目的:对常染色体显性遗传成人型脑白质营养不良(ADLD)一家系的临床资料和基因突变进行分析。方法:回顾性分析河南省人民医院神经内科2020年1月收治的常染色体显性遗传ADLD一家系共4代人(其中5例患者)的临床和影像学资料，对先证者及部分家系内成员的外周血基因组DNA进行全外显子测序分析。采用荧光定量PCR验证先证者及家系内成员的致病基因。结果:先证者及家系中其他患者的临床表现包括自主神经功能障碍(一过性低血糖及瞳孔散大)、慢性痉挛性截瘫、运动障碍等，神经影像学特征为广泛脑白质、小脑脚、胼胝体及脊髓受累。全外显子测序分析显示先证者核纤层蛋白B1( LMNB1)基因1~11外显子单倍重复。荧光定量PCR检测结果证实先证者及2个妹妹 LMNB1基因1、5、11外显子单倍重复。 结论:LMNB1基因1~11外显子单倍重复可导致ADLD，诊断该病时应综合分析临床表现、神经影像和遗传学特征。

患者女，36岁，因左上臂肿物伴疼痛6个月就诊。患者6个月前无明显诱因左上臂出现一突出肿物，时有压痛，曾在外院诊断为寻常疣并多次行激光及冷冻治疗，无明显好转。近期自觉肿物增大明显而就诊。既往体健，家族中无类似疾病史。体检：各系统检查无明显异常。皮肤科检查：左上臂可触及皮下肿物，边界尚清楚，大小约2 cm × 2 cm，质硬，有压痛，表面见色素减退性瘢痕，中央一针头大小黑褐色斑点（图1A）。实验室检查：血常规、肝肾功能、电解质、乳酸脱氢酶、肌酸磷酸激酶、糖基抗原19-9、糖基抗原125、甲胎蛋白、癌胚抗原未见异常。彩色超声检查：左上臂皮下1.6 mm处囊性病变（18 mm × 9 mm），性质待查。后行"左上臂深部肿物切除术"，组织病理示表皮突部分消失，真皮散在炎症细胞和黑色素沉着，肿瘤位于真皮中下层，病灶延伸至皮下脂肪组织，肿瘤细胞被纤维分隔，呈条束状及致密小巢状分布，细胞呈卵圆形或梭形，胞质透明，胞核空泡状，核仁明显（图1B ~ 1D）。免疫组织化学：S100、HMB-45、Melan-A、波形蛋白均阳性，CD56、细胞角蛋白、突触素、嗜铬细胞素A均阴性，Ki-67 20%阳性（图2）。PCR检测显示BRAF基因V600E突变，FISH检测显示EWSR1基因易位。

目的:基于生物信息学方法筛选胶质瘤中协同调控免疫和线粒体能量代谢的关键基因，探讨这些基因与免疫浸润的关系。方法:从癌症基因组图谱（TCGA）数据库中收集671例胶质瘤样本（肿瘤组）和5例非肿瘤脑组织样本（对照组），数据下载时间为2023年11月13日。检索GeneCards数据库和已发表文献中免疫相关基因（IRG）和线粒体能量代谢相关基因（MEMRG），经合并去重复后，对IRG和MEMRG取交集共得到76个免疫和线粒体能量代谢共相关基因（IR&MEMRG）。使用R软件limma包，筛选肿瘤组和对照组中的差异表达基因（DEG），与IR&MEMRG取交集得到胶质瘤中免疫和线粒体能量代谢共相关差异表达基因（IR&MEMRDEG）。采用R软件中clusterProfiler包对IR&MEMRDEG进行基因本体（GO）及京都基因和基因组百科全书（KEGG）富集分析。使用STRINGv12.0在线数据库（https：//cn.string-db.org/），利用获得的IR&MEMRDEG构建蛋白质互作网络，获得排名前5位的关键核心基因。采用单样本基因集富集分析（ssGSEA）分析所有样本中各免疫细胞浸润的相对丰度，得出样本中免疫细胞浸润矩阵。利用R软件中ggplot2包分析免疫细胞浸润丰度在肿瘤组和对照组间的差异；R软件pheatmap包绘制相关性热图展示免疫细胞自身的相关性，基于Spearman算法并利用R软件ggplot2包计算蛋白质互作网络内排名前5位的关键核心基因与免疫细胞的相关性。结果:TCGA数据库中，肿瘤组和对照组有3 623个DEG；其中上调表达基因1 711个，下调表达基因1 912个。