目的:研究异钩藤碱（isorhynchophylline, IRN）对血管紧张素Ⅱ（angiotensin Ⅱ, Ang Ⅱ）诱导的心肌细胞肥大的作用及机制。方法:H9c2细胞与Ang Ⅱ、不同浓度的IRN（0、5、10、25、50 μmol/L）共培养，检测细胞表面积及心肌肥大标志物心房利钠肽（atrial natriuretic peptide, ANP）、脑利钠肽（brain natriuretic peptide, BNP）、β-肌球蛋白重链（β-myosin heavy chain, β-MHC）mRNA水平来阐述IRN对心肌肥厚的作用及最有效浓度。H9c2细胞与Ang Ⅱ和IRN（25 μmol/L）在不同时间（0 h、6 h、12 h、24 h）共培养，研究抑制的最有效时间。检测信号通路的磷酸化水平，然后使用IRN和Akt抑制剂MK2206对信号通路磷酸化水平的影响来进一步研究潜在的作用机制。结果:与control组相比，Ang Ⅱ组H9c2细胞表面积显著增加（均 P<0.05），心肌肥大标志物ANP、BNP和β-MHC mRNA表达显著增加（均 P<0.05）；不同浓度的IRN（5、10、25、50 μmol/L）预处理均可抑制Ang Ⅱ引起的细胞表面积增加（均 P<0.05），尤其是在浓度为25 μmol/L时（ P<0.01）；IRN可以时间依赖性的抑制Ang Ⅱ诱导的ANP、BNP、β-MHC mRNA激活（均 P<0.05）。Ang Ⅱ引起Akt、GSK3β、mTOR、FOXO3a的磷酸化水平升高；IRN可以阻断Ang Ⅱ诱导的Akt信号通路磷酸化。 结论:IRN通过抑制Akt信号通路减轻Ang Ⅱ诱导的心肌细胞肥大。

