目的:探究竹节参总皂苷(TSPJ)对糖尿病心肌病(DCM)大鼠心肌细胞铁死亡的作用及调控机制。方法:实验1：将SD大鼠分为对照组、DCM组、TSPJ低剂量组、TSPJ高剂量组、二甲双胍组(Met)，每组各10只。实验2：将SD大鼠分为对照组、DCM组、TSPJ组、腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)抑制剂Compound C组、TSPJ＋AMPK激动剂AICAR组，每组各10只。除对照组外，其余各组大鼠均采取腹腔注射链脲佐菌素构建DCM模型。各组大鼠给予对应药物干预8周后，检测各组大鼠体重及糖脂代谢水平；超声心动图检测大鼠心功能指标；酶联免疫吸附(ELISA)法检测各组大鼠血清乳酸脱氢酶(LDH)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)、肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)水平；苏木精-伊红(HE)染色和电镜观察心肌组织病理变化；试剂盒检测心肌组织超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH)、丙二醛、活性氧簇(ROS)及Fe 2＋水平；Western印迹法检测心肌组织铁死亡、铁自噬以及AMPK/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白/UNC-51样激酶1(mTOR/ULK1)信号通路相关蛋白表达。 结果:与对照组相比，DCM组大鼠左心室射血分数(EF)、左室短轴缩短率(FS)、舒张早期与晚期血流速度峰值比值(E/A)均显著降低，舒张末期左心室内径(LVEDd)增加，血清LDH、cTnI、CK-MB升高，心肌组织SOD、GSH降低，丙二醛、ROS和Fe 2＋增加，转铁蛋白受体1(TFR1)、核受体共激活因子4(NCOA4)、LC3-II/LC3-I、Beclin-1、磷酸化AMPK及磷酸化ULK1表达水平升高，谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、溶质载体家族7成员11(SLC7A11)、磷酸化mTOR表达水平降低。与DCM组相比，各治疗组大鼠上述指标均得到显著改善。与TSPJ组相比，AMPK激动剂AICAR能够逆转TSPJ对DCM大鼠心肌细胞铁死亡及AMPK/mTOR/ULK1通路介导的铁自噬作用。 结论:TSPJ能够通过调控AMPK/mTOR/ULK1介导的铁自噬抑制DCM大鼠心肌细胞铁死亡，改善心肌损伤。

目的:评价核受体辅激活因子4 (NCOA4)介导的铁自噬在小鼠肠缺血再灌注损伤中的作用及其与铁死亡的关系。方法:SPF级健康雄性C57BL/6小鼠30只，8~10周龄，体重21~25 g，采用随机数字表法分为5组( n＝6)：假手术组(Sham组)、肠缺血再灌注组(I/R组)、肠缺血再灌注＋NCOA4沉默组(I/R＋NCOA4 shRNA组)、肠缺血再灌注＋自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤组(I/R＋3-MA)和肠缺血再灌注＋NCOA4沉默＋自噬激活剂雷帕霉素组(I/R＋NCOA4 shRNA＋RAPA组)。采用夹闭肠系膜上动脉45 min再灌注的方法制备小鼠肠缺血再灌注损伤模型。于造模前2周，I/R＋NCOA4 shRNA组和I/R＋NCOA4 shRNA＋RAPA组尾静脉注射AAV-NCOA4-shRNA 1×10 11 vp，Sham组、I/R组和I/R＋3-MA组注射AAV shCtrl(腺病毒对照) 1×10 11 vp。于造模前7 d I/R＋NCOA4 sh-RNA＋RAPA组腹腔注射雷帕霉素4 mg/kg，1次/d；于造模前1 h I/R＋3-MA组腹腔注射3-甲基腺嘌呤10 mg/kg。于再灌注2 h时，处死取肠组织，行Chiu评分，采用比色法检测MDA、谷胱甘肽(GSH)和Fe 2＋含量，ELISA法检测TNF-α和IL-1β含量，Western blot法检测NCOA4、微管相关蛋白1轻链3(LC3)、长链脂酰辅酶A合成酶4(ACSL4)、铁蛋白重链1(FTH1)和谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)表达水平，计算LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值。 结果:与Sham组比较，I/R组肠组织Chiu评分、MDA、Fe 2＋、TNF-α和IL-1β含量升高，GSH含量降低，NCOA4和ACSL4表达上调，LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高，GPX4和FTH1表达下调( P<0.05)；与I/R组比较，I/R＋NCOA4 shRNA组和I/R＋3-MA组肠组织Chiu评分、MDA、Fe 2＋、TNF-α和IL-1β含量降低，GSH含量升高，I/R＋NCOA4 shRNA组肠组织NCOA4和ACSL4表达下调，GPX4和FTH1表达上调( P<0.05)，I/R＋3-MA组ACSL4表达下调，LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值降低，GPX4和FTH1表达上调( P<0.05)；I/R＋NCOA4 shRNA组与I/R＋NCOA4 shRNA＋RAPA组上述指标比较差异无统计学意义( P>0.05)。 结论:NCOA4介导的铁自噬可促进铁死亡，参与小鼠肠缺血再灌注损伤的病理生理机制。

