目的:浮舰蛋白(flotillin-2,FLOT2)是典型的致瘤蛋白和潜在的肿瘤治疗靶点,但靶向FLOT2的干预策略仍未确定.翻译后修饰作为表观调控的重要方式,对蛋白质的活性、定位和稳定性等特性具有重要的调控作用,揭示蛋白质翻译后修饰的调控机制和功能是靶向治疗开发的一种有效手段.本研究旨在研究鼻咽癌中FLOT2赖氨酸乙酰化修饰的调控机制及其功能,为靶向FLOT2的肿瘤干预手段提供新思路.方法:利用PhosphoSitePlus数据库分析FLOT2的赖氨酸乙酰化位点,并构建赖氨酸乙酰化位点突变的FLOT2突变体[FLOT2(K211R)];用组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylases,HDAC)抑制剂曲古菌素A(trichostatin A,TSA)、Sirt家族去乙酰化酶抑制剂烟酰胺(nicotinamide,NAM)处理鼻咽癌细胞,TSA处理转染FLOT2突变体质粒的人胚肾细胞(human embryonic kidney,HEK)-293T细胞;利用免疫共沉淀(co-immunoprecipitation,Co-IP)检测FLOT2的总赖氨酸乙酰化水平以及特定赖氨酸(K)位点突变对FLOT2总赖氨酸乙酰化水平的影响.用蛋白质印迹法检测TSA处理未转染/转染FLOT2突变体质粒后的鼻咽癌细胞中FLOT2/FLAG-FLOT2的蛋白质表达,实时反转录聚合酶链反应(real-time reverse transcription PCR,real-time RT-PCR)检测TSA处理后鼻咽癌细胞中FLOT2 mRNA的表达.用TSA分别联合MG132或氯喹(chloroquine,CQ)处理鼻咽癌细胞后,检测FLOT2的蛋白质表达.用放线菌酮(cycloheximide,CHX)分别处理已转染FLAG-FLOT2(WT)或FLAG-FLOT2(K211R)质粒的HEK-293T细胞,检测FLAG-FLOT2、FLOT2(K211R)的蛋白质表达水平以反映蛋白质的降解速率.通过BioGrid数据库查询FLOT2与HDAC6之间是否可能存在相互作用,并采用Co-IP验证.用FLAG-FLOT2(WT)/FLAG-FLOT2(K211R)质粒分别联合空白对照(Vector)/HDAC6质粒转染HEK-293T细胞,分为FLAG-FLOT2(WT)+Vector、FLAG-FLOT2(WT)+HDAC6、FLAG-FLOT2(K211R)+Vector、FLAG-FLOT2(K211R)+HDAC6共4组,分析K211R突变对FLOT2总赖氨酸乙酰化水平的影响.在6-0B细胞中,分别过表达FLOT2(WT)和FLOT2(K211R),用细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)、平板克隆形成和Transwell侵袭检测FLOT2乙酰化位点突变体的生物学功能.结果:PhosphoSitePlus数据库显示FLOT2的K211位点存在乙酰化修饰,Co-IP结果证实FLOT2蛋白存在明显的乙酰化修饰,且TSA可以显著上调FLOT2的总乙酰化修饰水平,而NAM则无此作用;K211位点突变后FLOT2的总赖氨酸乙酰化水平显著下降,且不受TSA影响.TSA下调鼻咽癌细胞中FLOT2的蛋白质表达水平,而不影响FLOT2 mRNA的表达水平,也不影响转染FLAG-FLOT2(K211R)的鼻咽癌细胞中FLOT2(K211R)的蛋白质表达水平.FLOT2(K211R)的蛋白质降解速率显著慢于FLOT2(WT)的降解速率.蛋白酶体抑制剂MG132可以阻止TSA引起的FLOT2降解,溶酶体抑制剂CQ则无此功能.BioGrid数据库数据显示FLOT2与HDAC6可能存在相互作用,Co-IP结果证实FLOT2与HDAC6抗体可以相互共沉淀对方蛋白.在敲减HDAC6表达的鼻咽癌细胞中,FLOT2的总赖氨酸乙酰化水平显著提高;共转染HDAC6和FLAG-FLOT2(WT)可显著降低总赖氨酸乙酰化水平,而共转染HDAC6和FLAG-FLOT2(K211R)不影响总赖氨酸乙酰化水平.敲减HDAC6可以显著下调FLOT2的蛋白质水平而不影响其mRNA水平;MG132可以阻止敲减HDAC6引起的FLOT2降解.敲减HDAC6,FLOT2的降解速率显著加快.转染FLOT2(K211R)突变体的鼻咽癌细胞增殖速度和侵袭能力显著强于转染FLOT2(WT)的细胞.结论:FLOT2 K211位点存在乙酰化修饰,HDAC6通过介导FLOT2 K211的去乙酰化修饰抑制FLOT2经蛋白酶体途径降解,维持其在鼻咽癌中的稳定和促瘤功能.

