拉沙病毒(LASV)属于沙粒病毒科,哺乳动物病毒属.拉沙病毒可引起严重的急性出血热疾病,即拉沙热.拉沙热总病死率为1％,住院患者的病死率为15％.拉沙热主要在西非流行.目前,尚无FDA批准的针对LASV的特异性药物及疫苗,治疗策略仅限于在疾病早期给予利巴韦林,近年来报道的一些新型抗拉沙病毒药物已经进入临床研究阶段.根据美国疾病预防控制中心的报道,LASV被认为是A类病原体,它的高死亡率和治疗的局限性,世界卫生组织已经将拉沙热确定为研究和开发特效疫苗和药物的重中之重.本文将对拉沙病毒抑制剂的研究进展进行综述.

拉沙热(LF)是由拉沙病毒(LASV)引起的一种急性人畜共患病.拉沙病毒分离于1970年耶鲁医学院中一位来自尼日利亚东北部博尔诺州拉沙镇感染不明原因发热疾病的护士而得名,是一种高致病性病毒,被归类为生物安全4级病原体.拉沙热主要流行在几内亚、利比里亚、尼日利亚和塞拉利昂等西非国家.最近几年,拉沙病毒的流行范围在逐渐增加,美国、加拿大、英国、瑞典和德国等也报道了拉沙热病例,引起了人们的广泛关注.拉沙热主要临床表现为弥漫性血管内凝血、广泛的黏膜出血、多器官衰竭和休克,但发病早期症状与其他病毒性出血热相似,给患者的及时诊断与治疗带来巨大挑战.本综述旨在对拉沙病毒的病原学、流行病学以及病毒的诊断和防控措施进行介绍,为积极应对国内可能出现拉沙病毒的流行提供帮助.

沙粒病毒是一类有囊膜的RNA病毒.以哺乳动物为宿主的沙粒病毒(mammarenavirus)中,有9种可致人疾病,其中8种可致人出血热.拉沙病毒(Lassa virus,LASV)感染人所致拉沙出血热(Lassa hemorrhagic fever)流行范围广,有引发疾病大流行的可能,因此拉沙病毒被列为第一类病原微生物.目前针对沙粒病毒的疫苗和药物极为有限.本研究应用重组病毒技术,以HIV-1为核心,共构建了以9种沙粒病毒外壳蛋白包裹的重组病毒(arenavirus-GP/HIV-luc),在考察了它们对17株人、猴、鼠及蝙蝠的不同组织来源细胞进入水平的基础上,建立了沙粒病毒进入抑制剂药理活性评价模型,并用工具药验证.本研究建立的重组沙粒病毒进入抑制剂体外药效学评价模型特异性好,安全性高,可在生物安全二级(BSL-2)实验室进行实验,可为抗沙粒病毒药物和疫苗的活性评价提供技术平台,促进针对沙粒病毒出血热的药物及疫苗的研发.

沙粒病毒(Arenaviruses)属于沙粒病毒科(Arenaviridae),现分为爬行动物沙粒病毒属(Reptarenavirus,RARV)、哈特曼病毒属(Hartmanivirus,HARV)和哺乳动物沙粒病毒属(Mammarenavirus,MARV)3个属,分别以爬行动物和啮齿动物为宿主.沙粒病毒,特别是MARV可引起人类病毒性出血热,主要分布于非洲和美州,近几年来,亚洲也有病例报道,特别是我国鼠类中也证实存在一类新型沙粒病毒的感染,引起人们的关注.本文就沙粒病毒的结构、分类、疫苗、治疗及所致人类疾病的研究进展进行了综述.

目的 了解沙粒病毒的温州病毒(WENV)与淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)之间的抗原交叉反应情况.方法 分别利用原核细胞表达系统及昆虫细胞表达系统,对WENV、LCMV的核衣壳(nucleocapsid,N)蛋白进行表达、纯化;然后用纯化的原核细胞系统表达的蛋白免疫小鼠,制备抗血清.用纯化的昆虫细胞系统表达的蛋白作为检测抗原,与抗血清之间进行western-blot鉴定,分析WENV与LCMV N蛋白之间的交叉反应.结果 WENV与LCMV的N蛋白之间存在双向交叉反应.结论 LCMV与WENV的N蛋白之间存在抗原交叉反应,为进一步进行WENV的血清学研究提供重要的实验依据.

