目的:观察脂筏特征蛋白2(FLOT2)在肝内胆管细胞癌中的表达，探讨FLOT2对肝内胆管细胞癌增殖，迁移的作用。方法:收集2021年9月至2022年12月郑州大学人民医院健康体检人员20例、肝内胆管结石(HL)＋肝炎(HA)患者20例和肝内胆管细胞癌患者10例共50例检测血液样本，行蛋白组学检测，结合GEPIA2数据库分析FLOT2在肝内胆管细胞癌中的表达。构建小干扰RNA(siRNA)沉默肝内胆管癌细胞HuCCT1中的目的基因，以NC-FLOT2为对照组，si-FLOT2为实验组，实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)及蛋白质印迹法(Western blot)检测肝内胆管癌细胞中FLOT2的表达水平。细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖能力及细胞毒性，划痕愈合实验检测细胞迁移能力，流式细胞术检测细胞凋亡程度，组间比较采用 t检验。 结果:蛋白组学表明在肝内胆管细胞癌患者中，FLOT2表达较正常人群升高。qPCR实验中，HuCCT1细胞NC组表达量为(0.77±0.10)，实验组表达明显下降，分别为0.29±0.09、0.15±0.01、0.11±0.02( t＝11.634、11.725、13.432， P均<0.01)。Western blot实验表明，对照组FLOT2条带灰度值为(0.91±0.03)，实验组表达降低(0.41±0.14， t＝5.160， P<0.05)。划痕实验中下调FLOT2可降低肝内胆管癌细胞迁移能力，48 h后划痕愈合率对照组为(0.89±0.09)%，实验组分别为(0.49±0.08)%、(0.50±0.06)%、(0.60±0.07)%( t＝11.170、5.626、3.838， P均<0.01)。CCK-8增殖实验对照组为5.49±0.53，实验组(4.19±0.22， t＝7.164， P<0.05；3.33±0.25、1.83±0.28， t＝10.065、10.593， P均<0.01)。凋亡实验中，实验组凋亡率[(6.92±0.89)%]，敲低FLOT2后实验组较对照组凋亡明显增多[(10.03±0.31)%， t＝－6.828， P<0.05；(12.43±0.83)%、(13.87±0.38)%， t＝－11.709、－12.101， P均<0.01]。CCK-8毒性实验表明，RBE和HuCCT1对吉西他滨的IC 50分别为(8.90±1.28)、(34.31±7.40) μg/ml，RBE对吉西他滨的IC 50明显低于HuCCT1( t＝－7.077， P<0.05)。qPCR结果表明，HuCCT1中FLOT2表达量明显高于RBE[(0.004±0.001)、(0.019±0.005)， t＝－5.187， P<0.05]。敲低FLOT2后，HuCCT1细胞株对吉西他滨的IC 50值明显降低，实验组IC 50[(7.30±0.60)、(6.52±0.61)、(7.03±1.08) μg/ml， t＝－17.173、－15.079、－18.737， P均<0.01]。 结论:FLOT2在肝内胆管细胞癌中表达升高，并影响肝内胆管癌细胞HuCCT1的增殖、迁移、凋亡和耐药能力。

目的:探讨健康者和RA患者血浆来源外泌体对人静脉内皮细胞功能的影响。方法:收集健康者和RA患者血浆，用试剂盒分离外泌体后，通过透射电镜观察其形态特征、纳米颗粒分析仪（NTA）测量其大小及免疫印迹实验对表面标志蛋白进行鉴定。通过CCK8、细胞划痕、Transwell小室实验检测外泌体对内皮细胞增殖和迁移侵袭能力的影响；RT-PCR检测细胞分泌缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）、血管内皮生长因子（VEGF）含量变化。采用 t检验。 结果:透射电镜观察到双凹圆盘状的囊性小泡，纳米颗粒跟踪分析（NTA）测其直径在50~150 nm，蛋白质印迹法显示出血浆外泌体表面标志蛋白flotillin1和CD81，相对分子质量分别为47 000和26 000。内皮细胞活性随着外泌体浓度增高而降低，但2组差异均无统计学意差义（ t=1.86， P>0.05）。与健康者血浆外泌体相比，RA血浆外泌体可显著抑制内皮细胞迁移[（2.24±0.23）和（1.46±0.13）， t=6.60， P<0.05]，侵袭能力减弱[（0.673±0.030）和（0.827±0.030）， t=8.11， P<0.05]，分泌HIF-1α、VEGF细胞因子的能力也显著降低，差异均有统计学意义[（0.706±0.020）和（0.908±0.040）， t=10.10， P<0.05；（0.692±0.010）和（0.841±0.020）， t=14.90， P<0.05]。 结论:血浆来源的外泌体可能在RA并血管损伤中发挥重要的作用。

