目的:探索阿扎胞苷（AZA）联合高三尖杉酯碱（HHT）治疗急性髓系白血病（AML）的协同效应及其分子机制。方法:采用细胞增殖、凋亡和克隆形成实验研究AZA联合HHT在AML中协同效应并计算两药协同效应指数（CI），通过转录组测序、通路抑制剂和基因敲降等方法，探索两药的协同机制。结果:与单药相比，AZA+ HHT可显著抑制AML细胞增殖，并具有显著的协同效应（U937、MV4-11和KG-1细胞中CI值均小于0.9）；AZA+HHT能显著抑制U937（ P<0.001）和MV4-11（ P<0.001）细胞的克隆形成，并显著促进U937（ P<0.001）和MV4-11（ P<0.001）细胞凋亡。AZA联合HHT通过激活整合应激反应（ISR）信号通路介导DDIT3-PUMA依赖的AML细胞凋亡。AZA联合HHT可明显下调c-MYC蛋白，通过激活ISR信号通路，调控c-MYC/DDIT3/PUMA轴，促进细胞凋亡发挥协同抗AML作用。 结论:AZA联合HHT通过激活ISR信号通路，调控c-MYC/DDIT3/PUMA轴，抑制细胞增殖和促进细胞凋亡，发挥协同抗AML作用。

目的:评价异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）治疗急性髓系白血病伴骨髓增生异常相关改变（AML-MRC）的疗效及预后因素，分析AML-MRC患者基因突变谱系并探讨影响移植预后的分子生物学特征。方法:对2006年至2020年于中国医学科学院血液病医院接受allo-HSCT的75例AML-MRC患者进行回顾性分析。将75例患者分为：H组[既往有骨髓增生异常综合征（MDS）或MDS/骨髓增殖性肿瘤（MPN）病史]、C组（新诊断的AML-MRC伴MDS相关细胞遗传学异常）和M组（新诊断的AML-MRC伴多系发育异常），分析三组患者临床特征差异以及对移植预后的影响。对43例患者行骨髓靶向二代测序（137个基因）。结果:①75例AML-MRC患者，男41例，女34例，中位年龄41（18~56）岁，中位随访时间为35（95% CI 30~49）个月，中位总生存（OS）时间为78个月（95% CI 23个月~未达到）。移植后3年OS率为57.1%（95% CI 45.6%~71.4%），无事件生存（EFS）率为52.0%（95% CI 40.8%~66.1%），累积复发率（CIR）为26.8%（95% CI 16.6%~30.0%），移植相关死亡率（TRM）为22.7%（95% CI 13.2%~33.8%）。多因素分析显示，移植前处于非第1次完全缓解（CR1）状态是移植后OS和EFS的独立危险因素。影响OS的独立危险因素还包括-5/5q-染色体核型异常、移植后未发生慢性移植物抗宿主病（慢性GVHD）。②75例患者中H组59例（78.7%），其中20例转化为白血病（转白）前曾接受去甲基化药物治疗；C组9例（12.0%），M组7例（9.3%）。M、H、C组移植后3年OS率分别为71.4%（95% CI 44.7%~100.0%）、55.0%（95% CI 41.8%~72.5%）、55.6%（95% CI 31.0%~99.7%）（ P=0.700），EFS率分别为71.4%（95% CI 44.7%~100.0%）、46.5%（95% CI 34.0%~63.8%）、55.6%（95% CI 31.0%~99.7%）（ P=0.600）；原发性AML-MRC与继发性AML-MRC相比，移植后3年OS、EFS率差异无统计学意义[61.9%（95% CI 41.9%~91.4%）对55.0%（95% CI 41.8%~72.5%）， P=0.600；61.9%（95% CI 41.9%~91.4%）对46.5%（95% CI 34.0%~63.8%）， P=0.400]。转白前接受去甲基化治疗（20例）与未接受去甲基化治疗（39例）患者比较，转白时间差异无统计学意义[195（16~937）d对162（9~3167）d， P=0.804]，且两组患者OS和EFS差异无统计学意义（ P=0.400， P=0.700）。③对43例（57.3%）患者骨髓样本行二代基因测序，共发现73个突变类型，检出率最高的是U2AF1（11例，25.6%），其他检出率>10%的突变包括RUNX1（10例，23.3%）、NRAS（10例，23.3%）、ASXL1（6例，14.0%）、PTPN11（5例，11.6%）、TET2（5例，11.6%）。单因素分析显示U2AF1[ P=0.875， HR=1.110（95% CI 0.295~4.195）]、RUNX1[ P=0.685， HR=0.728（95% CI 0.157~3.375）]、NRAS[ P=0.919， HR=0.923（95% CI 0.196~4.334）]突变对移植后OS没有影响。 结论:-5/5q-染色体异常、未发生慢性GVHD、移植前非CR1状态是影响AML-MRC患者移植后OS的独立危险因素；MHC亚组分类不是影响移植预后的因素；去甲基化药物治疗可能无助于延缓MDS患者转白以及延长移植后OS期。

