目的:探讨急性冠状动脉综合征（ACS）患者血清糖原合成酶激酶-3β（GSK-3β）和母亲DPP同源物4（SMAD4）表达水平与冠状动脉病变程度和预后的关系。方法:回顾性选取2020年6月至2022年5月山东第一医科大学附属青岛医院收治的192例ACS患者为ACS组，同期收治的192例非ACS患者为非ACS组。通过酶联免疫吸附法测定两组患者血清GSK-3β、SMAD4表达水平。采用Gensini积分系统评价患者冠状动脉病变程度，并采用Spearman法分析ACS患者血清GSK-3β、SMAD4表达水平与Gensini总积分的相关性。采用受试者工作特征（ROC）曲线分析血清GSK-3β、SMAD4水平对ACS患者预后的预测效能。结果:ACS组患者血清GSK-3β、SMAD4水平均高于非ACS组[（2.70 ± 0.40） μg/L比（2.24 ± 0.41） μg/L、（12.19 ± 2.10） μg/L比（9.79 ± 2.82） μg/L]，差异有统计学意义（ P<0.05）。轻度、中度、重度冠状动脉病变ACS患者血清GSK-3β、SMAD4水平均依次升高，差异有统计学意义（ P<0.05）。Spearman分析结果显示，ACS患者血清GSK-3β、SMAD4水平均与Gensini总积分呈正相关（ r = 0.569、0.587， P<0.01）。ACS患者预后不良48例，预后不良发生率为25.00%（48/192）；预后良好144例。预后不良ACS患者血清GSK-3β、SMAD4水平均高于预后良好ACS患者[（3.15 ± 0.53） μg/L比（2.55 ± 0.36） μg/L、（14.03 ± 2.08） μg/L比（11.58 ± 2.11） μg/L]，差异有统计学意义（ P<0.05）。ROC曲线分析结果显示，血清GSK-3β、SMAD4水平单独与联合预测ACS患者预后不良的曲线下面积（AUC）分别为0.799、0.784、0.858，二者联合预测的AUC显著高于单独预测的AUC（ Z = 2.04和2.75， P = 0.041和0.006）。 结论:ACS患者血清GSK-3β、SMAD4表达异常升高，二者与ACS患者冠状动脉病变程度正相关，均对ACS患者不良预后有良好预测效能，且二者联合运用的预测效能更好。

目的:探讨核因子E2相关因子2(Nrf2)/转化生长因子-β(TGF-β)通路在失神经支配肾脏缺血再灌注损伤(IRI)导致的肾小管间质纤维化(TIF)中的作用及机制。方法:成年雄性C57BL/6小鼠随机分为4组(均n＝12)：假手术组(Sham组)、肾脏缺血再灌注组(IR组)、失神经假手术组(RDN组)和失神经肾脏缺血再灌注组(DIR组)。分别于造模后1 d或7 d取材，利用苏木精伊红(HE)染色法观察肾脏病理学改变、马松染色法观察TIF程度及免疫组化观察α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达，检测血尿素氮、肌酐和中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白(NGAL)、肾组织超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量、白细胞介素-4、10、13(IL-4、IL-10、IL-13)水平，蛋白印迹法检测Nrf2、TGF-β和磷酸化母亲DPP同源物3(果蝇)(Smad3)蛋白表达。结果:与Sham组比较，再灌注1 d组(IR-1)和DIR-1组肾脏病理损伤、血清尿素氮、肌酐和NGAL水平、肾组织MDA、IL-4、IL-10和IL-13水平升高而SOD活性降低，Nrf2、转化生长因子(TGF)-β和磷酸化Smad3蛋白表达增加( P<0.05)；与IR-7组比较，DIR-7组中纤维化程度及α-SMA、IL-4、IL-10和IL-13水平降低，Nrf2蛋白表达增高，TGF-β和磷酸化Smad3蛋白表达减少( P<0.05)。 结论:IRI造成失神经支配肾脏急性氧化应激损伤剧烈，启动TIF发生；而远期由于氧化应激损伤缓解、Nrf2通路的持续激活，抑制TGF-β表达及其下游Smad3蛋白磷酸化，从而减轻肾脏远期纤维化程度。

