-
微小RNA-506对胰腺癌肿瘤相关巨噬细胞及肿瘤微环境的影响
编辑人员丨5天前
目的:探索微小RNA-506(miR-506)对胰腺癌肿瘤相关巨噬细胞及肿瘤微环境的影响。方法:使用Panc02细胞建立原位成瘤模型。将C57BL/6荷瘤小鼠分为miR-ctrl C57组和miR-506 C57组,每组15只,成瘤后分别通过腹腔注射二油酰磷脂酰胆碱(DOPC)脂质体包被的miR-ctrl(miR-ctrl/DOPC)或miR-506(miR-506/DOPC),测量肿瘤重量和体积,以流式细胞术检测肿瘤浸润性免疫细胞亚群变化,并监测小鼠生存期。将荷瘤裸鼠分为miR-ctrl nude组和miR-506 nude组,每组5只,成瘤后分别通过腹腔注射miR-ctrl/DOPC或miR-506/DOPC,用以排除免疫系统影响。将C57BL/6荷瘤小鼠分为清除对照组和巨噬细胞清除组,每组10只,成瘤后两组分别通过腹腔注射磷酸盐缓冲液(PBS)或氯膦酸二钠脂质体(Clo),用以排除巨噬细胞影响,2周后各组再分为miR-ctrl PBS组、miR-506 PBS组、miR-ctrl Clo组和miR-506 Clo组。 结果:miR-506 C57组小鼠的肿瘤体积(1.04±0.23)×10 3 mm 3和肿瘤重量(0.51±0.10)g均小于miR-ctrl C57组[(1.92±0.34)×10 3 mm 3和(0.99±0.19)g],M2/M1比例低于miR-ctrl C57组[(1.19±0.46)比(2.85±0.40)],差异具有统计学意义( P<0.01)。生存曲线显示,miR-506 C57组小鼠总生存期好于miR-ctrl C57组小鼠,差异具有统计学意义( P<0.01)。BALB/c裸鼠成瘤模型中miR-506 nude组小鼠的肿瘤体积和肿瘤重量与miR-ctrl nude组比较,差异无统计学意义( P>0.05)。C57BL/6荷瘤小鼠模型免疫微环境中miR-506 PBS组较miR-ctrl PBS组肿瘤调节性T细胞的比例更低[(4.70±1.86)%比(12.00±2.24)%],细胞毒性T细胞的比例更高[(10.54±1.89)%比(4.54±1.25)%],凋亡细胞毒性T细胞的比例更低[(14.00±4.00)%比(26.80±4.27)%],细胞毒性T细胞产生干扰素-γ的浓度更高[(89.60±14.69)比(28.00±13.69)ng/g],差异均具有统计学意义( P<0.05);但经过Clo清除巨噬细胞后,miR-506 Clo组和miR-ctrl Clo组上述指标差异均无统计学意义( P>0.05)。 结论:MiR-506通过巨噬细胞依赖的方式抑制胰腺癌的进展并纠正其免疫抑制性肿瘤微环境。
...不再出现此类内容
编辑人员丨5天前
-
膦酸盐通过消耗巨噬细胞抑制非酒精性脂肪性肝炎的脂肪变和小叶炎症
编辑人员丨5天前
目的:探讨非酒精性脂肪性肝炎(NASH)中巨噬细胞的作用,为代谢性肝病的治疗靶点提供方向。方法:将20只6~8周C57BL/6野生型雄性小鼠随机分为两组:对照组5只,蛋氨酸胆碱缺乏饮食(MCD);实验组15只,MCD饮食+腹腔注射氯膦酸二钠脂质体(以清除巨噬细胞)。喂养4周建立小鼠NASH模型,留取血、肝脏及脾脏,分析体质量指数、肝指数、脾指数及检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)水平;通过HE染色及油红O染色进行非酒精性脂肪性肝病活动度评分(NAS);用RT-PCR方法比较F4/80 mRNA的相对表达水平。组间数据比较采用 t检验进行分析。 结果:MCD喂养小鼠4周建立NASH模型,实验组F4/80的mRNA表达量下降( t = 4.167, P<0.01),肝脂肪变性减轻( t = 10.70, P < 0.05),小叶炎症浸润程度减轻( t = 3.08, P < 0.05),NAS评分降低( t = 8.06, P < 0.05)。同时,ALT水平明显下降[(817.00±128.90)U/L与(231.20±36.28)U/L, t = 5.71, P < 0.01)],AST水平也降低[(1 211.00±248.90)U/L与(505.30±88.20) U/L, t = 3.32, P < 0.01)];但实验组脾脏体积及脾指数较大(0.24±0.01与0.32±0.02, t = 2.41, P < 0.05);肝脏气球样变、体质量指数及肝指数在两组的差异无统计学意义。 结论:在NASH中,膦酸盐可消耗巨噬细胞而发挥抑制肝脏炎症及保护受损肝脏的作用。
...不再出现此类内容
编辑人员丨5天前
-
NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白6对肝缺血再灌注损伤的影响
编辑人员丨5天前
目的:观察NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白6(NLRP6)对肝缺血再灌注损伤(IRI)的影响,并探索相关机制。方法:30只C57BL/6雄性小鼠,体重(18.80±1.99)g,分为5组,每组6只:仅接受剖腹探查的小鼠为假手术组(Sham组);直接制成肝IRI模型的小鼠为IRI组;术前尾静脉注射氯膦酸二钠(Clo)脂质体的小鼠为Clo组;术前尾静脉注射Clo脂质体+骨髓源性巨噬细胞(BMDM)的小鼠为Clo+BMDM组;术前尾静脉注射Clo脂质体+敲除NLRP6基因BMDM的小鼠为Clo+敲除NLRP6组。实时定量聚合酶链反应分析(RT-PCR)和蛋白质印迹法检测各组小鼠焦亡相关蛋白及因子的表达情况。模拟体外缺氧/复氧(H/R)模型,设置体外实验组:脂多糖(LPS)+三磷酸腺苷(ATP)组、LPS+ATP+敲除NLRP6组、H/R组、H/R+敲除NLRP6组,RT-PCR和蛋白质印迹法检测焦亡相关蛋白及因子的变化。分析核转录因子kappa B(NF-κB)在体内外的表达情况。结果:相较于Sham组,IRI组的NLRP6、NLRP3、天冬氨酸蛋白水解酶-1(Caspase-1)、全长焦孔素家族蛋白D(GSDMD)、白细胞介素(IL)-1β和IL-18蛋白表达均增加,在Clo组中,由于巨噬细胞被耗竭,这些蛋白的表达相较于IRI组下降,差异均有统计学意义(均 P<0.05)。在Clo+BMDM组中,随着巨噬细胞的重构,NLRP6、NLRP3、Caspase-1、GSDMD、IL-1β和IL-18蛋白的表达与Clo组相比再次上升,而在Clo+敲除NLRP6组,这些焦亡相关蛋白的表达均较Clo+BMDM组增加,差异均有统计学意义(均 P<0.05)。LPS+ATP组的焦亡率(16.39±1.06)%低于LPS+ATP+敲除NLRP6组的焦亡率(27.34±2.79)%,差异具有统计学意义( P<0.001)。H/R组的焦亡率(20.59±5.66)%亦低于H/R+敲除NLRP6组的(37.76±2.00)%,差异具有统计学意义( P=0.001)。NLRP3、Caspase-1、GSDMD以及IL-1β、IL-18、NF-κB p65在LPS+ATP+敲除NLRP6组中的表达均较LPS+ATP组更强烈,上述指标在H/R+敲除NLRP6组中的表达较H/R组亦均增强,差异均具有统计学意义(均 P<0.05)。相较于Sham组,NF-κB p65水平在IRI组中提高,但在Clo组中急剧逆转,而在Clo+BMDM组中再度回升,在Clo+敲除NLRP6组中的升高尤为显著。 结论:巨噬细胞对肝IRI的免疫应答产生关键性影响,NLRP6在其中发挥特异性作用;NLRP6在肝IRI中通过抑制NF-κB调控巨噬细胞的焦亡活动发挥抑炎效能。
...不再出现此类内容
编辑人员丨5天前
-
氯膦酸二钠脂质体对重症急性胰腺炎大鼠心肌损伤的保护作用
编辑人员丨2023/8/6
目的:探讨氯膦酸二钠脂质体(clodronate liposome,LC)对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠心肌损伤的保护作用.方法:将48只SD大鼠随机分为假手术组、SAP组及SAP+LC组,各组再分为术后2 h和6 h组(n=8).测定大鼠血清IL-6、淀粉酶及肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量,HE染色观察LC对SAP大鼠心肌组织病理损伤的影响,普鲁士蓝染色法观察LC对SAP大鼠心肌细胞间巨噬细胞的影响,免疫组化法观察LC作用后SAP大鼠丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)的表达.结果:假手术组术后2、6 h血清IL-6、淀粉酶、TNF-α含量均分别明显低于SAP组和SAP+LC治疗组(P<0.05),SAP+LC组明显低于SAP组(P<0.05).假手术组术后2、6 h心肌组织病理学评分明显低于 SAP组和 SAP+LC组(P<0.05),SAP+LC组明显低于 SAP 组(P <0.05).假手术组术后2、6 h心肌细胞间巨噬细胞数量明显低于SAP组和SAP+LC组,SAP+LC组明显低于SAP组.假手术组术后2、6 h心肌组织MAPK评分明显低于SAP组和SAP+LC组(P<0.05),SAP+LC组明显低于SAP组(P<0.05).结论:LC可选择性清除单核/巨噬细胞,对SAP大鼠心肌损伤起到保护作用.