目的 研究舰载保存去白细胞悬浮红细胞中红细胞计数、血红蛋白、红细胞压积、平均红细胞体积、红细胞分布宽度变异系数(RDW-CV)和红细胞分布宽度标准差(RDW-SD)参数的变化.方法 根据《献血者健康检查要求》(GB 18467-2011),于出海前1 d,随机采集和制备去白细胞悬浮红细胞10人份(2 U).每份血液分别取样,检测相关参数,作为航行前数据.然后每份血液等分为二,标记为对照组和试验组,分别储存于实验室和医疗船储血冰箱,于航行第21天取样进行去白细胞悬浮红细胞相关参数的检测.结果 ①对照组和试验组的红细胞数量和血红蛋白浓度均低于航行前,红细胞数量两组间与航行前比较差异无统计学意义(P=0.319),而血红蛋白浓度变化较显著(P=0.002);②两组的红细胞压积和平均红细胞体积均高于航行前,红细胞压积在两组间与航行前比较变化大(P=0.015),而平均红细胞体积差异不明显(P=0.051);③两组的RDW-SD和RDW-CV均大于航行前, RDW-SD在两组间与航行前比较变化大(P<0.001),而RDW-CV差异不明显(P=0.528).结论 去白细胞悬浮红细胞在海上保存过程中,红细胞数量和血红蛋白浓度随保存时间延长而降低,红细胞压积、平均红细胞体积、RDW-SD和RDW-CV随保存时间延长而增大.远航对去白细胞悬浮红细胞相关参数有一定影响,但与常规储血冰箱(4 ±2)℃保存的变化趋势仍较一致.

目的 开展相变材料运血箱海上血液前送补给实地评估,对携行的悬浮红细胞质量进行评价研究,为海上血液冷链储运系统的完善提供参考.方法 模拟海上血液前送补给实际情况,依托海军某综合补给任务,开展相变材料运血箱保存悬浮红细胞陆地前送(100 min)、海上前送(45 h)及前送补给悬浮红细胞继续在舰船上储运(7d)等的检验评估,并就悬浮红细胞储运过程中游离血红蛋白含量、血液生化指标等进行检测.结果 在血液前送阶段,相变材料运血箱内温度由4.1℃上升至9.5℃,游离血红蛋白、血钾、乳酸脱氢酶含量分别升高至(0.083 ±0.032)g/L、(15.097 ±1.791)mmol/L和(106.00 ±17.83)U/L;在血液储存阶段,海上保存悬浮红细胞的游离血红蛋白、血钾、乳酸脱氢酶含量分别升高至(0.111 ±0.035)g/L、(27.238 ±3.509)mmol/L 和(227.00 ± 111.94)U/L,血钠含量降低至(113.63 ±4.012)mmol/L.结论 相变材料运血箱可在较复杂环境条件下(多种运输途径、持续温度变化、携行及舰船振荡),保持箱内血液在较长时间(45 h)维持在恒定温度范围(4~10℃),并保证前送血液质量.此外,在海上储存多天的悬浮红细胞游离血红蛋白含量更高,储存损伤较陆地常规保存更大.

目的 探讨和研究海上航行对舰载保存去白细胞悬浮红细胞生化指标的影响与变化.方法 根据《献血者健康检查要求》(GB 18467-2011),于出海前1 d,随机采集和制备去白细胞悬浮红细胞10人份(2 U).每份血液等分为两份,标记为对照组和试验组,分别于长航第1、3、5、7、14、21天取样进行生化指标检测.结果 ①总蛋白(P=0.235)和白蛋白(P=0.119)浓度随保存时间的延长变化不明显;两组的总蛋白(P=0.825)和白蛋白(P=0.834)浓度差异无统计学意义.②肌酐(P=0.001)和尿酸(P=0.001)浓度随保存时间的延长变化比较显著;两组肌酐(P=0.643)和尿酸(P=0.923)浓度差异无统计学意义.③总胆固醇浓度随保存时间的延长变化不明显(P=0.354),而甘油三酯浓度随保存时间的延长变化比较显著(P=0.005);两组的总胆固醇(P=0.959)和甘油三酯(P=0.910)浓度差异无统计学意义.④乳酸脱氢酶(P<0.001)、羟丁酸脱氢酶(P<0.001)和肌酸激酶浓度(P<0.001)随保存时间的延长而逐渐升高;两组乳酸脱氢酶(P=0.759)、羟丁酸脱氢酶(P=0.528)和甘油三酯(P=0.918)浓度差异无统计学意义.⑤分组效应与时间效应的交互作用对渗透压(P=0.968)和葡萄糖浓度(P=0.406)影响不明显,两组的渗透压(P=0.569)和葡萄糖浓度(P=0.115)差异无统计学意义.结论 在4~5级海况条件下,长航对去白细胞悬浮红细胞的储存具有一定的影响,但与常规储血冰箱(4 ±2)℃保存的主要生化指标结果变化仍比较相近.该研究结果对进一步研究海上血液保障具有重要的临床意义.

