目的:评估时差成像培养系统（time-lapse imaging，TLI）对小鼠胚胎发育潜能及组蛋白表观修饰的影响。方法:选择SPF级雌性ICR小鼠，促排卵后取成熟M Ⅱ卵子进行体外受精（ in vitro fertilization，IVF），获取成功受精的合子，分别在TLI和常规培养体系（standard incubators，SI）中进行体外培养，记录两组胚胎的2-细胞率、4-细胞率、8-细胞率、桑葚胚率、囊胚率和孵出率。通过Hoechst、OCT4及CDX2抗体进行免疫荧光染色，分别统计囊胚细胞总数、内细胞团数和滋养外胚层细胞数。两组囊胚移植入第2.5天代孕母鼠子宫，统计植入率及活胎率。通过对组蛋白H3第4位赖氨酸三甲基化（H3K4me3）、组蛋白H3第9位赖氨酸二甲基化（H3K9me2）和组蛋白H3第9位赖氨酸乙酰化（H3K9ac）的免疫荧光染色，评估两组胚胎组蛋白表观修饰情况。 结果:TLI组和SI组的早期胚胎发育情况、内细胞团和滋养外胚层细胞数、植入率和活胎率比较差异均无统计学意义（均 P>0.05）。两组囊胚的组蛋白H3K4me3、H3K9me2和H3K9ac的表达水平差异均无统计学意义（均 P>0.05）。 结论:利用TLI体外培养不会影响胚胎的发育潜能以及组蛋白修饰。

机体受到感染、外伤后发生以防御反应为主的炎症应答，高迁移率族蛋白1（HMGB1）为重要的“炎症介质”，广泛存在于各种细胞中介导炎症应答。然而HMGB1在炎症中的生物学功能因蛋白修饰种类和细胞中定位的不同而呈现差异，其在细胞核中发生赖氨酸残基乙酰化、赖氨酸残基甲基化、半胱氨酸残基氧化、丝氨酸残基磷酸化、天冬酰胺残基糖基化、腺苷二磷酸-核糖基化及赖氨酸残基乳酸化修饰，蛋白修饰后由细胞核迁移到细胞质，并释放到细胞外。细胞外游离的HMGB1可与晚期糖基化终产物受体、Toll样受体结合，活化细胞和调控炎症应答。笔者从HMGB1翻译后修饰、释放、生物学作用及结合受体等方面，就其调控炎症反应机制的研究进展进行综述，为寻找炎症干预靶标提供理论依据。

目的:对反式转录激活因子Tat第41位赖氨酸(K41)在HIV-1转录活化过程中的作用进行探讨，并对B、C亚型HIV-1中Tat K41的作用进行比较。方法:通过荧光素酶活性实验检测野生型Tat、突变型Tat K41A、Tat K41R对HIV-1转录活性的影响，并比较B、C亚型HIV-1中Tat K41作用的差异；通过免疫沉淀(immunoprecipitation, IP)实验检测B、C亚型HIV-1中Tat K41是否影响Tat与SIRT1的结合；通过Western blot检测细胞核内B、C亚型HIV-1的Tat K41是否影响p65 K310的乙酰化水平。结果:与B亚型HIV-1不同，C亚型HIV-1的Tat K41突变后显著降低荧光素酶活性，减弱C亚型Tat与SIRT1的结合，降低细胞核内p65 K310ac的水平。结论:C亚型Tat K41在HIV-1转录中发挥重要作用。

目的:探讨二烯丙基三硫化物（DATS）对人胃癌细胞叶酸受体α（FRα）表达的影响及相关调控机制。方法:选择人胃癌细胞株BGC823、AGS，用10、20、40、80 μmol/L DATS处理BGC823细胞48 h，5、10、20、40 μmol/L DATS处理AGS细胞48 h，以6 μmol/L组蛋白去乙酰化酶（HDAC）抑制剂曲古抑菌素A（TSA）处理细胞作为表观遗传研究的阳性对照，以未经DATS处理的细胞作为阴性对照。采用流式细胞术检测DATS诱导胃癌细胞凋亡情况。