目的:评价信号转导和转录激活因子3(STAT3)/核受体共激活因子4(NCOA4)介导的铁自噬在红景天苷减轻小鼠肠缺血再灌注损伤中的作用及其与铁死亡的关系。方法:SPF级健康雄性C57BL小鼠36只，6～8周龄，体质量20～25 g，采用随机数字表法分为6组( n＝6)：假手术组(S组)、假手术＋红景天苷组(SS组)、肠缺血再灌注组(IR组)、肠缺血再灌注＋红景天苷组(IS组)、肠缺血再灌注＋红景天苷＋自噬激活剂雷帕霉素组(ISR组)和肠缺血再灌注＋红景天苷＋STAT3活化剂Colivelin组(ISC组)。IR组、IS组、ISR和ISC组采用夹闭肠系膜上动脉45 min、再灌注30 min的方法建立小鼠肠缺血再灌注损伤模型，S组和SS组仅分离肠系膜上动脉，不夹闭。于造模前1周时，SS组、IS组、ISC组和ISR组连续7 d腹腔注射红景天苷40 mg/kg，1次/d; ISR组连续7 d腹腔注射雷帕霉素4 mg/kg，1次/d; ISC组连续7 d腹腔注射Colivelin 1 mg/kg，1次/d；其余2组连续7 d腹腔注射等量生理盐水，1次/d。于再灌注30 min时处死小鼠，取小肠组织，HE染色后光镜下观察病理学结果，并行Chiu评分，检测MDA、Fe 2＋、谷胱甘肽(GSH)、ROS含量及SOD活性，采用Western blot法检测p-STAT3、STAT3、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、NCOA4和铁蛋白重链1(FTH1)的表达。 结果:与S组比较，IR组小肠组织Chiu评分、MDA、Fe 2＋和ROS含量升高，GSH含量降低，SOD活性降低，小肠组织p-STAT3和NCOA4表达上调，GPX4和FTH1表达下调，p-STAT3/STAT3比值升高( P<0.05)，小肠组织发生病理学损伤，SS组上述各指标差异无统计学意义( P>0.05)；与IR组比较，IS组小肠组织Chiu评分、MDA、Fe 2＋和ROS含量降低，GSH含量升高，SOD活性升高，p-STAT3和NCOA4表达下调，GPX4和FTH1表达上调，p-STAT3/STAT3比值降低( P<0.05)，小肠组织病理学损伤减轻；与IS组比较，ISR组和ISC组小肠组织Chiu评分、MDA、Fe 2＋和ROS含量升高，GSH含量降低，SOD活性降低，p-STAT3和NCOA4表达上调，GPX4和FTH1表达下调，p-STAT3/STAT3比值升高( P<0.05)，小肠组织病理学损伤加重。5组小肠组织STAT3表达比较差异无统计学意义( P>0.05)。 结论:STAT3/NCOA4介导的铁自噬参与了红景天苷减轻小鼠肠缺血再灌注损伤的过程，可能与抑制铁死亡有关。