沙粒病毒是有包膜的RNA病毒,现已知其家族中的8种病毒可致人出血热.除胡宁病毒疫苗外,目前尚无针对其他沙粒病毒的疫苗或特效药物批准上市.本研究是在首次发现黄酮类化合物桔皮素的抗沙粒病毒活性的基础上,从34个桔皮素类似物中发现并确认了3,5,6,7,4'-五甲氧基黄酮的抗拉沙病毒的活性(EC50:5.2 μmol· L-1),并初步探讨了其构效关系.研究结果表明,3,5,6,7,4'-五甲氧基黄酮对拉沙病毒的抑制活性是通过阻断病毒融合过程实现的,该化合物对除拉沙病毒外的另外7种致出血热沙粒病毒进入宿主细胞过程也有阻断活性(EC50:0.84～10.2μmol· L-1),其抗毒谱与现有沙粒病毒进入抑制剂相比有明显优势.本研究结果为应对致出血热沙粒病毒的药物研发提供了物质储备,也为寻找和发现广谱抗沙粒病毒活性物质提供线索.

病毒性出血热(viral hemorrhagic fevers,VHFs)是一组由媒介病原微生物引起的以发热和出血为主要临床症状的急性传染病,可引起人类VHFs的病毒包括黄病毒科病毒[如西尼罗河病毒(West Nile Virus,WNV)、日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)、蜱传脑炎病毒(tick-borne encephalitis virus,TBEV)、黄热病毒(yellow fever virus,YFV)和登革病毒(Dengue virus,DENV)]、布尼亚病毒科病毒[如汉坦病毒(Hantavirus,HV)、克里米亚-刚果出血热病毒(Crimean-Congo hemorrhagic fever virus,CCHFV)、发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒(severe fever with thrombocytopenia syndrome bunyavirus,SFTSV)]、丝状病毒科病毒[如埃博拉病毒(Ebola virus,EBOV)和马尔堡病毒(Marburg virus,MARV)]、沙粒病毒科病毒[如拉沙病毒(Lassa virus,LASV)和Lujo病毒]、披膜病毒科病毒[如基孔肯雅病毒(Chikungunya virus,CHIKV)].近年新发突发VHFs病例不断增加,且目前尚无有效治疗药物,VHFs严重威胁人类健康.本文就VHFs的病原学、临床特征、快速早期诊断及疫苗研究等方面作一综述.

拉沙病毒和马秋波病毒同属于沙粒病毒科,人类感染后病死率很高,对人类生命健康造成了严重威胁.沙粒病毒在基因组转录过程中存在与其他分节段负链RNA病毒相似的抢帽机制,位于病毒聚合酶N端的核酸内切酶结构域负责切割宿主mRNA,而其C端负责结合宿主mRNA帽子.目前对哺乳动物沙粒病毒聚合酶C端的特征知之甚少.为此构建了拉沙病毒和马秋波病毒聚合酶C端的重组表达载体,并利用E.coli原核系统进行表达和后续纯化,获得了不同聚体形式的C端蛋白,通过分析超速离心实验和负染电镜观察对其不同的聚体形式进行了表征.最后通过大量筛选结晶条件,得到了拉沙病毒聚合酶C端的晶体,为进一步研究其三维结构和功能机制奠定了基础.

Flexal病毒(Flexal virus,FLEV)和Whitewater Arroyo病毒(Whitewater Arroyo virus,WWAV)属沙粒病毒,经鼠传播,可引起人类严重传染病,主要分布于美洲,有因野外工程而感染或国际物流和人员往来而输入的风险.本研究通过检索、分析FLEV和WWAV基因组序列,参照同科属病毒遗传进化特征,确定病毒基因组保守区,筛选分子检测靶基因,设计PCR扩增引物和检测探针,建立两种沙粒病毒的实时荧光RT-PCR检测方法,并进行灵敏性、特异性和重复性初步评价.结果 表明,所建立的FLEV和WWAV检测方法与其他病毒无交叉反应,扩增效率大于95％,检出限分别为100copies/μL和20copies/μL,变异系数在2％以内.上述结果显示,本研究所建立的FLEV和WWAV检测方法的特异性强,灵敏性与重复性均处于常规病毒性传染病分子诊断可接受范围,可应用于疑似病例的快速检测和相关病原的筛查和流行病学调查.

病毒性出血热(VHF)是一类临床症状相似的疾病,主要由属于沙粒病毒科、丝状病毒科、汉坦病毒科和黄热病毒科的部分有包膜的RNA病毒引起.临床上这类疾病表现为发热、疲劳、眩晕、肌痛以及血管破裂出血和多器官衰竭等症状.大部分病毒具有人畜共患性,在第一宿主内为隐性感染,而对人体的感染是致命的.临床与实验研究结果表明在病毒性出血热中T细胞的应答十分重要,与损伤及发病机制密切相关.我们以VHF中T细胞的免疫应答为切人点,重点描述T细胞在病毒性出血热中的免疫保护作用及相关致病机制,同时对T细胞在VHF的疫苗研制中的潜在作用进行总结,为深入开展致病机制研究、疫苗及药物研发奠定基础.