在DATS处理BGC823、AGS细胞48 h后，换无DATS细胞培养液培养不同时间，检测FRα蛋白表达变化。采用6 μmol/L TSA或40 μmol/L DATS处理BGC823细胞和AGS细胞，蛋白质印迹法检测FRα、HDAC1和HDAC2以及组蛋白H3赖氨酸9位点乙酰化修饰（H3K9ac）和组蛋白H4赖氨酸5位点乙酰化修饰（H4K5ac）蛋白表达水平。应用BGC823细胞接种BALB/c裸鼠，建立移植瘤模型，DATS组裸鼠腹腔注射10 mg/kg DATS 16 d后，提取荷瘤组织蛋白，进行靶蛋白表达的检测；对照组注射等量0.9% NaCl溶液。结果:BGC823和AGS细胞经梯度浓度DATS处理后细胞FRα蛋白表达均呈剂量依赖性上调（ F＝65.68， P<0.01； F＝26.65， P<0.01）。撤除DATS后，BGC823和AGS细胞FRα蛋白表达逐渐降低并恢复至初始水平（ F＝74.57， P<0.01； F＝30.92， P<0.01）。随着DATS处理浓度的增加，BGC823、AGS细胞凋亡率均增加（ F＝32.95， P<0.01； F＝38.97， P<0.01）。BGC823、AGS细胞经TSA处理后FRα蛋白表达分别上调约4.5倍（ t＝-12.62， P<0.01）和3.6倍（ t＝-10.00， P<0.01）。分别经40、20 μmol/L DATS作用后，BGC823和AGS细胞FRα蛋白表达水平上调（均 P<0.01），HDAC1、HDAC2的表达受抑制（均 P<0.01），H3K9ac和H4K5ac的乙酰化修饰水平升高（均 P<0.01）。裸鼠荷瘤实验显示，给药后第16天，DATS组移植瘤体积小于对照组[（214±39）mm 3比（577±98）mm 3]，差异有统计学意义（ t＝4.86， P<0.01）。与对照组相比，DATS组移植瘤组织FRα蛋白表达上调约2倍（ t＝-5.29， P<0.01），HDAC1和HDAC2蛋白表达水平均下调（ t＝9.36， P<0.01； t＝9.88， P<0.01）。 结论:DATS以剂量依赖和可逆性方式上调人胃癌BGC823、AGS细胞FRα蛋白表达，其机制可能与DATS影响肿瘤细胞组蛋白乙酰化修饰有关。

目的:探讨高氧环境对氧诱导视网膜病变(OIR)模型小鼠肾脏代谢物的影响，了解病理性视网膜血管新生和肾损伤之间的潜在机制。方法:采用随机数字表法将16只健康SPF级C57/B6J新生小鼠随机分为OIR组与正常对照组，每组8只。小鼠自出生后标准饲养至第7天(P7)，OIR组小鼠和母鼠置于(75±2)%的高氧箱中饲养至P12，然后正常饲养；正常对照组一直在正常环境下饲养。各组小鼠在饲养P17时采用二氧化碳安乐死，取视网膜组织铺片并行血管异凝集素(IB4)染色，观察视网膜血管形态、中央无灌注区及病理性新生血管情况；另取小鼠肾组织进行液相色谱－质谱分析，取其对应小鼠的全血进行抗凝处理，通过离心沉淀，获得不含细胞成分的血浆，对血浆进行靶向代谢组学分析。使用代谢组学数据处理软件Progenesis QI v2.3对质谱信息进行解析，用无监督的主成分分析及正交偏最小二乘法分析(OPLS-DA)来区分各组间代谢轮廓的总体差异，比较2个组间代谢物的倍数变化。以变量权重值>1且 P<0.05为条件筛选出差异代谢物。基于KEGG数据库对差异代谢物进行代谢通路富集分析。 结果:视网膜铺片IB4染色结果显示，P17时正常对照组小鼠视网膜血管分布均匀；OIR组小鼠视网膜周边血管迂曲、紊乱，中央可见大面积无灌注区域形成，在视网膜无灌注区和血管区交界处形成大量新生血管簇，呈强荧光染色。