铁自噬(ferritinophagy)是细胞选择性自噬的一种类型，该过程由核受体辅激活因子4(nuclear receptor coativator 4，NCOA4)介导，使铁蛋白(主要是铁蛋白重链1)在自噬体中降解，导致铁蛋白结合的铁释放出来成为游离铁。铁自噬与新发现的细胞死亡形式——铁死亡有着一定的联系，在肿瘤发生中具有一定作用。本文介绍了铁自噬的概念及其相关基因，并对铁自噬相关基因在铁死亡和肿瘤发生中的作用进行了综述，以期为相关肿瘤的治疗提供一种新的思路。

目的:评价小鼠脑缺血再灌注早期环鸟苷酸-腺苷酸合成酶(cGAS)-干扰素基因刺激蛋白(STING)信号通路与铁自噬的关系。方法:清洁级健康雄性C57BL/6小鼠24只，6~8周龄，体重21~25 g，采用随机数字表法分为4组( n＝6)：假手术组(Sham组)、脑缺血再灌注损伤(CIRI)组、CIRI＋cGAS抑制剂组(CIRI＋RU组)和CIRI＋cGAS抑制剂＋过表达核受体辅激活因子4(NCOA4)组(CIRI＋RU＋LV-NCOA4组)。采用大脑中动脉栓塞(MCAO)法制备CIRI模型。CIRI＋RU组于再灌注前10 min腹腔注射cGAS抑制剂5 mg/kg；CIRI＋RU＋LV-NCOA4组于MCAO前7 d脑室注射NCOA4过表达慢病毒(1×10 9 TU/ml)2 μl，其余操作同CIRI＋RU组。再灌注6 h后行神经功能缺陷评分，随后处死小鼠并取脑，TTC法检测脑梗死体积，TBA法检测MDA含量，WST-1法检测SOD活性，Western blot法检测cGAS、STING、NCOA4、铁蛋白和微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)的表达。 结果:与Sham组相比，CIRI组神经功能缺陷评分和脑梗死体积增加，脑组织SOD活性降低，MDA含量升高，cGAS、STING、NCOA4和LC3B表达上调，铁蛋白表达下调( P<0.05)；与CIRI组相比，CIRI＋RU组神经功能缺陷评分和脑梗死体积减小，脑组织SOD活性升高，MDA含量降低，cGAS、STING、NCOA4和LC3B表达下调，铁蛋白表达上调( P<0.05)；与CIRI＋RU组相比，CIRI＋RU＋LV-NCOA4组神经功能缺陷评分和脑梗死体积增加，脑组织SOD活性降低，MDA含量升高，NCOA4和LC3B表达上调，铁蛋白表达下调( P<0.05)，cGAS和STING表达差异无统计学意义( P>0.05)。 结论:cGAS-STING信号通路可促进铁自噬的过度激活，增强氧化应激，进而诱发小鼠早期CIRI。