...不再出现此类内容
编辑人员丨2023/8/6
-
补肾活血方对去卵巢小鼠冠脉微循环的保护作用及机制研究
编辑人员丨2023/8/6
目的 探讨心肌巨噬细胞(macrophages,M)表型M1/M2极化在去卵巢小鼠冠脉微循环障碍(CMD)中的作用及补肾活血方的影响.方法 将90只雌性C57BL/6小鼠按随机数字表法分为9组:6周正常组(6WC组)、6周假手术组(6WS组)、6周模型组(6WM组,去卵巢6W)、8周正常组(8WC组)、8周假手术组(8WS组)、8周模型组(8WM组,去卵巢8W)、巨噬细胞清除组(简称CM组,腹腔注射氯膦酸二钠脂质体0.01 mL/kg,每周1次)、补肾活血组[简称BG组,补肾活血方灌胃,5 mL/(kg·d),每天1次]及miR-155抑制组(简称MI组,尾静脉注射miR-155抑制剂20 mg/kg,每周1次),每组10只,持续干预8周.采用小动物超声成像系统检测左室短轴缩短率(LVFS)和左室射血分数(LVEF),HE染色观察心肌组织结构,麦胚凝集素染色检测心肌细胞横截面积,免疫荧光染色检测冠脉微血管密度和CD68+表达;实时荧光定量PCR检测心肌miR-155、IL-1β、TN F-α、IL-10及血管内皮生长因子(VEGF) mRNA表达.结果 与6WC组比较,6WS和6WM组心肌LVEF和LVFS值、炎症细胞浸润、心肌细胞横截面积、冠脉微血管密度差异均无统计学意义(P>0.05);与8WC和8WS组比较,8WM组心肌LVEF和LVFS值明显下降,心肌细胞肿胀和炎症细胞浸润增加,心肌细胞横截面积增大,冠脉微血管密度减少,CD68+表达增加,miR-155、IL-1β和TN F-αmRNA表达增加,IL-10和VEGF mRNA表达减少(P <0.05,P<0.01);与8WM组比较,BG组心肌LVEF、LVFS值和冠脉微血管密度增加,炎症细胞浸润、细胞横截面积减小,CM和BG组心肌组织炎症细胞浸润、CD68+表达均减少,CM、BG和MI组心肌miR-155、IL-1β和TN F-αmRNA表达均减少;BG和MI组心肌IL-10和VEGF mRNA表达均增加,差异均有统计学意义(P <0.05,P<0.01);与MI组比较,BG组心肌miR-155、IL-1β、TNF-α、IL-10、VEGF mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05).结论 补肾活血方可能通过下调心肌miR-155调控M1/M2极化抑制冠脉微血管炎症反应.