OIR组小鼠视网膜无灌注区相对面积为(25.16±3.50)%，明显大于正常对照组的(0.63±0.30)%，差异有统计学意义( t＝12.07， P<0.001)。OPLS-DA模型参数R2X cum、解释率R2Y cum、和预测率Q2 cum分别为0.578、0.978和0.857，表明OPLS-DA模型具有较好的预测能力。共筛选鉴定到26个主要的差异代谢物，其中上调表达17个，下调表达9个，包括甘油磷脂类化合物[PC 20∶4(5Z，8Z，11Z，14Z)/0∶0、PC 22∶6(4Z，7Z，10Z，13Z，16Z，19Z)/0∶0、PC 14∶1(9Z)/20∶2(11Z，14Z)、PE P-18∶0/20∶4(6E，8Z，11Z，14Z)(5OH[S])]、氨基酸类代谢物(精氨酸、鸟氨酸、哌可酸和羟基赖氨酸)、嘌呤类(鸟嘌呤、次黄嘌呤、羟嘌醇)和脂肪酸类(15-棕榈酸甲酯、2，6，8，12-Tetramethyl-2，4-tridecadien-1-ol)等。差异代谢物主要富集于ABC转运蛋白(L-精氨酸、牛磺酸、肌醇、腺苷、N-乙酰基-D-氨基葡萄糖、L-谷氨酰胺)、氨酰-tRNA生物合成(L-异亮氨酸、L-脯氨酸、L-精氨酸、L-组氨酸、L-谷氨酰胺)、精氨酸生物合成(L-精氨酸、L-鸟氨酸、L-谷氨酰胺)等代谢通路。血浆的靶向代谢组学结果显示，差异的氨基酸类代谢产物主要富集于氨酰-tRNA生物合成、精氨酸生物合成代谢以及ABC转运蛋白等代谢通路。 结论:OIR小鼠的ABC转运蛋白、氨酰-tRNA生物合成、精氨酸生物合成代谢通路可能参与了肾损伤及早产儿视网膜病变新生血管形成的病理变化过程。

胶质母细胞瘤(GBM)是中枢神经系统肿瘤中最具侵袭性和致死性的类型，以进展快、易复发和治疗抵抗为特征。腺病毒早期区域1A蛋白结合p300蛋白(简称p300)是一种功能丰富的蛋白，可作为转录辅激活物和赖氨酸乙酰转移酶发挥作用。目前研究表明p300在GBM的发生、增殖、侵袭和放化疗抵抗中具有着重要价值。本文现围绕p300的结构、功能及其参与GBM发生发展的多种途径、转化应用前景等方面的相关研究进展进行综述，以期为GBM研究提供更多的参考借鉴。

目的:探讨砷暴露大鼠肝脏组蛋白H3第18位赖氨酸乙酰化（H3K18ac）水平与砷致肝损伤的关系，为砷中毒肝损伤机制及干预研究提供新靶点。方法:选取健康Wistar大鼠24只，雌雄各半，按体质量（80~100 g）采用随机数字表法分为对照组，低、中、高砷剂量组，每组6只。对照组给予去离子水灌胃，低、中、高砷剂量组按体质量用亚砷酸钠（NaAsO 2，2.00 g/L）溶液灌胃（灌胃量依次为2.5、5.0、10.0 mg/kg·bw），每周染砷6 d，持续4个月。实验终末收集各组大鼠肝脏组织及外周血，采用电感耦合等离子体质谱仪（ICP-MS）检测肝砷含量；酸抽提法提取大鼠肝脏组蛋白，酶联免疫吸附试验（ELISA）检测H3K18ac水平；采用全自动生化分析仪检测大鼠血清总胆汁酸（TBA）及谷氨酰胺转移酶（γ-GT）水平。 结果:对照组，低、中、高砷剂量组肝砷含量[中位数（四分位数间距）：2.41（1.83，2.99）、62.64（56.26，65.17）、68.81（62.58，77.24）、88.48（74.47，98.99）μg/g]比较差异有统计学意义（ H=18.98， P < 0.01），低、中、高砷剂量组均高于对照组（ P均< 0.05）；且大鼠肝砷含量随染砷剂量增加逐渐升高（ Z趋势=5.04， P < 0.01）。