目的:观察树突表达特异性7跨膜蛋白(DCSTAMP)对甲状腺乳头状癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响，并探讨其机制。方法:在基因表达谱交互式分析平台(GEPIA)中分析DCSTAMP在甲状腺乳头状癌组织中的表达；采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测甲状腺乳头状癌细胞系KTC-1、FTC-133及甲状腺正常细胞Nthy-ori 3-1中DCSTAMP表达的差异；在KTC-1和FTC-133细胞中分别转染过表达和敲低质粒及其对照，构建DCSTAMP过表达和敲低细胞模型；过表达组通过细胞增殖/毒性检测试剂盒(CCK-8)、5-乙炔基-2’-脱氧尿嘧啶核苷(EdU)细胞增殖检测试剂盒检测DCSTAMP基因过表达后对增殖的影响；蛋白印迹法验证过表达后对细胞核增殖抗原(Ki-67)蛋白、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路的影响；敲低组通过细胞划痕、侵袭测定实验(Transwell)实验检测DCSTAMP基因敲低后对迁移、侵袭的影响；蛋白印迹法验证敲低后对神经钙黏着蛋白(NCAD)、磷酸化蛋白激酶B蛋白(p-Akt)、总蛋白激酶B蛋白(t-Akt)表达的影响；两样本均数比较采用成组配对 t检验分析。 结果:RT-qPCR和Western blot结果均显示DCSTAMP基因在甲状腺乳头状癌细胞KTC-1、FTC-133中的表达高于甲状腺正常细胞Nthy-ori 3-1(RT-qPCR：DCSTAMP基因在Nthy-ori 3-1、KTC-1、FTC-133细胞中mRNA相对表达量分别为1.020±0.202、17.350±3.326、8.684±0.030，Nthy-ori 3-1与KTC-1比较： t＝4.901， P<0.05；Nthy-ori 3-1与FTC-133比较： t＝37.460， P<0.01；Western blot：DCSTAMP基因在Nthy-ori 3-1、KTC-1、FTC-133细胞中蛋白相对表达量分别为1.000±0.009、3.227±0.444、3.367±0.073，Nthy-ori 3-1与KTC-1比较： t＝9.628， P<0.01；Nthy-ori 3-1与FTC-133比较： t＝55.580， P<0.01)；KTC-1、FTC-133细胞中DCSTAMP过表达组细胞增殖速度高于对照组(KTC-1对照组与过表达组第3天相对增殖速度：0.215±0.010：0.397±0.029， t＝6.198， P<0.01；FTC-133对照组与过表达组第3天相对增殖速度：0.350±0.364：0.432±0.025， t＝33.640， P<0.01)，过表达组增殖能力高于对照组[KTC-1对照组比过表达组：(8.382±1.400)%比(91.253±1.699)%， t＝65.220， P<0.01；FTC-133对照组与过表达组：(14.385±2.441)%比(91.332±1.159)%， t＝49.320， P<0.01]，过表达组Ki-67表达高于对照组(KTC-1对照组与过表达组蛋白相对表达量：1.000±0.038比1.282±0.134， t＝9.968， P<0.01；FTC-133对照组与过表达组蛋白相对表达量：1.000±0.011比1.382±0.221， t＝40.920， P<0.01)，过表达组MAPK表达高于对照组(KTC-1对照组与过表达组：1.000±0.012比1.088±0.057， t＝10.720， P<0.01；FTC-133对照组与过表达组：1.000±0.039比1.220±0.123， t＝9.404， P<0.01)，过表达组MAPK通路亚家族细胞外信号调节激酶(ERK)蛋白表达高于对照组：(1.000±0.005比7.047±0.088， t＝68.650， P<0.01；FTC-133对照组与过表达组：1.000±0.003比1.983±0.029， t＝34.000， P<0.01)；而在KTC-1、FTC-133中敲低DCSTAMP基因后，对照组细胞迁移速度高于敲低组(KTC-1对照组与敲低组：(72.545±0.704)%比(45.016±2.156)%， t＝21.020， P<0.01；FTC-133对照组与敲低组：(82.422±0.196)%比(49.824±5.402)%， t＝10.450， P<0.01)，对照组侵袭能力高于敲低组(KTC-1对照组与敲低组：(320.667±13.013)%比(172.333±11.240)%， t＝14.940， P<0.01；FTC-133对照组与敲低组侵袭细胞数：302.667±24.111比228.000±14.422， t＝4.603， P<0.01)，p-Akt表达对照组高于敲低组(KTC-1对照组与敲低组：1.000±0.029比0.376±0.355， t＝21.980， P<0.01；FTC-133对照组与敲低组：1.000±0.010比0.809±0.110， t＝35.900， P<0.01)。 结论:DCSTAMP基因通过激活MAPK通路亚家族ERK及Akt磷酸化在甲状腺乳头状癌细胞系中可以促进肿瘤细胞增殖、迁移和侵袭。