概要:本文旨在对flotillins在相关细胞进程中的作用、在多种肿瘤中的作用和机制及其在肿瘤分子诊断和靶向治疗等方面的潜在应用价值进行综述.图1以示意图的形式直观地展示flotillin-1和flotillin-2的蛋白结构;表1对flotillin-1和flotillin-2在各种肿瘤中的表达异常情况、发挥的生物学功能及其机制进行汇总;在图2中,以模式图的形式展示flotillin-1和flotillin-2在肿瘤细胞中参与的信号通路及导致肿瘤细胞出现的不同表型.许多研究表明,flotillins在多种肿瘤中过表达,并且与肿瘤的发生发展、分期和转移密切相关.转移标志着肿瘤由局部病变发展为不可治愈的系统病变,是肿瘤预后的一个重要影响因素,但是其机制尚未完全阐述.因此,对其机制进行进一步探索有助于促进恶性肿瘤分子诊断、预后和精准治疗的发展.

目的 探讨针刺对阿尔茨海默病模型小鼠SAMP8的行为学影响及其作用机制.方法 将60只6月龄雄性SAMP8小鼠随机分为针刺治疗组、模型对照组和非穴位对照组,每组20只,另备同月龄雄性SAMR1小鼠20只作为正常对照组.针刺治疗组采用针刺肾俞、百会、血海、膈俞进行干预.8星期后,采用Morris水迷宫对各组小鼠的行为学进行检测,同时采用western blot检测小鼠海马组织Flotillin-1、NEP以及Aβ42表达情况.结果 Morris水迷宫实验中,与模型对照组比较,针刺治疗组小鼠的逃避潜伏期明显缩短(P＜0.05),其停留在原平台象限的时间和穿越原平台次数增加(P＜0.05);与模型对照组比较,非穴位对照组小鼠的逃避潜伏期无明显差别(P＞0.05),其停留在原平台象限的时间和穿越原平台次数也无明显差别(P＞0.05).Flotillin-1在针刺治疗组的表达较模型对照组明显减弱(P＜0.05),而在非穴位对照组与模型对照组之间,Flotillin-1的表达水平无明显差别(P＞0.05);NEP在针刺治疗组的表达较模型对照组明显增强(P＜0.05),而在非穴位对照组与模型对照组之间,NEP的表达水平无明显差别(P＞0.05);Aβ42在针刺治疗组的表达较模型对照组明显减弱(P＜0.05),而在非穴位对照组与模型对照组之间,Aβ42的表达水平无明显差别(P＞0.05).结论 针刺能够明显改善AD模型小鼠SAMP8的学习记忆能力,降低SAMP8小鼠海马Flotillin-1含量及上调NEP的表达,从而减少Aβ42表达,减轻神经毒性,发挥神经保护作用.

