目的:探讨不同氧气浓度对毛囊神经嵴干细胞(hfNCSC)的增殖和分化的影响，明确适宜hfNCSC增殖、维持其未分化状态的氧气条件。方法:显微解剖分离SD大鼠触须部的毛囊Bugle区组织，在1%(低氧组)、3%(中度低氧组)、20%(常氧组)3种氧气浓度下进行hfNCSC的原代培养，培养第10、13天时采用CCK-8法分别检测3组细胞的增殖活性；培养第13天时采用免疫荧光染色方法检测神经干细胞标志物Nestin、神经嵴来源干细胞标志物Sox10及神经元标志物β-Ⅲ Tubulin的表达；采用实时定量PCR法检测培养第13天时HIF-2α、Oct4、Nanog、Lin28、Sox2、KLF4、Nestin、Sox10、Slug以及PAX3在hfNCSC中的表达水平；采用蛋白质免疫印迹法检测培养第13天时Oct4、Sox2的表达情况。结果:(1)CCK-8结果显示，培养第10天时，中度低氧组细胞的增殖活性最高(相对吸光度值为1.868±0.147)，其与低氧组(1.580±0.107)和常氧组(1.451±0.037)相比，差异均有统计学意义(均 P<0.01)；培养第13天时，仍以中度低氧组细胞的增殖活性最高(相对吸光度值为5.322±1.111)，其与低氧组(4.117±0.672)相比差异无统计学意义( P＝0.088)，而与常氧组(1.535±0.119)相比差异有统计学意义( P<0.001)。(2)免疫荧光染色检测结果显示，不同氧气浓度下，Nestin、Sox10、β-Ⅲ Tubulin均有表达，Nestin、β-Ⅲ Tubulin均定位于细胞质，Sox10定位于细胞核和细胞质。(3)实时定量PCR结果显示，Oct4、Nanog、Lin28、HIF-2α、Sox10、Slug、PAX3在中度低氧组的表达水平最高，且与另外两组的差异均有统计学意义(均 P<0.05)；Nestin、Sox2、KLF4在低氧组表达水平最高，且与另外两组的差异均有统计学意义(均 P<0.01)。(4)蛋白质免疫印迹结果显示，Oct4、Sox2在中度低氧组的表达高于另外两组。 结论:低氧有利于提高hfNCSC的增殖能力并维持其未分化状态，其中3%的氧气浓度更适合hfNCSC的增殖以及未分化状态的维持。

背景:成体干细胞疗法是周围神经损伤修复与再生领域的研究热点之一.中胚层被视为成体干细胞的理想来源,间充质干细胞具有获得率高、来源广、增殖快等优异性能.而外胚层来源成体干细胞,尤其是神经嵴干细胞,具有神经源性,越来越受到研究人员的关注.目的:对来自外胚层和中胚层的多功能成体干细胞在周围神经损伤修复与再生中的作用及机制进行简要综述,探究不同来源成体干细胞的研究进展与应用前景,并结合临床研究,探讨成体干细胞疗法潜在的应用价值以及亟待解决的问题.方法:第一作者于2024年2月应用计算机在PubMed和SinoMed数据库检索2001年12月至2024年2月相关文献,以"ectodermal stem cells,mesenchymal stem cells,peripheral nerve injury,repair,regeneration"为英文检索词,以"外胚层干细胞、间充质干细胞、周围神经损伤、修复、再生"为中文检索词,最终纳入69篇文献进行分析论述.结果与结论:①外胚层来源成体干细胞具有优异的分化和再生潜能,尤其是毛囊神经嵴干细胞、嗅干细胞、牙外胚层干细胞等,具有神经源性,可在体外表达神经特异性标志物,但目前缺少临床试验研究.②中胚层来源成体干细胞种类多、易获得及纯化,其中骨髓间充质干细胞和脐带间充质干细胞在周围神经损伤修复的应用疗效及安全性方面有相关临床试验支持,能改善感觉及运动神经传导,且在随访中未出现并发症和明显不良反应.骨髓间充质干细胞的获取需行侵入性外科手术且要求患者与捐赠者骨髓配型吻合,应用受到一定限制;而脐带间充质干细胞虽无需侵入性获取,但分离较困难且表型不稳定.③内胚层来源成体干细胞常难以在体外生长,应用受限,目前应用于临床的可能性低.④综合来看,骨髓间充质干细胞仍为周围神经损伤干细胞治疗的首选细胞,适用于无外科手术禁忌且符合配型要求的情况,其次为脐带间充质干细胞,辅以分离方法的改进和表型稳定性的提高策略.⑤牙外胚层干细胞以及脂肪间充质干细胞具有较高应用潜能,有待进一步临床试验,其他外胚层、中胚层来源成体干细胞各以其优异特性在动物及细胞实验研究中具有显著优势.