对照组，低、中、高砷剂量组血清TBA、γ-GT水平比较差异有统计学意义（ F=11.11、12.26， P均< 0.05）；且大鼠血清TBA、γ-GT水平随染砷剂量增加逐渐升高（ F趋势=32.09、33.22， P均< 0.01）。对照组，低、中、高砷剂量组肝组织H3K18ac水平比较差异有统计学意义（ F=4.62， P < 0.05），中、高砷剂量组显著低于对照组（ P均< 0.05）；且大鼠肝组织H3K18ac水平随染砷剂量增加逐渐降低（ F趋势=12.82， P < 0.01）。相关性分析结果显示，大鼠肝砷含量与肝功能指标TBA、γ-GT水平呈正相关（ r=0.631、0.863， P均< 0.01），与H3K18ac水平呈负相关（ r=- 0.476， P < 0.05）；H3K18ac水平与肝功能指标TBA、γ-GT水平呈负相关（ r=- 0.628、- 0.544， P均< 0.05）。H3K18ac对砷致肝损伤的中介效应检验结果显示，组蛋白H3K18ac在砷暴露对肝功能指标的影响中具有部分中介效应，其对TBA和γ-GT水平的中介效应分别占总效应的37.10%[95%置信区间（ CI）：9.71%~92.45%]和20.05%（95% CI：2.61%~52.89%）。 结论:大鼠肝脏H3K18ac水平不仅响应于砷暴露，还与砷诱导的肝损伤密切相关，提示H3K18ac可能作为砷中毒肝损伤机制及干预研究的新靶点。

目的:探讨 68Ga－环( L－精氨酰甘氨酸－ L－α－天冬氨酰－ D－酪氨酸－N6－(((4，7－双(羧甲基)－1，4，7－三唑－1－基)乙酰基))－ L－赖氨酸)(NODAGA－RGD)PET/CT评估酪氨酸激酶抑制剂(TKI)治疗远处转移性分化型甲状腺癌(dmDTC)短期疗效的临床应用价值。 方法:回顾性收集2019年10月至2023年3月间南京市第一医院收治的13例dmDTC患者[男5例、女8例，年龄68(65，69)岁]，其中9例临床证实为放射性碘难治性分化型甲状腺癌(RAIR－DTC)、4例为存在远处转移且未行常规放射性碘治疗的分化型甲状腺癌。所有患者行 68Ga－NODAGA－RGD PET/CT评估靶病灶(TL)新生血管情况，记录SUV max及靶本底比值(T/B)，予TKI治疗(安罗替尼治疗9例、阿帕替尼治疗4例)后3个月，观察TL最大径变化率及甲状腺球蛋白(Tg)变化率。对SUV max及T/B与TL最大径变化率行Spearman秩相关分析，对T/B与TKI治疗有效性(TL最大径变化率≤－30%)行ROC曲线分析，病灶缓解率的比较采用Fisher确切概率法。 结果:68Ga－NODAGA－RGD显像示，13例患者的36个TL的SUV max为5.44(3.43，7.56)，T/B为5.25(4.50，7.23)；TKI治疗后3个月，TL最大径变化率为－30%(－39%，－21%)，Tg变化率为－68%(－96%，－52%)，T/B与TL最大径变化率呈负相关( rs＝－0.46， P＝0.005)，SUV max与TL最大径变化率无相关性( rs＝0.03， P＝0.883)。ROC曲线分析表明，T/B的最佳界值为4.95，AUC为0.698，灵敏度为87.5%，特异性为60.0%；相较于T/B<4.95的病灶，T/B≥4.95的病灶缓解率更高[2/14和63.6%(14/22)； P＝0.006]。TKI治疗后3个月，13例患者的疾病控制率(DCR)高达12/13。 结论:68Ga－NODAGA－RGD PET/CT可有效反映肿瘤新生血管情况，早期预测TKI疗效，为dmDTC患者TKI治疗提供有力的影像证据。

