抑菌率可达68.53％,而且兼具广谱抑菌能力和良好的定殖能力;盆栽实验表明,菌株SC-119对关防风根腐病的防治效果达到67.39％,其相对防效较接种哈茨木霉菌剂、枯草芽胞杆菌菌剂和代森锰锌分别提高了29.03％、32.26％和16.13％;对菌株SC-119进行分类学鉴定,确定其为萎缩芽胞杆菌(Bacillus atrophaeus).[结论]萎缩芽胞杆菌SC-119对关防风根腐病菌具有良好的拮抗作用,防效优良,具有良好的生防潜力,这为关防风根腐病的防治提供了优良的生防菌源,也为菌株SC-119的开发利用奠定了基础.

目的:利用浙贝母(Fritillaria thunbergii)根腐病病原菌之一的茄病镰刀菌(Fusarium solani)为抗原制备分泌特异性单克隆抗体(单抗)的细胞株,开发基于单抗的胶体金免疫层析试纸条,为检测浙贝母根腐病提供技术支撑.方法:以茄病镰刀菌全菌体蛋白质提取液为抗原,利用杂交瘤技术制备能分泌针对茄病镰刀菌特异性单抗的细胞株;间接ELISA和Western blot检测单抗的特异性、效价、灵敏度、结合蛋白等特性;采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒并标记单抗,制备胶体金免疫层析试纸条.结果:获得3株能分泌针对茄病镰刀菌的特异性单抗的细胞株,分别命名为FsA3、FsG6、FsD4.其中FsA3检测灵敏度为24.41 ng/mL,FsG6、FsD4检测灵敏度均为12.21 ng/mL.FsA3、FsG6、FsD4均针对茄病镰刀菌强烈反应,且不与细极链格孢(Alterniaria tenuissima)、交链格孢(A.alternata)、灰葡萄孢(Botrytis cinerea)、木贼镰刀菌(F.equiseti)、变红镰刀菌(F.incarnatum)、尖孢镰刀菌(F.oxysporum)、茎点霉属真菌(Phoma sp.)、Phomopsis oblonga等抗原发生交叉反应.基于FsG6的胶体金免疫层析试纸条检测浙贝母无菌组培苗提取液时只出现质控线,加入 100 ng茄病镰刀菌抗原或浙贝母根腐病病株样品时,均出现肉眼可见的质控线和检测线.结论:制备的单抗和试纸条具有简单、快速、特异性和灵敏度高的优点,可用于检测浙贝母病株中分离到的茄病镰刀菌,这为浙贝母根腐病田间快速准确检测提供了技术支撑.

作为世界性分布的镰刀属常见病原真菌,尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)和木贼镰刀菌(F.equiseti)对包括经济作物及药用植物等的生长均有较大危害.利用源自于植物根际土壤的有益微生物防控尖孢镰刀菌和木贼镰刀菌引起的真菌性病害,是目前较为理想的植物病害管理策略.为获得可有效抑制尖孢镰刀菌和木贼镰刀菌的生防菌源,于防风根际土壤中分离纯化真菌104株,基于平板对峙法筛选获得1株对尖孢镰刀菌和木贼镰刀菌具有显著抑制效果的菌株MR-43,结合形态特征、ITS序列分析,将其确定为Sirastachys castanedae(GenBank登录号:OK287148.1),隶属于Sirastachys组进化分支,发现其可宿生于植物根际土壤.基于盆栽试验法,探究MR-43在防风栽培土壤中的定殖能力,评价MR-43对由尖孢镰刀菌引起的防风枯萎病和由木贼镰刀菌引起的防风根腐病的防病能力,及其对防风植株的促生能力.结果显示,Sirastachys castanedae MR-43对尖孢镰刀菌、木贼镰刀菌的抑菌率为57％以上,且经多次验证抑菌效果稳定;菌株MR-43可稳定定殖于防风栽培土壤并实现有效扩繁;菌株MR-43的孢子悬液可有效控制防风枯萎病和防风根腐病,平均防效达68.52％,与多菌灵、代森锰锌的防病效果无显著性差异(P>0.05);此外,MR-43对防风植株生长具有明显促进作用.因此,Sirastachys castanedae MR-43在防风枯萎病、根腐病等真菌性病害管理方面具有较好的开发价值及应用潜力.