对DEG与获得的IR&MEMRG取交集，得到11个IR&MEMRDEG，分别为EIF4EBP1、TP53、IDH1、PRCKZ、CD200、GPI、PGM2、PKLR、AK2、ATP4A和ALDH3B1。GO富集分析结果显示，11个IR&MEMRDEG在生物过程层面主要富集在ATP代谢和ADP代谢、嘌呤核苷二磷酸代谢、嘌呤核糖核苷二磷酸代谢和核糖核苷二磷酸代谢；细胞成分层面主要富集在纤维胶凝蛋白-1富集颗粒、分泌颗粒腔、细胞质囊泡腔、囊泡腔和核基质中；分子功能层面主要富集于镁离子结合、钾离子结合和碱金属离子结合。KEGG富集分析结果显示，11个IR&MEMRDEG主要富集在糖酵解/糖异生、碳代谢、胰岛素信号通路、磷酸戊糖通路、淀粉和蔗糖代谢信号通路中。采用STRING在线数据库对11个IR&MEMRDEG进行分析，得到前5个得分最高的节点蛋白，分别为EIF4EBP1、TP53、IDH1、PRKCZ和AK2。通过ssGSEA算法计算28种免疫细胞的免疫浸润丰度，肿瘤组15种免疫细胞浸润丰度均高于对照组，差异均有统计学意义（均 P<0.05）。15种免疫细胞间均呈正相关，其中效应记忆性CD8 + T细胞与髓源性抑制细胞的相关性最强；EIF4EBP1、TP53、IDH1和AK2与较多免疫细胞之间均呈正相关（均 P<0.05）；PRKCZ与较多免疫细胞均呈负相关（均 P<0.05）。 结论:胶质瘤中PRKCZ、AK2和EIF4EBP1可能是胶质瘤免疫治疗新靶点。

目的:探讨还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化酶4(Nox4)在1型DM模型小鼠角膜病变中的致病作用及其可能机制。方法:选择 Nox4基因敲除( Nox4－/－)纯合子雄性小鼠40只，以鼠龄、性别匹配的野生型C57BL/6( Nox4＋/＋)小鼠120只作为对照。采用随机数字表法分别将2种小鼠随机分为DM组和非DM组，DM组小鼠采用链脲佐菌素腹腔内注射法构建1型DM模型。采用随机数字表法分别将 Nox4＋/＋小鼠DM组和非DM组分为普通饲料喂养小鼠和添加Nox4抑制剂GKT137831(GKT)饲料喂养小鼠。于DM造模后第16周采用酚红棉线法检测各组小鼠泪液分泌量；采用荧光素钠染色评分法评估角膜上皮完整性；采用激光扫描共聚焦显微镜观察角膜基质层神经纤维密度变化；采用CellROX荧光探针检测角膜上皮中活性氧簇(ROS)含量；采用免疫荧光染色法检测小鼠角膜上皮中E-Cadherin蛋白和核因子-κB(NF-κB)蛋白表达变化；采用角膜铺片TUBB3染色法检测角膜中央区神经纤维密度。 结果:Nox4＋/＋小鼠DM组和非DM组泪液分泌量分别为(2.40±1.18)和(5.30±1.02)mm/min，差异有统计学意义( P<0.01)； Nox4－/－小鼠DM组泪液分泌量为(4.19±0.63)mm/min，明显多于 Nox4＋/＋小鼠DM组，差异有统计学意义( P<0.05)；普通饲料喂养小鼠与GKT添加饲料喂养小鼠DM组泪液分泌量分别为(2.23±0.83)和(4.02±0.71)mm/min，差异有统计学意义( P<0.01)。与 Nox4＋/＋小鼠非DM组比较， Nox4＋/＋小鼠DM组角膜荧光素染色评分显著升高，角膜神经纤维密度显著降低，角膜上皮中ROS荧光强度明显增强，E-Cadherin蛋白表达荧光强度减弱，NF-κB蛋白表达荧光强度增强。 Nox4－/－或GKT添加饲料喂养小鼠DM组与非DM组比较角膜上皮中ROS荧光增强，E-Cadherin蛋白表达荧光减弱。 Nox4－/－和GKT添加饲料喂养小鼠DM组角膜上皮细胞中NF-κB蛋白荧光强度均较弱，与非DM组强度一致。角膜铺片免疫荧光染色显示， Nox4＋/＋小鼠DM组中TUBB3染色的神经纤维密度明显低于非DM组， Nox4－/－或GKT添加饲料喂养小鼠DM组角膜基质层神经纤维与非DM组比较无明显减少。 结论:Nox4参与了糖尿病角膜病变的致病过程，其机制可能与氧化应激诱导ROS产物聚集，激活NF-κB介导的炎症反应有关。