目的 观察祛瘀解毒方对子宫内膜异位症(EMS)模型大鼠在位子宫内膜组织铁自噬的影响,探讨其治疗EMS的作用机制.方法 50只雌性SD大鼠随机分为空白组、模型组、西药组和祛瘀解毒方高、低剂量组,每组10只.除空白组外,其余组均采用自体移植法造模,成模后分别予相应溶液灌胃4周.HE染色观察在位子宫内膜组织形态,试剂盒检测在位子宫内膜组织亚铁离子(Fe2+)含量,Western blot检测在位子宫内膜组织核受体共激活因子4(NCOA4)、铁蛋白重链1(FTH1)、LC3BⅡ/Ⅰ、p62蛋白表达,qPCR检测在位子宫内膜组织NCOA4、FTH1、LC3B、p62 mRNA表达,免疫荧光共定位检测在位子宫内膜组织NCOA4和LC3B共定位情况.结果 与空白组比较,模型组大鼠在位子宫内膜组织Fe2+含量降低(P<0.01),NCOA4蛋白表达及LC3BⅡ/Ⅰ比值降低(P<0.01),FTH1、p62蛋白表达升高(P<0.05,P<0.01),NCOA4 mRNA表达降低(P<0.01),p62 mRNA表达升高(P<0.01),NCOA4-LC3B共定位减少(P<0.01);与模型组比较,各给药组在位子宫内膜组织Fe2+含量升高(P<0.05,P<0.01),西药组FTH1、p62蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01),祛瘀解毒方高剂量组LC3BⅡ/Ⅰ比值升高(P<0.01),FTH1、p62蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01),祛瘀解毒方低剂量组NCOA4蛋白表达及LC3BⅡ/Ⅰ比值升高(P<0.05),p62蛋白表达降低(P<0.05),各给药组NCOA4 mRNA表达升高(P<0.01),NCOA4-LC3B共定位增加(P<0.05,P<0.01).各组大鼠在位子宫内膜组织形态未见明显异常.结论 祛瘀解毒方可能通过激活NCOA4介导的铁自噬通路恢复EMS大鼠在位内膜铁蛋白活性,上调铁离子含量,纠正铁稳态失衡,从而抑制EMS发展.

目的 探讨丁酸钠(sodium butyrate,NaB)是否可通过诱导铁自噬发挥其抗结直肠癌作用.方法 以MTT、平板克隆和PI染色观察NaB对结直肠癌HCT-116 细胞增殖和死亡的影响;自噬检测试剂盒(MDC法)、亚铁离子荧光探针FerroOrange、Western blot检测p62、LC3、FTH1、NCOA4 表达探究NaB是否诱导结直肠癌HCT-116 细胞发生铁自噬.结果 MTT和平板克隆实验结果显示,2 mmol/L NaB即可显著抑制HCT-116 细胞活力(P＜0.001)和克隆球形成(P＜0.01);PI染色结果显示,NaB可使死亡细胞数量增加;铁离子螯合剂去铁胺(DFO)可逆转NaB对HCT-116细胞增殖活性的抑制和促死亡作用(P＜0.05);自噬抑制剂氯喹(CQ)可进一步增强NaB对HCT-116 细胞增殖活性的抑制作用(P＜0.001);MDC法和FerroOrange检测结果显示,NaB可增加HCT-116 细胞自噬体形成和细胞内Fe2+水平(P＜0.001),DFO和CQ均可逆转NaB对HCT-116 细胞内Fe2+水平的上调作用(P＜0.05);Western blot结果显示,NaB可下调HCT-116 细胞p62、FTH1 蛋白表达水平(P＜0.001),上调LC3-II、NCOA4 蛋白表达水平(P＜0.001,P＜0.05),CQ可逆转NaB对HCT-116 细胞FTH1 蛋白表达水平的下调作用(P＜0.05).结论 NaB可通过诱导铁自噬发挥抗结直肠癌作用.

铁自噬及其参与的铁离子代谢异常是促发铁死亡的重要机制之一.铁自噬的调控主要涉及核受体共激活因子4(NCOA4)转录和蛋白质翻译后修饰.铁死亡在结肠炎和结肠炎相关癌症(CAC)的发生、发展中扮演重要角色,靶向调节铁死亡能缓解结肠炎症反应和诱导肿瘤细胞死亡.本文就NCOA4介导铁自噬的调控机制及其在结肠炎和CAC中的研究进展作一综述,从而为结肠炎及其炎癌转变的研究提供新视角.