目的:探究沉默微小RNA-378(miR-378)靶向调节骨形态发生蛋白(BMP)2/母亲DPP同源物(Smad)4信号通路对大鼠胫骨骨折愈合的影响.方法:对38只大鼠建立胫骨骨折模型,另取18只正常大鼠作为假手术组.选取胫骨骨折模型造模成功大鼠中的8只作为造模组,假手术组中的8只作为对照组.实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测造模组胫骨骨折部位骨组织及对照组相同部位正常骨组织miR-378与BMP2、Smad4 mRNA表达.将30只胫骨骨折模型大鼠随机分为模型组、空载质粒组和miR-378沉默组,每组10只.空载质粒组、miR-378沉默组分别经尾静脉注射1 μg空载质粒或miR-378小干扰RNA(siRNA)质粒;模型组和剩余10只假手术组大鼠经尾静脉注射0.9％氯化钠溶液1μg;每2天注射1次,连续干预30 d.利用X线观察各组大鼠胫骨骨折愈合情况并进行骨折愈合评分(Lane-Sandhu评分).采用酶联免疫吸附法检测各组血清炎症因子和骨钙素(OC)、碱性磷酸酶(ALP)水平.采用HE染色观察各组骨组织形态学变化.采用RT-qPCR检测各组骨组织miR-378与BMP2、Smad4 mRNA表达.采用蛋白印迹检测各组骨组织BMP2、Smad4蛋白表达.结果:造模组骨组织miR-378表达水平高于对照组,BMP2、Smad4 mRNA表达水平低于对照组(均P＜0.05).假手术组大鼠骨组织结构清晰;模型组和空载质粒组骨折线清晰,无骨痂出现,骨组织结构严重破坏,仅有少量成骨细胞生成;miR-378沉默组骨折线模糊,出现骨痂,骨组织破坏程度得到缓解并有大量成骨细胞生成.与假手术组比较,模型组血清肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β、OC、ALP及骨组织miR-378表达水平升高,BMP2、Smad4 mRNA和蛋白表达水平降低(均P＜0.05).与模型组和空载质粒组比较,miR-378沉默组Lane-Sandhu评分、OC、ALP水平,以及BMP2、Smad4 mRNA和蛋白表达水平升高,血清TNF-α、IL-1β及骨组织miR-378表达水平降低(均P＜0.05).结论:沉默miR-378可能通过靶向激活BMP2/Smad4信号通路减轻胫骨骨折大鼠炎症反应,促进成骨细胞生成,加快大鼠骨折部位的愈合.

遗传性出血性毛细血管扩张症(HHT)所致消化道出血临床少见,在中老年人群中不明原因消化道出血更易被忽视,从而延误治疗.HHT发病机制主要与ENG、酰基辅酶A合成酶长链家族成员4(ACVRL4)、激活素受体样激酶1(ALK1)和母亲DPP 同源物4(Smad4)基因突变有关,消化道出血作为HHT的少见并发症,考虑与多种危险因素有关,消化道出血可发生于胃肠道任何部位,以中老年患者多见,常伴有家族遗传史和鼻出血病史.临床诊断主要依靠内镜检查,并需与其他毛细血管疾病相鉴别.目前国内外尚无统一的治疗标准,但随着内镜诊疗技术的发展,内镜联合药物治疗可取得满意的疗效.现就HHT所致消化道出血的临床研究进展进行综述,旨在提高临床医生对HHT所致消化道出血的认识,提高疾病诊断率,为治疗不明原因消化道出血提供依据.