宫腔粘连(intrauterine adhesion,IUA),又称Asherman综合征,是育龄期女性较为常见的生殖系统疾病,其通常继发于产后感染、宫腔操作及生殖器结核等.IUA是一种由组织损伤引起的纤维化疾病,当子宫内膜基底层受到损害致修复障碍,细胞外基质过度沉积和重组,纤维结缔组织增生并取代正常的子宫内膜,导致子宫腔、宫颈管部分或完全粘连,从而引起一系列临床症状,包括周期性下腹痛、月经异常、生育能力降低等,严重危害女性的身心健康.目前主要的治疗手段是宫腔镜下粘连分解术,但术后往往存在高复发率及不孕等问题,IUA的治疗仍为临床一大难题.非编码RNA(non-coding RNA,ncRNA)是一类缺乏编码蛋白质潜能的RNA,是参与基因表达调控的重要因子,并在生物体的正常代谢活动及疾病的发生发展过程中发挥着重要作用.近年来的研究表明,TGF-β1/Smad、Wnt/β-catenin和NF-κB等信号通路与IUA的发生、发展关系密切,ncRNA可能通过影响这些通路的关键因子来参与子宫内膜纤维化的调控.ncRNA主要包括微小RNA、长链非编码RNA和环状RNA,这些ncRNA有望成为宫腔粘连疾病潜在的诊断标志物及治疗靶点.本文综述了 ncRNA在IUA中的研究进展,以期对IUA的防治提供新思路,提高患者的生活质量.

目的:通过生物信息学技术筛选与盆腔器官脱垂(POP)密切相关的衰老基因,并阐明关键基因潜在的临床意义和价值.方法:利用基因表达汇编(GEO)数据库以"pelvic organ prolapse"为关键词检索下载数据集GSE53868和GSE151188获取POP相关基因.从Aging Atlas数据库、CellAge数据库和人类衰老基因组资源(HAGR)数据库获取衰老相关基因,2组基因取交集得到POP相关衰老的差异表达基因(DEGs).采用R 4.2.1软件进行基因富集分析(GSEA).采用注释可视化和集成发现(DAVID)数据库对DEGs进行基因本体论(GO)功能富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)信号通路富集分析,采用Cytoscape 3.9.1软件构建蛋白-蛋白互作(PPI)网络,用cytoHubba插件筛选排名前10位的核心基因(Hub基因).采用R软件CIBERSORT反卷积法分析22种免疫细胞在POP组和对照组患者中的浸润情况.采用LASSO回归算法进一步筛选关键基因,分析关键基因与免疫细胞浸润的相关性和诊断效能.结果:通过Aging Atlas、CellAge和HAGR数据库得到724个衰老相关基因,与POP表达谱取交集,提取到含624个基因的POP相关衰老基因表达矩阵,差异分析后得到29个POP相关DEGs,其中表达上调基因2个,表达下调基因27个.GSEA显示,上调通路主要是糖尿病和细胞衰老等通路,下调通路包括阿尔茨海默病和缺氧诱导因子 1(HIF-1)信号通路等.GO功能富集分析主要富集于细胞对脂多糖的反应、炎症反应和细胞增殖的负向调节等生物学过程.KEGG信号通路富集分析主要是白细胞介素 17(IL-17)、肿瘤坏死因子(TNF)和核因子κB(NF-κB)信号传导途径.PPI 网络分析得到白细胞介素 6(IL-6)、白细胞介素 1B(IL-1B)、环氧合酶 2(PTGS2)和 NF-κB抑制因子 α(NFKBIA)等 10 个 Hub基因.CIBERSORT反卷积法分析,中性粒细胞和活化的肥大细胞在POP组患者中浸润比例相对较大,且在相关性分析中活化的肥大细胞与大部分DEGs呈正相关关系(r>0.5),巨噬细胞与IL-1B呈明显正相关关系(r>0.6).LASSO回归算法进一步筛选的 10个关键基因中,Jun D原癌基因(JUND)、Snail同源物1(SNAI1)、双调蛋白(AREG)、A型核纤层蛋白基因(LMNA)和超氧化物歧化酶2(SOD2)的诊断效能较高,受试者工作特征(ROC)曲线下面积(AUC)均大于0.750.结论:在衰老过程中,JUND、SNAI1、AREG、LMNA和SOD2基因可能通过炎症相关通路、转录调控、影响胶原蛋白分泌和代谢等多种途径参与POP病理生理过程,从而影响结缔组织支撑功能,促进POP的发生发展.