目的:探讨成纤维细胞生长因子10(FGF10)对神经元损伤的保护作用及其潜在的分子机制。方法:剥离新生SD乳鼠的脑组织并提取其中的皮层神经元，将其种植于含L-多聚赖氨酸的孔板上进行培养，并分为正常组、髓鞘碎片组和髓鞘碎片+FGF10组，其中髓鞘碎片组神经元在培养4 h后添加一定含量的髓鞘碎片溶液(终浓度为10 μg/mL)，而髓鞘碎片+FGF10组神经元同时在培养基内添加髓鞘碎片和FGF10溶液(终浓度为4.3 nmol/L)。培养1周后，应用TUNEL染色、流式细胞术检测各组神经元的凋亡情况，应用活/死细胞染色、CCK-8法检测各组神经元的生存情况，应用Western blotting、免疫荧光双标染色检测各组神经元内凋亡相关蛋白、微管相关蛋白和RAS同源基因家族成员A(Rho A)/Rho A相关蛋白激酶(ROCK)信号通路相关蛋白的表达。结果:与正常组相比，髓鞘碎片组中TUNEL染色所示神经元凋亡率明显升高，流式细胞术所示早期神经元凋亡率明显升高，活化半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)蛋白表达明显升高，Bcl-2/Bax值明显降低，活/死细胞染色所示神经元死亡率明显升高，CCK-8法所示神经元生存率明显降低，乙酰化微管蛋白/酪氨酸微管蛋白(Ace/Tyr-tubulin)值明显降低，Tau蛋白表达明显降低，Ace/Tyr-tubulin荧光强度比值明显降低，Rho A、ROCK蛋白表达明显升高，Rho A荧光强度值明显升高，差异均有统计学意义( P<0.05)。与髓鞘碎片组相比，髓鞘碎片+FGF10组中TUNEL染色所示神经元凋亡率明显降低，流式细胞术所示早期神经元凋亡率明显降低，活化caspase-3蛋白表达明显降低，Bcl-2/Bax值明显升高，活/死细胞染色所示神经元死亡率明显降低，CCK-8法所示神经元生存率明显升高，Ace/Tyr-tubulin值明显升高，Tau蛋白表达明显升高，Ace/Tyr-tubulin荧光强度比值明显升高，Rho A、ROCK蛋白表达明显降低，Rho A荧光强度值明显降低，差异均有统计学意义( P<0.05)。 结论:FGF10可能通过抑制Rho A/ROCK信号通路进而促进神经元内微管稳定，从而对抗神经元在髓鞘碎片环境下发生的凋亡并提高其生存率。

目的:浮舰蛋白(flotillin-2,FLOT2)是典型的致瘤蛋白和潜在的肿瘤治疗靶点,但靶向FLOT2的干预策略仍未确定.翻译后修饰作为表观调控的重要方式,对蛋白质的活性、定位和稳定性等特性具有重要的调控作用,揭示蛋白质翻译后修饰的调控机制和功能是靶向治疗开发的一种有效手段.本研究旨在研究鼻咽癌中FLOT2赖氨酸乙酰化修饰的调控机制及其功能,为靶向FLOT2的肿瘤干预手段提供新思路.方法:利用PhosphoSitePlus数据库分析FLOT2的赖氨酸乙酰化位点,并构建赖氨酸乙酰化位点突变的FLOT2突变体[FLOT2(K211R)];用组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylases,HDAC)抑制剂曲古菌素A(trichostatin A,TSA)、Sirt家族去乙酰化酶抑制剂烟酰胺(nicotinamide,NAM)处理鼻咽癌细胞,TSA处理转染FLOT2突变体质粒的人胚肾细胞(human embryonic kidney,HEK)-293T细胞;利用免疫共沉淀(co-immunoprecipitation,Co-IP)检测FLOT2的总赖氨酸乙酰化水平以及特定赖氨酸(K)位点突变对FLOT2总赖氨酸乙酰化水平的影响.