Background:Corneal stromal cells (CSCs) are components of the corneal endothelial microenvironment that can be induced to form a functional tissue-engineered corneal endothelium.Adipose-derived mesenchymal stem cells (ADSCs) have been reported as an important component of regenerative medicine and cell therapy for corneal stromal damage.We have demonstrated that the treatment with ADSCs leads to phenotypic changes in CSCs in vitro.However,the underlying mechanisms of such ADSC-induced changes in CSCs remain unclear.Methods:ADSCs and CSCs were isolated from New Zealand white rabbits and cultured in vitro.An Exosome Isolation Kit,Western blotting,and nanoparticle tracking analysis (NTA) were used to isolate and confirm the exosomes from ADSC culture medium.Meanwhile,the optimal exosome concentration and treatment time were selected.Cell Counting Kit-8 and annexin V-fluorescein isothiocyanate/propidium iodide assays were used to assess the effect of ADSC-derived exosomes on the proliferation and apoptosis of CSCs.To evaluate the effects ofADSC-derived exosomes on CSC invasion activity,Western blotting was used to detect the expression of matrix metalloproteinases (MMPs) and collagens.Results:ADSCs and CSCs were successfully isolated from New Zealand rabbits.The optimal concentration and treatment time of exosomes for the following study were 100 μg/ml and 96 h,respectively.NTA revealed that the ADSC-derived exosomes appeared as nanoparticles (40-200 nm),and Western blotting confirmed positive expression of CD9,CD81,flotillin-1,and HSP70 versus ADSC cytoplasmic proteins (all P ＜ 0.01).ADSC-derived exosomes (50 μg/ml and 100 μg/ml) significantly promoted proliferation and inhibited apoptosis (mainly early apoptosis) of CSCs versus non-exosome-treated CSCs (all P ＜ 0.05).Interestingly,MMPs were downregulated and extracellular matrix (ECM)-related proteins including collagens and fibronectin were upregulated in the exosome-treated CSCs versus non-exosome-treated CSCs (MMP1∶ t =80.103,P ＜ 0.01;MMP2∶ t =114.778,P ＜ 0.01;MMP3∶ t =56.208,P ＜ 0.01;and MMP9∶ t =60.617,P ＜ 0.01;collagen Ⅰ∶ t =-82.742,P ＜ 0.01;collagen Ⅱ∶ t =-72.818,P ＜ 0.01;collagen Ⅲ∶ t =-104.452,P ＜ 0.01;collagen Ⅳ∶ t =-133.426,P ＜ 0.01,and collagen V∶ t =-294.019,P ＜ 0.01;and fibronectin:t =-92.491,P ＜ 0.01,respectively).Conclusion:The findings indicate that ADSCs might play an important role in CSC viability regulation and ECM remodeling,partially through the secretion of exosomes.

目的 研究FGFR2C342Y基因突变引起的Crouzon综合征患者与正常人血清来源外泌体的蛋白组分的差异.方法 筛选出Crouzon综合征FGFR2C342Y突变患者的血清作为实验组,健康献血者的血清作为对照组,并使用超速离心法从中提取外泌体,展示了同位素标记相对和绝对定量(iTRAQ)蛋白组学分析结果,利用IPA通路分析软件分析其差异蛋白,以探讨exosome差异蛋白在颅缝早闭中的作用.结果 通过质谱分析共检测到62个蛋白,其中22个蛋白与骨相关数据库重合,其功能主要关于发育异常、遗传性异常、肌肉骨骼系统发育和功能、组织形态、视觉系统发育和功能等,均与Crouzon综合征的临床表现相关.网络分析发现“组织损伤和异常、血液系统的发育和功能、细胞信号转导和相互影响”相关的网络.结论 我们的研究显示了FGFR2C342Y Crouzon综合征患者的蛋白组学特点,展示了差异蛋白参与的功能和网络,并找到了关键蛋白FN1,FN1促进成骨细胞黏附增殖和矿化,这个蛋白可能对于Crouzon综合征的进一步研究提供新思路.

脂筏标记蛋白flotillin-1属于SPFH(stomatin/prohibitin/flotillin/HflK/C)蛋白家族,并广泛参与细胞膜信号传导和细胞膜物质转运等细胞活动,从1997年首次发现到现在已20年.越来越多的研究发现flotillin-1蛋白在许多人类疾病的发生与发展中起着重要的作用.本文主要从flotillin-1蛋白与多种癌症(乳腺癌、肝癌、肺癌、食管鳞状癌,结肠癌等)关系的角度,就近年来的相关文献进行综述,以期推动flotillin-1蛋白在疾病中的研究和潜在应用.

浮舰蛋白-1(flotillin-1,FLOT-1)属于脂筏标记蛋白,参与多种细胞生理活动,与许多肿瘤发生发展密切相关.FLOT-1在乳腺癌、食管鳞状癌、肾细胞癌(renal cell carcinoma,RCC)、移行细胞癌(transitional cell carcinoma,TCC)、非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)、肝细胞癌等肿瘤中均高表达,并与临床分期、转移、浸润和预后相关.本文综述了FLOT-1的结构和功能,及其在多种人类实体肿瘤中的作用.