扩张型心肌病是引起心力衰竭的主要疾病之一,存在病因学异质性.近 1/4 扩张型心肌病患者与遗传相关,心室扩大和心肌收缩功能障碍是该病的主要特征.核纤层蛋白A(Lamin A,LMNA)基因突变是遗传性扩张型心肌病的重要病因,心律失常是LMNA突变遗传性扩张型心肌病的重要临床表征.近年来基于C57/B6 遗传背景小鼠聚焦基因治疗的啮齿类动物扩张型心肌病模型构建及其干预是研究的热点,对犬和猪等大动物模型构建也有一定的研究.大动物尤其是非人灵长类动物是更贴近人的理想模型,但目前对于非人灵长类动物的心脏疾病模型并未涉及扩张型心肌病,故本文综述了基因层面的扩张型心肌病啮齿类动物及大动物模型的研究,提出可进行基于当前研究基础上的非人灵长类扩张型心肌病模型的理念,为今后有针对性地研究致病机制以及临床治疗提供新思路.

目的 基于生物信息学方法筛选和分析肠易激综合征的差异表达基因,为该疾病的发生发展提供可能的靶点,并在小胶质细胞中进行验证.方法 从GEO数据库下载GSE36701和GSE166869的基因表达芯片数据,分为肠易激综合征(ir-ritable bowel syndrome,IBS)组与健康对照(healthy control,HC)组,利用R语言的相关软件包对数据进行处理,获得差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs)并对其进行富集分析.然后取交集得到共有差异表达基因.应用g:Profiler数据库对共有差异表达基因进行GO和KEGG分析,应用STRING数据库对共有差异表达基因进行蛋白互作分析,应用Cytoscape软件筛选关键基因.应用WebGestalt数据库对共有上调差异表达基因进行与疾病、药物相关的富集分析.利用皮质酮(corticoste-rone,Cort)、脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)、Cort叠加LPS分别构建应激、炎症、应激叠加炎症的小胶质细胞模型,通过免疫印迹法和定量实时PCR验证GABRE及NF-κB通路的表达,通过ELISA实验检测炎症因子的表达.结果 用R语言的相关软件包分析芯片结果得到66个共有差异表达基因,GSEA分析结果示IBS与帕金森病、阿尔茨海默病等相关.GO分析结果示共有差异表达基因多在自然杀伤细胞介导的细胞毒性调节、自然杀伤细胞介导的免疫调节等生物学过程富集,在3级颗粒腔、微绒毛等细胞组件富集,在核纤层蛋白结合、氨基酰基转移酶活性等分子功能富集.KEGG分析显示共有差异表达基因在γ-氨基丁酸能突触等通路富集.蛋白互作分析结果显示关键基因为CDC20、PTTG1、BIRC5等.共有上调差异表达基因与疾病预测分析示IBS与食欲亢进、分裂情感障碍等疾病相关.共有上调差异表达基因与药物预测分析示IBS的治疗与氟硝西泮、抗焦虑药等药物相关.免疫印迹法和定量实时PCR结果显示,Cort组、LPS组和LPS+Cort组细胞中GABRE、TLR4、IκBα、NF-κB p65、TNF-α、IL-1β的表达显著高于正常对照组,且LPS+Cort组表达显著高于Cort组和LPS组(P＜0.05).ELISA结果显示,Cort组、LPS组和LPS+Cort组细胞中TNF-α、IL-6和CRP的表达显著高于正常对照组(P＜0.001),且LPS+Cort组显著高于Cort组和LPS组(P＜0.001).结论 GABRE和MICALL2基因与IBS发生发展相关,是IBS治疗的潜在靶标.

