患者，男，44岁，因"双眼视力下降5~6 d"于2021年4月27日在天津医科大学眼科医院就诊。既往无眼部疾病史，否认糖尿病、高血压以及外伤史、吸烟史。浅表性胃炎病史3~4年；饮酒史3~4年。近2个月饮350~400 g白酒/d（根据患者提供饮用白酒的信息计算196~224 g乙醇/d，甲醇含量在国家卫生标准范围内），停酒后手抖。眼部检查：裸眼视力（UCVA）：右眼0.01，左眼0.02；最佳矫正视力（BCVA）：右眼0.02，左眼0.1；眼压：右眼16.2 mmHg（1 mmHg=0.133 kPa），左眼17.5 mmHg。双眼结膜、角膜、前房、晶状体未见异常；瞳孔直径：右眼3.5 mm，左眼3.5 mm，直接、间接对光反射正常。双眼眼底视盘界清色可，视网膜血管走行自然，黄斑未见异常。超广角眼底照相显示：双眼视网膜平伏，未见异常。眼底自发荧光示：双眼黄斑区小片低自发荧光（见图1）。光学相干断层扫描（OCT）示：双眼鼻侧视网膜神经纤维层（Retinal nerve fiber layer, RNFL）略薄，双眼颞下RNFL略增厚（见图2）。光学相干断层扫描血管成像（Optical coherence tomography angiography, OCTA）示：视网膜浅层及深层血流密度未见异常。视觉诱发电位（Visual evoked potential, VEP）示：双眼P100潜伏期延长，振幅正常（见图3）。血常规、生化、电解质检查示：红细胞3.60×10 12/L，血红蛋白浓度129 g/L，平均红细胞血红蛋白含量35.8 pg，平均红细胞血红蛋白浓度358 g/L；谷丙转氨酶235 U/L，谷草转氨酶295 U/L，r-谷氨酰转肽酶217 U/L，总胆红素33.00 μmol/L，直接胆红素14.80 μmol/L；血钾3.43 mmol/L。免疫常规示：梅毒、HIV、乙肝、丙肝抗体均为阴性。头颅MRI（外院）示：脑实质MRI平扫未见异常，右侧中下鼻甲肥大。诊断：双眼急性乙醇中毒性视神经病变。嘱患者戒酒，予以营养神经改善微循环治疗：口服甲钴胺片0.5 mg/次，每日3次，维生素B1片10 mg/次，每日3次，氯化钾缓释片0.1 mg/次，每日2次，银杏叶提取物片40 mg/次，每日3次；双眼点七叶洋地黄双苷滴眼液每日4次，溴酚酸钠滴眼液每日2次。患者遵医嘱用药20 d后复查视力，BCVA：右眼0.8，左眼0.9。眼底视盘界清色可，黄斑中心凹光反射可见。嘱继续戒酒，改善营养治疗，半年后复查。

目的:观察大黄素对精索静脉曲张缺氧模型精原细胞的保护作用。方法:选用小鼠GC-1精原细胞，设置对照组(A组)、对照＋大黄素组(B组)、模型组(C组)、模型＋大黄素组(D组)。C组和D组加入氯化钴(CoCl 2)至终质量浓度为100 μmol/L，然后培养细胞24 h构建精索静脉曲张缺氧模型。B组和C组加入大黄素至终质量浓度为40 μmol/L。采用细胞计数试剂-8(CCK-8)法及流式细胞仪测定细胞凋亡水平，采用蛋白质印迹法(Western blot)检测半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase-3)和B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)的蛋白质表达水平，采用实时定量反转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测细胞Caspace-3和bax的基因表达水平，组间比较采取 t检验。 结果:CCK-8实验示C组和D组细胞存活率低于A组[(51.70±3.52)%、(77.84±5.18)%比(100.00±0.00)%， t＝23.767、7.410， P值均<0.05]，差异有统计学意义，且D组细胞存活率高于C组[(77.84±5.18)%比(51.70±3.52)%， t＝7.229， P<0.05]，差异有统计学意义。流式实验示D组凋亡细胞比例低于C组[(10.54±0.68)%比(21.23±1.01)%， t＝15.207， P<0.05]，差异有统计学意义。Western blot结果示D组Caspace-3和bax蛋白表达水平低于C组(0.713±0.020、0.819±0.022比1.134±0.025、1.271±0.019， t＝22.722、26.813， P值均<0.05)，差异有统计学意义。RT-qPCR结果示D组Caspace-3和bax表达水平低于C组(1.52±0.18、1.80±0.21比3.53±0.23、4.27±0.31， t＝11.920、11.426， P值均<0.05)，差异有统计学意义。 结论:大黄素通过抑制细胞凋亡对精索静脉曲张缺氧模型的精原细胞起保护作用。