目的:通过建立可诱导表达AML1-ETO（AE）融合基因的白血病细胞模型，研究AE融合基因对U937白血病细胞生物学功能的影响。方法:利用慢病毒载体系统，构建强力霉素（Dox）依赖的可诱导表达AE融合基因的U937细胞系（U937-AE）。在AE融合基因表达前后，分别采用CCK-8法、流式细胞术进行细胞增殖、周期、诱导分化检测，并进行转录组学测序和代谢组学测序分析，初步探讨AE融合基因对白血病细胞生物学功能的影响。结果:①成功构建Dox依赖的Tet-on调控系统，调控AE融合基因在U937-AE细胞中稳定表达。②诱导AE融合基因表达24 h后，表达AE的U937-AE细胞增殖倍率为3.47±0.07，低于AE阴性组的3.86±0.05（ P<0.05）；处于G 0/G 1期的细胞比例为（63.45±3.10）%，明显高于AE阴性组的（41.36±9.56）%（ P<0.05）；表达CD13、CD14的细胞比例较AE阴性组明显下降（ P<0.05）。③转录组学测序进行基因集富集分析显示，与静息相关、NF-κB和干扰素α/γ应答相关的炎症反应和免疫调节的基因集被明显富集在表达AE的U937-AE细胞。④U937-AE细胞表达AE融合基因后脂肪酸代谢发生紊乱，AE阳性组细胞的部分中、短链脂肪酸酰基肉碱的代谢物浓度降低[丙酰基-L-肉碱：AE阳性组0.46±0.13，AE阴性组1.00±0.27（ P<0.05）]；部分长链脂肪酸酰基肉碱的代谢物浓度升高[十四烷酰肉碱：AE阳性组1.26±0.01，AE阴性组1.00±0.05（ P<0.05）]。 结论:成功建立可诱导表达AE融合基因的白血病细胞模型。AE融合基因表达使U937-AE细胞增殖变慢、周期阻滞、分化受抑，炎症反应和免疫调节的相关基因集被明显富集，细胞的脂肪酸代谢发生紊乱。

目的:探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂西达本胺(CS055)、DNA甲基转移酶抑制剂地西他滨(DAC)单药和两药联合对急性髓系白血病细胞系U937细胞增殖、凋亡的影响及其可能作用机制。方法:体外培养的U937细胞经CS055(CS055单药组)、DAC(DAC单药组)单药或联合(联合用药组)处理后，并设不加药的阴性对照组，四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖抑制率、流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡情况，实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测DNA甲基转移酶1(DNMT1)mRNA表达，蛋白质印迹法(Western blot)分析乙酰化组蛋白H3、DNMT1的表达。结果:CS055、DAC处理U937细胞后，其增殖抑制率明显增高，呈时间-剂量依赖性。联合用药组的抑制作用较单药组更为明显；对照组、0.25 μmol/L CS055单药组、2.5 μmol/L DAC单药组及联合用药组72 h的凋亡率分别为(0.67±0.12)%、(23.43±0.50)%、(8.47±0.32)%、(32.73±0.42)%，联合组与各单药组比较，凋亡率显著增加；单药组应用CS055和DAC后DNMT1 mRNA和蛋白均表达下调，联合用药组表达下调更明显；单药组应用CS055和DAC后Ac-H3蛋白表达上调，联合组明显高于各单药组。结论:单独应用CS055、DAC对U937细胞均有增殖抑制、促凋亡作用，两药联合应用具有明显的协同效应；其机制可能是组蛋白去乙酰化酶抑制剂有去甲基化作用，去甲基化药物也有组蛋白去乙酰化酶抑制剂作用，两者联合既增加去甲基化作用又增加组蛋白去乙酰化作用。

