目的:探讨G蛋白偶联受体30(GPR30)抑制TLR4/NF-κB通路减少蛛网膜下腔出血(SAH)后神经元凋亡的作用及其机制。方法:采用随机分组的方式将SD雄性大鼠随机分为假手术组(Sham组 n＝24，Sham 2组 n＝21)、SAH模型组(SAH组 n＝24，SAH 2组 n＝21)及SAH模型+G1激动剂组(简称G1组， n＝24)。通过颈内动脉穿刺法进行SAH模型的构建。采用Sugawara评分评价大鼠SAH的严重性。SAH后24 h采用Garcia评分和平衡木试验评分评定神经功能缺损程度。成功建模24 h后，称重脑组织湿重和干重，计算脑组织含水率。绘制伊文思蓝标准曲线，评估血脑屏障通透性。采用免疫荧光染色观察各组小胶质细胞活化情况。采用蛋白质免疫印迹法(WB)检测各组GPR30、TLR4及NF-κB蛋白的表达情况；采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组外周血TNF-α、IL-1β和IL-6促炎细胞因子的表达情况；采用TUNEL法检测神经元凋亡情况。 结果:与SAH组相比，G1组Sugawara评分降低、平衡木试验评分和Garcia评分升高、脑含水率和伊文思蓝的渗出率均降低(均 P<0.05)。随着时间的变化，Sham 2组GPR30表达量无明显变化( P>0.05)，建模后6、12、24、48和72 h，SAH 2组的GPR30表达量均较Sham 2组高，SAH 2组建模24 h的GPR30表达量最高，而后下降(均 P<0.05)。Sham组、SAH组与G1组三组间比较，GPR30、TLR4和NF-κB表达量的差异均有统计学意义(均 P<0.05)，其中G1组较SAH组TLR4和NF-κB表达量下降(均 P<0.05)。免疫荧光染色结果显示，SAH组小胶质细胞数目较Sham组增多，而G1组较SAH组的小胶质细胞减少。ELISA结果显示，SAH组、Sham组与G1组的TNF-α、IL-1β及IL-6的表达差异均有统计学意义(均 P<0.05)，其中，与SAH组比较，G1组的TNF-α、IL-1β及IL-6的表达均降低(均 P<0.05)。TUNEL法染色结果显示，SAH组的TUNEL阳性细胞数较Sham组增加，而G1组较SAH组的TUNEL阳性细胞数减少。 结论:GPR30活化后可能通过抑制TLR4/NF-κB通路减少SAH后的神经元凋亡，改善SAH后早期脑损伤，保护神经功能。

目的:探讨G蛋白偶联雌激素受体1(GPER1)特异性激动剂G1、拮抗剂G15对癫痫大鼠发作易感性的影响。方法:将60只大鼠按随机数字表法分为对照组、G1处理组、G15处理组，每组20只。后2组大鼠分别腹腔注射GPER1特异激动剂G1(10 μg)、拮抗剂G15(40 μg)，连续注射12 d。3组大鼠均制备氯化锂-匹罗卡品癫痫模型。观察大鼠腹腔注射匹罗卡品后1 h内的行为学表现，每隔5分钟采用Racine分级评估癫痫发作严重程度，比较3组大鼠癫痫发作(Racine分级Ⅳ级)的潜伏期和不同时间点癫痫发作级别。使用脑电监测系统监测大鼠脑电图，记录匹罗卡品注射前10 min到注射后2 h的脑电数据，采用傅立叶变换(FFT)进行脑电的时频分析。比较3组大鼠脑电能量值的分布和癫痫持续状态20 min内θ、α波能量值的变化。结果:(1)与对照组、G1处理组比较，G15处理组大鼠的癫痫发作潜伏期明显缩短，差异均有统计学意义( P<0.05)。注射匹罗卡品后15 min、20 min，G1处理组大鼠癫痫发作分级较对照组低，差异均有统计学意义( P<0.05)。注射匹罗卡品后15~35 min，G15处理组大鼠癫痫发作分级较对照组高，差异均有统计学意义( P<0.05)。(2)与对照组比较，G1处理组大鼠癫痫发作时脑电波幅较小，而G15处理组大鼠癫痫发作时间较早，且脑电波幅大、频率高。与对照组比较，G1处理组大鼠的脑电能量值变化不明显，而G15处理组大鼠在2 h内呈现出更高的脑电能量值。与对照组和G1处理组比较，G15处理组大鼠在癫痫持续状态20 min内θ、α波能量值明显增强，差异均有统计学意义( P<0.05)。 结论:GPER1的活性水平与癫痫发作易感性有关，特异性抑制GPER1活性可增强癫痫易感性，增大癫痫过程中特定频率波段的能量值。