目的 研究微小RNA-21(miR-21)对小鼠慢性病毒性心肌炎(CVMC)心肌纤维化的影响及其可能机制.方法 雄性4周龄Balb/c小鼠40只按照随机数字表法分为磷酸盐缓冲液(PBS)组、CVMC组、CVMC+miR-21抑制剂组和CVMC+同型对照组,每组各10只.首次注射柯萨奇B3病毒(CVB3)液或PBS定为第0天,研究总时间为42 d.CVMC组、CVMC+miR-21抑制剂组和CVMC+同型对照组的小鼠均于第0、14和28天经腹腔注射100TCID50的CVB3液0.1、0.15和0.2 ml/只,同时点PBS组小鼠注射相同剂量的PBS.CVMC+miR-21抑制剂组和CVMC+同型对照组小鼠在第14和28天注射病毒液后分别经尾静脉注射miR-21抑制剂0.1 ml/只或同型对照0.1 ml/只.42 d后行超声心动图检查评估小鼠心功能,然后无菌留取小鼠心脏,观察心肌绿色荧光蛋白(GFP)的表达,同时行苏木素伊红及Masson染色观察心肌病理学特征,并计算心肌病理积分(PS)及胶原容积积分(CVF),实时荧光定量逆转录聚合酶链反应测定小鼠心肌中miR-21、Ⅰ型胶原(COL1-A1)及Ⅲ型胶原(COL3-A1)mRNA的表达,Western blot法测定心肌中转化生长因子-β1(TGF-β1)和母亲DPP同源物7(Smad7)蛋白的表达.结果 (1)超声心动图检查结果:CVMC组和CVMC+同型对照组小鼠左心室收缩末期内径(LVESD)、左心室舒张末期内径(LVEDD)均明显高于PBS组(P均<0.05),左心室射血分数(LVEF)明显低于PBS组(P<0.05).CVMC+miR-21抑制剂组小鼠LVESD、LVEDD均低于CVMC组和CVMC+同型对照组(P均<0.05),LVEF明显高于CVMC组和CVMC+同型对照组(P均<0.05).(2)心肌病理学检测结果:CVMC+miR-21抑制剂组和CVMC+同型对照组小鼠心肌切片在荧光显微镜下可见GFP表达.CVMC组和CVMC+同型对照组小鼠心脏肿大僵硬,镜下可见心肌散在坏死灶,周围少量炎性细胞浸润,间质成纤维细胞增生明显,胶原纤维堆积.CVMC组和CVMC+同型对照组小鼠心肌PS分别为(1.14±0.69)和(1.00±0.63)分,CVF分别为(17.86±2.61)%和(16.78±2.58)%,均明显高于PBS组[PS为0分,CVF为(5.70±1.42)%,P均<0.05].CVMC+miR-21抑制剂组小鼠心肌周围少量炎性细胞浸润,间质纤维化的程度较轻,CVF为(11.01±2.55)%,明显低于CVMC组和CVMC+同型对照组(P均<0.05),PS为(0.89±0.60)分,虽低于CVMC组和CVMC+同型对照组,但差异无统计学意义(P均>0.05).(3)心肌组织miR-21、COL1-A1和COL3-A1 mRNA的表达量:CVMC组和CVMC+同型对照组小鼠心肌组织中miR-21、COL1-A1和COL3-A1 mRNA的表达量均明显高于PBS组(P均<0.05),而CVMC+miR-21抑制剂组小鼠心肌中上述因子的mRNA表达量则均明显低于CVMC组和CVMC+同型对照组(P均<0.05).(4)心肌组织TGF-β1和Smad7蛋白的表达量:CVMC组和CVMC+同型对照组小鼠心肌中TGF-β1蛋白表达量均明显高于PBS组,而Smad7蛋白表达量则均明显低于PBS组(P均<0.05).CVMC+miR-21抑制剂组小鼠心肌中TGF-β1蛋白表达量明显低于CVMC组和CVMC+同型对照组,而Smad7蛋白表达量则明显高于CVMC组和CVMC+同型对照组(P均<0.05).结论 miR-21可促进CVMC小鼠心肌纤维化,这一作用可能是通过TGF-β1/Smad7信号通路介导的.

目的 探究下调微小RNA-564(miR-564)基因对滑膜间充质干细胞成软骨分化的作用.方法 取第3代的人滑膜间充质干细胞(SMSCs)作为实验细胞,实验设计为3组:SMSCs空白对照组(空白组);miRNA抑制剂转染SMSCs对照组(对照组);miR-564抑制剂转染SMSCs实验组(实验组).将3组SMSCs同时成软骨诱导培养,观察诱导后软骨细胞的组织形态,并检测诱导前7 d内的3组细胞增殖曲线,和软骨分化特异性基因和蛋白[Ⅱ型胶原、蛋白聚糖、性别决定区Y框蛋白9(Sox9)、母亲DPP同源物4(Smad4)];本次实验所有数据均采用单因素方差分析(one-way ANOVA)检验.结果 甲苯胺蓝染色观察细胞形态与特点基本符合软骨细胞,实验组细胞数量更多,蓝染更明显;细胞增殖曲线表明实验组细胞增殖速度明显快于对照组(F=0.842,P<0.01);RT-PCR检测与Western Blotting检测表明实验组软骨细胞分化特异基因和蛋白表达较对照组明显升高(F=2274.75,F=447.31,F=30476.22;P<0.01),并且实验组TGF-BMP关键基因及蛋白Smad 4有所升高(F=457.02,P<0.01).结论 下调miR-564基因的表达可促进滑膜间充质干细胞向软骨细胞增殖与分化,并且有可能是通过作用于TGF-BMP通路实现.

