目的:探讨D-柠檬烯对精索静脉曲张(VC)大鼠生精功能的保护作用。方法:雄性SD大鼠40只随机分为4组，假手术组(A组)，假手术+D-柠檬烯组(B组)，VC组(C组)，VC+D柠檬烯组(D组)。C、D组行左肾静脉缩窄术建立VC大鼠模型，B、D组术后每日腹腔注射D-柠檬烯200 mg/kg，A、C组注射等量生理盐水，4周后取左侧睾丸检测。苏木精-伊红(HE)染色，观察睾丸组织形态变化；分光光度法检测超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量；采用原位缺口末端标记法(TUNEL)检测生精细胞凋亡指数；免疫组织化学和蛋白质印迹法(Western blot)检测B细胞淋巴瘤/白血病相关X蛋白(bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2蛋白(bcl-2)、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3的表达水平；组间比较采用 t检验。 结果:A、B组大鼠睾丸未见明显组织学变化，C组可见明显病理损伤，D组较C组损伤明显改善；C组SOD含量(0.23±0.03)显著低于A组(0.79±0.04)( t＝22.183， P<0.05)，D组SOD含量(0.51±0.03)高于C组( t＝13.123， P<0.05)，C组MDA含量(5.59±0.39)显著高于A组(1.30±0.12， t＝18.386， P<0.05)，D组MDA含量(3.89±0.20)低于C组( t＝6.734， P<0.05)；C组凋亡(32.43±3.88)明显高于A组(2.41±0.67， t＝17.045， P<0.05)，D组凋亡细胞(17.12±2.66)低于C组( t＝7.273， P<0.05)；免疫组织化学和Western blot结果显示，C组的bax和Caspase-3蛋白表达量明显高于A组(1.179±0.070、0.469±0.220比0.453±0.043、0.143±0.017， t＝15.157、20.431， P值均<0.05)，bcl-2蛋白表达量低于A组(0.476±0.021比1.148±0.084， t＝13.414， P<0.05)；D组的的bax和Caspase-3蛋白表达量明显少于C组(0.689±0.054、0.282±0.031比1.179±0.070、0.469±0.220， t＝9.540、8.442， P值均<0.05)，bcl-2表达水平明显高于C组(0.794±0.033比0.476±0.021， t＝14.222， P<0.05)。 结论:D-柠檬烯可通过抗氧化和抗凋亡作用，对精索静脉曲张大鼠生精功能起保护作用。

目的:基于超快速气相电子鼻技术,建立15批臭灵丹草饮片的气味指纹图谱,结合谱效相关性分析,筛选与抗氧化活性相关的成分.方法:使用超快速气相电子鼻建立15批臭灵丹草饮片的气味指纹图谱,进行相似度评价.结合AroChemBase数据库进行定性分析.以DPPH自由基、ABTS自由基清除能力为指标评价臭灵丹草饮片挥发性成分的抗氧化活性,结合多元统计分析评价谱效关系,筛选与抗氧化活性关联度较大的成分.结果:建立了 15批臭灵丹草饮片的气味指纹图谱,结合AroChemBase数据库标定了 14个共有峰,分别为异戊烷、乙叉降冰生烯、α-蒎烯、α-水芹烯、1,8-桉叶素、5-甲基-4-壬烯、柠檬烯、二溴氯丙烷、芳樟醇、甲基丁香酚、十一酸甲酯、β-石竹烯、醋酸十一酯、覆盆子酮.臭灵丹草饮片挥发油清除DPPH、ABTS自由基的IC50分别为6.56～21.26 mg/mL、3.89～18.34 mg/mL,灰色关联度分析及偏最小二乘回归分析结果表明柠檬烯、甲基丁香酚、覆盆子酮等与其抗氧化相关性较大.结论:臭灵丹草饮片超快速气相电子鼻气味指纹图谱结合谱效关系研究初步筛选了与抗氧化能力相关性较大的3个成分,可为臭灵丹草饮片质量控制提供依据.

研究常山胡柚果皮(Citrus × aurantium Changshan-huyou pericarp,CP)精油化学成分,并对提取条件进行优化.采用水蒸气蒸馏法提取CP精油,利用气相色谱-质谱法进行分析,通过单因素试验考察不同提取条件对提取率的影响,并利用响应面、人工神经网络进行工艺优化.结果表明,CP精油中主要成分为D-柠檬烯;最佳工艺条件:粒径24目、蒸馏水浸泡1 h、液固比34.86 mL/g、提取温度300.00 ℃、提取时间166.21 min,在此条件下,CP精油提取率为0.82％,响应面与人工神经网络相结合,可有效地利用已有数据对目标寻优.同时CP精油对DPPH自由基有明显的清除作用(IC50值为65.01 mg/mL),表明CP精油具有一定的抗氧化活性.

