目的:研究环状RNA(circRNA)circOMA1在儿童急性髓系白血病(AML)中的表达及其对AML细胞系人急性单核细胞白血病细胞(THP-1)增殖和凋亡的影响及机制。方法:收集AML患儿初诊时和完全缓解后骨髓样本各14例作为初诊组及缓解组，并纳入同一时期同医院10例非恶性血液病患儿骨髓样本作为对照组。采用定量聚合酶链反应(qPCR)检测AML临床样本中和THP-1细胞系中circOMA1、miR-145和骨髓细胞瘤病毒癌基因同源物(MYC)mRNA的表达。转染THP-1细胞构建分组，单独转染circOMA1的细胞(circOMA1高表达组)采用转染pcDNA3.1空载体的细胞作为对照(pcDNA3.1对照组)；circOMA1和miR-145共转染的细胞(circOMA1+miR-145组)采用pcDNA3.1和miR-NC共转染的细胞作为对照(pcDNA3.1+miR-NC组、circOMA1+miR-NC组)。采用细胞计数试剂盒(CCK8)检测circOMA1及miR-145对THP-1细胞增殖的作用，采用流式细胞技术检测circOMA1及miR-145对THP-1细胞凋亡的影响，采用Western blot法检测circOMA1及miR-145对MYC蛋白表达的影响。组间比较采用独立样本 t检验或配对样本 t检验分析，相关性采用 Pearson相关性分析。 结果:初诊组的circOMA1表达水平(4.408±3.607)高于对照组(0.998±0.560)，差异有统计学意义( t＝2.946， P<0.01)；缓解组circOMA1表达水平(1.582±0.950)低于初诊组，差异有统计学意义( t＝3.628， P<0.01)。THP-1细胞实验显示，与pcDNA3.1对照组相比，circOMA1高表达组miR-145的表达降低( t＝4.21， P<0.05)，72 h和96 h细胞增殖增强( t＝5.46、7.40，均 P<0.05)，细胞凋亡被抑制( t＝6.44， P<0.01)。circOMA1+miR-NC组MYC蛋白的表达高于pcDNA3.1+miR-NC组( t＝5.72， P<0.01)，circOMA1+miR-145组的MYC蛋白表达低于circOMA1+miR-NC组( t＝4.56， P<0.05)；在72 h和96 h时，circOMA1+miR-NC组的细胞增殖水平均高于pcDNA3.1+miR-NC组( t＝5.77、7.30，均 P<0.05)，circOMA1+miR-145组的细胞增殖水平均低于circOMA1+miR-NC组( t＝4.66、6.17，均 P<0.05)；circOMA1+miR-145组细胞凋亡率高于circOMA1+miR-NC组( t＝4.25， P<0.05)。临床样本检测发现，circOMA1的表达与miR-145的表达呈负相关( r＝-0.62， P＝0.016)，与 MYC基因的表达呈正相关( r＝0.64， P＝0.013)。 结论:circOMA1在儿童AML中表达升高，并可通过miR-145/MYC途径促进AML细胞增殖，抑制凋亡，有望为AML的治疗和诊断提供理论依据。

患者女，45岁，20年前行剖宫产术，3年前因左卵巢囊肿行左卵巢囊肿剥除术，否认吸烟、饮酒史，否认放射性物质接触史，否认家族遗传性疾病，13岁初潮，平素月经规律。本次首发症状为右下腹痛和右下肢进行性疼痛。增强CT示右卵巢可见不均匀强化肿块，大小3.5 cm×1.5 cm，腹腔、盆腔内见多个轻度强化肿物。颈部超声示甲状腺结节。行全子宫＋双附件＋大网膜切除术＋盆腹腔肿瘤切除术。病理报告提示：恶性卵巢甲状腺肿(malignant struma ovarii, MSO)，滤泡型，伴子宫、腹膜、肠系膜和网膜转移；免疫组织化学结果：细胞角蛋白19(＋)、半乳糖凝集素3(galectin－3；＋)、人骨髓内皮细胞标志物－1(human bone marrow endothelial cell marker－1, HBME－1；＋)、甲状腺球蛋白(thyroglobulin, Tg；＋)、甲状腺转录因子－1(thyroid transcription factor－1, TTF－1；＋)、甲状腺过氧化物酶(thyroid peroxidase, TPO；部分＋)、细胞增殖核抗原Ki－67指数(约1%～2%)、高相对分子质量细胞角蛋白34βE12(－)、CD56(－)、突触素(synapsin, Syn；－)、嗜铬素A(chromogranin, CgA；－)。