目的 探究沉默miR-216a对四氯化碳(CCl4)诱导的肝纤维化模型大鼠的作用及机制.方法 从50只大鼠中随机选取10只作为正常组,其余40只采用腹腔注射含CCl4的橄榄油溶液方法构建肝纤维化模型大鼠.将造模成功的30只大鼠随机分为模型组、对照组和沉默组,每组各10只,对照组尾静脉注射含空载质粒的腺病毒,沉默组尾静脉注射含si-miR-216a质粒的腺病毒.采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测各组透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、Ⅳ型胶原(ⅣC)的表达水平.采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time qPCR)法检测miR-216a、第10号染色体缺失性磷酸酶及张力蛋白同源物基因(PTEN)mRNA和母亲DPP同源物7(Samd7)mRNA的相对表达量.采用蛋白质印迹法检测PTEN和Samd7的表达水平.结果 与正常组比较,模型组HA、LN、PCⅢ、ⅣC和miR-216a表达水平均升高,而PTEN mRNA、Samd7 mRNA、PTEN和Samd7的表达水平均降低,差异均有统计学意义(P均<0.05).与模型组和对照组比较,沉默组HA、LN、PCⅢ、ⅣC和miR-216a表达水平均降低,而PTEN mRNA、Samd7 mRNA、PTEN和Samd7表达水平均升高,差异均有统计学意义(P均<0.05).结论 沉默miR-216a可降低肝纤维化大鼠HA、LN、PCⅢ和ⅣC的表达水平,改善CCl4诱导的肝纤维化损伤,其机制可能与调控PTEN/Smad7信号通路有关.

目的:基于转化生长因子-β1 (TGF-β1)-母亲DPP同源物2(Smad2)信号通路探讨布地奈德对高氧诱导支气管肺发育不良(BPD)新生小鼠的保护作用及机制研究.方法:将60只SD小鼠随机分为对照组、模型组以及布地奈德低/中/高等剂量组,每组12只.对照组暴露于空气中,模型组和布地奈德低、中、高剂量组暴露于高氧环境中,建立BPD模型.布地奈德低/中/高等剂量组建模24 h后每日雾化吸入1 mL/2 mL/4 mL布地奈德混悬液,12h/次,持续雾化至处死,对照组和模型组建模24 h后每日雾化吸入生理盐水,12h/次.建模7d、14d,HE染色观察各组肺组织形态学变化,Image-Pro Plus 6.0软件测定放射状肺泡计数(RAC)、肺泡平均截距(MLI),免疫印迹法检测肺组织TGF-β1、Smad2、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)蛋白水平,酶联免疫吸附法检测血清白介素(IL)-1β、IL-18水平.结果:建模7d、14d后,模型组肺组织结构破坏严重,肺泡结构简单,体积增大,形成肺大疱,组织变形随着建模时间延长而加重.布地奈德低、中、高剂量组肺组织结构破坏程度随着布地奈德浓度增加而好转,肺泡结构逐渐完整.与对照组比较,模型组建模7d、14d后RAC明显降低,MLI和肺组织TGF-β1、Smad2、NLRP3、Caspase-1蛋白水平及血清IL-1β、IL-18水平明显升高(P＜0.05).与模型组比较,布地奈德低、中、高剂量组建模7d、14d后RAC逐渐增加,MLI和肺组织TGF-β1、Smad2、NLRP3、Caspase-1蛋白水平及血清IL-1β、IL-18水平逐渐降低(P＜0.05).结论:布地奈德可能通过调控NLRP3/Caspase-1信号通路抑制炎症反应,调控TGF-β1/Smad2信号通路抑制肺纤维化进程,在BPD新生小鼠中发挥保护作用.