...不再出现此类内容
编辑人员丨2023/8/6
-
巨噬细胞活化在先天性巨结肠相关性小肠结肠炎发病机制中的作用
编辑人员丨2023/8/6
目的 探究巨噬细胞活化在先天性巨结肠相关性小肠结肠炎(Hirschsprung's disease associated enterocolitis,HAEC)发病机制中的作用.方法 以SPF级Ednrb基因敲除小鼠为先天性巨结肠(Hirschsprung's disease,HSCR)模型鼠.采用抽签法,随机选择2周龄和3周龄EdnrB-/-小鼠各3只作为EdnrB-/-组,相应周龄野生型小鼠各3只作为对照组,氯膦酸二钠脂质体(clodronate li-posomes,CLOD)腹腔注射2周龄EdnrB-/-小鼠3只作为CLOD处理组.收集三组小鼠结肠肠管标本,并分为结肠远段 、近段.采用CD68及iNOS免疫荧光双染法观察小鼠结肠巨噬细胞及其活化.RT-qPCR分析小鼠结肠各段iNOS、TNF-α 的mRNA表达水平.结果 CD68及iNOS免疫荧光双染显示,2周龄EdnrB-/-组小鼠结肠近段的CD68阳性巨噬细胞百分比为(5.71±1.96)%,与同龄野生型小鼠结肠近段(1.31±0.81)% 比较,差异有统计学意义(P<0.05).3周龄EdnrB-/-组小鼠结肠近段CD68阳性的巨噬细胞和iNOS阳性细胞百分比较高,分别为(12.81±2.28)% 和(7.81±2.35)%,与同龄野生型小鼠(2.25±1.17)% 和(1.22±0.66)% 比较,差异均有统计学意义(P均<0.05).CLOD处理组结肠近段CD68阳性细胞百分比为(2.52±0.49)%,iNOS阳性细胞百分比为(1.29±0.38)%,与3周龄EdnrB-/-组小鼠近段比较,差异均有统计学意义(P均<0.05).RT-qPCR分析结果显示:2周龄EdnrB-/-小鼠结肠各段炎症因子表达无明显变化,而3周龄EdnrB-/-小鼠结肠近段肠管炎症因子的表达水平明显升高.CLOD处理组小鼠肠管炎症明显减轻 、炎性因子释放明显下降.结论 巨噬细胞活化及其分泌的促炎因子在HAEC的发生发展中起到一定作用.
...不再出现此类内容
编辑人员丨2023/8/6
-
清除巨噬细胞加重葡聚糖硫酸钠诱导的小鼠溃疡性结肠炎
编辑人员丨2023/8/6
目的 观察小鼠腹腔注射氯麟酸二纳脂质体(Clodrolip)后对葡聚糖硫酸纳(DSS)诱导的溃疡性结肠炎(UC)的影响.方法 将小鼠分为两组(DSS、DSS+Clodrolip组)后均予以3%DSS饮用水饲养7d,DSS+Clodrolip组于造模前3d、造模当天及造模第2、4、6天腹腔注射200μL的Clodrolip.观察体质量变化率、疾病活动指数(DAI)评分、结直肠长度、脾脏质量及组织学损伤,实时荧光定量PCR(RT-PCR)判断巨噬细胞清除情况及肠道组织炎性因子表达情况,TUNEL法检测肠上皮细胞凋亡情况.结果 DSS+Clodrolip组小鼠肠组织、肝脏组织内F4/80相对表达水平较DSS组均明显降低.从造模第4天开始,DSS+Clodrolip组小鼠体质量变化率较DSS纽明显下降;造模第1天DSS+Clodrolip组小鼠率先出现DAI评分,从造模第4夭开始,DSS+Clodrolip组小鼠DAI评分较DSS组明显升高.DSS+Clodrolip组小鼠结直肠长皮较DSS组缩短;DSS+Clodrolip组小鼠脾脏质量较DSS组增加.DSS+Clodrolip组小鼠的白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)相对表达水平高于DSS组.DSS+Clodrolip组小鼠肠上皮细胞凋亡情况较DSS组明显.结论 Clo-drolip能够上调促炎因子的表达,促进肠上皮细胞的凋亡,加重DSS诱导的小鼠UC.
