目的:探究LncRNA HCG18调控CD8+T细胞抗鼻咽癌细胞的功能及机制.方法:qRT-PCR检测鼻咽癌组织及癌旁组织 HCG18表达以及人鼻黏膜上皮细胞 HNEpC和人鼻咽癌细胞系CNE1、CNE2、HONE-1、HNE-2 中 HCG18 表达.CNE1 细胞分为 si-HCG18 组、si-NC 组、si-HCG18+PD-L1组,HNE-2细胞分为 HCG18组、Vector组和 HCG18+sh-PD-L1组,上述各组CNE1细胞和 HNE-2细胞分别与 CD8+T 细胞共孵育 24h(si-HCG18+CD8+T 组、si-NC+CD8+T 组、si-HCG18+PD-L1+CD8+T组、HCG18+CD8+T 组、Vector+CD8+T 组和 HCG18+sh-PD-L1+CD8+T 组),酶联免疫吸附试验(Enzyme Linked Immunosorbent Assay,ELISA)检测共孵育体系中INF-γ、TNF-α、IL-2浓度,细胞毒性试剂 盒检测肿瘤细胞裂解率.Western blot检测PD-L1蛋白表达.双荧光素酶报告基因实验验证HCG18与miR-20b-5p的靶向关系,miR-20b-5p与PD-L1的靶向关系.结果:鼻咽癌组织中HCG18表达显著高于癌旁组织,CNE1、CNE2、HONE-1、HNE-2细胞中HCG18表达均显著高于 HNEpC细胞(P＜0.05).si-HCG18组CNE1细胞中PD-L1表达显著低于si-NC 组(P＜0.05),HCG18组 HNE-2细胞PD-L1表达显著高于 Vector 组(P＜0.05),相比于 si-NC+CD8+T 组,si-HCG18+CD8+T 组共孵育体系中 INF-y、TNF-α、IL-2浓度显著增加(P＜0.05),CNE1细胞裂解率显著增加(P＜0.05),相比于si-HCG18+CD8+T组,si-HCG18+PD-L1+CD8+T 组共孵育体系中 INF-γ、TNF-α、IL-2 浓度显著降低(P＜0.05),CNE1 细胞裂解率显著降低(P＜0.05).相比于Vector+CD8+T组,HCG18+CD8+T组共孵育体系中INF-γ、TNF-α、IL-2浓度显著降低(P＜0.05),HNE-2细胞裂解率显著降低(P＜0.05),相比于HCG18+CD8+T组,HCG18+sh-PD-L1+CD8+T组共孵育体系中INF-γ、TNF-α、IL-2浓度显著增加(P＜0.05),HNE-2细胞裂解率显著增加(P＜0.05).miR-20b-5p 为 HCG18 靶基因,PD-L1 为 miR-20b-5p 靶基因.结论:HCG18 上调鼻咽癌细胞PD-L1表达并且抑制CD8+T细胞的抗肿瘤活性.

目的 探索阴沟肠杆菌SHAMU191747所分泌的新型R 型噬菌体尾样细菌素(phage tail-like bacteriocin,PTLB)对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococ-cus aureus,MRSA)的抗菌活性.方法 琼脂平板拮抗试验和肉汤微量发酵试验,检测阴沟肠杆菌SHAMU191747对MRSA的拮抗活性.超高速离心法和密度梯度离心法,制备阴沟肠杆菌SHAMU191747发酵上清液粗提物.使用透射电镜检测粗提物中有无新型R型PTLB.琼脂平板点种法,验证粗提物对MRSA的抗菌活性.采用SDS-PAGE电泳检测新型R型PTLB的分子量.结果 阴沟肠杆菌SHAMU191747分泌新型R型PTLB,对MRSA具有强拮抗效应.新型R型PTLB的分子量约35 ku,能够高效杀伤MR-SA;尾鞘未收缩的功能性分子的物理尺寸为(142.7±4.3)×(13.8±0.6)nm,尾鞘收缩的非功能性分子的物理尺寸为(57.7±1.2)×(20.8±1.5)nm.结论 阴沟肠杆菌SHAMU191747产生的新型R型PTLB能够高效杀伤MRSA,具有开发成新型抗菌药物的潜力,临床应用前景很大.