后患者接受6周期化疗(卡铂500 mg＋紫杉醇240 mg)。化疗期间血清Tg水平持续缓慢上升(从204.3 μg/L升至281.0 μg/L)，癌胚抗原、肿瘤糖类抗原－125变化不明显。6周期化疗后复查CT示：腹盆腔多发肿物，结合病史考虑为残留的肿瘤转移灶，最大径较前变化不明显。化疗结束后行甲状腺结节细针穿刺活组织检查，病理证实为分化型甲状腺癌(differentiated thyroid cancer, DTC)。后行甲状腺切除术和中央区淋巴结清扫术。术后病理示：右叶DTC(典型乳头状癌)，左叶结节性甲状腺肿，中央区淋巴结未查见癌(0/3)，pT1N0M0，Ⅰ期。术后患者服用左旋甲状腺素(每日100 μg)行促甲状腺激素(thyroid stimulating hormone, TSH)抑制治疗。后行2次 131I治疗，每次剂量为7 400 MBq，治疗间隔6个月。首次 131I治疗后全身显像(post－therapy whole－body scan, Rx－WBS)及SPECT/CT显像示：残余甲状腺(图1A)；腹盆腔多发残留MSO转移灶伴 131I摄取(图1A～1C)。第2次Rx－WBS及SPECT/CT显像示：清除手术后残留的甲状腺组织(简称清甲)成功(图1D)；腹盆腔多发残留MSO转移灶伴 131I摄取，摄取值及摄取灶数目均明显小于第1次显像，多数转移灶最大径缩小，部分病灶完全缓解(图1D～1F)。此外，抑制性Tg水平从第1次 131I治疗前的110.0 μg/L降至第2次 131I治疗后的1.3 μg/L。经过2轮 131I治疗后，解剖学和血清学均取得了明显缓解，没有监测到明显不良反应。目前该患者在TSH抑制下积极随诊监测。对DTC病灶和MSO病灶分别进行二代测序，以下基因突变均为阴性：B－Raf原癌基因丝/苏氨酸蛋白激酶(B－Raf proto－oncogene, serine/threonine kinase, BRAF) V600E基因、端粒酶逆转录酶(telomerase reverse transcriptase, TERT)启动子、转染重排(rearranged during transfection, RET)、Kirsten大鼠肉瘤病毒致癌基因同源物(Kirsten rat sarcoma viral oncogene homolog, KRAS)、神经母细胞瘤RAS病毒致癌基因同源物(neuroblastoma RAS viral oncogene homolog, NRAS)、肿瘤蛋白53(tumor protein 53, TP53)、磷脂酰肌醇－4，5－双磷酸3－激酶催化亚基α(phosphatidylinositol－4，5－bisphosphate 3－kinase catalytic subunit alpha, PIK3CA)。

借助网络药理学和分子对接预测加味活络效灵丹抗结直肠癌(colorectal cancer,CRC)可能的作用靶点及相关信号通路,并通过实验验证.采用中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)获取加味活络效灵丹的活性成分及靶点,利用GeneCards、DrugBank、OMIM、TTD数据库获取CRC的相关靶点,Cytoscape软件构建药物-活性成分-靶点网络,STRING数据库构建蛋白-蛋白互作(PPI)网络,DAVID平台对靶点进行基因本体论(Gene Ontology,GO)功能和京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)通路富集分析,AutoDock Vina进行分子对接.设置不同浓度加味活络效灵丹含药血清组分别处理HCT 116细胞,利用cell counting kit-8(CCK-8)检测各组HCT 116细胞增殖抑制情况,Tran-swell检测HCT 116细胞侵袭能力,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测β-连环蛋白(β-catenin)、细胞周期蛋白D1(cyclinD1)、V-Myc骨髓细胞瘤病毒癌基因同源物(c-Myc),以及上皮间质转化(EMT)标志蛋白E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)、基质金属蛋白酶2(MMP2)、基质金属蛋白酶7(MMP7)、基质金属蛋白酶9(MMP9)、转录因子TWIST的表达水平.