目的:探讨甲状腺乳头状癌中树突状细胞-特异性跨膜蛋白(DC-STAMP)的表达及其临床意义。方法:收集郑州大学第一附属医院54例甲状腺乳头状癌患者手术新鲜癌组织及正常甲状腺组织，应用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测甲状腺乳头状癌组织及配对正常甲状腺组织中DC-STAMP mRNA和蛋白的表达，应用免疫组织化学技术检测甲状腺乳头状癌组织芯片中DC-STAMP蛋白、鼠类肉瘤滤过性毒菌致癌同源体B1(BRAF)蛋白和BRAF V600E突变蛋白的表达水平，采用 t检验分析甲状腺乳头状癌组织和正常甲状腺组织DC-STAMP表达量差异，采用 χ2检验分析DC-STAMP mRNA表达水平与甲状腺癌患者临床病理学特征的相关性，采用 χ2检验分析DC-STAMP与BRAF V600E突变的相关性。 结果:DC-STAMP mRNA在甲状腺乳头状癌组织相对表达量显著高于正常甲状腺组织[升高(3.354±2.938)倍， t＝5.886， P<0.05]，其表达水平与肿瘤多灶性明显相关( χ2＝4.396， P<0.05)。DC-STAMP蛋白在甲状腺乳头状癌组织相对表达量明显高于正常甲状腺组织。DC-STAMP在甲状腺乳头状癌中的表达与BRAF V600E突变明显相关( χ2＝3.962， P<0.05)。 结论:DC-STAMP在甲状腺乳头状癌组织中明显过表达且表达水平与肿瘤多灶性明显相关。DC-STAMP与BRAF V600E突变明显相关，在甲状腺乳头状癌的侵袭和转移中可能起重要作用。

目的:探讨长链非编码RNA树突状细胞-特异性跨膜蛋白域包含1-反义链1(DCST1-AS1)结合α-烯醇化酶(ENO1)在三阴性乳腺癌细胞增殖和侵袭中的作用。方法:通过基因本体分析寻找DCST1-AS1的潜在靶标；通过癌症基因组图谱分析ENO1在乳腺癌中的表达和预后；采用RNA免疫沉淀实验、实时定量聚合酶链反应和蛋白质免疫印迹研究DCST1-AS1与ENO1之间的相互作用；采用细胞增殖实验和侵袭实验研究DCST1-AS1结合ENO1对细胞增殖和侵袭的影响。使用GraphPad Prism 8软件处理数据，组间比较采用配对 t检验。 结果:基因本体分析表明DCST1-AS1下拉蛋白ENO1参与肿瘤能量代谢与细胞间黏附等重要生物过程。癌症基因组图谱显示ENO1在乳腺癌亚型中差异表达且与患者的不良预后明显相关( P< 0.01)。干扰DCST1-AS1能显著下调ENO1 mRNA(0.45±0.01， t＝11.815， P< 0.01)，差异有统计学意义，而过表达DCST1-AS1则显著上调ENO1 mRNA(4.15±0.07， t＝63.424， P< 0.01)，差异有统计学意义。干扰ENO1表达不仅使过表达DCST1-AS1的MDA-MB-231细胞的增殖能力受损(小干扰RNA组吸光度值分别为0.68±0.10、0.95±0.06、1.58±0.10、1.91±0.15；小干扰RNA对照组吸光度值分别为0.83±0.16、1.60±0.18、2.51±0.17、2.82±0.13， t＝3.641， P< 0.05)，差异有统计学意义，还抑制了细胞的侵袭(siRNA组，1.00±0.57，siNC组，3.34±0.71， t＝4.462， P< 0.05)，差异有统计学意义。 结论:DCST1-AS1通过调控ENO1促进三阴性乳腺癌的增殖和侵袭。