目的:制备并表征包载CPI-444并偶联CD8抗体的纳米微粒(CNP/αCD8),探讨其对CD8+T细胞活化、增殖和抗肿瘤作用的影响.方法:采用复乳溶剂蒸发法和EDC/NHS法制备包载腺苷受体A2A(A2AR)特异性拮抗剂CPI-444(C)或香豆素6(C6)荧光素的纳米微粒并分别在其表面偶联CD8抗体,制得CNP/αCD8和C6NP/αCD8.扫描电镜和NanoPlus粒度测定仪表征纳米微粒形态和粒径,液相色谱与串联质谱联用(LC-MS/MS)法和离心法测定纳米微粒的载药量和药物释放情况,荧光显微镜和流式细胞仪检测CD8+T细胞内化C6NP/αCD8的情况,流式细胞仪、ELISA和LDH法检测CNP/αCD8对CD8+T细胞增殖、活化、细胞毒活性和杀瘤能力的影响.结果:CNP/αCD8纳米微粒为圆形、粒径约150 nm,能有效包载CPI-444和偶联CD8抗体,药物包封率和CD8抗体偶联效率分别约为60%和53.4%;CNP/αCD8纳米微粒具有良好稳定性,能被CD8+T细胞内化,抑制A2AR分子表达.生物学功能实验显示,CNP/αCD8增强CD8+T细胞的增殖能力、促进T细胞活化、分泌细胞因子及产生颗粒酶B和穿孔素,并增强CD8+T细胞杀伤肿瘤细胞的能力.结论:CNP/αCD8纳米微粒能显著增强CD8+T细胞免疫效应功能,其增强CD8+T细胞功能可能是通过抑制A2AR分子的表达起作用.

目的 制备具有化学动力疗法(CDT)疗效的多功能二氧化锰包覆二氧化硅纳米平台(SiO2@MnO2 NPs),并观察其体外MRI/超声的成像效果.材料与方法 通过溶胶-凝胶法制备SiO2纳米粒(SiO2 NPs),并基于氨水、聚乙二醇与高锰酸钾的还原反应制备SiO2@MnO2 NPs.观察两种纳米粒的形貌、粒径大小和表面电位,验证SiO2@MnO2 NPs产生毒性羟基自由基的能力,评估纳米粒体外MRI/超声成像的效果,观察细胞对纳米粒的摄取以及纳米粒在细胞内产生活性氧的能力,并评估纳米粒对人胰腺癌细胞PANC-1的CDT疗效.结果 成功制备SiO2@MnO2 NPs,透射电子显微镜下观察碎片状MnO2的壳层包覆在球形SiO2 NPs表面,平均粒径(115.9±2.0)nm,平均电位(-32.51±0.30)mV.紫外分光光度计检测到亚甲基蓝随SiO2@MnO2 NPs浓度的升高逐渐降解,提示毒性羟基自由基的生成.体外模拟肿瘤微环境见SiO2@MnO2 NPs可增强MRI/超声成像效果;于PANC-1细胞内检出大量活性氧生成并发挥CDT效应杀伤肿瘤细胞.结论 本研究成功制备了多功能性SiO2@MnO2 NPs,体外显示了良好的CDT效应和双模态成像效果,对PANC-1细胞具有一定的杀伤作用,为增效CDT和构建多功能纳米平台奠定基础.

目的 研究补中益气汤及方中中药配伍对环磷酰胺诱导的免疫抑制小鼠脾脏中自然杀伤细胞(NK细胞)调控作用.方法 100只小鼠随机分为10组,除空白组外,其余小鼠采用腹腔注射环磷酰胺制备小鼠免疫抑制模型.免疫抑制小鼠随机分为模型组,阳性组,高、中、低剂量中药组,黄芪+白术组,黄芪+党参组,白术+党参组,黄芪+白术+党参组,连续给药17 d后,测量小鼠体质量并计算脾脏及胸腺指数,流式细胞仪检测NK细胞比例,酶标法测试NK细胞活性.结果 与空白组比较,模型组小鼠脾脏指数、胸腺指数、NK细胞比例与活性明显降低(P＜0.01),表明免疫抑制小鼠模型建立成功.与模型组比较,中药(补中益气汤)组可以有效提高小鼠免疫器官指数、NK细胞比例与活性(P＜0.01或P＜0.05),其中以中剂量中药组纠正效果最为显著,NK细胞比例高于阳性组,但不及空白组水平,表明方剂可改善免疫抑制状态.黄芪+白术组、黄芪+白术+党参组可提高小鼠免疫器官指数(P＜0.01或P＜0.05),白术+党参组、黄芪+白术+党参组可提高小鼠NK细胞比例与活性(P＜0.01或P＜0.05),表明方中主药配伍亦可一定程度提升免疫功能,但效果不及全方组(中剂量中药组).结论 补中益气汤可拮抗环磷酰胺所导致的免疫抑制,增强NK细胞的免疫功能.