目的 探讨核转录因子 kappa B p65(nuclear factor-kappa B p65,NF-κB p65)/肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)对未足月胎膜早破(preterm premature rupture of membranes,PPROM)孕妇胎膜细胞凋亡的影响.方法 选取2021 年6 月至2022 年6 月于南华大学附属娄底医院分娩的 57 例孕妇为研究对象,PPROM孕妇27 例为试验组,正常足月分娩孕妇30 例为对照组,采集分娩时胎膜组织.利用HE染色法观察胎膜组织结构;免疫组织化学法检测胎膜NF-κB p65 和磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)的表达;TUNEL检测胎膜细胞凋亡;Western Blotting检测胎膜NF-κB p65、p-NF-κB p65、TNF-α和半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(cysteinyl aspartate specific proteinase-3,Caspase-3)蛋白表达水平;qRT-PCR检测胎膜组织NF-κB p65、TNF-α和Caspase-3 mRNA表达;分析PPROM孕妇胎膜p-NF-κB p65/NF-κB p65 比值、TNF-α蛋白表达水平与胎膜细胞凋亡指数的相关性.结果 HE染色结果显示对照组胎膜组织结构较完整,试验组胎膜组织结构排列紊乱、胶原纤维层变薄、细胞胞质呈现大量空泡化;免疫组化结果显示NF-κB p65 主要表达于胎膜细胞的细胞质,p-NF-κB p65 表达于胎膜细胞的细胞核;试验组胎膜NF-κB p65、TNF-α、Caspase-3 蛋白和mRNA表达以及细胞凋亡指数均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);试验组p-NF-κB p65/NF-κB p65 蛋白比值高于对照组(P<0.01);试验组p-NF-κB p65/NF-κB p65 蛋白比值与细胞凋亡指数呈正相关(相关系数 r1 = 0.897,P<0.01);试验组p-NF-κB p65/NF-κB p65 与TNF-α蛋白表达水平呈正相关(r2 =0.835,P<0.01);试验组TNF-α蛋白表达水平与胎膜细胞凋亡指数呈正相关(r3 =0.934,P<0.01).结论 NF-κB p65 可通过促进下游基因TNF-α表达,进而上调Caspase-3,引起胎膜细胞凋亡,参与PPROM的发生.

