目的:探究蓝萼甲素(GLA)调控NOD样受体蛋白3对H9C2心肌细胞缺血再灌注诱发细胞焦亡的影响。方法:将H9C2心肌细胞分为对照组(control组)；缺氧复氧组(H/R)，建立大鼠心肌细胞体外缺血再灌注模型(缺氧4 h，复氧4 h)，GLA低剂量(5 μmol/L)组和高剂量(10 μmol/L)组分别预处理大鼠心肌细胞24 h后，在进行H/R处理。通过细胞计数试剂盒(CCK-8)、检测乳酸脱氢酶(LDH)检测细胞活性；蛋白免疫印迹法(Western blot)检测焦亡相关蛋白：NOD样受体蛋白3(NLRP3)、裂解的半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-1(cleaved-Caspase-1)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、Gasdermin蛋白家族D(GSDMD)以及N端GSDMD(N-Gasdermin D，N-GSDMD)的表达。通过实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测NLRP3 mRNA的表达水平；组间比较采用单因素方差分析。结果:H/R组细胞活性低于对照组(1.000比0.401±0.026， F＝916.488， P<0.05)，GLA低剂量组、高剂量组细胞比H/R组细胞活性高于对照组(0.469±0.014、0.520±0.009比0.401±0.026， F＝916.488， P<0.05)；Western blot结果显示：NLRP3/β-肌动蛋白(β-actin)在对照组、H/R组、GLA低剂量组和高剂量组中比值分别为0.763±0.103、1.223±0.049、0.820±0.054、0.807±0.161，差异有统计学意义( F＝13.093， P<0.05)；cleaved-Caspase-1/β-actin在对照组、H/R组、GLA低剂量组和高剂量组中比值分别为0.525±0.050、0.944±0.059、0.789±0.621、0.705±0.069，差异有统计学意义( F＝24.900， P<0.05)；ASC/β-actin在对照组、H/R组、GLA低剂量组和高剂量组中比值分别为0.630±0.204、1.027±0.235、0.731±0.199、0.652±0.255，差异有统计学意义( F＝10.202， P<0.05)；GSDMD/β-actin在对照组、H/R组、GLA低剂量组和高剂量组中比值分别为0.640±0.148、1.202±0.173、0.852±0.196、0.638±0.073，差异有统计学意义( F＝8.797， P<0.05)，N-GSDMD/β-actin在对照组、H/R组、GLA低剂量组和高剂量组中比值分别为0.455±0.083、1.169±0.187、0.936±0.124、0.675±0.171，差异有统计学意义( F＝22.273， P<0.05)。 结论:蓝萼甲素能够抑制H9C2心肌细胞缺血再灌注损伤诱导细胞焦亡的发生，其机制可能与蓝萼甲素抑制NLPR3炎性小体表达与激活有关。

目的:观察蓝萼甲素预处理对H 2O 2诱导H9c2心肌细胞损伤模型的保护作用，并采用网络药理学方法预测蓝萼甲素抗H9c2心肌细胞凋亡的作用机制。 方法:将H9c2心肌细胞按随机数字表法分为空白对照组、模型组及蓝萼甲素低、中、高剂量组。空白对照组使用无血清培养液处理。模型组采用无血清培养4 h后，加入250 μmol/L H 2O 2干预6 h。蓝萼甲素低、中、高剂量组分别给予蓝萼甲素0.125、0.250、0.500 μg/ml预处理4 h后，加入浓度为250 μmol/L H 2O 2干预6 h。采用MTT法检测心肌细胞活力，观察细胞形态，采用Annexin Ⅴ-FITC/PI荧光双染及Hoechst 33258荧光染色检测细胞凋亡情况。通过Pubchem数据库获得蓝萼甲素的化学结构式，使用Swiss Target Prediction和Pharmmapper平台预测蓝萼甲素潜在靶点，利用GeneCards数据库筛选蓝萼甲素抗H9c2心肌细胞凋亡的作用靶点。采用Cytoscape软件构建蓝萼甲素作用的靶点网络，通过String数据库和Cytoscape软件绘制蛋白相互作用网络，并用Metascape数据库对靶点进行GO及KEGG通路富集分析。 结果:与模型组比较，蓝萼甲素低、中、高剂量组H9c2心肌细胞活力[(66.56±6.51)%、(79.21±6.89)%、(94.06±5.19)%比(51.75±4.14)%]升高( P<0.01)，细胞凋亡率[(24.12±4.71)%、(17.42±4.39)%、(7.65±1.56)%比(36.73±5.65)%]降低( P<0.01)。网络药理学分析结果提示，蓝萼甲素有22个与抗H9c2心肌细胞凋亡相关的靶点，主要调节氧化应激、细胞迁移、激酶结合活性等，可调节MAPK1、VEGFA、MMP9、NOS3、MMP2、MAPK14等靶点通路，发挥抗H9c2心肌细胞凋亡作用。 结论:蓝萼甲素预处理对H 2O 2诱导H9c2心肌细胞损伤有保护作用，其机制可能通过多靶点-多途径发挥抗氧化应激和减少细胞凋亡的作用。