背景:U937细胞可以作为急性髓系白血病细胞模型,用于研究急性髓系白血病的生物学特性、信号通路和治疗靶点.目前虽然已有研究报道长链非编码RNA KIAA0125在急性髓系白血病中呈高表达,但其在U937细胞中的生物学功能尚不清楚,在急性髓系白血病发生发展中的作用机制有待进一步阐明.目的:探讨长链非编码RNA KIAA0125在急性髓系白血病患者外周血中的表达水平及对U937细胞增殖、凋亡的影响.方法:RNA-seq分析急性髓系白血病患者骨髓单核细胞样本,筛选得到差异表达基因——长链非编码RNA KIAA0125,利用qRT-PCR检测长链非编码RNA KIAA0125在急性髓系白血病患者外周血中的表达进行验证,通过GEPIA数据库统计分析173例急性髓系白血病患者和70例健康人骨髓细胞中长链非编码RNA KIAA0125 mRNA的表达与预后的关系.随后使用重组慢病毒技术及CRISPR/Cas9-SAM技术分别构建敲低/过表达长链非编码RNA KIAA0125的U937细胞系,qRT-PCR检测长链非编码RNA KIAA0125敲低/过表达效率.接下来,使用CCK-8实验、流式细胞术及Western blot检测敲低/过表达长链非编码RNA KIAA0125对U937细胞增殖、凋亡的影响.最后,使用Western blot检测敲低/过表达长链非编码RNA KIAA0125对Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白的影响.结果与结论:①qRT-PCR结果显示长链非编码RNA KIAA0125在急性髓系白血病患者外周血中呈高表达,GEPIA数据库显示长链非编码RNA KIAA0125在急性髓系白血病患者骨髓细胞中呈高表达,高表达组具有更差的生存期;②敲低组长链非编码RNA KIAA0125的敲低效率为70%,成功构建了稳定敲低长链非编码RNA KIAA0125表达的U937细胞,过表达组长链非编码RNA KIAA0125的表达是Vector组的4倍,成功构建了稳定过表达长链非编码RNA KIAA0125的U937细胞;③敲低长链非编码RNA KIAA0125抑制U937细胞的增殖并促进其凋亡,过表达长链非编码RNA KIAA0125则促进U937细胞的增殖但对U937细胞的凋亡无显著影响;④敲低长链非编码RNA KIAA0125抑制Wnt/β-catenin信号通路活性,而过表达长链非编码RNA KIAA0125则激活Wnt/β-catenin信号通路.结果表明,长链非编码RNA KIAA0125在急性髓系白血病外周血中呈高表达,其可能通过调控Wnt/β-catenin信号通路影响U937细胞的增殖和凋亡,可能是急性髓系白血病的潜在预后标志物.

目的:探究长非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA)GA结合蛋白转录因子β亚基 1的反义RNA(antisense RNA of GA binding protein transcription factor β subunit 1,GABPB1-AS1)靶向微小 RNA-497-5p/热休克蛋白 8(microRNA-497-5p/heat shock protein 8,miR-497-5p/HSPA8)轴调控急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)细胞增殖、侵袭迁移及凋亡的作用和机制.方法:HL-60细胞分为正常对照组、si-NC组、si-GABPB1-AS1组、si-GABPB1-AS1+NC inhibitor组、si-GABPB1-AS1+miR-497-5p inhibitor组.qRT-PCR检测LncRNA GABPB1-AS1、miR-497-5p和HSPA8表达;双荧光素酶报告基因实验验证LncRNA GABPB1-AS1、miR-497-5p和HSPA8的靶向关系;MTT检测细胞活力;Edu检测细胞增殖;Transwell小室实验检测侵袭和迁移;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、HSPA8、肿瘤转移相关蛋白 2(metastasis-associated proteins,MTA2)、酵母Atg6同系物(homolog of yeast Atg6,Beclin-1)和Caspase-3蛋白水平;建立小鼠移植瘤模型验证LncRNA GABPB1-AS1对AML移植瘤生长的影响.结果:与人骨髓单核细胞相比,不同AML细胞系 THP-1、NB4、U-937、HL-60中 LncRNA GABPB1-AS1高表达[(1.29±0.10)、(1.58±0.12)、(2.02±0.17)、(3.17±0.24)vs.(1.02±0.07)]、miR-497-5p低表达[(0.94±0.07)、(0.75±0.03)、(0.57±0.03)、(0.25±0.01)vs.(1.05±0.09)].由于HL-60细胞中LncRNA GABPB1-AS1表达最高,故选择该细胞系进行功能验证实验.敲低LncRNA GABPB1-AS1能降低HL-60细胞活力、Edu阳性率、细胞侵袭数、迁移数、HSPA8 mRNA及HSPA8、PCNA和MTA2蛋白表达,增加凋亡率、miR-497-5p及Caspase-3和Beclin-1蛋白表达(P<0.05).miR-497-5p与LncRNA GABPB1-AS1、HSPA8之间分别存在靶向关系;抑制miR-497-5p表达能逆转LncRNA GABPB1-AS1敲低对HL-60细胞恶性生物学行为的抑制作用;抑制LncRNA GABPB1-AS1表达可抑制移植瘤生长.结论:LncRNA GABPB1-AS1敲低对AML细胞进展抑制作用,可能与上调miR-497-5p表达,下调HSPA8表达有关.