目的:探究甲磺酸去铁胺对氧化应激诱导的小鼠精原细胞铁死亡的作用。方法:将小鼠GC-1精原细胞分为设置对照组(A组)、甲磺酸去铁胺处理组(B组)、氯化钴处理组(C组)、甲磺酸去铁胺处理+氯化钴处理组(D组)。C组和D组加入200 μmol/L氯化钴处理细胞24 h以构建小鼠精原细胞氧化应激模型。B组和D组加入350 μmol/L甲磺酸去铁胺。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)测定细胞活性；采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定细胞内铁离子、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)水平；采用细胞荧光测定活性氧和线粒体膜电位水平；采用蛋白质印迹法检测谷胱甘肽过氧化物酶-4(GPX4)的表达水平，组间比较采取 t检验。 结果:C组和D组细胞活性显著低于A组[(49.79±2.86)%、(85.05±3.21)%比(100.00±0.00)%， t＝42.99、11.42， P<0.05]，且D组细胞活性高于C组[(85.05±3.21)%比(49.79±2.86)%， t＝20.10， P<0.01]，差异有统计学意义。ELISA结果示D组铁离子、MDA水平低于C组[(14.41±0.72) μmol/g、(7.025±0.127) nmol/mg比(19.18±0.61) μmol/g、(9.589±0.140) nmol/mg， t＝12.43、33.27， P<0.01]；GSH水平高于C组[(12.37±1.02) μmol/g比(6.98±0.70) μmol/g， t＝10.66， P<0.01]，差异均有统计学意义。细胞荧光结果显示A组、B组和D组ROS水平低于C组(27.17±2.44、25.15±2.28、41.46±1.75比71.20±1.78， t＝32.58、35.55、26.61， P<0.01)；A组和D组线粒体膜电位高于C组(14.98±0.73、8.46±1.69比0.61±0.09， t＝43.55、10.82， P<0.01)，差异均有统计学意义。蛋白质印迹法实验结果显示D组GPX4表达水平高于C组(0.457±0.014比0.386±0.012， t＝6.556， P<0.05)，差异有统计学意义。 结论:甲磺酸去铁胺通过抑制铁死亡对小鼠精原细胞氧化应激模型起保护作用。

目的:探讨缺氧条件下胰岛中5-羟色胺的表达水平及其调节机制。方法:将体外培养的人胰岛分为对照组和氯化钴（CoCl 2）处理组，每组设置3个平行组，通过免疫荧光染色检测人胰岛中的5-羟色胺表达水平。将β细胞系NIT-1细胞分为7组：对照组、CoCl 2处理组、缺氧（1% O 2）组、缺氧诱导因子1α（Hif1α）激活剂二甲基乙二酰氨基乙酸（DMOG）组、小干扰RNA对照（sictrl）组、sictrl+CoCl 2组、siHif1α+CoCl 2组，每组设置3个平行组。通过实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）和Western blotting检测5-羟色胺合成限速酶色氨酸羟化酶（Tph1）的表达水平。组间比较采用独立样本 t检验。 结果:在人胰岛中，与对照组相比，CoCl 2处理组5-羟色胺的表达水平显著降低（ P<0.001）。在NIT-1细胞中，与对照组相比，CoCl 2处理和缺氧处理（1% O 2）均显著抑制Tph1表达（ P<0.05），且Hif1α激活剂DMOG提高Hif1α表达（ P<0.05），同时显著抑制Tph1表达（ P<0.05）；与siCtrl组相比，siCtrl+CoCl 2组Tph1表达显著下调（ P<0.05），而siHif1α+CoCl 2组较siCtrl+CoCl 2组Tph1表达显著上调（ P<0.05）。 结论:在缺氧条件下，Hif1α抑制Tph1的表达，从而降低胰岛中5-羟色胺的表达水平。