目的 探究蓝萼甲素(GLA)对阿尔茨海默病(AD)大鼠神经炎症及高迁移率族蛋白B1-晚期糖基化终末产物受体(HMGB1-RAGE)信号通路的影响.方法 通过在脑室注射Aβ1-42溶液建立AD大鼠模型,并将大鼠随机分为假手术组、模型组、多奈哌齐组、GLA低剂量组、GLA高剂量组、GLA高+HMGB1组,每组15只.Morris水迷宫实验检测大鼠学习和记忆能力;HE染色检测海马组织病理形态学变化;ELISA检测海马组织中TNF-α、IL-6、IL-1β的含量;免疫荧光检测小胶质细胞标记蛋白Iba-1和星形胶质细胞标记蛋白GFAP的表达;Western blotting检测海马组织中HMGB1-RAGE通路相关蛋白的表达.结果 与假手术组相比,模型组大鼠逃避潜伏期、TNF-α、IL-6、IL-1β的含量、Iba-1和GFAP蛋白阳性表达面积及HMGB1、RAGE、TLR4、p-NF-κB p65/NF-κB p65表达均升高(P<0.05),停留目标象限时间、穿越平台次数减少(P<0.05);与模型组相比,GLA低、高剂量组大鼠逃避潜伏期、TNF-α、IL-6、IL-1β的含量、Iba-1和GFAP蛋白阳性表达面积及HMGB1、RAGE、TLR4、p-NF-κB p65/NF-κB p65表达均降低(P<0.05),停留目标象限时间、穿越平台次数增多(P<0.05),且GLA高剂量组和多奈哌齐组差异无统计学意义(P?0.05);进一步使用HMGB1重组蛋白进行回补实验,发现GLA对神经炎症的抑制作用被逆转,且RAGE水平升高(P<0.05).结论 GLA可能通过抑制HMGB1-RAGE信号通路减轻AD大鼠的神经炎症.

目的 探讨蓝萼甲素(GLA)对骨肉瘤(OS)细胞的作用及机制.方法 将不同浓度的GLA作用于骨肉瘤细胞(143B、HOS、U2OS);CCK8法检测不同浓度GLA处理24 h、48 h、72 h后的细胞活性,选取影响最为明显的细胞系作为工具细胞进行深入研究;采用细胞克隆形成实验检测细胞增殖能力;采用划痕实验检测细胞迁移能力;采用Transwell实验检测细胞侵袭能力;采用流式细胞术检测细胞凋亡;采用RT-qPCR实验和Western Blot实验分析潜在的分子机制.结果 CCK8实验显示GLA以浓度依赖方式抑制骨肉瘤细胞的恶性增殖,且对143B细胞系的增殖抑制最为明显;细胞克隆形成实验、划痕实验、Transwell实验和流式细胞术表明,GLA抑制143B细胞的增殖、迁移和侵袭能力,并促进143B细胞凋亡;RT-qPCR实验和Western Blot实验显示GLA可明显下调IL-6/STAT3通路相关蛋白的mRNA和蛋白表达,但不影响IL-6下游MAPK级联通路和PI3K通路相关蛋白的表达;GLA可抑制细胞周期和凋亡相关蛋白(Cyclin D1、Bcl-2、XIAP)的表达.结论 蓝萼甲素可能通过调控IL-6/STAT3通路抑制骨肉瘤细胞的增殖、迁移和侵袭,并诱导细胞凋亡.