目的 研究急性髓系白血病(AML)患儿柔红霉素(DNR)耐药与程序性死亡受体配体-1(PD-L1)蛋白表达的相关性.方法 选取 2016 年 1 月至 2022 年 12 月郑州大学附属儿童医院收治的 110 例AML患儿骨髓样本作为研究组,以 50 名骨髓正常供体骨髓样本作为对照组.培养人AML细胞系HL60、THP-1、U-937、Molm-13,Western blot检测PD-L1 蛋白表达量.构建LV-PD-L1-shRNA、LV-PD-L1-WT-OE慢病毒载体,分析PD-L1 对Molm-13 细胞DNR耐药的影响及机制.结果 研究组PD-L1 蛋白表达量高于对照组,AML细胞系中PD-L1 蛋白表达量高于健康骨髓单个核细胞(BMMC)(P＜0.05),PD-L1 表达与AML患儿白细胞计数、骨髓原始细胞比率、预后危险分层、两个标准化学治疗方案后疾病缓解情况有关(P＜0.05).PD-L1 高表达组总生存率低于PD-L1 低表达组(P＜0.05).与LV-PD-L1-WT-OE组比较,LV-PD-L1-shRNA组PD-L1 mRNA表达量降低、细胞增殖活性降低、凋亡率升高(P＜0.05),LV-PD-L1-shRNA可提高Molm-13 细胞对DNR的敏感性.TCGA数据库分析显示,6-磷酸葡萄糖脱氢酶(G6PD)可能为PD-L1 潜在的目标基因.结论 PD-L1 在儿童AML中高表达,与患儿化疗耐药有关,其可能通过调控G6PD引起DNR耐药.

目的:探讨PIM1基因对急性髓系白血病(AML)U937细胞增殖、凋亡的影响,以及对JAK2/STAT3通路的调控作用.方法:收集初诊成人AML患者和单纯缺铁性贫血患者的骨髓单个核细胞,荧光定量PCR检测PIM1 mRNA表达.将AML细胞系U937细胞分为:U937组(U937细胞正常培养)、Si-PIM1组(U937细胞转染含PIM1 mRNA的低表达腺病毒载体)、Si-NC组(U937细胞转染不含PIM1 mRNA的低表达腺病毒载体)、CoA1组(U937细胞中加入浓度为20 μmol/L的JAK2激活剂CoA1)、Si-PIM1+CoA1组(U937细胞转染含PIM1 mRNA低表达的腺病毒载体并加入浓度为20 μmol/L的CoA1).培养24 h.荧光定量PCR和蛋白印迹法检测U937细胞PIM1 mRNA和蛋白、JAK2/STAT3通路、细胞周期、凋亡相关蛋白表达;噻唑蓝法检测细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞周期变化及凋亡率.结果:AML患者骨髓单个核细胞中PIM1mRNA表达水平高于单纯缺铁性贫血患者(P＜0.05).与U937 组相比,Si-PIM 1 组细胞 PIM1 mRNA 和蛋白、p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3、Cyclin D1、CDK2 蛋白、细胞增殖活性、S期比例、G2/M期比例降低(均P＜0.05),p27、Caspase-3蛋白、G0/G1期、凋亡率升高(均P＜0.05),而CoA1组上述指标的变化情况与Si-PIM1组正好相反,CoA1可逆转Si-PIM1对U937细胞的作用效果.U937组、Si-PIM1+CoA1组、Si-NC组U937细胞上述指标差异无统计学意义(P＞0.05).结论:敲低P1M1基因表达可抑制U937细胞增殖、促进凋亡,缓解ALM进程,且上述作用可能与抑制JAK2/STAT3通路活化有关.