随着生物医学的进一步发展,人们对于细胞的认识越来越深入.干细胞是一类拥有自我复制、更新、诱导分化特性的细胞,能够向体内多种高度分化的细胞转变,在机体的组织修复、再生、补充缺失组织中发挥重要的作用.目前干细胞在生物医学研究中受到广泛关注,其临床应用也逐渐深入.Masjkur等[1]发现,通过神经与血管信号刺激体内干细胞能够诱导血管的生成,促进损伤组织修复.2016年Bang等[2]利用间充质干细胞和骨髓源单核细胞治疗中风,患者的症状得到改善.这些研究表明干细胞在神经再生与组织修复中具有巨大的应用前景.

目的:采用显微分离+组织块贴壁法培养大鼠毛囊神经嵴干细胞(hfNCSC).方法:显微分离SD大鼠触须部毛囊膨凸部(bugle),采用组织块贴壁法培养毛囊神经嵴干细胞,倒置显微镜下观察细胞形态.采用免疫荧光多重标记法检测Nestin和神经营养素受体p75(p75 NTR)的表达.结果:用显微分离+组织块贴壁法可成功获得毛囊神经嵴干细胞,倒置显微镜下观察细胞活性好,形态多样,以梭形为主,也可见三角形、椭圆形细胞,核大而明显,多居于胞质一侧.免疫荧光鉴定显示细胞Nestin和p75NTR双阳性.结论:从SD大鼠触须部毛囊bugle区成功分离到毛囊神经嵴干细胞.

毛囊干细胞是存在于毛囊外根鞘隆突部的一种成体干细胞,来源丰富且易于获取.与毛囊内的其他成体干细胞一样,毛囊干细胞具有许多的优点,如自我更新能力强、高增殖能力和多分化潜能等,这使得毛囊干细胞成为非常好的分离干细胞来源以及组织工程和再生医学应用的组织来源.毛囊干细胞在表皮和皮肤组织工程中的研究作为一个迅速发展的全新领域,目前已在基础和临床研究方面都取得了巨大进展.本文主要就毛囊干细胞的应用前景展开综述,包括干细胞诱导毛发新生,促进创面愈合,促进神经、脊髓修复,心肌细胞样细胞分化等.

目的 观察SOX9和ETS-1蛋白在人毛囊隆突区迁出细胞中的表达及定位,探讨其在白癜风毛囊周围复色机制中的意义.方法 取6份正常头皮组织,显微镜下分离出单个毛囊并体外培养人毛囊神经嵴干细胞,镜下观察毛囊隆突区干细胞迁出和生长情况,免疫荧光染色法检测SOX9、ETS-1蛋白表达情况.结果 体外培养的人单个毛囊的隆突区可迁出神经嵴干细胞,迁出神经嵴干细胞传代的长满时间和长满密度分别为[(3.17±1.17)d]、[(2.79±0.48)×106个/mL];SOX9和ETS-1蛋白在人毛囊隆突区迁出神经嵴干细胞均呈阳性表达,且均定位于细胞核.结论 人毛囊隆突区存在神经嵴干细胞,SOX9、ETS-1可能是其标志物.