目的 探讨异钩藤碱对急性脑梗死大鼠认知障碍的影响及相应机制.方法 将144只SD大鼠按照随机数字表法随机分为假手术组、急性脑梗死组、异钩藤碱低剂量组、异钩藤碱高剂量组、尼莫地平组、异钩藤碱高剂量+干扰素基因刺激蛋白(STING)激动剂(ADU-S100)组,每组24只.除假手术组外,其他各组大鼠均采用线栓闭塞大脑中动脉法构建急性脑梗死大鼠模型,假手术组仅游离右侧颈外动脉、颈总动脉和颈内动脉,不做插入线栓处理.建模成功后立即给药,异钩藤碱低剂量组和异钩藤碱高剂量组大鼠分别灌胃5mg/kg、20mg/kg异钩藤碱,且均需腹腔注射等量的等渗盐水;尼莫地平组大鼠需灌胃30 mg/kg尼莫地平,且还需腹腔注射等量的等渗盐水;异钩藤碱高剂量+ADU-S100组大鼠需灌胃20 mg/kg异钩藤碱且腹腔注射20 mg/kg ADU-S100;假手术组、急性脑梗死组大鼠均需灌胃10ml/kg与腹腔注射10ml/kg的等渗盐水.给药1次/d,持续2周.末次给药处理24 h后,采用Zela-Longa法对所有大鼠进行神经功能评分,并进行Morris水迷宫实验,记录大鼠的逃避潜伏期及原平台象限停留次数.采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠血清中白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平;检测各组大鼠脑组织含水量;采用2,3,5-三苯基四唑氯化物(TTC)染色测定各组大鼠脑梗死体积;采用伊文思蓝检测各组大鼠血-脑屏障通透性;采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测大鼠脑组织中闭锁小带蛋白1(ZO-1)、闭合蛋白(occludin)信使核糖核酸(mRNA)表达;采用免疫印迹检测大鼠脑组织中STING、磷酸化TANK结合激酶1(p-TBK1)、磷酸化干扰素调节因子3(p-IRF3)蛋白表达,并进行组间比较.结果 (1)与假手术组相比,急性脑梗死组末次给药处理24 h后神经功能评分[(2.96±0.32)分比0分]、脑组织含水量[(86.9±3.2)％比(71.8±3.1)％]、血清 TNF-α[(86.7±3.5)ng/L 比(35.6±1.7)ng/L]、IL-6[(167.8±6.1)ng/L 比(50.2±2.2)ng/L]、脑梗死体积[(28.6±1.3)mm3 比 0 mm3]、脑组织中伊文思蓝含量[(1.57±0.13)g/L 比(0.96±0.08)g/L]及 STING[(1.83±0.16)比(0.86±0.08)]、p-TBK1[(0.89±0.07)比(0.41±0.03)]、p-IRF3[(0.67±0.05)比(0.13±0.01)]蛋白表达均升高,脑组织中 ZO-1 mRNA[(0.45±0.04)比(1.00±0.00)occludin mRNA[(0.23±0.02)比(1.00±0.00)]表达均降低,逃避潜伏期延长[(33.6±1.6)s比(12.3±0.5)s],原平台象限停留次数减少[(5.9±0.2)次比(15.7±0.4)次],组间差异均有统计学意义(均P＜0.05).(2)与急性脑梗死组比较,异钩藤碱低剂量组、异钩藤碱高剂量组、尼莫地平组大鼠末次给药处理24 h后神经功能评分[(2.37±0.21)、(1.14±0.17)、(1.18±0.13)分比(2.96±0.32)分]、脑组织含水量[(81.8±3.0)％、(74.9±3.0)％、(74.3±2.9)％比(86.9±3.2)％]、血清 TNF-α[(71.1±1.4)、(43.4±2.0)、(41.5±1.9)ng/L 比(86.7±3.5)ng/L]、IL-6[(129.8±5.4)、(81.2±3.8)、(80.0±3.6)ng/L 比(167.8±6.1)ng/L]、脑梗死体积[(21.7±1.0)、(10.5±0.5)、(10.7±0.5)mm3 比(28.6±1.3)mm3]、脑组织中伊文思蓝含量[(1.39±0.12)、(1.16±0.10)、(1.18±0.19)g/L 比(1.57±0.13)g/L]及 STING[(1.50±0.14)、(1.02±0.11)、(1.01±0.09)比(1.83±0.16)]、p-TBK1[(0.75±0.05)、(0.54±0.04)、(0.52±0.05)比(0.89±0.07)]、p-IRF3[(0.51±0.05)、(0.25±0.02)、(0.27±0.02)比(0.67±0.05)]蛋白表达均降低,脑组织中 ZO-1 mRNA[(0.58±0.05)、(0.87±0.07)、(0.89±0.09)比(0.45±0.04)]、occludin mRNA[(0.36±0.03)、(0.71±0.06)、(0.69±0.05)比(0.23±0.02)]表达均升高,逃避潜伏期缩短[(28.6±1.0)、(16.5±0.7)、(16.4±0.7)s 比(33.6±1.6)s],原平台象限停留次数增加[(8.2±0.3)、(12.8±0.5)、(12.9±0.5)次比(5.9±0.2)次],组间差异均有统计学意义(均P＜0.05)o(3)与异钩藤碱高剂量组比较,异钩藤碱高剂量+ADU-S100组末次给药处理24 h后神经功能评分[(2.12±0.14)分比(1.14±0.17)分]、脑组织含水量[(78.7±3.2)％比(74.9±3.0)％]、血清 TNF-α[(59.7±2.1)ng/L比(43.4±2.0)ng/L]、IL-6[(118.9±4.6)ng/L 比(81.2±3.8)ng/L]、脑梗死体积[(16.6±0.4)mm3比(10.5±0.5)mm3]、脑组织中伊文思蓝含量[(1.36±0.10)g/L 比(1.16±0.10)g/L]及STING[(1.37±0.12)比(1.02±0.11)]、p-TBK1[(0.67±0.05)比(0.54±0.04)]、p-IRF3[(0.39±0.03)比(0.25±0.02)]蛋白表达均升高,脑组织中 ZO-1 mRNA[(0.63±0.05)比(0.87±0.07)]、occludin mRNA[(0.46±0.05)比(0.71±0.06)]表达均降低,逃避潜伏期延长[(23.4±1.0)s比(16.5±0.7)s],原平台象限停留次数减少[(9.6±0.3)次比(12.8±0.5)次],组间差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 异钩藤碱可抑制急性脑梗死大鼠炎症、减少血-脑屏障损伤、降低脑水肿程度,改善认知障碍,其机制可能与抑制STING/TBK1/IRF3通路有关.