通过对白术籽蛋白质氨基酸营养价值和挥发性成分及其炒制前后的变化研究,为白术药材资源综合利用提供理论支持.利用全自动氨基酸分析仪、紫外-可见分光光度计、气相色谱质谱联用仪(gas chromatography-mass spec-trometry,GC-MS)分别对炒制前后白术籽的可溶性蛋白、氨基酸、挥发性成分进行测定,通过NIST谱库检索对目标化合物进行解析.白术籽中氨基酸种类齐全,生品和炒制品均含有17种氨基酸,总量分别为5.29％和5.90％;甜味和鲜味氨基酸总量与苦味氨基酸总量的比值为1.98和1.95.蛋白质营养价值高,其中必需氨基酸含量与氨基酸总量的比值、必需氨基酸含量与非必需氨基酸含量比值都与理想蛋白标准相接近,必需氨基酸比值系数分别为80.41和77.76,必需氨基酸指数均接近于1.挥发性香气成分丰富,40个挥发性成分包括共有成分12个,生品和炒制品的特有成分各为15个和37个;以萜类化合物为主,以D-柠檬烯为代表的单萜类化合物占比较大.炒制可增加白术籽中药效氨基酸、必需氨基酸以及具有呈味能力的鲜味氨基酸含量,进而提高蛋白质营养价值,促使挥发性成分的类别和数量更加丰富.作为白术药材非药用部位,白术籽生品和炒制品均具有较高的食用价值,炒制加工可进一步改善口感和提升风味;本文研究可为白术非药用部位的资源化利用及高附加值产品创造提供理论依据.

苍术的挥发性成分既具有明显的药理作用又被认为是苍术的主要燥性成分,该研究从挥发油变化角度分析苍术不同炮制品的差异,阐述苍术炮制后降燥增效的原因.利用HS-GC-MS技术获取生苍术、麸炒苍术、焦苍术与 4 种不同工艺的米泔水制苍术挥发性成分,使用SIMCA软件对苍术及其不同炮制品的挥发油成分进行多元统计学分析.在HS-GC-MS结果中共鉴定出 87 个挥发性成分.在生品中鉴定出 76 种挥发性成分、麸炒苍术 79 种、樟帮米泔水制苍术 70 种、焦苍术 81 种、湖南米泔水制苍术 78 种,吉林米泔水制苍术 73 种、上海米泔水制苍术 77 种.通过多元统计学分析发现苍术各个炮制品之间具有显著性差异,OPLS-DA模型显示生品与 6 种炮制品共有 28 个显著差异性成分.炮制后普遍显著性上升的挥发性成分有 11种,分别是α-蒎烯、水芹烯、(1S)-(+)-3-蒈烯、邻异丙基甲苯、D-柠檬烯、α-ocimene、α-异松油烯、silphiperfol-5-ene、silphinene、γ-烯基、germacrene B,可能与其增效有关;炮制后普遍显著性下降的挥发性成分有 5 种,分别是 β-榄香烯、1-methyl-4-(6-methylhept-5-en-2-yl)cyclohexa-1,3-diene、β-selinene、β-倍半水芹烯、苍术酮,可能与其燥性相关.