目的 从微小RNA-101(miR-101)/Zeste基因同源蛋白2(EZH2)轴的角度探究槲皮素逆转非小细胞肺癌(NSCLC)上皮间质转分化(EMT)及吉西他滨(Gb)耐药性的分子机制.方法 用不同浓度槲皮素培养A549及A549/Gb,CCK-8法筛选适宜的槲皮素浓度进行后续试验;取A549细胞分为空白组、A549+EMT诱导剂组、A549+槲皮素组、槲皮素+EMT诱导剂组;A549细胞和A549/Gb分为A549组、A549/Gb组、A549/Gb+槲皮素组、A549/Gb+EMT诱导剂组、miR-101-inhibitor组、槲皮素+miR-101-inhibitor组、miR-NC组;实时荧光定量PCR(qPCR)检测各组miR-101表达水平;Western blot法检测EZH2、转化生长因子(TGF)-β1、果蝇母亲DPP同源物4(SMAD4)、p-SMAD4和EMT标志蛋白E钙黏蛋白(E-cadherin)、N钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)表达;CCK-8法检测各组细胞光密度(OD)值,并计算半数抑制浓度(IC50)及耐药指数(IR).结果 槲皮素对A549及A549/Gb的IC50分别为64、128μmol/L.EMT诱导剂增强A549细胞EMT特性(N-cadherin及Vimentin表达升高,E-cadherin表达降低)后,A549细胞miR-101表达降低,EZH2、TGF-β1、p-SMAD4/SMAD4蛋白表达水平,IC50及IR升高(P<0.05);槲皮素可抑制A549细胞EMT特性、降低IC50及IR,并上调miR-101,抑制EZH2、TGF-β1、p-SMAD4/SMAD4蛋白表达(P<0.05);EMT诱导剂可逆转槲皮素的上述作用(P<0.05).与A549细胞相比,A549/Gb细胞的EMT特性增强,IC50、IR、EZH2、TGF-β1、p-SMAD4/SMAD4表达均升高(P<0.05);抑制miR-101或EMT诱导剂处理,均可进一步增强A549/Gb细胞的EMT特性,升高IC50、IR,上调EZH2、TGF-β1、p-SMAD4/SMAD4蛋白表达(P<0.05);槲皮素可抑制A549/Gb细胞的EMT进程、降低其IC50、IR及EZH2、TGF-β1、p-SMAD4/SMAD4蛋白表达(P<0.05);抑制miR-101表达可逆转槲皮素的上述作用(P<0.05).结论 槲皮素可通过上调miR-101,抑制EZH2表达,进而抑制EMT进程,降低NSCLC细胞耐药性.

目的 分析声带白斑组织果蝇母亲DPP同源物4(SMAD4)、IL-35表达情况,并探讨其与喉癌的关系.方法 选取2019年1月至2021年1月嘉兴市第一医院耳鼻咽喉科收治的行手术治疗的声带白斑患者30例为声带白斑组,声带息肉患者30例为声带息肉组,喉癌患者30例为喉癌组,采用RT-PCR法、免疫荧光染色法检测声带息肉组织、白斑组织及喉癌组织SMAD4、IL-35(包括2个亚型:IL-12p35、Ebi3)mRNA和蛋白的表达情况;分析声带组织SMAD4 mRNA表达水平、蛋白阳性表达率与上皮异常增生程度的相关性;分析声带白斑患者术后发展为喉癌的危险因素;分析影响喉癌患者预后的危险因素.结果 声带息肉组织SMAD4 mRNA表达水平、蛋白阳性表达率＞声带白斑组织＞喉癌组织(均P＜0.05),声带息肉组织IL-12p35与Ebi3 mRNA表达水平、蛋白阳性表达率＜声带白斑组织＜喉癌组织(均P＜0.05).声带组织SMAD4 mRNA表达水平、蛋白阳性表达率与声带组织上皮异常增生程度均呈负相关(rs=-0.637、-0.817,均P＜0.05);IL-12p35 mRNA表达水平、蛋白阳性表达率与声带组织上皮异常增生程度均呈正相关(rs=0.712、0.673,均P＜0.05);Ebi3 mRNA表达水平、蛋白阳性表达率与声带组织上皮异常增生程度均呈正相关(rs=0.681、0.776,均P＜0.05).Cox多因素分析显示,声带白斑形态分型差、上皮异常增生程度高、SMAD4低表达及Ebi3高表达是声带白斑患者术后发展为喉癌的独立危险因素(均P＜0.05);淋巴结转移及IL-35高表达是影响喉癌患者预后的独立危险因素(均P＜0.05).结论 SMAD4与IL-35的表达变化可能是喉癌发生、发展的早期事件,SMAD4低表达及IL-35高表达可能通过影响信号通路或免疫抑制影响声带白斑的转归,两者或可作为评估声带白斑患者转归及喉癌患者预后的指标.