目的:探讨鹿茸多肽(VAP)对骨质疏松(OP)模型大鼠的保护作用,并阐明其可能的作用机制.方法:60只12周龄SD大鼠随机分为对照组、模型组、阳性药组(1 mg·kg-1·d-1 阿仑膦酸钠灌胃)、低剂量(100 mg·kg-1·d-1)VAP组、中剂量(200 mg·kg-1·d-1)VAP组和高剂量(300 mg·kg-1·d-1)VAP组,每组10只.除对照组外,其余各组大鼠肌肉注射地塞米松(2 mg·kg-1)复制OP大鼠模型,对照组大鼠肌肉注射等体积生理盐水,每周2次,连续11周.双能X射线骨密度仪检测各组大鼠股骨骨密度(BMD),酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测各组大鼠血清中血钙(Ca2+)、血磷(P)、骨保护素(OPG)、碱性磷酸酶(ALP)和骨钙素(OCN)水平,生化法检测各组大鼠血清中丙二醛(MDA)水平和超氧化物歧化酶(SOD)活性,HE染色观察各组大鼠骨组织病理形态表现,Western blotting法检测各组大鼠骨组织中沉默信息调节因子 1(SIRT1)、过氧化氢酶(CAT)、Runt相关转录因子2(RUNX2)和叉头框蛋白O1(FOXO1)蛋白表达水平.结果:与对照组比较,模型组大鼠股骨BMD明显降低(P<0.05);与模型组比较,阳性药组、中剂量VAP组和高剂量VAP组大鼠股骨BMD明显升高(P<0.05 或P<0.01).与对照组比较,模型组大鼠血清中Ca2+、P和OPG水平及SOD活性明显降低(P<0.05),ALP、OCN和MDA水平明显升高(P<0.05);与模型组比较,低剂量VAP大鼠血清中OPG水平明显升高(P<0.05),阳性药组、中剂量VAP组和高剂量VAP组大鼠血清中Ca2+、P和OPG水平及SOD活性明显升高(P<0.05 或P<0.01),阳性药组和各剂量VAP组大鼠血清中ALP、OCN和MDA水平明显降低(P<0.05或 P<0.01).HE染色,与对照组比较,模型组大鼠骨组织中骨细胞数量减少且排列混乱,骨小梁纤细,出现大片断裂,髓腔扩大;与模型组比较,阳性药组、中剂量VAP组和高剂量VAP组大鼠骨组织中骨小梁粗壮,排列紧密.Western blotting法,与对照组比较,模型组大鼠骨组织中SIRT1、CAT、RUNX2和FOXO1蛋白表达水平明显降低(P<0.05);与模型组比较,阳性药组、中剂量VAP组和高剂量VAP组大鼠骨组织中SIRT1、CAT、RUNX2和FOXO1蛋白表达水平明显升高(P<0.05或P<0.01).结论:VAP对OP模型大鼠具有保护作用,其作用机制可能与介导SIRT1/FOXO1信号通路抗氧化应激作用有关.

缺血性脑卒中引起的脑缺血和再灌注可对神经组织造成无法弥补的损伤,影响神经功能的恢复.姜黄活性成分通过抑制小胶质细胞活性、抑制核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)信号通路、Janus蛋白酪氨酸激酶 2/转录激活子 3(janus protein tyrosine kinase 2/transcriptional activator 3,JAK2/STAT3)信号通路、激活磷脂酰肌醇三羟基激酶(phosphoinositide-3 kinase,PI3K)/蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶(serine threonine kinase,Akt),发挥抗炎活性.姜黄活性成分可通过调节凋亡相关蛋白分泌,调节沉默信息调节因子 1(silentinformationregulator1,SIRT1)/叉头框蛋白 O1(forkhead box O1,FOXO1)信号通路,上调声波刺猬(sonic hedgehog,Shh)信号通路,阻止内质网应激相关凋亡途径,发挥抗细胞凋亡活性.姜黄活性成分可通过抗氧化应激反应,保护血脑屏障的完整性和功能,抑制过度自噬,保护星形胶质细胞,促进神经突触生长,发挥神经保护作用.

目的:探究蓝萼甲素对急性髓系白血病(AML)U937 细胞增殖、凋亡、自噬及沉默信息调节因子 1(SIRT1)/叉头框转录因子 O1(FoxO1)信号通路的影响.方法:体外培养 AML U937 细胞,取培养至对数生长期的U937 细胞分为对照组(常规培养 U937 细胞)、三氧化二砷组(在含 U937 细胞的培养基中加入 2 μmol/L 的三氧化二砷)、蓝萼甲素低(在含 U937 细胞的培养基中加入 2 μmol/L 蓝萼甲素)、高(在含 U937 细胞的培养基中加入4 μmol/L蓝萼甲素)浓度组,继续培养 48h后.四甲基偶氮唑蓝法检测 U937 细胞增殖率,流式细胞术检测 U937细胞凋亡率,单丹磺酰尸胺荧光染色观察 U937 细胞自噬小体数量,荧光定量 PCR 法检测 U937 细胞 SIRT1、FoxO1 mRNA表达水平,蛋白印迹法检测 U937 细胞 SIRT1、FoxO1 蛋白表达水平.结果:与对照组相比,三氧化二砷组、蓝萼甲素低、高浓度组 U937 细胞增殖率显著降低(均P<0.05),凋亡率、自噬小体数量、SIRT1、FoxO1 mRNA和蛋白表达水平显著升高(均P<0.05);与三氧化二砷组相比,蓝萼甲素低、高浓度组 U937 细胞增殖率显著升高(均P<0.05),凋亡率、自噬小体数量、SIRT1、FoxO1 mRNA和蛋白表达水平显著降低(均P<0.05);与蓝萼甲素低浓度组相比,蓝萼甲素高浓度组 U937 细胞增殖率显著降低(P<0.05),凋亡率、自噬小体数量、SIRT1、FoxO1 mRNA和蛋白表达水平显著升高(均P<0.05).结论:蓝萼甲素能抑制U937 细胞的增殖,促进其凋亡和自噬,其机制可能与激活 SIRT1/FoxO1 信号通路有关.