目的:建立清脑降压片一测多评测定方法,同时测定其中11种成分含量,并构建其OPLS-DA、EM-TOPSIS法综合质量评价模型.方法:以Agilent Extend C18柱为色谱柱,乙腈-0.1％甲酸为流动相,同时测定18批清脑降压片中β-蜕皮甾酮、异钩藤碱、钩藤碱、黄芩苷、汉黄苓苷、红镰霉素-6-O-β-龙胆二糖苷、决明子苷C、橙黄决明素、丹参素、丹酚酸B、丹参酮ⅡA的含量,采用主成分分析(PCA)法和正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA)其整体质量进行综合评价.结果:11种成分分别在各自范围内线性关系良好(r≥0.999),精密度、重复性、稳定性、准确度良好(RSD＜2.0％).以汉黄芩苷为参照物,β-蜕皮甾酮、异钩藤碱、钩藤碱、黄芩苷、红镰霉素-6-O-β-龙胆二糖苷、决明子苷C、橙黄决明素、丹参素、丹酚酸B、丹参酮ⅡA的平均相对校正因子分别为1.648 9、0.925 7、1.434 6、1.299 1、0.751 6、0.836 9、1.129 5、1.573 0、0.788 5 和 1.256 9;ESM 法与 QAMS 法测定结果比较,差异无统计学意义(P＞0.05).PCA结果显示不同批次清脑降压片质量存在差异;OPLS-DA筛选出黄芩苷、汉黄芩苷、丹酚酸B、红镰霉素-6-0-β-龙胆二糖苷和β-蜕皮甾酮等5种引起清脑降压片质量差异的主要因素.结论:所建立的方法对清脑降压片的质量控制和整体评价具有重要意义.

高血压是临床最常见的慢性疾病之一.西医治疗高血压以血管紧张素转换酶抑制剂、钙离子通道阻滞剂、β-受体阻滞剂和利尿剂为主导.与西药相比,中药具有多成分、多靶点、整体调节的优势,且安全性高.近年来,钩藤及其制剂在治疗心血管疾病尤其是高血压病上取得了较好的疗效.钩藤主要从抑制交感神经系统活性、阻断肾素-血管紧张素-醛固酮系统、改善内皮功能、发挥钙拮抗剂作用等方面产生降压作用.结合文献报道,从钩藤单体化学成分、钩藤提取物、钩藤配伍制剂3个方面总结钩藤及其制剂在治疗高血压病中的应用,以期为钩藤治疗高血压病的临床应用提供更全面的数据基础.

研究补肾清肝中药配伍对间歇性低氧致人脐静脉内皮细胞损伤模型p38MAPK/NF-κB信号通路的干预效应.实验采用改良的间歇性低氧诱导人脐静脉内皮细胞建立体外细胞损伤模型,以补肾清肝中药有效成分配伍(异钩藤碱、桃叶珊瑚苷及川芎嗪)作为干预药物,首先进行中药最优配伍浓度体外筛选,然后选择最优配伍浓度作为干预剂量,观察其对模型p38MAPK/NF-κB信号通路的干预效应.结果显示异钩藤碱、桃叶珊瑚苷及川芎嗪在0.01 mg·L“时具有最佳的体外抗炎效应.间歇性低氧组NF-κB p65入核量及p-IκB较对照组与其他各组均显著增加,同时免疫荧光染色NF-κB p65可见间歇性低氧组出现明显NF-κB p65核移位表现,内皮细胞黏附程度明显增加;与间歇性低氧组相比,p38MAPK抑制剂组及补肾清肝中药配伍组p-p38MAPK,NF-κB p65入核量及p-IκB表达量均明显较少,内皮细胞黏附明显被抑制.该研究表明,补肾清肝中药最优浓度配伍通过将抑制p38MAPK的磷酸化作为起始,继而阻断了NF-κB的核移位行为,抑制其转录功能,实现对间歇性低氧诱导血管内皮细胞损伤模型的保护效应.