目的:分析壬基酚对人结肠癌SW480细胞活性及跨膜G蛋白偶联雌激素膜受体30（GPR30）表达的影响。方法:采用实验研究方法。通过体外培养人结肠癌SW480细胞，采用细胞增殖、周期及凋亡检测以及基因和蛋白检测实验，分析壬基酚影响人结肠癌SW480细胞增殖、细胞周期、凋亡以及GPR30表达的情况。细胞分组：SW480细胞加入培养基设为对照组，加入培养基+1×10 ?8 mol/L雌二醇设为雌二醇组，加入培养基+1×10 -8 mol/L壬基酚设为壬基酚组，加入培养基+1×10 -8 mol/L壬基酚+1×10 -7 mol/L GPR30特异性拮抗剂G15设为壬基酚+G15组。观察指标：（1）4组人结肠癌SW480细胞增殖指数。（2）4组人结肠癌SW480细胞的周期占比。（3）4组人结肠癌SW480细胞的凋亡指数。（4）4组人结肠癌SW480细胞GPR30信使RNA（mRNA）表达情况。（5）4组人结肠癌SW480细胞GPR30蛋白表达情况。正态分布的计量资料以 x±s表示，组间比较采用单因素方差分析，两两比较采用最小显著差异法检验。 结果:（1）4组人结肠癌SW480细胞增殖指数。细胞增殖实验结果显示：对照组、雌二醇组、壬基酚组、壬基酚+G15组人结肠癌SW480细胞的增殖指数分别为100.00±0.00、89.19±4.86、148.96±6.04、120.40±3.39，4组比较，差异有统计学意义（ F=21.45， P<0.05）；壬基酚组与对照组比较，差异有统计学意义（ P<0.05）；雌二醇组、壬基酚+G15组分别与对照组比较，差异均无统计学意义（ P>0.05）。（2）4组人结肠癌SW480细胞的周期占比。细胞周期实验结果显示：对照组、雌二醇组、壬基酚组、壬基酚+G15组人结肠癌SW480细胞的S期细胞占比分别为39.96%±2.02%、36.67%±0.62%、43.85%±1.02%、38.29%±1.42%，4组比较，差异有统计学意义（ F=10.08， P<0.05）；雌二醇组、壬基酚组分别与对照组比较，差异均有统计学意义（ P<0.05）；壬基酚+G15组与对照组比较，差异无统计学意义（ P>0.05）。（3）4组人结肠癌SW480细胞的凋亡指数。细胞凋亡实验结果显示：对照组、雌二醇组、壬基酚组、壬基酚+G15组人结肠癌SW480细胞的凋亡指数分别为1.67±0.18、4.80±0.31、0.75±0.11、2.20±0.19，4组比较，差异有统计学意义（ F=136.79， P<0.05）；雌二醇组、壬基酚组分别与对照组比较，差异均有统计学意义（ P<0.05）；壬基酚+G15组与对照组比较，差异无统计学意义（ P>0.05）。（4）4组人结肠癌SW480细胞GPR30 mRNA表达情况。实时荧光定量聚合酶链式反应检测结果显示：对照组、雌二醇组、壬基酚组、壬基酚+G15组人结肠癌SW480细胞GPR30 mRNA相对表达率分别为1.00±0.00、0.86±0.05、1.89±0.27、0.64±0.12，4组比较，差异有统计学意义（ F=26.61， P<0.05）；壬基酚组、壬基酚+G15组分别与对照组比较，差异均有统计学意义（ P<0.05）；雌二醇组与对照组比较，差异无统计学意义（ P>0.05）。（5）4组人结肠癌SW480细胞GPR30蛋白表达情况。Western blot检测结果显示：对照组、雌二醇组、壬基酚组、壬基酚+G15组人结肠癌SW480细胞GPR30蛋白相对表达率分别为1.83±0.16、1.68±0.15、3.10±0.30、1.26±0.11，4组比较，差异有统计学意义（ F=34.05， P<0.05）；壬基酚组、壬基酚+G15组分别与对照组比较，差异均有统计学意义（ P<0.05）；雌二醇组与对照组比较，差异无统计学意义（ P>0.05）。 结论:低剂量壬基酚可增加人结肠癌SW480细胞增殖指数与S期细胞占比，降低细胞凋亡指数，并促进GPR30 mRNA和蛋白表达。

G蛋白偶联雌激素受体(GPER)作为一种新发现的雌激素膜蛋白偶联受体，近年来在内分泌代谢研究中广受关注。GPER介导的糖脂代谢异常和炎症反应失衡是多种内分泌代谢疾病发生发展的病生机制之一，有望成为治疗冠状动脉粥样硬化、肥胖和糖尿病的新药物靶标。本文从糖脂代谢和炎症几方面简要综述了GPER介导的雌激素通路的相关进展。