网络药理学分析,得到加味活络效灵丹活性成分242个,CRC靶点1 844个,CRC与加味活络效灵丹交集靶点127个,与CRC相关的信号通路涉及PI3K-Akt、TNF、HIF-1、IL-17、Wnt等.分子对接显示,主要活性成分与核心蛋白有较稳定的结合构象.CCK-8检测显示,加味活络效灵丹能显著抑制HCT 116细胞的增殖;Tran-swell 检测显示,随着加味活络效灵丹含药血清浓度的增加,抑制 HCT 116细胞的侵袭能力越明显;经含药血清处理后,β-catenin、cyclinD1、c-Myc、N-cadherin、vimentin、MMP2、MMP7、MMP9 和 TWIST 蛋白表达受抑制,E-cadherin 表达上调.结果表明,加味活络效灵丹通过多成分、多靶点、多途径抑制结直肠癌细胞的增殖、侵袭和转移,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路激活,从而影响EMT的发生有关.

研究黄芩清热除痹胶囊(Huangqin Qingre Chubi Capsules,HQC)治疗类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的作用及机制.70 只雄性SPF级大鼠随机分为正常组,模型组,HQC低(0.18 g·kg-1)、中(0.36 g·kg-1)、高(0.72 g·kg-1)剂量组,甲氨蝶呤(MTX,0.75 mg·kg-1)组,阴性对照组(NC组,模型+生理盐水).佐剂性关节炎(AA)大鼠成纤维样滑膜细胞(fibro-blast-like synoviocytes,FLS)分为正常组,模型组,HQC低(5%HQC含药血清+95%滑膜培养基)、中(10%HQC含药血清+90%滑膜培养基)、高(15%HQC含药血清+85%滑膜培养基)剂量组,阴性对照组.采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和蛋白免疫印记法(Western blot)检测甲基转移酶3(methyltransgerase like 3,METTL3)、分泌型卷曲相关蛋白4(SFRP4)、β-连环蛋白(β-catenin)、细胞周期蛋白 D1(CCND1)、V-Myc骨髓细胞瘤病毒癌基因同源物(c-Myc)、纤连蛋白(fibronectin)、基质金属蛋白酶3(matrix metalloproteinase 3,MMP3)mRNA和蛋白的表达.免疫荧光法进一步检测MMP3 和β-catenin蛋白表达.在AA-FLS上敲低METTL3 基因表达水平,进一步检测各基因表达情况.酶联免疫吸附法(ELISA)检测白细胞介素(IL)-1β、IL-6、IL-8 的水平.结果显示,与正常组相比,模型组大鼠四肢均发现红肿现象,关节肿胀程度明显增加;与模型组相比,各给药组关节肿胀度显著下降(P<0.05),后足撤退阈值和体质量指数均显著增加(P<0.05).METTL3 在AA大鼠高表达,且与SFRP4 的表达呈负相关.AA-FLS经给药后,METTL3、β-catenin、CCND1、c-Myc、fibronectin、MMP3 mRNA和蛋白表达显著降低(P<0.05).与模型组相比,敲低METTL3 后β-catenin、CCND1、c-Myc、fibronectin、MMP3 mRNA和蛋白表达均降低(P<0.05).同时HQC+敲低METTL3 组的β-catenin、CCND1、c-Myc、fibronectin、MMP3 mRNA和蛋白表达均明显低于METTL3 敲低组(P<0.05).HQC能不同程度降低IL-1β、IL-6、IL-8 水平(P<0.05).结果表明,HQC对AA大鼠有明显改善作用;METTL3 在AA大鼠滑膜组织和AA-FLS中表达显著升高,这可能是诊断和治疗RA的潜在靶点;HQC通过METTL3-SFRP4/Wnt/β-catenin信号通路改善RA,具有明显的抗炎和抗风湿作用.