目的:检测脂筏标记蛋白-2(Flotillin-2,Flot-2)在胃癌组织中的表达水平,分析Flot-2的表达与胃癌临床病理特征及预后的关系.方法:选取南昌大学第二附属医院胃肠外科于2009年1月至2010年4月行手术切除的胃癌组织112例及与其配对的癌旁组织,采用免疫组织化学法检测肿瘤组织中Flot-2的表达水平,采用Spearman检验Flot-2表达与胃癌临床病理特征及预后的关系,采用Kaplan-Meier法及Log-Rank检验分析其生存数据.结果:Flot-2阳性表达呈黄色颗粒,主要在细胞质中表达,胃癌组织中的表达量明显高于癌旁组织(53.57％ vs 46.43％,P＜0.05).Flot-2表达与患者的性别、年龄、肿瘤位置、分化程度无显著关联(P＞0.05),与肿瘤大小、浸润深度、淋巴结转移、远处转移及AJCC分期均显著关联(均P＜0.01).Flot-2低表达组患者的5年总体生存率明显高于高表达组(P＜0.01).Cox回归分析显示,远处转移、AJCC分期和Flot-2蛋白表达水平为胃癌患者预后的独立危险因素.结论:胃癌组织中高表达Flot-2,其与患者不良预后密切相关,是胃癌预后的独立危险因素,有望成为胃癌治疗的潜在新靶点.

目的 探讨FLOT1基因小干扰RNA(siRNA)联合姜黄素对肾癌细胞凋亡的影响及其机制.方法 以LipofectamineTM 2000为载体,将FLOTl-siRNA转染人肾癌786-0细胞,Western blot检测转染siRNA后的细胞中FLOT1的蛋白表达.后续研究分FLOT1-siRNA组、姜黄素组和FLOT1-siRNA+姜黄素组进行细胞干预,并设置空白对照组,细胞计数试剂盒(CCK-8)及流式细胞仪分别检测4组细胞活力及凋亡率;H2 DCFHDA探针检测4组细胞ROS含量;Western blot检测4组细胞磷酸化信号转导与转录激活因子-3(p-STAT3)及信号转导与转录激活因子-3(STAT3)信号通路下游增殖细胞核抗原(PCNA)和B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)的蛋白表达.结果 FLOT1-siRNA转染786-0细胞后FLOT1的表达(0.087±0.010)明显受到抑制,与空白对照组(0.454±0.038)比较差异有统计学意义(t=16.177,P=0.000).si-FLOT1 (0.491±0.053)或姜黄素(0.542±0.058)均可抑制786-0细胞活力,诱导786-0细胞凋亡(18.22±1.07)％、(12.39±0.86)％及ROS产生(189.5±8.2)、(147.7±7.1),下调p-STAT3(0.118±0.014)、(0.110±0.012)和PCNA(0.229±0.025)、(0.302±0.034)表达,上调bax(0.206±0.021)、(0.123±0.014)表达,与NC组比较差异均有统计学意义(0.792±0.065)、(1.62±0.25)％、(57.7±3.5)、(0.202±0.023)、(0.577±0.049)、(0.069±0.010)(t=6.736、7.378、12.796、10.112、7.186、2.832,P=0.000、0.000、0.000、0.000、0.000、0.022),联合使用si-FLOT1和姜黄素对786-0细胞活力(0.378±0.044)抑制、细胞凋亡(24.18±1.22)％及ROS产生(249.3±9.4)诱导、p-STAT3(0.054±0.008)和PCNA表达(0.135±0.016)下调及bax表达(0.411±0.038)上调作用更明显,且与单一的si-FLOT1或姜黄素比较差异均有统计学意义(t=5.132、4.491、3.456、6.140、10.752、15.106,P=0.001、0.002、0.009、0.000、0.000、0.000).结论 FLOT1 siRNA或姜黄素均可抑制肾癌细胞活力,诱导细胞凋亡,两者合用对细胞活力及凋亡作用更明显,机制可能与细胞内ROS提高及抑制STAT3信号有关.