目的 构建Tet-on调控小鼠肝脏特异性表达uPA基因的NOD-SCID背景的转基因小鼠,并通过人肝癌细胞移植修复小鼠亚急性肝损伤进而构建人源化肝细胞嵌合小鼠.方法 采用CRISPR/Cas9技术,在gRNA引导下,Cas9核酸内切酶于Rosa26基因位点切割并编辑,插入目的基因pTight-uPA-pA-Alb promoter-rtTA-pA表达框.使目的基因能跟随染色体稳定遗传,生物学功能保持稳定.新培育的转基因小鼠分为4组:诱导组(n=17)、移植组(n=16)、未诱导组(n=5)和空白对照组(n=5).诱导组经强力霉素诱导3周,肝脏中表达的uPA能造成小鼠肝脏亚急性损伤;再通过人肝癌细胞移植修复.移植4周后,通过小鼠血清生化学、组织病理学,评估该人源化肝细胞嵌合小鼠的效果.结果 诱导组小鼠血清中uPA、丙氨酸氨基转移酶(ALT)均高于未诱导组和空白对照组(P＜0.01);移植组人白蛋白含量显著高于未移植组(P＜0.01).组织病理学HE染色发现人肝癌细胞参与小鼠肝组织的修复,激光共聚焦显微镜观察显示鼠肝脏中有人肝癌细胞聚集并表达人白蛋白,组化染色人角质蛋白(CK18)表达成阳性.结论 新构建的转基因小鼠能通过强力霉素诱导小鼠肝脏中uPA表达,造成肝脏亚急性损伤,并通过人源肝癌细胞移植修复进而构建人源化肝细胞嵌合小鼠.

目的 利用免疫学检验方法对混合精斑进行分离确证,寻找更有效的混合精斑检测方法.方法将3名志愿者的精液混合后,分别用前列腺特异性抗原(prostate-specific antigen,PSA)胶体金免疫试纸条法、免疫磁珠法以及激光捕获显微切割技术对混合精斑进行处理和检测,对分型结果进行统计,并与单一精斑结果进行比较.结果经PSA胶体金免疫试纸条法测试,各样品在测试区和控制区内均出现一条紫红色条带;经免疫磁珠法处理后,检出更完整有效的短串联重复(short tandem repeat,STR)分型;应用激光捕获显微切割技术对混合精斑进行处理并经低体积扩增后,将结果汇总、叠加获得完整的单一分型,与单一精斑分型相匹配,分型成功率为84.00％.把上述方法应用于实际案件中,获得了单一的嫌疑人Y-STR分型,为案件的快速破获提供了证据基础.结论联合应用PSA胶体金免疫试纸条法、免疫磁珠法以及激光捕获显微切割技术可快速对混合精斑进行分离检验.

目的:探讨甲状腺乳头状癌组织中短串联重复序列(STR)基因座变异规律以及显微切割技术在肿瘤组织鉴定中的应用,为甲状腺乳头状癌组织的个体识别及亲缘关系鉴定提供依据.方法:收集43例人甲状腺乳头状癌和癌旁正常组织经激光显微切割获取肿瘤细胞和间质细胞,采用Chelex-100法提取DNA,分别采用Goldeneye?DNA 22NC、Goldeneye?DNA 27YB和Goldeneye?DNA 17X试剂盒进行常染色体和性染色体STR基因座PCR扩增,ABI 3500遗传分析仪检测进行STR分型.结果:甲状腺乳头状癌组织肿瘤间质细胞与对应癌旁组织的STR分型一致.43例癌组织的肿瘤细胞有9例STR基因座发生了变异,在常染色体和X染色体联合检测的37个STR基因座共检出11次变异(常染色体变异7次,X染色体变异4次),其中等位基因增加3次,部分杂合性丢失6次,出现新等位基因2次,并且同一甲状腺乳头状癌肿瘤细胞可同时发生多种变异.Y染色体STR基因座没有检出变异.结合实验结果与患者临床资料分析,STR基因座的变异与甲状腺乳头状癌患者的临床分期、性别无明显相关关系,与患者的年龄正相关,差异具有统计学意义(P<0.05).结论:甲状腺恶性肿瘤组织常染色体和X染色体STR基因座存在变异,而且变异更可能发生在年龄大的甲状腺乳头状癌组织中,在司法鉴定中进行STR分型时应谨慎判型.显微切割技术可准确分离间质细胞,是解决此类恶性肿瘤组织检材涉及的案件进行身源鉴定的有效手段.

染色体显微切割技术是细胞遗传学与分子遗传学相结合的一项桥梁技术。近年来，该技术在同源基因的定位和克隆中的价值深受关注。本文结合显微切割的经验，对其应用和新进展进行了综述。

基因扩增是肿瘤基因组不稳定的一个重要方面。随着染色体显微切割和比较基因组杂交等分子细胞遗传学技术的发展，大大推动了肿瘤细胞中基因扩增的研究。这两种技术的有机结合，能有效地检测出肿瘤细胞中基因扩增的染色体区域，并且为寻找肿瘤发展进程中新的扩增基因开辟了一条重要的途径。

人类染色体显微切割技术可从特定区域切取所需的染色体片段，结合PCR、分子克隆、DNA测序和FISH等方法，用于染色体特定区、带的DNA文库构建、特异性探针的制备、疾病遗传学特征的分析和有关基因的鉴定、分离、克隆和定位等。而且，该技术有助于人类基因组物理图谱的绘制。