目的:通过观察小檗碱(BBR)对卵巢颗粒细胞衰老的影响,探究其保护作用及调节机制.方法:应用H2O2诱导建立人卵巢颗粒样肿瘤(KGN)细胞衰老模型;设置空白组、模型组、BBR高剂量(1 μmol·L-1)组和BBR低剂量(0.5 μmol·L-1)组,模型组与BBR组加入浓度为10 μmol·L-1H2O2,孵育40 min.通过细胞增殖与活性检测(CCK-8)分析检测BBR对KGN细胞增殖的影响;通过β-半乳糖苷酶染色检测BBR对KGN细胞衰老状态的影响;应用流式细胞术检测BBR对KGN细胞凋亡和ROS含量的影响;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测BBR对KGN细胞抗凋亡蛋白B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)/促凋亡蛋白Bcl-2相关X蛋白(Bax)比值、胱天蛋白酶-3(Caspase-3)、叉头框转录因子O1(FoxO1)及过氧化氢酶(CAT)mRNA表达的影响;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测BBR对KGN细胞沉默信息调节因子1(SIRT1)、超氧化物歧化酶2(SOD2)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、FoxO1、自噬相关蛋白微管相关蛋白轻链3Ⅱ(LC3BⅡ)、自噬关键分子酵母Atg6(Beclin-1)及泛素结合蛋白p62蛋白表达的影响.结果:H2O2诱导40 min后,与空白组比较,模型组细胞增殖率显著下降(P＜0.01);与模型组比较,BBR干预组细胞增殖率明显上升(P＜0.05);β-半乳糖苷酶染色结果显示,与空白组比较,模型组细胞呈现明显的衰老状态(P＜0.01),BBR干预组细胞衰老情况较模型组显著降低(P＜0.01);流式细胞术检测显示,与空白组比较,模型组细胞凋亡率显著上升(P＜0.01),BBR干预组细胞凋亡率较模型组明显降低(P＜0.05);同时,与空白组比较,模型组ROS含量显著增加(P＜0.01);与模型组比较,BBR干预组细胞ROS含量显著降低(P＜0.01);Real-time PCR结果显示,与空白组比较,模型组KGN细胞CAT、Bcl-2/Bax mRNA表达明显降低,Caspase-3与FoxO1 mRNA表达明显增加(P＜0.05);与模型组比较,BBR干预后KGN细胞CAT与Bcl-2/Bax mRNA表达明显增加(P＜0.05),Caspase-3与FoxO 1 mRNA表达较模型组明显降低(P＜0.05).Western blot结果显示,与空白组比较,模型组SIRT1、SOD2及p62蛋白水平显著降低(P＜0.01),JNK、FoxO1、LC3B Ⅱ与Beclin-1蛋白水平明显升高(P＜0.05);BBR干预后,SIRT1、SOD2及p62蛋白水平较模型组显著增加(P＜0.01),JNK、FoxO1、LC3BⅡ与Beclin-1蛋白水平较模型组明显降低(P＜0.05).结论:BBR具有抑制卵巢颗粒细胞衰老效应,其机制与通过SIRT1/FoxO1通路介导抑制细胞凋亡与自噬有关.

目的 探讨miR-125a-3p对骨关节炎大鼠软骨细胞活性、氧化应激反应及细胞沉默信息调节因子 1/叉头框转录因子o1(SIRT1/Foxo1)蛋白表达的影响.方法 将40 只大鼠随机分为对照组(健康大鼠)、模型组(骨关节炎大鼠,造模后不做其他处理及干预)、miR-125a-3p组(骨关节炎大鼠,造模成功7d后于大鼠左膝关节关节腔内注射miR-125a-3p抑制剂)、阿利吉仑组(骨关节炎大鼠,造模成功 7d后给予大鼠 50 mg/kg阿利吉仑灌胃),每组10 只.通过氧化应激反应检测超氧物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、乳酸脱氢酶(LDH),HE、番红O、Masson 染色检查大鼠软骨损伤情况,TUNEL检测软骨细胞凋亡,RT-PCR与免疫印迹检测SIRT1、Foxo1 基因及蛋白水平.结果 软骨细胞凋亡率模型组高于miR-125a-3p组与阿利吉仑组(P<0.05),miR-125a-3p组与阿利吉仑组比较差异无统计学意义(P>0.05).HE、番红O、Masson 染色显示,模型组大鼠关节软骨面骨裂隙形成;miR-125a-3p组与阿利吉仑组大鼠关节软骨表面变得光滑,无明显裂隙.RT-PCR与免疫印迹检测显示,与模型组相比,miR-125a-3p组与阿利吉仑组 SOD、GSH、SIRT1 水平均升高(P<0.05),MDA、LDH、Foxo1 水平均降低(P<0.05).结论 miR-125a-3p通过调控SIRT1/Foxo1 信号通路,可降低氧化应激反应,抑制软骨细胞凋亡,改善骨关节炎病情.