目的 探讨核纤层蛋白B1(lamin B1,LMNB1)对肝癌进展的影响,发掘肝癌新的治疗靶点.方法 利用工具网站基因表达水平值的交互式分析平台(Gene Expression Profiling Interactive Analysis,GEPIA)分析癌症基因组图谱数据库(The Cancer Genome Atlas,TCGA)中肝癌组织及癌旁组织LMNB1的表达水平,使用Kaplan-Meier分析LMNB1表达水平差异对肝癌患者预后的影响.采用实时定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测正常肝细胞系及肝癌细胞系中LMNB1表达水平.选取LMNB1表达水平较高的两种人肝癌细胞株Hep3B、HepG2,转染小干扰RNA敲低LMNB1表达,在LMNB1表达水平较低的细胞SUN475中构建LMNB1稳定过表达细胞系并使用Western blot验证转染效率,采用CCK8法检测敲低或过表达LMNB1后肝癌细胞的增殖能力,采用平板克隆形成检测敲低或过表达LMNB1后细胞形成克隆的能力.采用Transwell检测敲低或过表达LMNB1后细胞侵袭及迁移能力的变化.采用Western blot实验检测磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated protein kinase B,p-AKT)、蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)、磷酸化细胞外调节蛋白激酶(phosphorylated extracellular regulated protein kinases,p-ERK)及细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)的变化.结果 TCGA数据库分析表明肝癌组织中LMNB1表达水平较癌旁正常组织高(P＜0.05),且LMNB1表达水平与肝癌患者预后呈负相关(P = 0.003).实时定量PCR显示相对正常人肝细胞系,肝癌细胞中LMNB1 mRNA表达量分别为MHCC97H:1.80±0.10(t = 11.08,P＜0.001);SUN475:1.29±0.03(t = 5.88,P = 0.004);HepG2:2.97±0.04(t = 39.68,P＜0.001);PLC/Prf/5:1.74±0.04(t = 14.51,P＜0.001);HuH7:1.70±0.02(t = 15.22,P＜0.001);SK-HEP-1:1.59±0.05(t = 11.17,P＜0.001);Hep3B:2.27±0.09(t = 18.50,P＜0.001);均显著高于正常人肝细胞系.Western blot结果显示在HepG2及Hep3B细胞系中,与siScramble阴性对照组相比,转染siLMNB1实验组的LMNB1表达水平显著降低(HepG2:0.60±0.10 vs 1.60±0.10,t = 11.55,P＜0.001;Hep3B:0.40±0.10 vs 1.70±0.10;t = 15.61,P＜0.001);而SUN475中转染质粒后LMNB1表达显著增加(0.70±0.20 vs 0.07±0.04;t = 5.541,P = 0.005).敲低LMNB1后培养96 h,与对照组相比,Hep3B(10.81±0.67 vs 15.48±0.62;t = 8.86,P＜0.001)及HepG2(9.45±0.61 vs 17.08±0.75;t = 13.67,P＜0.001)细胞增殖能力被显著抑制;而在SUN475中过表达LMNB1后,实验组细胞增殖活性显著增加(16.94±1.52 vs 12.65±1.06;t = 3.99,P = 0.016).在HepG2及Hep3B细胞系中敲低LMNB1后,细胞克隆形成数显著减少[HepG2:(90.30±7.24)个 vs(382.01±25.27)个,t = 19.24,P＜0.001;Hep3B:(128.03±8.24)个 vs(395.85±28.27)个,t = 15.76,P＜0.001],在SUN475中过表达LMNB1组比对照组克隆形成个数显著增加[(467.82±42.45)个 vs(85.31±15.32)个;t = 14.87,P = 0.001].在HepG2及Hep3B细胞系中敲低LMNB1后,肝癌细胞迁移数量显著减少[HepG2:(75.25±8.10)个 vs(15.02±3.50)个,t = 11.90,P＜0.001;Hep3B:(168.20±12.26)个 vs(34.83±7.61)个,t = 15.96,P＜0.001],侵袭的细胞数量同样显著减少[HepG2:(110.21±12.01)个 vs(25.76±4.03)个,t = 11.50,P＜0.001;Hep3B:(150.22±15.16)个 vs(22.03±14.26)个,t = 10.65,P＜0.001];在SUN475中,过表达LMNB1组比对照组细胞迁移数量显著增加[(50.11±5.55)个 vs(349.85±25.26)个;t = 11.33,P＜0.001],侵袭的细胞数量同样显著增加[(40.11±5.26)个 vs(80.13±12.20)个;t = 5.21,P = 0.007].与对照组相比,敲低LMNB1后,AKT的磷酸化活性形式p-AKT表达水平显著下降,而过表达LMNB1可导致p-AKT表达升高(P均＜0.05).而敲低或过表达LMNB1后,p-ERK表达水平无显著变化,AKT和ERK的本底表达水平均未发生明显变化.结论 抑制LMNB1可通过抑制PI3K/AKT信号转导通路的激活抑制肝癌的发生发展,可作为诊断肝癌的生物标记物和潜在的治疗靶点.