目的:探讨重组腺病毒缺氧诱导因子-1α(AdHIF-α1)在大鼠缺氧脑微血管内皮细胞(BMEC)中的转染情况，为AdHIF-1α治疗缺氧的BMEC提供理论基础。方法:建立大鼠BMEC的体外分离培养及鉴定，并用含100 μmol/L二氯化钴(CoCl 2)的维持培养液培养，制成BMEC缺氧模型；然后将AdHIF-1α转染入缺氧的BMEC中，在荧光显微镜下观察荧光蛋白的转染情况。 结果:AdHIF-lα转染入缺氧的BMEC后，分别在12 h、24 h、48 h、72 h于荧光显微镜下观察AdHIF-lα的转染情况，结果显示，12 h开始出现少许荧光，光密度值( A值)0.13±0.01；24 h荧光表达有所增强， A值0.46±0.03；48 h荧光表达最明显， A值0.97±0.05；72 h可见荧光减弱， A值0.38±0.02；不同时间点比较差异有统计学意义，两两比较结果显示，相邻时间点 A值比较差异均有统计学意义( q＝25.88、40.00、46.28，均 P<0.01)。 结论:重组腺病毒缺氧诱导因子-1α能成功转染至缺氧的BMEC。

目的:探究甲磺酸去铁胺对精索静脉曲张睾丸支持细胞氧化应激模型的保护作用。方法:细胞实验选择小鼠睾丸支持细胞TM-4，设置对照组(A组)、甲磺酸去铁胺+对照组(B组)、氯化钴组(C组)、甲磺酸去铁胺+氯化钴组(D组)。C组和D组加入400 μmol/L氯化钴，随后培养细胞24 h构建精索静脉曲张氧化应激模型。B组和D组加入800 μmol/L甲磺酸去铁胺。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)和流式测定细胞存活和凋亡水平；采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定细胞内活性氧(ROS)、十二烷硫酸钠(SDS)、丙二醛(malondialdehyde，MDA)、谷胱甘肽(GSH)水平；采用蛋白质印迹法(Western blot)检测谷胱甘肽过氧化物酶-4(GPX4)的蛋白表达水平，组间比较采用 t检验。 结果:CCK-8实验结果显示C组和D组细胞存活率低于A组[(45.75±12.08)%、(86.53±2.57)%比(100.00±0.00)%， t＝11.000、12.810， P值均<0.05]，差异有统计学意义，且D组细胞存活率高于C组[(86.53±2.57)%比(45.75±12.08)%， t＝8.087， P<0.01]，差异有统计学意义。流式实验结果显示D组凋亡细胞比例低于C组[(8.63±0.11)%比(34.19±0.35)%， t＝121.300， P<0.01]，差异有统计学意义。ELISA结果显示D组相对ROS、MDA表达水平低于C组[(239.17±23.18)%、(40.34±1.50) nmol/(L·mg)比(378.00±24.84)%、(49.18±2.68) nmol/(L·mg)， t＝10.010、7.053， P值均<0.01]；超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)表达水平高于C组[(7.85±0.24) U/mg、(425.60±12.21) U/mg比(4.69±0.28) U/mg、(208.96±7.00) U/mg， t＝20.650、37.710， P<0.01]，差异均有统计学意义。蛋白质印迹法实验结果显示氯化钴缺氧诱导了铁死亡关键蛋白GPX4表达下调，而甲磺酸去铁胺(DFO)恢复了铁死亡关键蛋白GPX4的表达。 结论:甲磺酸去铁胺通过抑制铁死亡对精索静脉曲张睾丸支持细胞氧化应激模型起保护作用。