目的:基于网络药理学和分子对接预测黄芪补肾活血汤治疗乳腺癌的作用机制.方法:利用中药系统药理学数据库和分析平台(traditional Chinese medicines systems pharmacology platform,TCMSP)、BATM-TCM数据库等筛选黄芪补肾活血汤主要活性成分以及相关靶点,通过Gene Cards数据库搜索乳腺癌相关基因并进行筛选,将黄芪补肾活血汤靶点与乳腺癌基因进行映射,利用Cytoscape 3.8.2软件构建中药-成分-靶点可视化网络,绘制蛋白互作网络及进行基因本体(gene ontology,GO)、京都基因和基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)富集分析,筛选出核心基因.将黄芪补肾活血汤复方成分与关键靶点通过Swiss Dock网站进行分子对接验证.结果:黄芪补肾活血汤有效成分136个,潜在治疗靶点828个,其中76个是黄芪补肾活血汤治疗乳腺癌的潜在靶点.在蛋白互作网络中发现TP53、VEGFA、MAPK8、JUN、EGF等可能是黄芪补肾活血汤治疗乳腺癌的关键靶点.通过GO、KEGG富集分析发现作用机制涉及的通路包括PI3K-Akt信号通路、肿瘤中的microRNAs、RNA聚合酶Ⅱ转录因子复合物肌膜、转录因子结合、G蛋白偶联胺受体活性、血红素结合、蛋白质结构域特异性结合、核受体活性、癌症中的转录调控异常、血管内皮生长因子信号通路等.通过分子对接验证显示,化合物槲皮素、山柰酚、β-谷甾醇、木犀草素、植物甾醇与关键靶点PGR、ADRB2、NR3C2、PREE1、SCN5A具有较好的结合能力.结论:通过网络药理学构建"药物-成分-靶点-信号通路"网络及分子对接技术验证,发现黄芪补肾活血汤治疗乳腺癌主要是通过抗癌、抑制雌激素受体的表达、调节免疫等多通路、多靶点实现的,为临床治疗乳腺癌提供了更多的治疗方法,给临床用药提供了更多的选择.

目的 探讨固本安神方对围绝经期综合征(PMS)模型大鼠性激素水平及卵巢雌激素受体蛋白表达水平的影响.方法 选取动情周期规则的雌性SD大鼠 60 只,腹腔注射 160 mg/kg去氧乙烯基环己烯(VCD),以复制PMS大鼠模型.造模成功后,将雌性SD大鼠随机分为模型组(B组,等体积生理盐水),中药组[C组,0.56 g/(kg·d)更年安片],西药组[D组,0.1 mg/(kg·d)戊酸雌二醇片],固本安神方高、中、低剂量组[E1 组、E2 组、E3 组,18.0,9.0,4.5 g/(kg·d)],各 10 只.另取雌性SD大鼠 10 只为正常组(A组,等体积生理盐水).各组大鼠分别灌胃给药 4 周后,摘取其子宫、双侧卵巢,称定湿重,计算子宫指数、卵巢指数;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定血清中卵泡刺激素(FSH)、促黄体生成素(LH)、雌二醇(E2)的水平;采用免疫印记(Western blot)法测定卵巢组织中雌激素受体α(ERα)、雌激素受体β(ERβ)、G蛋白偶联雌激素受体 1(GPER1)蛋白表达水平.结果 与B组比较,C组、D组、E1组大鼠的子宫指数、卵巢指数均显著升高(P<0.01);C组、D组、E1 组大鼠血清中FSH和LH水平均显著降低(P<0.01),E2 水平均显著升高(P<0.01);C组、D组、E1 组大鼠卵巢组织中ERα,ERβ,GPER1 蛋白表达水平均显著升高(P<0.01),E2 组、E3 组大鼠卵巢组织中ERα蛋白表达水平均显著升高(P<0.05),E2 组大鼠卵巢组织中GPER1 蛋白表达水平显著升高(P<0.05).结论 固本安神方治疗PMS模型大鼠的作用机制可能与影响性激素分泌及提高卵巢雌激素受体的蛋白表达水平有关.