目的 探索Rasd1(ras related dexamethasone induced 1)在SD大鼠蛛网膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage,SAH)后通过神经元-少突胶质细胞间通讯参与白质损伤(white matter injury,WMI)的机制.方法 将90只雄性SD大鼠(体质量180～250 g)采用随机抽签的方法分为假手术组、SAH组、SAH+LV-NC组、SAH+LV-Rasd1组和SAH+sh-Rasd1组,最终每组12只.利用血管内穿刺法构建大鼠在体SAH模型,侧脑室注射Rasd1基因过表达/敲低慢病毒,神经行为学评分检测神经功能变化,透射电镜检测胼胝体区域髓鞘脱失情况和少突胶质细胞铁死亡的发生情况,普鲁士蓝染色检测铁沉积,试剂盒检测丙二醛(malonic dialdehyde,MDA)和谷胱甘肽(glutathione,GSH),PCR 检测 Rasd1 mRNA的表达情况,Western blot检测核受体辅激活蛋白4(nuclear receptor coactivator 4,NCOA4)、谷胱甘肽过氧化物酶 4(glutathione peroxidase 4,GPX4)、2',3'-环腺苷酸-3'-磷酸二酯酶(2',3'-cyclic-nucleotide 3'-phosphodiesterase,CNPase)和铁蛋白(Ferritin)的表达.结果 SAH 后,Rasd1 升高(P＜0.01)并主要表达于皮层神经元中,出现髓鞘脱失,少突胶质细胞铁死亡;过表达Rasd1后,大鼠神经行为学评分显著降低,髓鞘脱失、少突胶质细胞铁死亡和铁沉积明显加重,MDA升高(P＜0.01)、GSH下降(P＜0.01)、NCOA4升高(P＜0.01)、Ferritin和GPX4下降(P＜0.01);敲低Rasd1后,大鼠神经行为学评分明显升高,髓鞘脱失、少突胶质细胞铁死亡和铁沉积显著减轻,MDA下降(P＜0.01)、GSH升高(P＜0.01)、NCOA4下降(P＜0.01)、Ferritin和GPX4升高(P＜0.01).结论 Rasd1在蛛网膜下腔出血后通过铁自噬促进少突胶质细胞铁死亡,从而参与蛛网膜下腔出血后白质损伤.

目的 观察大补脾汤通过核受体辅激活因子4(NCOA4)介导的铁自噬对放射性肺损伤大鼠氧化应激的影响,探讨其可能作用机制.方法 30只SPF级SD大鼠随机分为正常对照组、模型组和中药高、中、低剂量组,每组6只.中药高、中、低剂量组分别灌胃24.28、12.14、6.07 g/kg大补脾汤,正常对照组和模型组灌胃等体积生理盐水,连续14 d.给药后除正常对照组外,其余大鼠右肺予X射线8 Gy单次照射.HE染色观察大鼠右肺组织病理变化,试剂盒检测右肺组织亚铁离子(Fe2+)、谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、活性氧(ROS)含量,免疫组化、Western blot和qPCR检测右肺组织核因子E2相关因子2(Nrf2)、NCOA4、铁蛋白重链1(FTH1)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)蛋白和mRNA表达.结果 与正常对照组比较,模型组大鼠肺泡壁断裂,肺泡塌陷变形,肺间质充血、出血、炎性细胞浸润并伴有少量纤维化,右肺组织Fe2+、MDA、ROS含量及NCOA4蛋白和mRNA表达明显升高,GSH、SOD含量及Nrf2、FTH1、GPX4蛋白和mRNA表达明显降低,差异有统计学意义(P＜0.01);与模型组比较,中药各剂量组大鼠右肺组织病理损伤明显减轻,右肺组织Fe2+、MDA、ROS含量及NCOA4蛋白和mRNA表达明显降低,GSH、SOD含量及Nrf2、FTH1、GPX4蛋白和mRNA表达明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).结论 大补脾汤可能通过NCOA4介导的铁自噬抑制铁死亡,减轻放射性肺损伤氧化应激反应,改善肺部病理损害,发挥对放射性肺损伤的防护作用.