目的:构建双层含骨基质骨器官芯片并用于体外模拟成骨细胞和破骨细胞分化，为抗骨质疏松药物开发提供新平台。方法:使用WorkSoild软件制作双层双通道骨器官芯片设计图，利用光刻技术制备浇注母版。以聚二甲基硅氧烷（PDMS）为原料，通过模具浇注制备芯片主体。以牛皮质骨片为间隔，分隔培养室4个通道进出口采用储液柱封闭。芯片验证实验分为成骨、破骨诱导组和成骨、破骨对照组，成骨、破骨诱导组将小鼠胚胎成骨细胞前体细胞MC3T3-E1和小鼠巨噬细胞RAW264.7分别接种于芯片上，成骨诱导14 d，破骨诱导7 d。成骨、破骨对照组为不进行诱导的MC3T3-E1细胞和RAW264.7细胞。观察指标包括：（1）芯片外观及密封性：芯片制备完成后拍照观察外观并通过密封实验观察密封性能。（2）生物相容性：MC3T3-E1细胞和RAW264.7细胞接种于芯片培养3 d及培养1、3、5 d后，分别采用钙黄绿素乙酰氧基甲酯/碘化丙啶（AM/PI）染色和细胞增殖及毒性检测试剂盒（CCK-8）实验观察细胞存活情况。（3）成骨分化情况：对成骨诱导组细胞进行碱性磷酸酶（ALP）染色、茜素红染色观察成骨细胞诱导情况。收集成骨诱导组和成骨对照组细胞RNA，qPCR检测成骨细胞标志基因Runt相关转录因子2（RUNX2）、骨钙素（OCN）、Ⅰ型胶原（COL1A1）表达情况，观察成骨细胞分化程度和成骨能力。（4）破骨分化情况：对破骨诱导组细胞进行抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色观察破骨细胞分化情况。提取破骨诱导组和破骨对照组细胞RNA进行破骨分化基因qPCR，检测破骨细胞标志基因TRAP、组织蛋白酶K（CTSK）和树突状细胞特异性跨膜蛋白（DC-STAMP）表达水平。结果:双层含骨基质骨器官芯片大小为3 cm×3 cm，整体透光，芯片系统结构对接紧凑，无渗液。钙黄绿素AM/PI染色结果显示，MC3T3-E1细胞和RAW264.7细胞培养3 d后，呈红色荧光死细胞极少。CCK-8实验结果显示，MC3T3-E1细胞和RAW264.7细胞培养5 d内，细胞活力均在90%以上，表明芯片生物相容性好，细胞可以正常存活并增殖。ALP染色和茜素红染色结果显示，成骨诱导14 d，成骨诱导组MC3T3-E1细胞成功分化为成骨细胞并产生钙化结节。qPCR结果显示，成骨诱导组MC3T3-E1细胞的RUNX2相对表达量为4.98±0.74，显著高于对照组的0.99±0.03（ P<0.01）；MC3T3-E1细胞的OCN相对表达量为7.98±0.76，显著高于对照组的1.00±0.06（ P<0.01）；MC3T3-E1细胞的COL1A1相对表达量为7.07±0.56，显著高于对照组的0.97±0.03（ P<0.01）。TRAP染色结果显示，破骨诱导7 d，破骨诱导组RAW264.7细胞形成巨大的多核破骨细胞，破骨细胞表达大量TRAP蛋白。qPCR检测结果显示，破骨诱导组RAW264.7细胞的TRAP相对表达量为3.35±0.37，显著高于对照组的1.01±0.06（ P<0.01）；RAW264.7细胞的CTSK相对表达量为3.46±0.79，显著高于对照组的1.01±0.05（ P<0.01）；RAW264.7细胞的DC-STAMP相对表达量为1.92±0.12，显著高于对照组的0.98±0.08（ P<0.01）。 结论:双层含骨基质骨器官芯片结构紧凑，可长期体外培养，生物相容性好，可进行成骨和破骨细胞分化诱导，有望为骨质疏松机制探究和药物筛选提供新的研究平台。