目的 探讨黄芪含药血清对自然杀伤(NK)细胞的杀伤活性和NKG2D、NKG2A、细胞因子干扰素-γ(IFN-γ)表达水平的影响.方法 20只SPF级SD大鼠,随机分成黄芪低、中、高剂量组(3.1、6.2、12.4 g/kg体重)和正常对照组,灌胃后制备含药血清.用NK细胞专用培养基培养NK-92MI细胞,用1640培养基培养YAC-1细胞.将NK-92MI细胞与20％不同剂量黄芪含药血清及正常对照血清孵育48 h,即分别为正常对照组、黄芪低剂量组、黄芪中剂量组以及黄芪高剂量组.通过乳酸脱氢酶(LDH)释放测定方法检测NK细胞对靶细胞YAC-1的杀伤活性,ELISA法检测IFN-γ的水平,Western blot检测NKG2D以及NKG2A蛋白表达水平.结果 与正常对照组和黄芪低剂量组相比,黄芪中、高剂量组的NK细胞活性显著升高(P＜0.01).IFN-γ的表达在黄芪低、中、高剂量组中均升高,但不随浓度升高而增强.与正常对照组相比,黄芪低、中剂量组NKG2D蛋白表达水平明显升高(P＜0.01),而NKG2A蛋白表达水平在各组间无明显差异(P＞0.05).结论 黄芪含药血清可增强NK细胞杀伤活性、上调IFN-γ表达水平、上调NK细胞活化型受体的表达,通过调控NK细胞实现对机体的保护作用.

目的:探讨miR-155通过调控巨噬细胞极化发挥清除病原菌的作用和机制。方法:使用脂多糖/干扰素-γ(lipopolysaccharide/interferon-γ，LPS/IFN-γ)或白细胞介素(interleukin，IL)-4分别处理RAW264.7细胞和骨髓来源巨噬细胞(bone marrow-derived macrophage，BMDM)，24 h后检测miR-155表达水平；将RAW264.7细胞和BMDM分别过表达、抑制miR-155后，检测巨噬细胞极化表型转化，以及活性氧、活性氮和细胞因子释放；将miR-155过表达的BMDM进行M1型诱导，取上清培养大肠杆菌不同时间后，检测大肠杆菌菌落形成能力。结果:LPS/IFN-γ的添加可以明显促进miR-155在RAW264.7细胞和BMDM中的表达，而IL-4的诱导降低BMDM中miR-155水平；进一步在RAW264.7细胞和BMDM中过表达miR-155后，可促进M1型极化分子转录、抑制M2型极化分子标志物的表达；反过来，通过反义寡核苷酸抑制miR-155后，可以抑制M1型极化而促进M2型极化；同时，过表达miR-155的巨噬细胞分泌的一氧化氮(nitric oxide，NO)、活性氧(reactive oxygen species，ROS)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)显著性被促进；过表达miR-155的M1型极化BMDM培养上清明显可以减少大肠杆菌菌落形成数量。结论:miR-155通过调控巨噬细胞极化，影响其ROS/NO和细胞因子的分泌，参与巨噬细胞清除、杀伤病原菌的过程。