用蛋白质印迹法检测TSA处理未转染/转染FLOT2突变体质粒后的鼻咽癌细胞中FLOT2/FLAG-FLOT2的蛋白质表达,实时反转录聚合酶链反应(real-time reverse transcription PCR,real-time RT-PCR)检测TSA处理后鼻咽癌细胞中FLOT2 mRNA的表达.用TSA分别联合MG132或氯喹(chloroquine,CQ)处理鼻咽癌细胞后,检测FLOT2的蛋白质表达.用放线菌酮(cycloheximide,CHX)分别处理已转染FLAG-FLOT2(WT)或FLAG-FLOT2(K211R)质粒的HEK-293T细胞,检测FLAG-FLOT2、FLOT2(K211R)的蛋白质表达水平以反映蛋白质的降解速率.通过BioGrid数据库查询FLOT2与HDAC6之间是否可能存在相互作用,并采用Co-IP验证.用FLAG-FLOT2(WT)/FLAG-FLOT2(K211R)质粒分别联合空白对照(Vector)/HDAC6质粒转染HEK-293T细胞,分为FLAG-FLOT2(WT)+Vector、FLAG-FLOT2(WT)+HDAC6、FLAG-FLOT2(K211R)+Vector、FLAG-FLOT2(K211R)+HDAC6共4组,分析K211R突变对FLOT2总赖氨酸乙酰化水平的影响.在6-0B细胞中,分别过表达FLOT2(WT)和FLOT2(K211R),用细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)、平板克隆形成和Transwell侵袭检测FLOT2乙酰化位点突变体的生物学功能.结果:PhosphoSitePlus数据库显示FLOT2的K211位点存在乙酰化修饰,Co-IP结果证实FLOT2蛋白存在明显的乙酰化修饰,且TSA可以显著上调FLOT2的总乙酰化修饰水平,而NAM则无此作用;K211位点突变后FLOT2的总赖氨酸乙酰化水平显著下降,且不受TSA影响.TSA下调鼻咽癌细胞中FLOT2的蛋白质表达水平,而不影响FLOT2 mRNA的表达水平,也不影响转染FLAG-FLOT2(K211R)的鼻咽癌细胞中FLOT2(K211R)的蛋白质表达水平.FLOT2(K211R)的蛋白质降解速率显著慢于FLOT2(WT)的降解速率.蛋白酶体抑制剂MG132可以阻止TSA引起的FLOT2降解,溶酶体抑制剂CQ则无此功能.BioGrid数据库数据显示FLOT2与HDAC6可能存在相互作用,Co-IP结果证实FLOT2与HDAC6抗体可以相互共沉淀对方蛋白.在敲减HDAC6表达的鼻咽癌细胞中,FLOT2的总赖氨酸乙酰化水平显著提高;共转染HDAC6和FLAG-FLOT2(WT)可显著降低总赖氨酸乙酰化水平,而共转染HDAC6和FLAG-FLOT2(K211R)不影响总赖氨酸乙酰化水平.敲减HDAC6可以显著下调FLOT2的蛋白质水平而不影响其mRNA水平;MG132可以阻止敲减HDAC6引起的FLOT2降解.敲减HDAC6,FLOT2的降解速率显著加快.转染FLOT2(K211R)突变体的鼻咽癌细胞增殖速度和侵袭能力显著强于转染FLOT2(WT)的细胞.结论:FLOT2 K211位点存在乙酰化修饰,HDAC6通过介导FLOT2 K211的去乙酰化修饰抑制FLOT2经蛋白酶体途径降解,维持其在鼻咽癌中的稳定和促瘤功能.