患者，女，54岁，因吞咽困难1年余，加重伴言语不清2 d就诊我院。患者1年前无明显诱因出现吞咽困难，程度较轻，伴咽部异物感，吞咽时明显，偶有咽喉部隐痛等不适，多次于院外就诊，考虑慢性咽喉炎，予药物治疗效果不佳。2 d前患者出现吞咽困难加重，无法饮水进食，伴有言语不清，说话如口中含物，咽喉部疼痛不明显。纤维咽喉镜检查：咽喉黏膜慢性充血，悬雍垂居中，双侧扁桃体无明显肿大，舌根及咽后壁淋巴滤泡增生肥大，会厌左侧舌面见一直径大小约1.5 cm的淡黄色囊性新生物，表面光滑，杓间区黏膜苍白增厚，双侧声带轻度水肿，运动闭合可，双侧披裂对称，稍充血肿胀，双侧梨状窝未见异常（图1A）。既往胆囊炎病史，长期口服消炎利胆片。否认家族史、传染病史。入院诊断：吞咽困难（原因待诊），会厌囊肿，咽喉反流，慢性咽喉炎，胆囊炎。血常规：白细胞13.46×10 9/L，中性粒细胞百分比86.1%，淋巴细胞百分比10.3%。电解质K + 3.49 mmol/L。予以头孢呋辛抗感染、地塞米松抗炎、林格氏液补液、口服氯化钾补钾、伏诺拉生抑酸护胃治疗后，患者吞咽困难、言语不清较前稍缓解。追问病史，家属诉2 d前与患者争吵后出现吞咽困难加重，情绪稳定时症状稍缓解，考虑存在心因性因素可能。完善头部MRI示双侧额叶缺血、腔梗灶，轻度脑白质脱髓鞘改变，左侧基底节及右侧丘脑区小软化灶（图1B）。请神经内科会诊，神经系统专科查体：查体合作，高级认知功能检查未见明显异常，双侧瞳孔等大等圆，光敏，双侧眼球各方向运动到位，未见明显眼震，双侧鼻唇沟对称，口角不歪，伸舌居中，咽反射减弱，悬雍垂居中，软腭上抬可，四肢肌力5级，肌张力正常，双侧腱反射对称引出，双侧痛触觉对称，双侧指鼻、跟膝胫实验（－），Romberg（－），双侧病理征（－），颈阻（－），疲劳实验（+）。考虑延髓麻痹待诊：重症肌无力。完善肌电图/诱发电位：RNS左面神经1、3、5 Hz电刺激均可见CMAP波幅递减，10 Hz CMAP波幅变化不明显，左尺神经5 Hz电刺激波幅递减趋势，余各频率CMAP波幅变化不明显。结论：重复电刺激异常（低频递减）。外周血-神经肌肉接头疾病五项（定量）：抗乙酰胆碱AChR受体自身抗体5.51 mmol/L（<0.45 mmol/L），明确重症肌无力诊断。加用甲钴胺营养神经，溴吡斯的明抗胆碱酯酶治疗后，患者吞咽困难较前明显好转，院外继续巩固治疗。

目的:建立以及验证人肝细胞L-02缺血再灌注损伤(IRI)模型。方法:分别利用液体石蜡、氯化钴(CoCl 2)以及缺氧培养箱构建人肝细胞株L-02 IRI模型，采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞活力，利用相关试剂盒检测细胞超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平，利用异硫氰酸荧光素标记的膜联素V/碘化丙锭(Annexin V-FITC/PI)细胞凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡水平，蛋白质印迹(Western blot)法测定凋亡相关蛋白天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)以及B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白(bax)表达水平，通过以上方法对3种方式构建肝细胞IRI效果进行验证以及统计分析。两组间的比较采用 t检验，多组间比较采用单因素方差分析。 结果:利用液体石蜡、CoCl 2以及缺氧培养箱构建的肝细胞IRI模型的细胞活力均低于对照组，各组细胞450 nm吸光度分别为(0.698±0.021、0.622±0.029、0.725±0.025比1.086±0.123)，差异有统计学意义( F＝30.02， P<0.01)，其中液体石蜡组、缺氧培养箱组的细胞活性要高于CoCl 2组( t＝3.660、4.605， P均<0.05)；各组SOD水平均低于对照组[(117.678±9.797)、(100.095±5.588)、(105.614±4.880) U/mg蛋白比(172.378±6.208) U/mg蛋白， F＝92.56， P<0.01]，其中液体石蜡组SOD水平高于CoCl 2组( t＝3.118， P<0.05)；各组MDA水平高于对照组[(62.684±4.584)、(70.931±1.849)、(63.472±2.316) nmol/mg蛋白比(16.163±2.106) nmol/mg蛋白， F＝219.90， P<0.01]，CoCl 2组MDA高于液体石蜡组和缺氧培养箱组( t＝2.889、4.347， P均<0.05)；IRI各组细胞凋亡率高于对照组[(26.087±4.107)%、(36.797±3.453)%、(31.945±2.859)%比(1.840±0.489)%， F＝103.50， P<0.01]，其中CoCl 2组凋亡率高于液体石蜡组( t＝3.992， P<0.01)。各组P-Caspase-3相对表达水平较对照组升高(2.460±0.102、2.629±0.059、2.574±0.107比1.000， F＝291.23， P<0.01]，bax相对表达水平同样高于对照组(1.506±0.012、1.618±0.055、1.631±0.080比1.000， F＝90.80， P<0.01)，液体石蜡、CoCl 2和缺氧培养箱三组之间的凋亡蛋白相对表达量无明显差异( F＝4.33、0.92， P均>0.05)。 结论:采用液体石蜡、CoCl 2以及缺氧培养箱均可成功诱导肝细胞的IRI，在无缺氧培养箱的条件下，与CoCl 2比较，可优先选用液体石蜡的方法来构建肝细胞的IRI模型。