细胞外囊泡(EVs)是由从细胞膜主动分泌的双层膜结构的囊泡小体.外泌体为最小的EVs,外泌体包括源细胞非特异性和特异性两类蛋白分子.前者包括热休克蛋白、参与细胞内信号转导的蛋白、各种代谢酶、细胞溶质蛋白和四跨膜蛋白等;后者只存在于某种特殊的细胞,如树突状细胞(DC)等.外泌体除含有蛋白,还含有小RNA,如微小RNA和长链非编码RNA,参与基因的表达调控.与类风湿关节炎(RA)相关的外泌体蛋白如瓜氨酸蛋白、外泌体淀粉样蛋白A等,外泌体酶如金属蛋白酶氨基肽酶N、D和B-葡糖醛酸酶、Rab27蛋白等,外泌体核酸如miR155和miR146a等,其不仅参与了RA的发病,而且还是RA具有诊断价值的生物标志物.在RA中,利用外泌体能再次诱导机体对自身抗原的耐受,可防止疾病的发生发展.阻断肿瘤坏死因子表达外泌体可治疗RA,除了DC和中性粒细胞衍生的外泌体具有治疗作用外,还有口服牛乳源性EVs可减轻胶原诱导型关节炎模型炎症.外泌体自身不仅可作为治疗药物,而且可作为结合药物的载体,满足精准治疗的需求.

目的 研究白花蛇舌草-半枝莲药对乙酸乙酯组分(YDW11)对破骨细胞分化的抑制作用.方法 UPLC-MS法鉴定YDW11中化学成分后,MTT法分析其对RAW264.7细胞活力的影响.100 ng/mL核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)诱导RAW264.7细胞7d以建立破骨细胞模型后,抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色考察TRAP阳性多核细胞数,相应试剂盒测定TRAP酶活性.QRT-PCR检测TRAP、树突状细胞-特异性跨膜蛋白(DC-STAMP)、活化T细胞核因子cl(NFATc1)基因表达,Western blotting检测核因子κB受体活化因子(RANK)、肿瘤坏死因子受体相关因子6 (TRAF6)、NFATc1、组织蛋白酶K蛋白表达,Taqman MicroRNA RT-PCR检测miR-155表达.结果 YDW11中有16种成分,鉴定出对羟基苯乙酮、野黄芩苷、木犀草素、芹菜素.与模型组比较,YDW11组(25、50 μg/mL)阳性多核细胞数显著减少(P＜0.01),并对细胞活力无明显影响(P＞0.05);呈剂量依赖性地显著抑制酶活性,TRAP、DC-STAMP、NFATc1基因表达,RANK、TRAF6、NFATc1、组织蛋白酶K蛋白表达(P＜0.05),并显著提高miR-155表达(P＜0.05).结论 YDW11可通过上调miR-155表达、下调相关基因和蛋白表达抑制RANKL诱导的破骨细胞分化.

黏蛋白1 (MUC1)是一种表达于多种上皮细胞的高度糖基化的跨膜蛋白,可维持正常上皮屏障的内环境稳态.在各种恶性肿瘤细胞中MUC1异常表达或糖基化可促进肿瘤的发生和转移,也为肿瘤疫苗设计提供了特异性抗原表位,因而成为一个潜在的免疫疗法靶点.目前为止,已经广泛用于临床试验.靶向MUC1的疫苗可分为四类:多肽疫苗、多糖疫苗、病毒载体疫苗和树突状细胞疫苗.其中,病毒载体疫苗TG4010联合化疗已被证实可使晚期非小细胞肺癌患者显著获益.本文总结了目前基于MUC1为靶点的肿瘤疫苗研究进展.