浮舰蛋白-1(flotillin-1,FLOT-1)属于脂筏标记蛋白,参与多种细胞生理活动,与许多肿瘤发生发展密切相关.FLOT-1在乳腺癌、食管鳞状癌、肾细胞癌(renal cell carcinoma,RCC)、移行细胞癌(transitional cell carcinoma,TCC)、非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)、肝细胞癌等肿瘤中均高表达,并与临床分期、转移、浸润和预后相关.本文综述了FLOT-1的结构和功能,及其在多种人类实体肿瘤中的作用.

Flotillin-l(浮舰蛋白-1)是脂筏的标记蛋白.它不但参与多种细胞正常的生理活动,也在许多肿瘤发生和发展中起重要作用.近年发现Flotillin-1在肺腺癌、乳腺癌、肝细胞癌等细胞中高表达,并与临床等级、预后差、总体存活率低有关联.简要综述了Flotillin的组成、结构和基本功能,以及在疾病中的作用.

目的 探讨子宫内膜癌组织中浮舰蛋白-1(Flotillin-1)的表达情况及与患者临床特征和预后的关系.方法 收集150例子宫内膜癌患者的子宫内膜癌组织及其对应的癌旁正常组织(距肿瘤边缘4 cm).采用免疫组织化学染色法检测子宫内膜癌组织及癌旁正常组织中Flotillin-1蛋白的表达情况,分析子宫内膜癌组织中Flo-tillin-1蛋白表达情况与患者临床特征及预后的关系.结果 子宫内膜癌组织中Flotillin-1蛋白的阳性表达率为36.0％(54/150),明显低于癌旁正常组织的68.0％(102/150),差异有统计学意义(P＜0.01).不同年龄的子宫内膜癌患者子宫内膜癌组织中Flotillin-1蛋白的阳性表达率比较,差异无统计学意义(P﹥0.05);高+中分化、无淋巴结转移、国际妇产科联盟(FIGO)分期为Ⅰ期、浸润深度≤1/2的子宫内膜癌患者子宫内膜癌组织中Flotillin-1蛋白的阳性表达率均高于低分化、有淋巴结转移、FIGO分期为Ⅱ～Ⅲ期、浸润深度﹥1/2的子宫内膜癌患者,差异均有统计学意义(P＜0.05).单因素分析结果显示,低分化、有淋巴结转移、FIGO分期为Ⅱ～Ⅲ期、浸润深度﹥1/2以及Flotillin-1阴性表达患者的中位生存期均短于高+中分化、无淋巴结转移、FIGO分期为Ⅰ期、浸润深度≤1/2及Flo-tillin-1阳性表达的患者,差异均有统计学意义(P＜0.05);多因素Cox比例风险回归分析结果显示,低分化、有淋巴结转移、FIGO分期为Ⅱ～Ⅲ期、浸润深度﹥1/2以及Flotillin-1阴性表达均是影响子宫内膜癌患者预后的独立危险因素(P＜0.01).结论 Flotillin-1蛋白在子宫内膜癌组织中的表达水平较低,且其表达水平与子宫内膜癌患者的临床特征有关,对于子宫内膜癌的发生发展具有重要的临床意义.

目的 检测阿尔茨海默病(AD)早期患者血清中浮舰蛋白(Flotillin)水平,同时进行精神状态量表(MMSE)评分,并探讨Flotillin mRNA水平对AD的早期诊断价值.方法 选取52例AD早期患者为研究对象(AD组),同期选取68例健康体检者作为对照(对照组).采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测两组受试者血清中Flotillin mRNA水平,并进行MMSE评分;分析AD患者血清Flotillin mRNA水平与MMSE总评分相关性;分析血清Flotillin mRNA水平对AD的早期诊断价值;Logistic回归分析影响AD发生的危险因素.结果 AD组血清Flotillin mRNA水平高于对照组,MMSE总评分、定向力评分、记忆力评分、计算力评分、回忆评分、语言评分均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);AD患者血清中Flotillin mRNA水平与MMSE总评分呈负相关(r=-0.586,P=0.000);血清Flotillin mRNA诊断AD的曲线下面积(AUC)为0.842,截断值为1.486,特异性为88.2％,敏感度为69.2％;Flotillin mRNA高表达、MMSE低评分是影响AD发生的危险因素.结论 血清Flo-tillin mRNA水平在AD患者中明显升高,且与MMSE总评分呈负相关.血清Flotillin mRNA可能有助于疾病早期诊断,对评价AD的早期危险性有重要意义.

浮舰蛋白flotillin-1和flotillin-2参与多个细胞生理活动过程,包括调节细胞黏附、物质内吞、蛋白质分选与再循环和细胞迁移,同时也与一些退行性疾病和肿瘤的发生发展有密切联系.该文介绍了flotillins的结构与定位,综述了flotillins从发现至今影响个体形态发生、神经元生长和功能以及调控多个信号转导途径等几个方面的研究进展,并展望flotillins在疾病机制研究以及临床诊断治疗中的作用.