目的:探讨蓝萼甲素(GLA)对缺氧/复氧(H/R)诱导的 H9c2细胞损伤的保护作用以及与高迁移率族蛋白 B1(HMGB1)/Toll样受体 4(TLR4)/核因子κB(NF-κB)信号通路的关系.方法:体外培养H9c2心肌细胞并构建H9c2细胞H/R损伤模型,实验分为 6组:对照组(正常培养)、模型组(构建 H/R细胞模型)、GLA-L组(细胞中加入 5 μmol/L的 GLA后构建 H/R细胞模型)、GLA-M组(细胞中加入 10 μmol/L的 GLA后构建 H/R细胞模型)、GLA-H组(细胞中加入 20 μmol/L的 GLA后构建 H/R细胞模型)、GLA-H+甘草素组(细胞中加入 20μmol/L的GLA和 100μg/mL的HMGB1/TLR4/NF-κB通路抑制剂甘草素后构建H/R细胞模型).CCK-8法检测细胞存活率;流式细胞仪检测细胞凋亡率;DCFH-DA荧光探针法检测细胞内活性氧(ROS)水平;试剂盒测定细胞中乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量;酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测炎性因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平;实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测 HMGB1、TLR4、NF-κB p65 mRNA表达;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测HMGB1、TLR4、NF-κB p65蛋白表达.结果:与对照组比较,模型组H9c2细胞存活率和SOD含量明显降低,细胞凋亡率、LDH、MDA、ROS、TNF-α、IL-6含量及 HMGB1、TLR4表达与 NF-κB p65磷酸化水平均明显增加,差异均有统计学意义(P<0.05).与模型组相比,GLA-L组、GLA-M组、GLA-H组 H9c2细胞存活率和 SOD含量明显升高,细胞凋亡率、LDH、ROS、MDA、TNF-α、IL-6 含量及HMGB1、TLR4表达与NF-κB p65磷酸化水平明显降低,均呈剂量依赖性,差异均有统计学意义(P<0.05).与GLA-H组相比,GLA-H+甘草素组H9c2细胞 HMGB1、TLR4表达与 NF-κB p65磷酸化水平、细胞凋亡率、LDH、MDA、ROS、TNF-α、IL-6含量均进一步下降,细胞存活率和 SOD含量进一步上升,差异均有统计学意义(P<0.05).结论:GLA可能通过抑制 HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路,降低细胞凋亡率,减少炎性因子表达,进而保护 H9c2细胞免受 H/R诱导损伤.

目的:探究蓝萼甲素对急性髓系白血病(AML)U937 细胞增殖、凋亡、自噬及沉默信息调节因子 1(SIRT1)/叉头框转录因子 O1(FoxO1)信号通路的影响.方法:体外培养 AML U937 细胞,取培养至对数生长期的U937 细胞分为对照组(常规培养 U937 细胞)、三氧化二砷组(在含 U937 细胞的培养基中加入 2 μmol/L 的三氧化二砷)、蓝萼甲素低(在含 U937 细胞的培养基中加入 2 μmol/L 蓝萼甲素)、高(在含 U937 细胞的培养基中加入4 μmol/L蓝萼甲素)浓度组,继续培养 48h后.四甲基偶氮唑蓝法检测 U937 细胞增殖率,流式细胞术检测 U937细胞凋亡率,单丹磺酰尸胺荧光染色观察 U937 细胞自噬小体数量,荧光定量 PCR 法检测 U937 细胞 SIRT1、FoxO1 mRNA表达水平,蛋白印迹法检测 U937 细胞 SIRT1、FoxO1 蛋白表达水平.结果:与对照组相比,三氧化二砷组、蓝萼甲素低、高浓度组 U937 细胞增殖率显著降低(均P<0.05),凋亡率、自噬小体数量、SIRT1、FoxO1 mRNA和蛋白表达水平显著升高(均P<0.05);与三氧化二砷组相比,蓝萼甲素低、高浓度组 U937 细胞增殖率显著升高(均P<0.05),凋亡率、自噬小体数量、SIRT1、FoxO1 mRNA和蛋白表达水平显著降低(均P<0.05);与蓝萼甲素低浓度组相比,蓝萼甲素高浓度组 U937 细胞增殖率显著降低(P<0.05),凋亡率、自噬小体数量、SIRT1、FoxO1 mRNA和蛋白表达水平显著升高(均P<0.05).结论:蓝萼甲素能抑制U937 细胞的增殖,促进其凋亡和自噬,其机制可能与激活 SIRT1/FoxO1 信号通路有关.