目的:通过检测先天性肾盂输尿管连接部梗阻(ureteropelvic junction obstruction, UPJO)患儿梗阻段组织上皮屏障结构分子、缺氧诱导因子和血管内皮标志分子的分布和表达情况，了解UPJO梗阻段上皮屏障缺陷和缺氧表型，探讨尿路上皮细胞屏障缺陷和缺氧的相关性。方法:收集2019年1～8月复旦大学附属儿科医院手术切除的UPJO患儿梗阻段17例作为UPJO组，另收集2019年5月至2020年1月因肾肿瘤行肾全切患儿的正常输尿管5例作为正常对照组。利用免疫荧光染色观察石蜡切片UPK3A、E-cadherin、ZO-1、HIF-1α以及CD34的表达与分布情况。利用氯化钴(cobalt chloride，CoCl 2)建立尿路上皮细胞系SV-HUC-1的缺氧模型，并用CCK-8法筛选最佳建模CoCl 2浓度。采用实时荧光定量RT-qPCR和蛋白质印迹法检测E-cadherin、ZO-1在mRNA和蛋白水平的表达情况，使用Stata 13.0对比分析组间差异，并用GraphPad Prism 7.0绘图。 结果:UPJO组梗阻段UPK3A、E-cadherin、ZO-1蛋白的相对表达量分别为0.338(0.154，0.585)、0.739±0.155和0.146±0.130，与对照组0.898(0.779，0.925)、1.000±0.050和1.000±0.404比较均显著减少，差异有统计学意义( P＝0.020 8、0.001 5和<0.000 1)。UPJO梗阻段HIF-1α和CD34蛋白的相对表达量分别为5.473(2.896，15.969)和3.021±0.949，较对照组1.256(0.615，1.299)和1.000±0.752明显增加，组间比较差异亦均有统计学意义( P＝0.000 9和0.000 4)。蛋白质印迹法和CCK-8实验显示，诱导SV-HUC-1细胞缺氧模型的最适CoCl 2浓度为200 μmol/L(24 h)，对细胞活力无显著影响。缺氧组SV-HUC-1细胞的ZO-1和E-cadherin的相对表达量在mRNA水平分别为0.452±0.083和0.693±0.100，与空白对照组1.029±0.291和1.000±0.045比较均显著下降，差异均有统计学意义( P＝0.008 9和0.008 2)。缺氧组SV-HUC-1细胞的相对表达量在ZO-1和E-cadherin蛋白水平分别为0.572±0.241和0.942±0.022，与空白对照组1.000±0.253和1.000±0.026比较，差异亦有统计学意义( P＝0.025 3和0.041 1)。 结论:UPJO患儿梗阻段存在上皮屏障缺损，同时也存在缺氧。在细胞水平，缺氧会使SV-HUC-1细胞间连接分子表达减少，缺氧可能是引起上皮屏障破坏的原因之一。

目的 探讨软式内镜活检管腔的干燥方法和干燥时间.方法 将临床诊疗使用过的胃镜随机分为5组,结肠镜随机分为6组,每组均进行60次实验.所有胃镜和结肠镜经规范清洗和消毒后,第1组活检管腔常规使用压力气枪持续吹气30 s进行干燥;剩余各组先用内镜干燥机干燥5 min,再使用压力气枪对活检管腔持续吹气30、40、50、60 s(胃镜)或30、40、50、60、70 s(结肠镜).干燥时间结束时,使用氯化钴试纸判断内镜管腔的干燥程度.结果 胃镜常规吹气30 s的干燥合格率为20.0％,结肠镜为18.3％;胃镜干燥机干燥5 min+吹气60s,结肠镜干燥机干燥5 min+吹气70 s,干燥合格率均为100％;胃镜、结肠镜各组组内干燥合格率比较,差异有统计学意义(均P＜0.05).结论 软式内镜用内镜干燥机干燥5 min的基础上,胃镜活检管腔吹气时间60 s,肠镜活检管腔吹气时间70 s,可以保证内镜活检管腔的干燥效果.