目的 探索醛酮还原酶家族1 成员B10(aldo-keto reductase family 1 member B10,AKR1B10)在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)糖酵解中的功能及其潜在机制.方法 利用生物信息学手段分析AKR1B10 在HCC中的表达.实时荧光定量聚合酶链反应(real-time reverse transcription PCR,qRT-PCR)和蛋白质印迹(Western blotting)检测AKR1B10 的表达;细胞计数试剂盒 8(cell counting kit-8,CCK-8)、Transwell实验和流式细胞术分别检测细胞增殖、迁移侵袭和凋亡;qRT-PCR检测骨髓细胞瘤病毒癌基因(myelocytomatosis,MYC)、己糖激酶 2(hexokinase 2,HK2)、磷酸甘油酸激酶 1(phosphoglycerate kinase 1,PGK1)的表达水平;Seahorse XP96 分析胞外酸化率(extracellular acidification rate,ECAR)和耗氧率(oxygen consumption rate,OCR);利用试剂盒检测丙酮酸、乳酸、柠檬酸、苹果酸的含量.结果 生物信息学分析结果显示HCC组织和细胞中AKR1B10 存在高表达,且GSEA通路富集分析显示其在糖酵解通路上富集.细胞实验发现过表达AKR1B10 可以促进HCC细胞增殖、迁移、侵袭,并抑制细胞凋亡.此外,过表达AKR1B10 可以促进HCC细胞中MYC、HK2 和PGK1 的表达,并提高糖酵解水平.回复实验显示糖酵解抑制剂(2-deoxy-D-glucose,2-DG)可以逆转AKR1B10 对HCC细胞的增殖、迁移和侵袭的促进作用.结论 AKR1B10 可以通过激活糖酵解通路促进HCC增殖,提示AKR1B10 可能是一种新的HCC诊断标志物和治疗靶点.

目的:研究人非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)A549细胞中桥接整合因子-1 (bridging intergrator-1,BINl)对程序性死亡受体-配体1(programmed death-ligand 1,PD-L1)表达的影响及其机制.方法:采用qRT-PCR和Western blotting方法检测A549细胞和正常人胚肺成纤维细胞2BS中BIN1与PD-L1基因和蛋白表达情况,通过基因转染技术、利用阳离子脂质体将含有人全长BIN1基因序列的真核表达质粒CMV-MCS-GFP-SV40-Neomycin-BIN1转染到A549细胞中(BIN1+组),构建过表达BIN1的细胞株,采用RNA干扰技术将干扰骨髓细胞瘤病毒癌基因(cellular-myelocytomatosis viral oncogene,c-MYC)的c-MYC-siRNA转染到A549细胞中(c-MYC-siRNA组)以敲低c-MYC基因表达,通过qRT-PCR和Western blotting方法验证转染效果及过表达BIN1基因或敲低c-MYC基因对A549细胞中c-MYC和PD-L1表达的影响.结果:与2BS细胞相比,A549细胞中BIN1基因和蛋白均呈低表达状态,而PD-L1呈高表达状态(均P＜0.05).将携带BIN1基因的真核表达质粒转染到A549细胞后,BIN1基因和蛋白表达水平较对照组显著升高(P＜0.05),而PD-L1表达显著降低(P＜0.05).c-MYC-siRNA转染到A549细胞后,细胞内c-MYC表达显著降低(P＜0.01),PD-L1表达明显下调(P＜0.01).结论:BIN1过表达可以通过失活c-MYC通路降低PD-L1表达,从而抑制A549细胞的免疫逃逸.

