目的:探究柯诺辛碱(Cor)对创伤性脑损伤(TBI)大鼠的治疗作用及其对线粒体自噬的影响.方法:将80只大鼠随机分为假手术组(n=10)、造模组(n=70).假手术组大鼠仅切开皮肤,不进行造模;造模组大鼠建立TBI大鼠模型.将58只造模成功大鼠随机分为模型组(n=12)、低剂量组(n=12)、中剂量组(n=12)、高剂量组(n=11)、抑制剂组(n=11).低、中、高剂量组大鼠分别予低[5 mg/(kg·d)]、中[10mg/(kg·d)]、高[20mg/(kg·d)]剂量柯诺辛碱治疗,抑制剂组大鼠予柯诺辛碱[20mg/(kg·d)]和自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)[15mg/(kg·d)]治疗.给药14 d后,采用改良神经功能缺损评分法进行神经功能评分,采用Morris水迷宫实验评价认知功能,采用蔗糖偏好实验和旷场实验评价行为学.通过苏木素-伊红(HE)染色和TUNEL染色评价脑组织损伤和神经元凋亡.检测脑组织含水量、脑组织氧化应激指标[超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和丙二醛(MDA)]水平.采用Western blotting检测脑组织Bax、Bcl-2、cleaved Caspase-3、LC3B、p62和Beclin-1蛋白表达.结果:低、中、高剂量组大鼠的神经功能评分、逃避潜伏期、脑组织含水量、TUNEL阳性率、MDA水平,以及Bax、cleaved Caspase-3、p62蛋白表达水平均低于模型组(P＜0.05);低、中、高剂量组大鼠穿越平台次数、蔗糖偏好率、水平活动分数、垂直活动分数,SOD、CAT和GSH-Px水平,以及Bcl-2、LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ、Beclin-1蛋白表达水平均高于模型组(P＜0.05).抑制剂组大鼠的神经功能评分、逃避潜伏期、脑组织含水量、TUNEL阳性率、MDA水平,以及Bax、cleaved Caspase-3、p62蛋白表达水平均高于高剂量组(P＜0.05);抑制剂组大鼠穿越平台次数、蔗糖偏好率、水平活动分数、垂直活动分数,SOD、CAT和GSH-Px水平,以及Bcl-2、LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ、Beclin-1蛋白表达水平均低于高剂量组(P＜0.05).结论:柯诺辛碱可有效减轻TBI后的继发性损伤,抑制神经元凋亡和氧化应激,其机制可能与激活线粒体自噬有关.

钩藤是我国常用的中药之一,具有清热平肝,息风定惊之功效.生物碱类物质是钩藤的主要活性物质,现代实验药理学研究表明钩藤及其生物碱类物质对神经系统具有广泛的生物学效应,其中钩藤碱是钩藤中含量最高、研究最多的生物碱.本文就钩藤碱及其同分异构体(异钩藤碱、柯诺辛碱和柯诺辛碱B)对神经系统的作用及机制进行综述,为其应用拓展和深入研究提供参考.

目的 从多种钩藤的提取物及其单体中筛选具有逆转肝癌耐药细胞株HepG2/ADM耐药性的逆转剂.方法 配制不同浓度的钩藤氧化类吲哚生物碱提取物U1、钩藤非氧化类吲哚生物碱提取物U2、大叶钩藤提取物U3、华钩藤提取物U4 4种钩藤提取物和Rhy、Irhy、Cory、Icory、HS、HSE和CNX 7个单体以及阳性药VRP,分别作用于HepG2/ADM和HepG2细胞72 h后,采用MTr法进行药物细胞毒实验;以上述药物的非毒剂量与DOX联用,采用MTT法进行逆转肿瘤耐药活性的研究.结果 4种提取物中U3的逆转倍数最高,为28.29,其次是U1、U4、U2;在7个单体化合物中,Icory的逆转倍数最高为40.26,其次是Irhy、Cory、CNX、Rhy、HSE和HS.结论 钩藤类生物碱及其单体对肝癌耐药细胞株HepG2/ADM具有逆转作用,其中,大叶钩藤的提取物及其单体柯诺辛碱有成为肿瘤耐药逆转剂的研究潜力.

目的 建立从天然药物中快速发现乙酰胆碱酯酶抑制剂的有效方法,为中药及其活性成分治疗阿尔茨海默病提供支持.方法 通过Ellman比色法,对多种药用植物乙醇提取物的抗乙酰胆碱酯酶活性进行评价,筛选出活性较好的提取物样品,应用亲和超滤超高效液相色谱-四级杆-飞行时间串联质谱(UPLC-Q-TOF/MS)联用技术分离鉴定其中的活性成分.结果 元胡、黄柏、钩藤、血三七具有较强的乙酰胆碱酯酶抑制活性.经过快速筛选,发现3-二氢异卡丹宾或者3-二氢卡丹宾、钩藤碱、异钩藤碱、柯诺辛或异柯诺辛可能为钩藤中的活性化合物.结论 采用亲和超滤UPLC-Q-TOF/MS联用技术从天然药物中快速筛选出乙酰胆碱酯酶抑制剂,方法可行、快速,能够为治疗阿尔茨海默病的新药开发提供先导化合物.

目的:建立一测多评法同时测定大叶钩藤中异钩藤碱、钩藤碱、柯诺辛B和柯诺辛的含量,并验证该法的准确性及可行性.方法:以钩藤碱为内标物,计算其与异钩藤碱、柯诺辛B和柯诺辛的相对校正因子,比较一测多评法与外标法测定结果的差异性.结果:建立的相对校正因子重现性良好,一测多评法与外标法的测定结果之间无显著差异.结论:一测多评法可用于大叶钩藤药材中4种生物碱类成分的含量测定.

目的 研究蓬莱葛Gardneria multiflora枝叶的化学成分.方法 采用硅胶、ODS、Sephadex LH-20和HPLC等色谱方法进行分离纯化,并根据化合物的理化性质及波谱学数据鉴定其化学结构.结果 从蓬莱葛枝叶中分离得到13个生物碱类化合物,分别鉴定为antirhine 4α-oxide (1)、geissoschizol (2)、melosline E(3)、土波台文碱(4)、tubotaiwine N-oxide(5)、pyridinium (6)、melosline B(7)、N-甲基巴婆碱(8)、venoterpine (9)、肉桂酰胺(10)、lyaloside (11)、异长春花苷内酰胺(12)、柯诺辛碱(13).结论 化合物1～13均为首次从该植物中分离得到.

目的 观察柯诺辛碱B(Cory B)对百草枯(PQ)诱导的SH-SY5Y细胞自噬的调节作用及异常聚集TDP-43的影响.方法 实验分为正常对照组、模型组和Cory B干预组.用PQ诱导氧化应激细胞损伤模型.采用CCK8法检测细胞存活率,免疫荧光染色检测自噬标记物LC3B点状聚集物的形成,免疫印迹法(Western blot)检测自噬标志物LC3的转换变化(LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ)以及TDP-43蛋白的表达改变.结果 CCK8法检测结果显示,PQ降低了SH-SY5Y细胞存活率,Cory B对细胞没有明显的毒性,并且可以提高PQ诱导细胞的存活率.免疫荧光染色结果显示,经Cory B处理的细胞内LC3B点状聚集物明显增多.Western blot检测结果显示,与模型组相比较,Cory B干预组LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值升高,异常聚集的TDP-43蛋白表达水平降低.结论 Cory B能促进PQ诱导SH-SY5Y细胞的自噬反应,并降低异常聚集的TDP-43蛋白的表达,表明Cory B可能通过诱导细胞自噬发挥神经保护作用.