目的:研究人非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)A549细胞中桥接整合因子-1 (bridging intergrator-1,BINl)对程序性死亡受体-配体1(programmed death-ligand 1,PD-L1)表达的影响及其机制.方法:采用qRT-PCR和Western blotting方法检测A549细胞和正常人胚肺成纤维细胞2BS中BIN1与PD-L1基因和蛋白表达情况,通过基因转染技术、利用阳离子脂质体将含有人全长BIN1基因序列的真核表达质粒CMV-MCS-GFP-SV40-Neomycin-BIN1转染到A549细胞中(BIN1+组),构建过表达BIN1的细胞株,采用RNA干扰技术将干扰骨髓细胞瘤病毒癌基因(cellular-myelocytomatosis viral oncogene,c-MYC)的c-MYC-siRNA转染到A549细胞中(c-MYC-siRNA组)以敲低c-MYC基因表达,通过qRT-PCR和Western blotting方法验证转染效果及过表达BIN1基因或敲低c-MYC基因对A549细胞中c-MYC和PD-L1表达的影响.结果:与2BS细胞相比,A549细胞中BIN1基因和蛋白均呈低表达状态,而PD-L1呈高表达状态(均P＜0.05).将携带BIN1基因的真核表达质粒转染到A549细胞后,BIN1基因和蛋白表达水平较对照组显著升高(P＜0.05),而PD-L1表达显著降低(P＜0.05).c-MYC-siRNA转染到A549细胞后,细胞内c-MYC表达显著降低(P＜0.01),PD-L1表达明显下调(P＜0.01).结论:BIN1过表达可以通过失活c-MYC通路降低PD-L1表达,从而抑制A549细胞的免疫逃逸.

目的:分析SOX4基因的调控网络和蛋白产物特征,并进行验证.方法:利用生物信息学方法预测人SOX4基因的调控网络及其蛋白产物与其他蛋白的相互作用;在肺癌细胞系和肺癌临床样本中通过实时荧光定量PCR对miRNA-30s进行定量分析.结果:人类SOX4蛋白可能与TP53、DICER1和SDCBP2等3种蛋白相互作用;SOX4基因可能受多种lncRNA和miRNA的调控;hsa-miR30s在临床样本中表达模式不完全相同.与癌旁组织相比,hsa-miR30c-5p和hsa-miR30d-5p在癌组织中显示低表达,hsa-miR30d-5p则相反;与正常人胚肺成纤维细胞KMB 17相比,肺癌细胞系A549和H1299中3个miRNA-30成员的表达模式均为高表达.结论:SOX4基因及其蛋白产物的生物信息学分析为相关研究提供了重要信息基础,但尚须相关实验验证,以确定相关性.

为了解糖尿病患者高密度脂蛋白（HDL）的糖化及其与细胞受体的特异结合情况，用荧光法测定了糖尿病Ⅰ组（糖化血红蛋白<7.6％，7例）、Ⅱ组（糖化血红蛋白>9.6％，7例）及6例正常人的HDL糖化值，将3组HDL的羧基肼化再与辣根过氧化物酶（HRP）缩合为蛋白酶标复合物（HDL-HRP），用酶联免疫受体法测定HDL与培养的人胚肺成纤维细胞（HLF）表面受体的特异结合。结果：Ⅰ组、Ⅱ组及对照组HDL糖化值分别为39.26±8.10、72.94±6.40及20.40±1.10糖基/HDL；3组HDL的HLF表面受体特异结合量在高脂条件下明显高于无脂条件下的结合量，Ⅰ组、Ⅱ组低于对照组，Ⅱ组低于Ⅰ组。提示：糖尿病患者糖化HDL高于正常人，但其与细胞受体特异结合下降，且糖化程度越高下降越明显。

本文总结了X射线（180kV）、 60Co γ射线和 238Pu α粒子（5.25MeV）以及γ射线与甲基胆蒽（3-MCA）复合处理分别诱发成年Wistar大鼠肺成纤维细胞系（WAL-F 1）和正常人胚肺细胞系（HEL-8315）恶性转化的研究结果。同时，报告了硒（Se）对α粒子辐射诱发细胞恶性转化的影响。结果表明，高LET（α粒子）和低LET（X射线或γ射线）诱发细胞转化的生物学特性及形态基本上相似，但二者之间存在着某些差异。在α粒子照射条件下，细胞转化的潜伏期比X射线约推迟4～5代，可能与α粒子照射引起DNA损伤较重，修复时间延缓有关； 238Pu α粒子对X射线的相对生物效应（RBE），在α粒子剂量0.50Gy时为6。观察到γ射线与3-MCA复合处理对诱发HEL-8315细胞转化的协同效应及Se对α粒子诱发WAL-F 1细胞转化的防护作用。后者可能与含Se的谷胺甘肽过氧化物酶（GSH-PX）清除自由基有关。

目的:探讨健脾消癌方对人结肠癌细胞(HCT116)来源外泌体诱导正常人胚肺成纤维细胞(HFL1)向肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)活化的影响.方法:以13.1 g·kg-1的健脾消癌方灌胃SD大鼠以制备含药血清,采取超高速离心法分别提取含10％无外泌体血清培养的HCT116细胞外泌体及含20％健脾消癌方含药血清培养的HCT116细胞外泌体,纳米颗粒跟踪分析仪(Zetaview)检测外泌体的粒径分布,蛋白免疫印迹法(Western blot)鉴定外泌体的标志蛋白凋亡转接基因2互作蛋白X(Alix),热休克蛋白70(HSP70),肿瘤易感基因101蛋白(TSG101),荧光显微镜观察HFL1对细胞膜染色试剂盒(PKH67)标记的外泌体的摄取情况;将HFL1细胞分6组:空白组,转化生长因子-β1(TGF-β1)组,TGF-β1联合HCT116外泌体2 mg·L-1组,TGF-β1联合HCT116外泌体4 mg· L-1组,TGF-β1联合健脾消癌方外泌体2 mg· L-1组,TGF-β1联合健脾消癌方外泌体4 mg·L-1组,均干预48 h,Western blot和实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)分别测定α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白和mRNA的表达水平.结果:Zetaview检测粒径分布主要集中在50～100 nm,结合标志蛋白Alix,HSP70和TSG101的表达证实其为外泌体,HFL1细胞与外泌体共孵育后,荧光显微镜下可看到大量外泌体被HFL1细胞所摄取;与空白组比较,TGF-β31组和TGF-β1联合HCT116外泌体组的α-SMA蛋白及mRNA表达水平升高(P＜0.05);与TGF-β1联合HCT116外泌体组比较,TGF-β1联合健脾消癌方外泌体组的α-SMA蛋白及mRNA水平下降(P＜0.01).结论:人结肠癌细胞外泌体联合TGF-β1可诱导HFL1.活化成CAFs,健脾消癌方可通过影响α-SMA的表达水平而降低HFL1的活化能力从而达到拮抗结肠癌肺转移的作用.