目的:探讨D-柠檬烯对胶质母细胞瘤(GBM)细胞增殖和凋亡的影响,并阐明其可能的作用机制.方法:将GBM细胞分为对照组(0 mmol·L-1 D-柠檬烯)和 0.2、0.4、0.6、0.8及1.0 mmol·L-1 D-柠檬烯组.采用CCK-8法检测各组细胞增殖抑制率,克隆形成法检测各组细胞克隆形成率,Annexin Ⅴ-FITC/PI法检测各组细胞凋亡率,Western blotting法检测各组细胞中蛋白激酶B(AKT)、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和多聚二磷酸腺苷(ADP)核糖聚合酶(PARP)蛋白表达水平,免疫荧光法检测各组细胞中裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(cleaved Caspase)-3 蛋白表达水平.15 只建立皮下移植瘤模型小鼠随机分为空白组(0 mg·kg-1·d-1 D-柠檬烯)、低剂量D-柠檬烯组(200 mg·kg-1·d-1 D-柠檬烯)和高剂量D-柠檬烯组(400 mg·kg-1·d-1 D-柠檬烯),每组5只.计算各组小鼠体内肿瘤抑制率,HE染色和免疫组织化学染色观察各组小鼠皮下肿瘤组织形态表现,并绘制肿瘤生长曲线,免疫组织化学法检测各组小鼠皮下瘤组织中Ki67蛋白阳性表达率,TUNEL染色法检测各组小鼠肿瘤细胞凋亡情况.结果:对照组细胞呈长梭形,状态良好,紧密且贴壁生长,细胞器和细胞质正常;给药48 h后,0.6 mmol·L-1 D-柠檬烯组细胞体积减小,细胞膜虽完整但通透性增强,细胞质皱缩,细胞内部产生空泡结构,部分呈碎片状漂浮在溶液表面;0.8 和1.0 mmol·L-1 D-柠檬烯组细胞中有明显凋亡小体生成,呈现凋亡状态.CCK-8法,与对照组比较,0.6、0.8 和 1.0 mmol·L-1 D-柠檬烯组U87、LN229 及GL261 细胞增殖抑制率均明显升高(P<0.01),0.4 mmol·L-1 D-柠檬烯组U87和GL261细胞增殖抑制率均明显升高(P<0.01).克隆形成法,与对照组比较,0.4、0.6和 0.8 mmol·L-1 D-柠檬烯组U87、LN229及GL261细胞克隆形成率均明显降低(P<0.05或P<0.01).Annexin Ⅴ-FITC/PI法,与对照组比较,D-柠檬烯处理48 h后,0.6、0.8和1.0 mmol·L-1 D-柠檬烯组LN229细胞凋亡率明显升高(P<0.01).Western blotting法,与对照组比较,0.6、0.8和1.0 mmol·L-1 D-柠檬烯组LN229细胞中Bax蛋白表达水平均明显升高(P<0.01),AKT和Bcl-2蛋白表达水平均明显降低(P<0.01);0.8和1.0 mmol·L-1 D-柠檬烯组LN229细胞中PARP蛋白表达水平均明显升高(P<0.01).免疫荧光法,与对照组比较,0.6、0.8和1.0 mmol·L-1 D-柠檬烯组LN229细胞中cleaved Caspase-3蛋白表达水平均明显升高(P<0.01).与空白组比较,低和高剂量D-柠檬烯组小鼠肿瘤体积均明显减小(P<0.01).与空白组比较,低和高剂量D-柠檬烯组小鼠肿瘤质量均明显降低(P<0.05),肿瘤抑制率均明显升高(P<0.05).空白组小鼠肿瘤细胞弥漫分布,细胞核染色加深,核浆比增大;低和高剂量D-柠檬烯组小鼠肿瘤组织出现大量肿瘤细胞变性坏死.与空白组比较,低和高剂量D-柠檬烯组小鼠肿瘤组织中Ki67蛋白阳性表达率均明显降低(P<0.01).与空白组比较,低和高剂量D-柠檬烯组小鼠肿瘤细胞凋亡率均明显升高(P<0.01).结论:D-柠檬烯具有抑制GBM细胞增殖的作用,其作用机制可能与调控AKT蛋白的表达并激活Caspase-3通路诱导凋亡有关.

目的:系统研究不同品种橘红花挥发性成分差异和香气特征.方法:利用顶空-气相色谱-质谱法(HS-GC-MS)对4个品种("光青""假西洋""密叶正毛"和"黄龙正毛")共40批橘红花的挥发性成分进行检测,结合相对气味活度值(ROAV)分析其中的关键香气成分.采用多元统计分析筛选不同品种橘红花显著性差异成分和特征香气成分.结果:HS-GC-MS检测结果显示,从4个品种橘红花中共鉴定出40个挥发性成分,主要包括烯烃类、醇类、酯类、酮类和醛类,其中以柠檬烯、β-月桂烯、芳樟醇、反式-橙花叔醇等为共有且含量较高的成分.通过ROAV确定了4个品种橘红花共有关键香气成分8个.挥发性成分差异分析结果显示,21个差异标志物可用于品种判别,其中β-蒎烯是"假西洋"的特征香气成分,芳樟醇是"密叶正毛"的特征香气成分,苯乙醛、反式-橙花叔醇和邻氨基苯甲酸甲酯是"黄龙正毛"的特征香气成分.结论:HS-GC-MS结合ROAV系统分析可区分不同品种橘红花并鉴定差异性的特征香气成分,该方法可为橘红花的品种判别和资源综合开发利用提供参考.