破骨细胞是具有骨吸收能力的多核巨细胞.在破骨细胞分化过程中,细胞因子刺激破骨细胞前体细胞表达融合蛋白,如树突状细胞特异性跨膜蛋白(DC-STAMP)、破骨细胞多次跨膜蛋白(OC-STAMP),为破骨细胞融合奠定基础.在疾病状态下,细胞因子的分泌异常,导致破骨细胞融合蛋白表达增加.这促进破骨细胞前体细胞融合形成骨吸收能力更强的破骨细胞.破骨细胞融合蛋白的异常表达是破骨细胞造成病理性骨破坏的前提.阐明破骨细胞融合蛋白的作用机制,对于干预骨破坏性疾病具有一定意义.基于此,本文通过论述破骨细胞融合蛋白的研究现状,为进一步研究破骨细胞造成的骨破坏性疾病提供参考.

目的 观察藁本内酯(LIG)对核因子κB受体活化因子配体(RANKL)诱导RAW264.7向破骨细胞分化的影响,并探讨该作用与G蛋白偶联雌激素受体(GPER)的相关机制.方法 体外培养RAW264.7细胞,RANKL诱导破骨细胞分化,并用LIG进行干预.通过抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)活性检测和TRAP染色法评价破骨细胞形成和分化能力;qPCR法检测GPER及破骨细胞相关基因mRNA水平;Western blot法检测GPER蛋白表达;采用GPER特异性拮抗剂G36进行干预,观察LIG干预破骨细胞分化的作用变化.结果 LIG浓度为10μmol/L时,TRAP活性检测结果显示,TRAP活性显著降低(P<0.01);TRAP染色结果显示,与RANKL组相比,LIG组TRAP阳性细胞形成减少(P<0.001);qPCR检测结果显示,与RANKL组相比,LIG组树突状细胞-特异性跨膜蛋白(DC-STAMP)、活化T细胞核因子(NFATc1)、组织蛋白酶K(CTSK)和核因子κB受体(RANK)的mRNA水平显著降低(P<0.05,P<0.001),而GPER mRNA表达明显升高(P<0.001);West-ern blot结果显示,与RANKL组相比,LIG组GPER蛋白表达升高(P<0.001).与LIG组比较,LIG+G36组TRAP阳性细胞数升高(P<0.01),TRAP活性增强(P<0.05),DC-STAMP、NFATc1、CTSK、RANK mRNA的表达升高(P<0.05).结论 LIG能够抑制RANKL诱导RAW264.7向破骨细胞分化,其机制可能是促进GPER表达,减少RANK和下游转录因子NFATc1的表达,抑制破骨细胞分化和骨吸收功能.

目的 探讨树突表达特异性7跨膜蛋白(TM7SF4)在胶质母细胞瘤(GBM)中的表达及对增殖、凋亡、肿瘤免疫浸润等生物学功能的影响.方法 采用CCK8、流式细胞术、划痕实验、荧光定量PCR(RT-qPCR)分析TM7SF4在GBM中的表达和作用.采用生物信息学分析(包括TIMER、LinkedOmics、DAVID、String、TISIDB和cBio-Portal数据库分析)TM7SF4基因的表达、相关差异基因、基因富集和功能分析、免疫细胞浸润等.结果 TM7SF4在GBM组织和细胞系中低表达,差异有统计学意义(P＜0.01);在GBM细胞U251中干扰TM7SF4基因促进细胞增殖和迁移,抑制细胞凋亡,差异有统计学意义(P＜0.01);生物信息学分析TM7SF4表达相关基因主要参与免疫反应和细胞间信号传导等生物过程;TM7SF4的表达与GBM肿瘤免疫浸润B淋巴细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞、巨噬细胞、中性粒细胞、树突状细胞的表达丰度均呈正相关(P＜0.05);TM7SF4基因可能与CCR7、CD80、GZMB、CSF2、CD27、CCL4、CD2、CD1C等基因存在相互作用关系.结论 TM7SF4在GBM中低表达,干扰TM7SF4能促进GBM细胞增殖和迁移和抑制细胞凋亡,TM7SF4可能是一个潜在的预后生物标志物和免疫治疗靶点.