目的 探讨骨髓细胞瘤病毒癌基因(c-myc)和第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)在合并糖尿病胰腺癌患者中的表达水平及对预后的监测价值.方法 收集88例胰腺癌患者的临床资料,根据是否合并糖尿病将患者分为对照组(未合并糖尿病,n=52)和观察组(合并糖尿病,n=36).采用酶联免疫吸附试验检测血清c-myc和PTEN表达水平,采用免疫组织化学法检测胰腺癌组织中c-myc和PTEN的表达情况,采用Spearman法分析血清c-myc和PTEN表达水平与胰腺癌组织中c-myc和PTEN阳性表达率的相关性.采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线,组间比较采用Log-rank检验.采用Cox回归模型分析影响胰腺癌患者预后的危险因素.结果 观察组患者的血清c-myc表达水平明显高于对照组,血清PTEN表达水平明显低于对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.01).观察组胰腺癌组织中c-myc的阳性表达率高于对照组,PTEN的阳性表达率低于对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.05).经Spearman相关性分析,血清c-myc表达水平与胰腺癌组织中c-myc阳性表达率呈正相关(r=0.768,P﹤0.05),血清PTEN表达水平与胰腺癌组织中PTEN阳性表达率也呈正相关(r=0.803,P﹤0.05).c-myc阳性患者的2年生存率低于c-myc阴性患者(P﹤0.05),而PTEN阳性和阴性患者的2年生存率比较,差异无统计学意义(P﹥0.05).Cox回归分析结果显示,合并糖尿病和c-myc阳性表达是影响胰腺癌患者预后的独立危险因素(P﹤0.05).结论 合并糖尿病胰腺癌患者和未合并糖尿病胰腺癌患者的c-myc和PTEN表达水平存在差异,糖尿病和c-myc有望成为监测胰腺癌预后的重要指标.

目的 探讨长链非编码RNA胃癌相关转录本3(lncRNA GACAT3)在肝癌组织的表达和对肝癌细胞HepG2增殖、侵袭和迁移的影响及其机制.方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)技术检测新乡医学院第一附属医院收治并手术治疗的73例肝癌患者的癌组织、癌旁组织,PLC/PRF/5、Hep3B、HepG2肝癌细胞,以及正常肝细胞THLE-3中lncRNA GACAT3表达水平;阴性对照小干扰RNA(siRNA)和lncRNA GACAT3 siRNA转染HepG2肝癌细胞,Real-time PCR检测转染48 h后细胞lncRNA GACAT3表达,噻唑蓝(MTT)检测转染24、48、72 h各组细胞增殖能力,细胞划痕和Transwell实验检测细胞迁移侵袭,蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路蛋白表达.应用SPSS 21.0软件进行统计,计量资料以均值±标准差(Mean±SD)表示,两组数据采用配对t检验或独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析,多组数据两组间比较采用LSD-t检验.结果 肝癌组织lncRNA GACAT3表达水平(3.10±1.93)显著高于癌旁组织(1.02 ±0.59,t=8.086,P＜0.01);肝癌细胞PLC/PRF/5(1.92±0.21,t=7.074,P＜0.01)、Hep3B(2.42 ±0.25,t=9.327,P＜0.01)和HepG2 (2.96±0.31,t=10.582,P＜0.01)中lncRNA GACAT3表达水平均显著高于正常肝细胞(0.97±0.10).沉默GACAT3组细胞lncRNAGACAT3表达(0.16±0.02)显著低于沉默对照组(1.03 ±0.11,t=13.478,P＜0.01),48 h和72 h细胞增殖能力显著降低(P＜0.01),划痕愈合率、细胞迁移侵袭能力显著降低(P＜0.01).细胞中Wnt/β-catenin信号通路蛋白β-catenin(0.15 ±0.02)及其下游蛋白骨髓细胞瘤病毒癌基因(c-Myc)(0.22±0.02)和细胞周期蛋白D1(Cyclin D1) (0.21±0.02)表达较沉默对照组(0.81 ±0.08,t=13.863;0.65 ±0.07,t =9.731;0.78 ±0.08,t=10.230;P均＜0.01)显著降低,p-β-catenin蛋白表达(0.75±0.08)显著高于沉默对照组(0.27 ±0.03,t=11.972,P＜0.01).结论 lncRNA GACAT3在肝癌中高表达,沉默lncRNA GACAT3能够抑制肝癌细胞增殖迁移侵袭,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关.