目的:通过检测不同病情阶段急性髓系白血病(AML)患者CXC趋化因子配体8(CXCL8)的水平变化,分析其与AML患者临床病情及预后的关联性,探索骨髓微环境中CXCL8对白血病发生、发展及恶性生物学行为的调控机制,为AML的基础研究和临床诊治提供借鉴与参考.方法:收集不同病情阶段AML患者骨髓标本,采用ELISA检测CXCL8含量;利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测不同AML细胞系中CXCL8特异性受体CXCR1/2表达情况;选取U937细胞为AML疾病模型,给予不同浓度外源性rCXCL8干预U937细胞,观察细胞形态学变化,并利用CCK-8法检测细胞增殖,qRT-PCR检测CXCR1/2表达变化;将初诊AML患者BM-MSC与U937细胞共培养,ELISA检测共培养体系CXCL8变化差异;Annexin V/PI双染流式细胞术分别检测rCXCL8、anti-CXCL8对U937细胞凋亡的影响,Western blot揭示其间伴随的分子机制.结果:初诊及复发AML患者CXCL8水平显著高于健康者(P<0.05),复发阶段CXCL8水平显著高于其他病情阶段(P<0.01),而与健康者相比,CR阶段且无感染的AML患者CXCL8水平差异无统计学意义(P>0.05).BM-MSC与U937细胞共培养体系中CXCL8含量及其共培养体系下U937细胞CXCL8 mRNA水平均显著高于未加入BM-MSC的单培养Mono组(P<0.05).利用rCXCL8干预U937细胞可通过上调Bcl-2表达并下调Bax表达促进细胞增殖,并上调CXCL8特异性受体CXCR1/2表达.通过拮抗CXCL8(anti-CXCL8)后,上调Bax表达并下调Bcl-2表达同时抑制ERK1/2信号通路活化水平诱发U937细胞凋亡.结论:CXCL8与AML病情、预后转归密切相关,是AML患者疾病进展、预后评估的有效监测指标.骨髓微环境中CXCL8是介导白血病细胞恶性增殖、免疫逃逸的重要趋化因子,通过拮抗CXCL8可诱导U937细胞发生凋亡,其机制可能与Bcl-2家族蛋白表达变化、抑制ERK1/2信号通路活化水平有关.

目的:研究高三尖杉酯碱(HHT)对CEBPA蛋白的影响,探讨HHT治疗CEBPA双突变急性髓系白血病的作用机制.方法:构建K562 CEBPA p30表达细胞系,Western blot测定HHT、柔红霉素、阿糖胞苷处理前后K562 CEBPA p30表达细胞系以及U937、MOLM-13细胞系中外源和内源性CEBPA蛋白表达量的变化,测定蛋白酶抑制剂和蛋白合成抑制剂对CEBPA蛋白表达量的影响.用转录组RNA-seq分析与柔红霉素处理相比,HHT处理后基因表达和通路富集的差异.结果:无论是U937和MOLM-13细胞系中的内源性CEBPA蛋白还是K562 CEBPA p30表达细胞系中的外源性CEBPA蛋白,HHT均可降低其表达量(P＜0.05),而柔红霉素和阿糖胞苷无此效果.蛋白酶体抑制剂可增加CEBPA蛋白的表达量(P＜0.05),而蛋白合成抑制剂可减少CEBPA蛋白的表达量(P＜0.05).HHT处理上调了 K562 CEBPA p30细胞的核糖体生成相关通路,柔红霉素则不具有这种作用.结论:HHT可抑制CEBPA蛋白的合成,降低CEBPA蛋白的表达水平,这可能是HHT治疗CEBPA双突变急性髓系白血病的作用机制.