...不再出现此类内容
编辑人员丨2023/8/6
-
氯膦酸二钠脂质体清除肝内巨噬细胞对CCl4诱导的慢性肝损伤大鼠门脉高压的影响
编辑人员丨2023/8/5
目的 观察氯膦酸二钠脂质体清除肝内巨噬细胞对CCl4诱导的慢性肝损伤大鼠门脉高压的影响.方法 随机将48只Wistar大鼠分为对照组和模型组,每组24只.采用皮下注射橄榄油和四氯化碳(CCl4)法制备肝损伤模型.在实验d70,再将每组分为2个亚组,分别经尾静脉注射磷酸盐缓冲液脂质体(PL)或氯膦酸二钠脂质体(CL)处理.在实验d105,使用BL-420F生理机能实验系统测定大鼠肝脏在体门静脉压力,采用ELISA法检测血sCD163水平,采用免疫组化法检测肝组织CD163和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)蛋白表达.结果 在对照组内,CL处理大鼠血清sCD163水平为(798.6±61.9)pg/L,显著低于PL处理组[(848.3±26.2)pg/L,P<0.05];在模型组内,CL处理大鼠肝脏指数和门静脉压力分别为(4.7±0.8)和(10.6±2.0)mmHg,显著低于PL处理组[分别为(5.6±1.3)和(12.4±2.7)mmHg,P<0.05];模型组CL处理大鼠血清ALT、AST和sCD163水平分别为(69.9±21.4)U/L、(202.8±14.2)U/L和(980.1±122.3)pg/L,与PL处理大鼠比,均有显著性差异[分别为(97.8±39.6)U/L、(290.6±168.1)U/L和(1083.2±97.2)pg/L,P<0.05];免疫组化结果显示,CL处理大鼠肝组织CD163和iNOS蛋白阳性表达较PL处理大鼠有不同程度的减弱.结论 巨噬细胞参与门脉高压的发生和发展.清除巨噬细胞可降低门静脉压力.
...不再出现此类内容
编辑人员丨2023/8/5
-
巨噬细胞介导应激经由十二指肠炎症引发消化不良症状的机制研究
编辑人员丨2023/8/5
背景:临床流行病学证据显示应激是消化不良症状的重要致病因素.十二指肠炎症是消化不良症状产生的关键机制之一,而巨噬细胞是参与炎症反应的关键因素.目的:确定合并精神心理应激因素的功能性消化不良(FD)患者的十二指肠炎症状态;通过避水应激(WAS)动物模型研究确认巨噬细胞是否参与介导了应激相关十二指肠炎症的发生.方法:观察并比较合并精神心理因素的FD患者和无症状健康体检者的十二指肠炎症特征.观察WAS小鼠模型(每日应激1 h,持续10 d)十二指肠炎症的动态变化,以及预先以氯膦酸二钠脂质体清除巨噬细胞对十二指肠炎症的影响.采用HE染色和免疫细胞计数评估炎症严重程度,免疫组化染色检测巨噬细胞浸润情况,real-time PCR检测炎症因子表达.结果:与健康对照者相比,合并精神心理因素的FD患者十二指肠炎症更为严重[免疫细胞计数:(138.91±7.13)/HPF对(81.44±23.60)/HPF,P<0.0001],促炎细胞因子IL-1β、TNF-α、IL-17A表达升高,抗炎细胞因子IL-10、TGF-β表达降低(P均<0.05).WAS小鼠模型的十二指肠炎症于应激第5天达到峰值,之后逐渐缓解;巨噬细胞浸润情况与炎症变化趋势一致.预先清除巨噬细胞的WAS小鼠模型,十二指肠炎症较单纯WAS小鼠显著减轻[免疫细胞计数:(75.10±4.08)/HPF对(202.43±5.18)/HPF,P<0.001],促炎细胞因子IL-1β、TNF-α、IL-8表达降低,抗炎细胞因子IL-10表达升高(P均<0.05).结论:应激相关消化不良症状可能是通过触发十二指肠炎症所引起,在应激引发十二指肠炎症的机制中,巨噬细胞可能发挥关键作用.
...不再出现此类内容
编辑人员丨2023/8/5
-
氯膦酸二钠脂质体治疗膝关节骨性关节炎的疗效观察
编辑人员丨2023/8/5
目的 探讨氯膦酸二钠脂质体(CL)治疗膝关节骨性关节炎(KOA)的效果.方法 30只小鼠均进行KOA造模,造模成功后随机分为3组,每组各10只,分别行膝关节腔注射CL、帕瑞西布钠和生理盐水,4周及8周后获取膝关节标本,观察膝关节病理变化.体外培养巨噬细胞系,分别加入CL、空白脂质体,观察其对巨噬细胞的影响.结果 CL组小鼠膝关节病理切片可见软骨退变较少,关节表面破坏较轻.不同浓度CL培养下的巨噬细胞存在不同程度的凋亡,高浓度下巨噬细胞凋亡明显,低浓度下反而对巨噬细胞增殖有促进作用.结论 CL可以诱导巨噬细胞凋亡,在一定程度上减少软骨细胞的破坏,保护软骨细胞,以减缓关节的退变.
...不再出现此类内容
编辑人员丨2023/8/5