目的 本研究分别将野生型(WT)、Gper1敲低(Gper1-KD)大鼠海马组织进行转录组测序,探讨G蛋白偶联雌激素受体 1(G-protein coupled estrogen receptor 1,GPER1)影响癫痫发病可能的信号通路和分子机制.方法 海马组织进行RNA提取和cDNA文库构建,与NCBI数据库大鼠基因组及基因注释比对,通过FPKM值,筛选组别间差异表达基因(DEGs).将DEGs进行GO富集、KEGG富集分析,构建蛋白互作网络,利用RT-qPCR法对关键DEGs进行验证.结果 Gper1-KD 组与 WT 组相比,筛选(Fold change＞2且FDR＜0.01)后,检测到DEGs 2 253个,其中上调基因1 380个,下调基因873个;GO结果显示,DEGs主要分布在淋巴细胞趋化性、细胞分泌、巨噬细胞趋化性、中性粒细胞趋化性、血管生成正向调控等生物过程;KEGG结果显示,DEGs相关分子信号通路主要有癌症信号通路、PI3K-Akt通路、癌症蛋白聚糖相关信号通路、细胞黏附相关通路、MAPK信号通路等;RT-qPCR 结果表明,Mapk12、Pdpk1、Foxo3、Camk2d、Pik3cg 等基因表达水平差异具有显著性.结论 MAPK、TNF信号通路在GPER1影响癫痫发生中可能起关键作用,GABA能神经元和Pik3cg在GPER1影响癫痫易感性方面可能发挥重要作用.

GPR30是一种G蛋白偶联受体,同时其因为能够与雌激素直接结合而被称为G蛋白偶联雌激素受体.作为雌激素的新型受体,其功能被广泛与雌激素已知效应比较.雌激素对神经中枢系统作用以及这些作用是否能够转化用于治疗各种神经系统疾病已经得到广泛的讨论.据文献报道GPR30受体在神经中枢系统中分布并部分参与雌激素样神经保护作用,同时其被激动不具备雌激素直接使用带来的副作用,比如乳腺癌,雌化效应.这些特征提示GPR30受体可能是新的从激素角度出发治疗神经系统疾病的潜在靶点.本综述首先总结该受体在脑部分布,介导的信号通路以及这些通路产生的神经作用,随后对近十年关于GPR30神经作用应用于神经系统疾病时获取的新认识进行总结并从中提出针对神经系统疾病可能的治疗策略,最后粗略探讨GPR30受体在神经系统疾病临床转化过程中可能遇到的问题.

目的:探讨特异性激活G蛋白偶联雌激素受体(GPER)对结直肠癌(CRC)细胞迁移的作用及其可能的机制.方法:体外培养CRC细胞RKO和SW480,使用0.5或1.0 μmol/L的GPER特异性激活剂(G-1)处理CRC细胞,采用CCK-8法、划痕实验和Transwell实验分别检测G-1对CRC细胞增殖、迁移的影响.用qPCR和WB法分别检测G-1及G-1+活性氧(ROS)清除剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)处理对RKO细胞E-钙黏素(E-Cad)、纤连蛋白(FN)mRNA和蛋白表达的影响,用流式细胞术检测RKO细胞中ROS的水平.结果:经G-1处理后RKO和SW480细胞的迁移能力均明显减弱(均P<0.05),能显著上调细胞中E-cad mRNA及蛋白表达、下调FN mRNA及蛋白表达(均P<0.05).G-1处理能刺激RKO细胞ROS水平上升,在NAC的作用下,由G-1引起的E-cad、FN蛋白表达变化被部分逆转.结论:特异性激活GPER通过上调ROS水平抑制EMT进程,进而抑制CRC细胞的迁移.

目的 探讨雌激素信号转导通路失衡在妊娠高血压疾病胎盘血管病变发生中的作用.方法 建立高血压妊娠大鼠模型,分为对照组、模型组和模型+雌二醇(E2)组.记录母体大鼠的血压(BP)和尿蛋白水平,HE染色检测妊娠高血压大鼠胎盘病理组织,采用蛋白质印迹检测各组成纤维细胞中雌激素通道蛋白[雌激素受体 α36(ERα36)、雌激素受体 α(ERα)、雌激素受体 β(ERβ)和G蛋白偶联雌激素受体(GPER)]、血管内皮因子[C反应蛋白(CRP)、血管内皮生长因子(VEGF)和内皮型一氧化氮合酶(eNOS)]及TLR4通路(TLR4、MyD88、p-IRAK4和TRAF6)蛋白的表达.结果 与对照组比较,模型组的雌激素ERα36、ERα和ERβ表达下调,而E2处理后其表达增加;此外,模型组大鼠血压及尿蛋白升高,模型组胎盘绒毛中的细胞胆细胞、绒毛数量减少,胎盘绒毛结构萎缩,部分绒毛出现纤维蛋白样坏死等,而模型+E2组病理明显好转;模型组的血管内皮因子(CRP、VEGF和eNOS)及TLR4通路(TLR4、MyD88、p-IRAK4和TRAF6)表达升高,而E2处理后其表达降低,差异有统计学意义(P<0.05).结论 E2可以改善妊娠高血压大鼠结局.E2的保护作用可以通过与ERα36结合来降低胎盘血管生成因子以及TLR4/MyD88/IRAK4/TRAF6信号转导的表达来部分发挥.