目的:探讨4种不同麻醉方式对结直肠癌根治术患者围手术期机体免疫功能及苏醒期质量的影响。方法:择期行腹腔镜下结直肠癌根治术患者120例，按随机数字表法分为4组（每组30例）：全凭静脉麻醉组（N组）、腹横肌平面阻滞（transversus abdominis plane block, TAPB）联合全身麻醉组（T组）、硬膜外阻滞（epidural block, EB）联合全身麻醉组（S组）及TAPB联合右美托咪定（dexmedetomidine, Dex）复合全身麻醉组（TD组）。N组患者采用全凭静脉麻醉诱导与维持，T组患者在全身麻醉诱导前行超声引导下双侧TAPB，S组于L 2-L 3行EB，TD组在全身麻醉诱导前行超声引导下双侧TAPB，麻醉维持过程中静脉输注Dex 0.3 μg·kg -1·h -1至术毕前30 min。记录4组患者的手术时间、麻醉时间、术中出血量及丙泊酚、瑞芬太尼、血管活性药物等术中用药情况。于术前1 d（T 0）、术后1 d（T 1）、术后3 d（T 2）、术后5 d（T 3）检测患者外周血T细胞亚群CD3 +、CD4 +、CD8 +水平及自然杀伤（natural killer, NK）细胞水平，并计算CD4 +/CD8 +；记录患者苏醒期拔管时Ramsay镇静评分，最高VAS疼痛评分及咳嗽、寒战、躁动和恶心呕吐的发生情况。 结果:与T 0时比较，T 1时4组的NK细胞水平降低（ P<0.05），CD3 +、CD 4+水平及CD4 +/CD8 +降低（ P<0.05）；T 2时4组的NK细胞水平降低（ P<0.05），CD3 +、CD4 +水平及N组、T组的CD4 +/CD8 +降低（ P<0.05）。与T组比较，T 1、T 2时N组的NK细胞水平降低（ P<0.05），CD3 +、CD4 +水平及CD4 +/CD8 +降低（ P<0.05）；而S组和TD组的NK细胞水平升高（ P<0.05），CD3 +、CD4 +水平及CD4 +/CD8 +升高（ P<0.05）。与N组比较，T 1、T 2时S组和TD组的NK细胞水平升高（ P<0.05），CD3 +、CD4 +水平及CD4 +/CD8 +升高（ P<0.05）。与N组、T组比较，S组、TD组术中丙泊酚及瑞芬太尼用量减少（ P<0.05）。S组血管活性药物使用率高于N组、T组、TD组（ P<0.05）。与N组比较，T组、S组和TD组最高VAS疼痛评分降低（ P<0.05），TD组和S组恶心呕吐的发生率降低（ P<0.05），TD组咳嗽、躁动、寒战的发生率降低且拔管时Ramsay镇静评分升高（ P<0.05）。与T组比较，TD组和S组恶心呕吐发生率降低（ P<0.05），TD组咳嗽、躁动、寒战的发生率降低且拔管时Ramsay镇静评分升高（ P<0.05）。与S组比较，TD组咳嗽、躁动、寒战的发生率降低（ P<0.05），拔管时Ramsay镇静评分升高（ P<0.05）。其余指标差异无统计学意义（ P>0.05）。 结论:相较于全凭静脉麻醉、TAPB联合全身麻醉、EB联合全身麻醉，TAPB联合Dex复合全身麻醉可维持腹腔镜下结直肠癌根治术患者术中血流动力学稳定，并能有效改善围手术期机体免疫功能及苏醒期质量。

免疫检查点抑制剂具有恢复免疫系统识别和杀伤肿瘤细胞的能力，近年来被应用于多种癌症的治疗。因其具有增强免疫系统活性，破坏免疫稳态的作用，可引起免疫相关不良反应。免疫相关不良反应可发生在各组织器官，其中免疫检查点抑制剂相关性肠炎的发病率较高。本文结合国内外研究，对免疫检查点抑制剂相关性肠炎的发病机制、临床表现、内镜特征及治疗进行综述，并特别关注难治性肠炎的最新诊疗进展。

目的:提高体外膜氧合（ECMO）治疗噬血细胞综合征的认识。方法:回顾性分析2020年2月收治的1例腺病毒相关噬血细胞综合征患者的诊治过程，并复习相关文献。结果:患者，女性，22岁，以发热起病，全血细胞减少伴铁蛋白和可溶性CD25升高，自然杀伤（NK）细胞活性减低，腺病毒抗体IgM阳性，CT示双肺渗出，进展到呼吸窘迫综合征。建立ECMO系统及抗噬血活动等综合治疗后，患者痊愈出院。结论:ECMO成功救治腺病毒相关噬血细胞综合征，提示在细胞因子风暴情况下实施ECMO治疗是可行的，但缺乏多中心前瞻性研究来指导如何规范管理。