[目的]探讨异钩藤碱通过血管紧张素1型受体(AT1R)对血管平滑肌细胞(A7r5细胞)时钟基因昼夜节律改变的调控作用.[方法]采用血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导A7r5细胞构建时钟基因节律改变模型.实验分为正常对照组、模型组(AngⅡ剂量为0.1μmol/L)、异钩藤碱组(异钩藤碱剂量为31μmol/L)和异钩藤碱联用缬沙坦(AT1R阻滞剂)组(异钩藤碱31μmol/L、缬沙坦10μmol/L).采用实时定量聚合酶链反应(qPCR)法检测各个时间点不同组A7r5细胞中AT1R、Per2、Bmal1、Clock基因的表达水平,建立数学模型计算不同参数间的差别.采用蛋白免疫印迹(Western blot)法检测各个时间点不同组A7r5细胞中Src和p-Src蛋白表达情况.[结果]A7r5细胞经AngⅡ(0.1μmol/L)作用后,AT1R、Per2、Bmal1、Clock基因出现昼夜节律改变,呈现反杓型波动;Src蛋白磷酸化表达增加.异钩藤碱(31μmol/L)作用后,上述时钟基因表达恢复正常的杓型波动.异钩藤碱(31μmol/L)与缬沙坦(10μmol/L)联用后,上述时钟基因的昼夜节律受到一定程度的抑制,各组细胞的中值、振幅和峰相位发生不同程度的改变,Src蛋白磷酸化水平下调.[结论]异钩藤碱通过AT1R-Src信号途径可调控AngⅡ诱导的血管平滑肌细胞时钟基因表达的昼夜节律改变.

异钩藤碱作为钩藤中主要的四环羟吲哚生物碱,除具有显著的抗心血管疾病药理活性外,近年来发现,其对神经系统具有广泛的药理作用.综合近几年文献,从拮抗β-淀粉样蛋白产生的神经毒性、抑制线粒体凋亡、抑制tau蛋白磷酸化、抑制炎性介质释放、诱导α-突触核蛋白自噬、拮抗1-甲基-4-苯基吡啶诱导的神经毒性、保护脑缺血再灌注损伤、抗抑郁样作用等方面对异钩藤碱的神经保护作用进行概述,为异钩藤碱的进一步研发提供参考依据.

钩藤是我国常用的中药之一,具有清热平肝,息风定惊之功效.生物碱类物质是钩藤的主要活性物质,现代实验药理学研究表明钩藤及其生物碱类物质对神经系统具有广泛的生物学效应,其中钩藤碱是钩藤中含量最高、研究最多的生物碱.本文就钩藤碱及其同分异构体(异钩藤碱、柯诺辛碱和柯诺辛碱B)对神经系统的作用及机制进行综述,为其应用拓展和深入研究提供参考.

目的:了解钩藤药材商品规格等级标准的演变历史,并对现行标准的合理性进行初步评估.方法:查阅相关本草文献、现代中医药文献及结合钩藤主产地和部分药材市场的实地考察,对钩藤商品规格等级及销售情况进行系统调研,并以钩藤碱、异钩藤碱为指标成分,对其划分依据进行初步评估.结果:调查结果显示,至今尚未形成全国性的钩藤商品规格等级标准,仅有个别地方标准形成;人们对钩藤药材的商品规格等级划分重视度不足,市场执行力差;钩藤指标成分与药材钩型、大小及销售价格并无相关性.其中,异钩藤碱和钩藤总碱的含量与其药材颜色具有显著相关性.结论:传统钩藤商品规格等级标准合理性差,需尽快建立相关国家标准,以规范钩藤药材市场.

目的 建立UPLC-MS/MS方法测定中药钩藤中钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱、异去氢钩藤碱、毛钩藤碱与去氢毛钩藤碱含量.方法 以地西泮为内标,采用UPLC BEH(2.1 mm×50mm,1.7 μm)柱,柱温为40℃.流动相由乙腈和水(含0.1％甲酸)组成,梯度洗脱流速为0.4 ml/min,洗脱时间为5.5 min.MRM模式对钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱、异去氢钩藤碱、毛钩藤碱与去氢毛钩藤碱进行定量分析.蒸馏水煮法对中药钩藤进行提取.结果 在0.005μg/ml～5 μg/ml浓度时,钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱、异去氢钩藤碱、毛钩藤碱与去氢毛钩藤碱线性良好(r＞0.995),最低定量下限为0.005 μg/ml.日内精密度RSD≤8％,日间精密度RSD≤10％.准确度在93.4％ ～ 108.7％.结论 该分析方法灵敏、快速、选择性好,并成功应用于中药钩藤中钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱、异去氢钩藤碱、毛钩藤碱与去氢毛钩藤碱含量测定.