目的:探讨胃复方含药血浆对人胃癌BGC-823细胞的抑制作用及其机制.方法:MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞技术检测细胞周期,RT-PCR及Western blot法检测细胞中垂体瘤转化基因(pituitary tumor transforming gene,PTTG)、骨髓细胞瘤病毒癌基因(cellular-myelocytomatosis viral oncogene,c-Myc)、人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)的mRNA及蛋白表达水平.结果:胃复方含药血浆低、中、高剂量组的吸光度(OD)值依次降低并与作用时间负相关,抑制率(IR)依次升高并与作用时间正相关;胃复方含药血浆不同浓度组干预胃癌细胞72 h后,其G0/G1期细胞比率显著增加,并与其浓度正相关;S期和G2/M期细胞比率均显著减少,并与其浓度负相关.各组含药血浆作用于胃癌细胞72 h后,与空白血浆组比较,5-Fu组、中药组均对PTTG、c-Myc、hTERT的mRNA相对表达量、蛋白表达量有下调作用并呈剂量依赖性.结论:胃复方含药血浆可能下调PTTG、c-Myc、hTERT的表达以阻滞细胞周期进程,从而抑制人胃癌BGC-823细胞增殖达到抗肿瘤作用.

背景与目的 骨髓细胞的双色间期荧光原位杂交(interphase fluorescence in situ hybridization,FISH)被证实是研究骨髓转移性神经母细胞瘤患者v-myc禽类骨髓细胞瘤病毒癌基因神经母细胞瘤衍生同源基因(v-myc avian myelocytomatosis viral oncogene neuroblastoma derived homolog,MYCN)扩增的直接、有效的方法.然而,单凭MYCN扩增不足以进行预处理风险分层.最近,染色体11q23缺失被纳入神经母细胞瘤的风险分层中.在本研究中,我们旨在研究11q23缺失和MYCN扩增在骨髓转移性神经母细胞瘤患者的生物学特性及其对预后影响.方法 我们利用骨髓细胞的双色间期FISH方法分析了101例骨髓转移性神经母细胞瘤患者的MYCN和11q23状态,并比较了两种畸变的生物学特征和预后影响.结果 有12例(11.9％)和40例(39.6％)患者分别出现MYCN扩增和11q23缺失.这两个标志物几乎不同时出现.MYCN扩增主要发生在乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)和神经元特异性烯醇化酶(neuron-specific enolase,NSE)水平升高的患者中(P<0.001);与MYCN-正常患者相比,MYCN扩增的患者多伴有事件发生(如肿瘤复发、进展或死亡)(P=0.004).11q23缺失仅与年龄相关(P=0.001).与MYCN正常患者相比,MYCN扩增患者的预后较差[3年无事件生存率(event-free survival,EFS):8.3±8.0％vs.43.8±8.5％,P<0.001;3年总生存率(overall survival,OS):10.4±9.7％vs.63.5％ ±5.7％,P<0.001).11q23缺失仅在MYCN正常患者预后不良(3年EFS率:34.3±9.5％v s.53.4±10.3％,P=0.037;3年OS率:42.9±10.4％vs.75.9±6.1％,P=0.048).同时具有MYCN扩增和11q23缺失的患者预后最差(P<0.001).结论 染色体11q23缺失仅在无MYCN基因扩增的骨髓转移性神经母细胞瘤预示预后不良.在识别高危患者方面,两种标志物的联合评估远优于单一标志物评估.