[目的]明确低浓度吡虫啉对多异瓢虫Hippodamia variegata成虫嗅觉行为的影响.[方法]采用Y型嗅觉仪测定多异瓢虫成虫在摄入低浓度(LC20和LC50)吡虫啉后对健康棉株和棉蚜Aphis gossypii成蚜为害棉株挥发物的行为反应;并通过固相微萃取收集健康棉株和棉蚜成蚜为害棉株的挥发物,以气相色谱-质谱联用仪分析鉴定挥发物成分;进而测试多异瓢虫成虫对棉株挥发物单一组分的选择行为.[结果]未摄入吡虫啉的多异瓢虫成虫对棉蚜成蚜为害的棉株具有显著的正趋性,但对健康棉株和清洁空气均无显著的趋向性;摄入低浓度吡虫啉的多异瓢虫成虫对棉蚜成蚜为害的棉株、健康棉株以及清洁空气均无显著的趋向性.对比健康棉株,从棉蚜成蚜为害棉株的挥发物中鉴定出8种挥发量显著增加的化合物,分别为月桂烯、柠檬烯、1-癸炔、3-蒈烯、(3E)-4,8-二甲基-1,3,7-壬三烯[(3E)-4,8-dimethyl-1,3,7-nonatriene,DMNT]、β-石竹烯、α-葎草烯、(3E,7E)-4,8,12 三甲基十三碳-1,3,7,11-四烯[(3E,7E)-4,8,12-trimethyltrideca-1,3,7,11-tetraene,TMTT].利用Y型嗅觉仪测定多异瓢虫成虫对以上8种物质的嗅觉选择行为发现,未摄入吡虫啉的多异瓢虫成虫对TMTT具有显著的正趋性,对其他7种挥发性化合物无显著趋性,而摄入低浓度吡虫啉的多异瓢虫成虫对8种挥发性化合物均无显著正趋性.在行为选择测试中,低浓度吡虫啉处理后的多异瓢虫成虫对棉株挥发物及单一组分的未选择个体数量均显著多于对照组.[结论]研究结果证实低浓度吡虫啉削弱了多异瓢虫成虫对棉花植株挥发物的嗅觉识别功能,为新疆棉田多异瓢虫的保护利用及棉田农药的合理使用提供科学依据.

目的 前期研究显示肝喜片处方中陈皮、茵陈、沉香等6种含挥发性成分中药饮片提取的芳香水中解析出8种挥发性成分,其中柠檬烯、γ-萜品烯、冰片、β-蒎烯具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤等作用.为进一步研究肝喜片全方中挥发性成分,本研究采用气相色谱-质谱法(GC-MS)分析医院制剂肝喜片处方中的挥发性化学成分.方法 利用水蒸气蒸馏法提取肝喜片中非全方芳香水及全方芳香水,并结合GC-MS技术对其成分进行检测及解析.结果 肝喜片全方中药饮片提取的芳香水中共检测出 28种挥发性成分,含量较高的成分为右旋樟脑(48.45%)、苯甲醛(12.46%)、芳香酮(8.69%),合计69.6%,但均无明显药理作用;其他少量成分有药理作用,但含量很低.结论 肝喜片工艺优化提取挥发性成分时不宜用全方,应优选陈皮、茵陈、沉香等6种含挥发性成分中药饮片提取芳香水.

通过气相色谱-离子迁移谱技术(gas chromatography-ion mobility spectrometry,GC-IMS)对2 个香菇品种的不同菌龄的重要农艺性状和挥发性有机物的差异进行了研究.研究表明:不同菌龄阶段的香菇只在产量和蕾数上有显著差异,同等菌龄、不同香菇品种间农艺性状差异显著.2 个香菇品种分别鉴定出包括单体和二聚体在内的 17 和 12 种挥发性物质,包括醛类、酯类、醇类、酮类、酸类和烯类化合物.基于化学计量学主成分分析(principal component analysis,PCA)、指纹图谱和聚类分析对 2 个香菇品种的不同菌龄挥发性有机物分析发现,不同菌龄的香菇中挥发性有机物质有较大差异,不同香菇品种中挥发性有机物质也呈现一定的差异,菌龄为 95 d和 105 d时挥发性有机物均较为相似.2 个香菇品种中柠檬烯均是随着菌龄的增加逐步上升,乙酸乙酯和壬醛均是逐步降低.此外,3-甲基丁醇、戊醛、庚醛、己醛和柠檬烯可作为区别"申香1513"不同菌龄阶段的特征挥发性有机物,丁酸乙酯和柠檬烯则可作为区别"5550"不同菌龄阶段的特征挥发性有机物.GC-IMS 可快速对不同菌龄的香菇品种进行挥发性化合物的差异分析,为香菇挥发性成分差异研究和品质育种提供参考依据.