目的 测定不同采摘时期蓝萼香茶菜中蓝萼甲素的含量,考察最适采收期;研究蓝萼香茶菜中蓝萼甲素的提取工艺.方法 HPLC法,色谱柱为Waters Symmetry C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为甲醇-水(70:30),检测波长250 nm,流速1.0 ml/min,柱温35℃,进样量10 μl;单因素试验法比对不同溶剂、不同提取方式对蓝萼甲素提取率的影响,正交试验法优选蓝萼甲素的乙醇提取工艺.结果 7月份采集的蓝萼香茶菜中蓝萼甲素含量最高;甲醇提取的蓝萼甲素含量最高为1.932 mg/g(n=3),95％乙醇次之为1.896mg/g(n=3);乙醇提取蓝萼甲素的最佳工艺为95％乙醇加热回流提取2h,提取1次,固/液比1∶15.结论 蓝萼香茶菜最宜采摘时间为7月份;乙醇提取工艺安全、稳定、成本低,适合工业生产.

为了探究二萜类化合物蓝萼甲素(glaucocalyxin A)对拟南芥4种磷脂酶的影响,以蓝萼甲素为供体,以哥伦比亚野生型拟南芥(Col-0)和4个拟南芥磷脂酶突变体株系(pla1-1 、pla2-1 、plc1-1和pldδ-2)为受体植物,通过施加不同浓度的蓝萼甲素(0、20、100 μmol·L-1)对5个拟南芥株系组织膜透性和渗透调节物质进行研究.结果表明:外施不同浓度的蓝萼甲素后,拟南芥5个株系中相对电导率和丙二醛(MDA)含量均显著升高,脯氨酸和可溶性蛋白含量呈现出先上升后下降的趋势,于24 h达到峰值,且不同的磷脂酶在调控其生理过程中具有不同的作用;表明蓝萼甲素作用与4种磷脂酶具有相关性,可通过调控4种磷脂酶来发挥部分化感作用.

蓝萼香茶菜[Rabdosia japonica (Burm.f.) Hara var.glaucocalyx (Maxim.) Hara]是中国民间草药,具有抗肿瘤活性.此研究的目的是探讨蓝萼甲素(glaucocalyxin A,GLA),一种从蓝萼香茶菜中分离纯化得到的二萜类化合物,诱导胶质瘤细胞凋亡的作用及其机制.通过检测C6大鼠胶质瘤细胞的存活率及干扰核糖核酸(ribonucleic acid,RNA)、聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)和蛋白质免疫印迹(Western blot)技术以探究细胞凋亡的分子信号机制.当GLA存在时,C6大鼠胶质瘤细胞的存活率明显降低,鸟嘌呤核苷酸交换因子H1 (guanine nucleotide-exchange factor,GEF-H1)表达上调,引起细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)蛋白磷酸化,造成细胞凋亡.因此,GLA诱导神经胶质细胞凋亡是通过激活GEF-H1/ERK途径.

目的:研究蓝萼甲素(GLA)对JAR细胞HMGB1炎症信号通路的调节作用,探讨GLA与HMGB1相互作用的机制.方法:不同浓度GLA(0.01、0.1、1、10μg/ml)刺激培养JAR细胞48 h后,qRT-PCR与Western blot分别检测HMGB1 RNA与蛋白水平的表达;荧光素酶报告基因检测NF-κB表达活性;激光共聚焦检测HMGB1在细胞中的分布情况;ELISA检测培养液HMGB1的含量.结果:0.1μg/ml GLA刺激培养JAR细胞,HMGB1表达与NF-κB活性升高最显著,随着GLA浓度的增加,两者表达水平反而下降;GLA刺激培养JAR细胞可引起HMGB1从胞核转移入胞浆,进而分泌到胞外.结论:GLA通过HMGB1信号通路调节JAR细胞炎症反应,且作用效果与剂量密切相关.