目的 探索体外培养神经束膜细胞的有效方案,并初步研究毛囊神经嵴干细胞(hfNCSC)对神经束膜细胞的激活作用.方法 采用"限时消化-差速贴壁-化学药物"方法对大鼠坐骨神经束膜细胞进行培养和纯化,同时培养大鼠触须垫hfNCSC,并对细胞进行免疫细胞化学染色鉴定.借助Transwell小室建立hfNCSC与神经束膜细胞的共培养模型,在Transwell上室接种神经束膜细胞,下室接种hfNCSC(hfNCSC共培养组)或不接种细胞(对照组),共培养6、12和18 h后进行结晶紫染色,观测神经束膜细胞的迁移情况.取hfNCSC条件培养基(hfNCSC条件培养基组)和含2％FBS的DMEM培养基(对照组)分别作用于神经束膜细胞,24、48和72 h后用CCK-8试剂盒检测细胞增殖情况.结果 本方案可在2周的时间内获得纯度高达(97.66±2.08)％的神经束膜细胞.将神经束膜细胞与hfNCSC共培养6、12和18 h后,可见hfNCSC共培养组神经束膜细胞的迁移数较对照组增多,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01).以hfNCSC条件培养基作用于神经束膜细胞24 h和48 h后,hfNCSC条件培养基组与对照组神经束膜细胞的细胞活力差异无统计学意义(P均>0.05);但作用72 h后,hfNCSC条件培养基组神经束膜细胞的细胞活力高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01).结论 "限时消化-差速贴壁-化学药物"方法可成功培养和纯化神经束膜细胞;hfNCSC可激活神经束膜细胞,促进其迁移和增殖.

目的 检测神经嵴干细胞标记(p75、MSX2)和自我更新标记(OCT4、NANOG)在人毛囊隆突区迁出细胞的表达,并进一步检测其增殖活性.方法 取正常头皮组织,显微分离单个毛囊隆突,并体外培养,观察迁出细胞的生长情况;采用免疫荧光染色法检测人毛囊隆突区迁出细胞p75、MSX2、OCT4和NANOG的表达;采用BrdU标记免疫荧光染色检测细胞增殖活性.结果 p75、MSX2、OCT4和NANOG在人毛囊隆突区迁出细胞中呈阳性表达.传代培养24 h、48 h、72 h后BrdU阳性率分别为(49.50±4.62)％、(33.43±10.43)％、(17.51±8.51)％,且在传代培养24 h时增殖能力较高.结论 人毛囊隆突区存在神经嵴干细胞,且该细胞具有迁移、自我更新能力及较强的增殖活性.

背景:既往研究报道了毛囊表皮神经嵴干细胞在周围神经修复中的巨大潜力,但其炎症调节作用在面神经修复研究中鲜有报道.目的:探究毛囊表皮神经嵴干细胞能否调节面神经损伤后早期局部肿瘤坏死因子α和白细胞介素4表达水平,以促进面神经功能和形态恢复.方法:提取4 d龄SD大鼠毛囊表皮神经嵴干细胞进行培养、鉴定.取54只成年雄性SD大鼠制备面神经干缺损自体静脉导管桥接模型,随机等分为生理盐水组、DMEM组和毛囊表皮神经嵴干细胞组.通过免疫蛋白印迹、免疫组化、免疫荧光观察术后4-14 d肿瘤坏死因子α和白细胞介素4表达水平.对术后12周大鼠进行面神经功能评分,并行苏木精-伊红染色观察面神经形态.结果 与结论:①毛囊表皮神经嵴干细胞中Nestin和p75NTR双阳性表达,细胞纯度>90％;②与其他两组相比,毛囊表皮神经嵴干细胞组的肿瘤坏死因子α表达在术后7 d减弱(P<0.05),而白细胞介素4表达在术后3,7,14 d均增强(P<0.05);③与其他两组相比,毛囊表皮神经嵴干细胞组的面神经功能改善(P<0.05);④面神经移植段均可见新生血管和再生轴突,与其他两组相比,毛囊表皮神经嵴干细胞组移植段和移植远段的神经纤维排列更有序、包绕的髓鞘更厚;⑤结果表明:毛囊表皮神经嵴干细胞对面神经损伤后修复早期局部肿瘤坏死因子α和白细胞介素4表达具有调节作用,可抑制局部炎症反应,并促进面神经功能和形态恢复.